脓毒症中树突状细胞作用及其变化的研究进展

背景 脓毒症是指感染和创伤等原因引起的微生物进入人体诱发剧烈的全身炎症反应,并引起组织器官继发性损伤,是重症监护室(ICU)主要死亡原因之一. 目的 阐述树突状细胞(dendritic cells,DCs)在脓毒症过程中的变化,从而体现出DCs在脓毒症中起到的关键作用. 内容 DCs功能障碍是脓毒症免疫抑制的主要原因之一,脓毒症中DCs数量减少,并且以未成熟DCs为主,导致其吞噬抗原的能力减弱；脓毒症小鼠中大多脾脏DCs以成熟形态存但是其分泌细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)10和IL-12失衡；脓毒症中DCs刺激T细胞增殖的能力减弱.以上所有变化导致机体不能对外来病原体发生免疫应答,导致机体处于免疫抑制状态. 趋势 增加脓毒症中树突状细胞的数目,改善脓毒症中树突状细胞递呈抗原,分泌细胞因子的能力可能成为治疗脓毒症的潜在靶点之一.     

大鼠树突状细胞CD86分子小干扰RNA慢病毒载体构建及其功能

目的 观察针对大鼠树突状细胞(DCs)表面共刺激分子CD86的小干扰RNA(siRNA)慢病毒载体转染骨髓来源大鼠DCs后,CD86分子mRNA水平变化及DC刺激T淋巴细胞增殖能力的变化.方法 将针对大鼠DCs表面共刺激分子CD86的siRNA慢病毒载体转染骨髓来源大鼠DCs,逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测CD86分子mRNA水平,MLR检测转染后的树突状细胞刺激T淋巴细胞增殖能力的变化.结果 转染组CD86分子mRNA水平较未转染组及阴性对照组有明显下降.MLR中各实验组DC与细胞1:1、1:10、1:50混合72 h后492 nm吸光度值分别为,未转染组:0.876±0.117、0.582±0.085、0.472±0.034;阴性对照组:0.870±0.140、0.541±0.066、0.438±0.067;转染组:0.394±0.143、0.294±0.032、0.218±0.015.表明转染后的DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力较未转染组及阴性对照组显著降低.结论 实验所用针对CD86分子的siRNA慢病毒载体,可以特异性的抑制大鼠树突状细胞CD86基因的表达,降低树突状细胞对T淋巴细胞的刺激增殖能力.     

树突状细胞肿瘤疫苗诱导抗胃癌作用的实验研究

目的探讨树突状细胞(dendriticcells,DCs)肿瘤疫苗诱导的抗胃癌效应对荷瘤裸小鼠的作用。方法使用胃癌细胞冻融抗原,体外致敏从小鼠骨髓诱导分化来源的DCs成为肿瘤疫苗,用其来刺激脾脏淋巴细胞,得到肿瘤抗原特异的细胞毒性T淋巴细胞(CTL),观察其对荷瘤裸小鼠肿瘤生长的影响以及早期凋亡诱导作用。结果经重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导小鼠骨髓细胞,得到大量形态典型、具备强烈刺激增殖能力、高表达CD1a、CD11c、CD40和CD80的DCs。肿瘤抗原致敏DCs刺激脾脏淋巴细胞成为CTL后,可显著抑制裸小鼠皮下移植瘤生长并致瘤细胞早期凋亡增加。结论DCs肿瘤疫苗可通过CTL的作用,抑制荷瘤裸小鼠的胃癌细胞生长及促进胃癌细胞早期凋亡。     

胃癌抗原特异性树突状细胞疫苗的抗瘤效应

我们利用液氮冻融提取胃癌细胞抗原刺激小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)制备肿瘤疫苗,进而诱导小鼠脾脏淋巴细胞制备肿瘤抗原特异细胞毒性淋巴细胞(CTLs) ,应用于胃癌裸小鼠皮下模型,探讨其多方面抗胃癌效应。一、材料与方法1.BALB/c小鼠骨髓DCs肿瘤疫苗制备:依据文献[1] ,分离BALB/c小鼠股、胫骨骨髓细胞,经1g/L浓度SCG790 1肿瘤可融性抗原孵育过夜后,终浓度5 0 μg/L的粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF)及10 0 μg/L的白细胞介素(IL) 4(PeproTech公司)诱导培养7d获得DCs肿瘤疫苗。抗CD40 FITC、抗CD80 FITC直标荧光…     

沉默树突状细胞恒定链以增强其抗肿瘤作用的体外实验研究

目的初步观察用小分子干扰RNA(siRNA)沉默树突状细胞(DCs)恒定链(Ii)后,DCs疫苗的体外抗肿瘤效果。方法从小鼠骨髓分离骨髓前体细胞,细胞经100 ng/ml GM-CSF和100 ng/ml IL-4诱导培养6 d后,转染针对DCs Ii链特异的Ii-siRNA,转染后加用50 ng/ml TNF-α继续诱导细胞成熟48 h,然后分别用Western blot检测沉默效果及CCK-8试剂盒检测DCs刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力;此外,DCs共转染Ii-siRNA和小鼠胃癌前体细胞MFC的总RNA后,与同种异体淋巴细胞共培养,通过ELISA检测培养上清IFN-γ/和IL-4的水平,并收集致敏淋巴细胞进行体外杀伤实验。结果Ii-siRNA明显抑制DCs Ii的表达。沉默Ii链能够增强DCs的淋巴细胞增殖能力,并促使淋巴细胞向Th1的方向漂移[IFN-γ:(5107±351)pg/ml,IL-4:(65±13)pg/ml,P＜0．05]。淋巴细胞经共转染Ii-siRNA和MFC RNA的DCs激活后,明显而特异地杀伤靶肿瘤细胞(杀伤百分率: 66．94%±2．75%,P＜0．05)。结论通过siRNA沉默DCs的Ii链可能是一种行之有效的增强抗肿瘤免疫的方法。     

抗原负载的树突状细胞体外诱导抗肿瘤免疫的研究

目的 观察抗原负载的树突状细胞(DCs)体外诱导抗肿瘤免疫效应,探讨树突状细胞肿瘤疫苗的制备方法 .方法 以细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4体外诱导人单核细胞来源的树突状细胞,第6天加入肝癌细胞BeL-7402的冻融抗原并以联合细胞因子鸡尾酒法[肿瘤坏死因子(TNF-α)+IL-6+IL-1β+前列腺素E2(PGE2)]诱导成熟,对照组仅以鸡尾酒法诱导成熟.24 h后收获DCs以流式细胞仪检测其成熟表型CD80、CD83、CD86和LHA-DR,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其IL-12的分泌,噻唑蓝(MTT)比色法检测其刺激淋巴细胞增殖活性,乳酸脱氢酶释放实验检测其诱导的免疫效应细胞对肝癌细胞的特异性细胞毒作用.结果 联合细胞因子可诱导的DCs成熟和IL-12的分泌(P＜0.05),成熟的DCs有较强的刺激淋巴细胞增殖能力;抗原负载组DCs可诱导效应细胞对肝癌细胞BeL-7402的特异性杀伤作用(P＜0.05).结论 抗原负载的DCs可体外诱导特异性抗肿瘤免疫效应,提示以抗原负载的树突状细胞作为肿瘤免疫治疗的方法 是可行的.     

树突状细胞负载丁酸梭菌诱导免疫效应细胞对裸鼠皮下BxPC-3移植瘤的抑制作用

目的:探讨丁酸梭菌(CB)致敏树突状细胞(DCs)诱导免疫效应细胞(IECs)对BALB/c裸鼠皮下BxPC-3移植瘤的抑制效果。方法:BALB/c裸鼠安全性评价实验：28只裸鼠随机分为7组,实验第1天,取对数生长的BxPC-3注射于裸鼠左下臂,14 d后测量各组裸鼠皮下移植瘤大小,空白对照G组注射无菌生理盐水,A~F...     

小鼠骨髓源性树突状细胞的体外诱导培养及功能分析

目的:建立小鼠骨髓源性树突状细胞(DCs)体外培养和扩增方法,为以DCs为靶点的免疫治疗研究提供基础。方法:从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中提取骨髓细胞,以含重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF,400U/ml)和IL-4(200U/ml)的RPMI 1640(含10%FBS)进行诱导培养,于培养第4天加入脂多糖(LPS)继续培养2d。利用倒置相差显微镜和透射电子显微镜观察细胞生长状态和超微结构,流式细胞术鉴定培养第6天时DCs纯度及免疫表型,流式细胞微球捕获芯片技术检测第2、4、6天培养上清中细胞因子IL-6、IL-10、巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)、干扰素-1(IFN-1)、TNF-α、IL-12p70含量。结果:重组小鼠GM-CSF和IL-4诱导培养小鼠骨髓细胞4d,加入脂多糖(LPS)继续培养2d,近90%细胞高表达DCs特征性标志物CD11c,高表达抗原提呈分子MHC-Ⅱ和共刺激分子CD86、CD80,具有典型的树突状形态学特征和分泌炎症性细胞因子IL-6、IL-10、MCP-1、TNF-α和IL-12p70的功能。结论:小鼠骨髓细胞以重组小鼠GM-CSF和IL-4体外诱导培养的DCs具有较高的纯度,保持了体内的形态学、免疫表型及功能特征。     

肿瘤浸润性树突状细胞与前列腺癌病理分级及临床分期的关系

目的 :探讨前列腺癌 (PCa)组织中浸润性树突状细胞 (DCs)与PCa病理分级及临床分期的关系。方法 :对 35例PCa标本分别进行病理分级及临床分期 ,并进行S 10 0蛋白的SP免疫组织化学染色和Spearman相关性分析。结果 :DCs染色位于细胞浆 ,PCa中DCs指数明显小于周围正常的前列腺组织 (P <0 .0 5 ) ;不同分级的PCa中DCs指数差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ,DCs指数与PCa分级之间无明显的相关性 ;DCs与PCa临床分期之间呈明显负相关 ,Spearman相关系数为 - 0 .7975 (P <0 .0 5 )。早期PCa(A、B期 )的DCs指数明显高于晚期PCa(C、D期 )。结论 :DCs指数能判断PCa的细胞分化程度、肿瘤预后 ,可为免疫治疗提供依据。     

肝癌细胞冻融抗原制备树突状细胞瘤苗的研究

目的探讨获得高效肝癌树突状细胞瘤苗(Dendritic Cells,DCs瘤苗)的优化方法.方法取健康人新鲜血,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC),诱导DCs.A组用重组人粒巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导DCs,B组用GM-CSF和IL-4诱导,肝癌细胞冻融抗原冲击,C组用GM-CSF、IL-4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导,D组用GM-CSF、IL-4和TNF-α诱导,肝癌细胞冻融抗原冲击.结果荧光抗体CD11c和CD54均高表达,各组间无显著性差异(P＞0.05),TNF-α可明显上调CD86和CD80表达(P＜0.01),肝癌细胞冻融抗原可进一步激活不同条件下诱导的DCs,促进CD86、CD80和人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)表达.结论经GM-CSF、IL-4加TNF-α诱导的DCs可有效的摄取肝癌细胞冻融抗原,促进DCs的成熟,可制备高效的肝癌DCs瘤苗,用于肝癌过继性免疫治疗.     

不同程度烫伤应激对大鼠皮下移植瘤生长的影响

目的：探讨应激反应对大鼠皮下移植瘤生长的影响。方法：将大鼠乳腺癌细胞Walker-256癌细胞株注入Wistar幼鼠腹腔,5d后抽取腹水,浓缩,经Wistar大鼠腹股沟皮下接种,建立Wistar大鼠皮下移植瘤模型。选取24只荷瘤大鼠,随机分为实验对照组（未烫伤）、轻度烫伤组（10％TBSA,100℃水中烫伤5s）、重度烫伤组（15％TBSA,100℃水中烫伤10s）,每组8只。烫伤后12h尾静脉取血,ELISA法检测血自细胞介素-18（IL-113）水平,放射免疫法测定血清皮质醇水平;烫伤后1、7、13d测定皮下肿瘤体积,伤后13d进行肿瘤的病理学观察。结果：烫伤后大鼠血浆IL-1G水平较实验对照组[（5．01±2．51）pg／m1]明显升高（P〈O．01）,重度烫伤组[（155．78±18．30）pg／ml]较轻度烫伤组[（94．12±15．31）pg／m1]升高更加明显（P〈O．01）;烫伤后大鼠血清皮质醇水平也较实验对照组[（60．51±16．70）μg／L]明显升高（P〈O．01）,重度烫伤组[（115．78±17．42）μg／L]较轻度烫伤组[（87．19±13．28）μg／L]升高更加明显（P〈O．05）。烫伤后1d,各组间肿瘤体积差异无统计学意义（P〉0．05）;烫伤后7d和13d,对照组与轻度烫伤组肿瘤体积差异无显著性（P〉0．05）,重度烫伤组肿瘤体积明显大于实验对照组和轻度烫伤组（P〈0．05）。病理学观察显示,烫伤组肿瘤细胞密度均较实验对照组大;各组均有纤维组织增生和炎细胞浸润,尤以重度烫伤组为甚。结论：重度烫伤后应激反应促进肿瘤的生长。     

来氟米特抑制狼疮肾炎患者树突状细胞成熟的实验研究

目的：观察来氟米特活性代谢产物A771726处理前后狼疮。肾炎（1upus nephritis，LN）患者树突状细胞（DC）表面标志及功能的改变，探索来氟米特治疗LN的新途径。方法：分离LN患者外周血单个核细胞，用粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte macrophage colony stimulating factor，GM-CSF）、白细胞介素-4（interleukin-4，IL-4）等细胞因子诱导DC成熟，来氟米特组再加入A771726培养。培养第9天收集DC细胞，流式细胞仪检测CD80、CD86和HLA-DR的表达。肌法检测DC刺激淋巴细胞增殖的能力，ELISA法检测混和淋巴细胞反应培养上清IL-10和IFN-γ水平。结果：A771726处理后的DC表达0380、cm86和HLA-DR百分数较对照组均明显降低[（62．80±1．67）vS（78．35±4．50），（64．50±13．06）vs（84．91±9．80），（71．44±11．56）vs（91．51±7．63）]，P均〈0．01；A771726处理后的DC与T细胞混合培养，其刺激T细胞增殖相应的OD值较对照组明显降低[DC：TC=1：10时，（0．295±0．069）vs（0．468±0．100）；DC：TC=1：50时，（0．196±0．044）vs（0．391±0．023）]，P均〈0．01。其混合培养的上清液中IL-10水平较无A771726处理的DC与T细胞的混合培养上清液明显降低[（205．0±35．8）pg／ml vs （443．6±93．2）pg／ml，P〈0．01]，而IFN-γ两者间无统计学差异[（89．3±11．9）pg／ml vs （99．9±15．7）pg／ml，P〉0．05]。结论：A771726在体外可抑制LN患者外周血DC的成熟，未成熟DC能抑制T细胞增殖及T细胞向Th2细胞转化。     

复方玄驹胶囊治疗自身免疫性前列腺炎大鼠的实验研究

目的:研究复方玄驹胶囊对自身免疫性前列腺炎大鼠的治疗效果。方法:健康Wistar大鼠60只,随机分为5组,对照组、低浓度蛋白免疫模型组、低浓度蛋白免疫+复方玄驹胶囊全方治疗组、高浓度蛋白免疫模型组、高浓度蛋白免疫+复方玄驹胶囊全方治疗组。除对照组外,其余4组用高低两种浓度(15 mg/ml及80 mg/ml)的同种大鼠前列腺匀浆蛋白提纯液进行注射造模。造模(30 d)成功后,对照组和模型组生理盐水[1 ml/(200 g·d)]灌胃,治疗组用生理盐水溶解的复方玄驹胶囊全方[0.068 g/(ml·d)]灌胃,随后分别于30、45、60 d分批处死大鼠。用ELISA法检测大鼠血清中的IL-8、IL-10及TNF-α的表达,并观察大鼠前列腺组织病理切片。结果:与模型组相比,经复方玄驹胶囊全方灌胃治疗的高浓度蛋白免疫大鼠血清中IL-8、TNF-α在造模45 d时由(148.54±17.23)pg/ml、(62.14±5.59)pg/ml下降到(100.77±11.08)pg/ml、(32.63±2.91)pg/ml(P0.05);60 d时由(143.69±17.28)pg/ml、(59.38±5.50)pg/ml降到(95.77±10.53)pg/ml、(29.63±2.66)pg/ml(P0.05)。低浓度组造模45 d时IL-8、TNF-α亦由(128.47±12.21)pg/ml、(40.43±3.64)pg/ml下降至(111.76±10.07)pg/ml、(35.44±3.17)pg/ml(P0.05),60 d时由(131.07±10.93)pg/ml、(43.34±3.91)pg/ml降至(97.46±8.75)pg/ml、(30.44±2.75)pg/ml(P0.05)。高浓度蛋白免疫的治疗组大鼠血清IL-10在造模45 d、60 d分别由(189.14±16.78)pg/ml、(184.14±15.89)pg/ml上升至(230.48±29.96)pg/ml、(248.48±31.03)pg/ml(P0.05),低浓度组由(223.14±17.87)pg/ml、(224.14±17.93)pg/ml升高至(231.42±23.18)pg/ml、(249.42±24.97)pg/ml(P0.05)。病理切片示对照组无明显变化;实验组病理切片显示大鼠前列腺组织腺体结构破坏,炎性细胞浸润;治疗组治疗15 d后光镜下观察病变逐步改善,腺腔增大,上皮细胞轻度增生,间质中无明显炎性细胞浸润,可见少量纤维组织。结论:复方玄驹胶囊能降低自身免疫性前列腺炎大鼠前列腺组织炎性改变,并有效改善炎性因子表达,对大鼠自身免疫性前列腺炎有一定疗效。     

乌司他丁对烫伤大鼠高迁移率族蛋白B1表达及CD4＋CD25＋调节性T细胞的影响

目的：研究乌司他丁对烫伤大鼠脾脏高迁移率族蛋白B1（HMGBl）的表达以及淋巴细胞免疫功能的影响。方法：96只Wistar大鼠随机分为假烫组、烫伤组和烫伤＋乌司他丁治疗组（n=32）。后两组大鼠制作30％TBSAⅢ度烫伤模型,伤后即刻腹腔注射林格液或乌司他丁＋林格液抗休克,创面涂碘伏抗炎。假烫组于37℃水浴中12S行假烫。各组分别于伤后1、3、5、7d腹主动脉无菌采血,并分离获取大鼠脾脏组织。Westernblot检测大鼠脾组织HMGBl的表达,流式细胞术检测血液中CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg）的变化。结果：与假烫组比较,烫伤组大鼠脾组织HMGBl水平在伤后1～7d显著升高（P〈O．01）,伤后3d时表达量最高,分别为0．66±0．10、0．22±0．05（t=10．91,P〈0．01）;乌司他丁治疗后1～7dHMGB1水平有不同程度的降低,其中伤后5d表达量最低,分别为0．32±0．07、0．63±0．07（t=9．61,P〈0．01）。与假烫组比较,烫伤组CD4＋CD25＋Treg表达在伤后逐渐上升,伤后3d时达到峰值（5．42±0．56）％;乌司他丁治疗后,CD4＋CD25＋Treg于伤后3、5、7d显著低于烫伤组（P〈O．01）,伤后5d时最低（2．23±0．21）％。结论：严重烫伤后大鼠脾脏HMGB1水平的持续升高对其调节性T细胞的异常具有显著的影响;乌司他丁作为一种抗炎药物能够降低伤后HMGB1的表达,改善烫伤大鼠的免疫功能。     

自身免疫性前列腺炎大鼠模型的建立

目的:使用前列腺蛋白提纯液建立自身免疫性前列腺炎大鼠模型。方法:选用36只Wistar大鼠,随机分为对照组、低浓度组和高浓度组,每组12只。对照组注射生理盐水,低浓度和高浓度组实验大鼠于0、14 d分别注射等剂量15 mg/ml及80 mg/ml浓度的前列腺蛋白提纯液,4周后处死大鼠,前列腺组织HE染色,取大鼠外周血检测血清炎症因子IL-8、IL-10,血清免疫球蛋白IgA、IgM,辅助性T细胞Th1/Th2等指标。结果:高浓度组有3只大鼠死亡,对照组与低浓度组均无死亡。前列腺大体观察对照组无明显变化,低浓度组大鼠前列腺体积增大,质地稍硬,高浓度组大鼠前列腺质地坚硬,与周围组织粘连。实验组病理切片显示前列腺组织腺体结构破坏,有炎性细胞浸润。大鼠血清IL-8指标低浓度组[(129.07±11.48)pg/ml]、高浓度组[(147.58±17.70)pg/ml]与对照组[(94.12±7.04)pg/ml]比明显升高(P0.05);大鼠血清IL-10指标低浓度组[(227.14±18.19)pg/ml]、高浓度组[(187.14±16.32)pg/ml]与对照组[(252.48±21.72)pg/ml]相比显著降低(P0.05)。大鼠血清IgA与对照组[(0.19±0.14)mg/ml]相比,低浓度组[(0.25±0.37)mg/ml]和高浓度组[(0.31±0.42)mg/ml]明显升高(P0.05);大鼠血清IgM指标低浓度组[(0.23±0.41)mg/ml]、高浓度组[(0.34±0.58)mg/ml]与对照组[(0.17±0.33)mg/ml]相比,显著升高(P0.05)。外周血辅助性T细胞Th1/Th2未见明显改变。结论:低、高浓度组大鼠造模均获成功。使用低浓度的前列腺蛋白提纯液造模的动物死亡率低,病理改变及血清炎症因子变化符合自身免疫性前列腺炎的表现,可作为制备自身免疫性前列腺炎的可靠模型浓度。     

精索静脉曲张对精液质量和血清、精浆中抑制素B水平的影响

目的:探讨精索静脉曲张(VC)患者精索静脉曲张程度对精液参数和血清、精浆中抑制素B(inhibin B)水平的影响。方法:收集95例不育伴VC患者,55例有正常生育力的男性作为对照组,均通过CASA进行精液常规检查,改良巴氏染色进行精子形态检查;通过ELISA法检测外周血、精浆中抑制素B的水平。结果:VC患者正常形态精子百分率[Ⅰ度:(6.3±6.5)%,Ⅱ度:(2.6±3.0)%,Ⅲ度:(1.0±0.7)%]和前向运动精子百分率[Ⅰ度:(33.3±20.8)%,Ⅱ度:(28.9±19.8)%,Ⅲ度:(13.5±8.4)%]明显低于对照组[(7.5±5.2)%,(43.9±22.7)%](P0.05),精子畸形以头部畸形为主;VC患者外周血和精浆中抑制素B水平[Ⅰ度:(160.9±48.9)pg/ml,(208.3±28.1)pg/ml;Ⅱ度:(150.6±44.7)pg/ml,(201.5±83.5)pg/ml;Ⅲ度:(132.6±41.5)pg/ml,(150.2±51.6)pg/ml]均低于对照组[(201.0±38.1)pg/ml,(225.3±82.5)pg/ml]。结论:VC可导致精子活力降低,畸形率升高,外周血和精浆抑制素B水平下降,从而导致男性生育力受损。     

腹腔镜与开腹直肠癌根治术对局部与全身免疫反应影响的对比研究

目的比较腹腔镜与开腹直肠癌手术对机体局部和全身炎症免疫反应的影响。方法 2005年4月～2006年2月40例直肠癌分为开腹组20例和腹腔镜组20例,术前第1天、术后第1天和第3天分别采集外周静脉血,测定C反应蛋白(CRP)、白细胞(WBC)、白介素6(IL-6)、CD4、CD8、自然杀伤细胞(NK细胞)和淋巴细胞,术后第1天和第3天腹腔引流液送检测定WBC、IL-6。结果腹腔镜与开腹直肠癌根治术对WBC、CD4、CD8、CD4/CD8、NK细胞和淋巴细胞的影响差异无显著性意义(P0.05)。开腹组术后第1、3天血CRP分别为(109.9±36.2)、(80.9±26.3)mg/L,显著高于腹腔镜组(83.9±37.7)mg/L(t=2.226,P=0.032),(58.6±30.4)mg/L(t=2.485,P=0.017)。开腹组术后第1、3天血IL-6分别为(92.6±21.0)、(71.6±18.4)pg/ml,显著高于腹腔镜组(73.7±20.9)pg/ml(t=2.853,P=0.007),(57.3±19.3)pg/ml(t=2.398,P=0.021)。2组术后第1、3天腹腔引流液WBC差异无显著性意义(P0.05),腹腔引流液IL-6开腹组术后第1天(164.8±54.0)pg/ml和术后第3天(121.6±45.9)pg/ml明显高于腹腔镜组术后第1天(128.3±55.4)pg/ml(t=-2.112,P=0.041)和术后第3天(90.7±48.2)pg/ml(t=-2.076,P=0.044)。腹腔镜组术中出血量(142.7±104.8)ml比开腹组(246.0±146.4)ml明显减少(t=-2.565,P=0.014),肠道功能恢复时间(51.0±19.1)h与开腹组相比明显缩短(81.1±21.6)h(t=-4.669,P=0.000),术后住院时间(10.7±2.8)d与开腹组(13.7±5.3)d相比差异有显著性(t=-2.238,P=0.031)。2组手术时间、肿瘤下切缘距离、肿瘤直径、清除淋巴结数和并发症比较无显著性意义(P0.05)。结论腹腔镜直肠癌根治术与开腹手术相比对机体炎症免疫反应的影响小,是一种安全、创伤小、恢复快的手术方式。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对50％总体表面积烫伤大鼠存活率和脏器功能的影响

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂对无液体复苏时致死性烫伤休克大鼠存活率和脏器功能的改善作用.方法：64只SD雄性大鼠随机分为4组：假烫组（n=10）,烫伤组（n=18）,烫伤＋2-甲基-2-乙酸组（2M2P组,n=18）和烫伤＋丙戊酸钠组（VPANa组,n=18）.烫伤组于80 ℃水浴浸泡背部15 s、双下肢15 s、腹部8 s,造成50%TBSAⅢ度烫伤.假烫组于37 ℃水浴浸泡,部位和时间与烫伤组相同. 2M2P组和VPANa组致伤方法同烫伤组,并于烫伤后即刻皮下注射2M2P或VPANa 300 mg/kg.各组大鼠烫伤深度经组织病理证实,于伤后2h和6h取腹主动脉血检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、肌酐（Cr）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）等脏器功能指标.另66只大鼠随机分为烫伤组（n=18）、2M2P组（n=24）和VPANa组（n=24）,观察其伤后6 h和12 h生存率.结果：VPANa组生存时间为（776.7±89.5）min,显著高于烫伤组[（360.8±27.4）min]和 2M2P组[（512.5±52.2）min],差异具有显著性（P＜0.05）.VPANa组伤后6 h和12 h生存率分别为83.3%和50.0%,显著高于烫伤组（50.0%和0）和2M2P组（66.7%和16.7%）,差异具有显著性（P＜0.05）;2M2P组6 h和12 h生存率也显著高于烫伤组（P＜0.05）.烫伤及烫伤后各处理组伤后2 h和6 h ALT、Cr和CK-MB均显著高于假烫组（P＜0.05）.伤后6 h VPANa组ALT、Cr和CK-MB显著低于烫伤组和2M2P组（P均＜0.05）,2M2P组虽低于烫伤组,但差别无统计学意义.结论：组蛋白去乙酰化酶抑制剂能显著改善致死性烫伤休克大鼠脏器功能指标,延长动物生存时间.丙戊酸钠作用明显强于2M2P,有希望成为战场或灾害现场无液体复苏条件下救治致死性烧伤休克的潜力药物.     

骨髓间充质干细胞促进“创面”愈合的实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）促进创面愈合的作用和用于创面修复的可行性。方法：密度梯度离心法分离培养正常人骨髓间充质干细胞（hMSCs），流式细胞仪检测培养第二代细胞CD14、CD29、CD34、CD44、CD45和CD106抗原表达以鉴定MSCs。实验分3组：直接共培养组（n=8）为hMSCs（1×10^5/ml）与人表皮角质形成细胞（HEKa）直接接触共培养；间接共培养组（n=7）为在transwell透明聚碳酸酯膜上层加入hMSCs细胞悬液[（2-3）×10^5个细胞）]，下层接种HEKa，间接共培养；单纯HEKa培养组（n=7）单纯培养HEKa。在倒置显微镜下刮擦生长融合成片的HEKa细胞以制备宽度为100μm的“表皮创面”模型。模型制备后24、48、72h，倒置相差显微镜下计数每高倍视野越过创缘迁移到创面的HEKa数，并用SigmaScan Pro5软件计算创面愈合率，检测HEKa细胞吸收脱氧胸腺嘧啶核苷的放射活性，判定HEKa细胞的分裂增殖活性。结果：流式细胞仪检测第二代hMSCs CD29、CD44和CD106抗原阳性（分别为94.81%、95.38%、97.40%），CD14、CD34、CD45抗原阴性（分别为1.23%、3.05%、2.64%）；直接培养组、间接培养组和单纯HEKa培养组越过创缘进入创面的细胞伤后24h分别有（10.00±0.25）、（5.50±0.20）和（5.20±0.35）个/高倍视野；48h分别有（55.30±0.22）、（27.00±0.34）和（26.50±0.25）个/高倍视野；72h分别有（110.50±0.45）、（42.50±0.50）、（40.20±0.38）个/高倍视野。3组伤后72h创面愈合率分别为（60.00±0.04）%，（35.00±0.01）%、（33.00±0.05）%。脱氧胸腺嘧啶苷掺入培养基法表明hMSCs对体外共培养HEKa细胞的增殖作用分别为（1650±270）cpm/10^5 cell、（1240±210）cpm/10^5 cell、（1180±220）cpm/10^5 cell。上述各指标直接共培养组与单纯HEKa培养组比较，差异有显著性（P〈0.01），而间接培养组与单纯HEKa培养组间差异无显著性（P〉0.05）。     

抗CD54抗体对脓毒症小鼠的治疗作用

目的探讨应用抗CD54抗体保护脓毒症小鼠肺脏功能并改善其免疫功能状态的机制。方法24只C57／BL6小鼠按完全随机法分为4组：假手术组（Sham组）、盲肠结扎穿孔（cecal ligation and puncture,CLP）模型小鼠±生理盐水组（CLP组）、CLP±抗CD54抗体组（Anti-CD54组）和CLP±抗CD54抗体同型对照组（Isotype组）,每组6只。观察各组小鼠肺组织病理形态学改变,肺组织炎性因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF）mRNA、白介素（intedeukin,IL）-10和IL-6的mRNA表达水平,胸腺、脾脏和肺组织髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）活性,肺组织湿重／干重比值,外周血和腹腔灌洗液细菌清除率,胸腺和脾脏细胞凋亡情况。结果苏木精-伊红（hematoxvlin-eosin,HE）染色显示应用Anti-CD54组小鼠与CLP组和Isotype组小鼠比较,肺组织的损伤程度减轻,表现为间隔轻度增宽、无明显出血,少量炎性细胞浸润;Anti．D54组肺组织TNF-α（3．93±0．82）和IL-10（2．83±0．55）的mRNA水平,均显著低于CLP组[（8．22±2．34）、（6．05±1．52）]和Isotype组[（8．54±1．75）、（5．56±1．33）]（P〈0．05）;Anti-CD54组胸腺[（45±10）U／mg]、脾脏[（39±8）U／mg]和肺组织[（64±12）U／mg]匀浆MPO活性（P〈0．05）,均显著低于CLP组[（98±13）、（78±12）、（105_±10）U／mg]和Isotype组[（88±20）、（90±16）、（110±16）U／mg]（P〈0．05）;Anti-CD54组（4．03±0．18）肺组织湿重／干重比值,显著低于CLP组（4．95±0．18）和Isotype组（4．81±0．31）（P〈0．05）;Anti-CD54组血液（6±2）及腹腔灌洗液（5±2）细菌清除率显著高于CLP组[（76±18）、（72833±7176）]和Isotype组[（69±18）、（66532±143006）]（P〈0．001）;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal deoxynueleotidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL）结果显示：Anti-CD54组胸腺（55±13）和脾脏（45±17）组织凋亡细胞百分比数显著少于CLP组[（127±30）、（130±25）]和Isotype组[（223±15）、（110±42）]（P〈0．05）。结论抗CD54抗体对脓毒症小鼠具有一定的治疗作用,可能与其改善小鼠肺功能状态,提高血液和腹腔清除率,抑制小鼠脾脏和胸腺凋亡有关。