多发性骨髓瘤的基因表达谱分析

目的：研究MM患者与正常人骨髓基因的差异表达。方法：应用cDNA芯片技术对10例初诊多发性骨髓(MM)患者和10名正常骨髓的单个核细胞的mRNA进行检测。结果：在2048条基因中共发现差异表达基因566条。在MM中237条表达增加，329条表达降低。结论：MM的发生发展涉及多基因的改变，cDNA芯片技术可高效研究多个基因的表达水平。     

期刊文摘

肠型胃癌基因表达的cDNA微阵列分析[李新华 ,张万岱 ,王波涛 ,肖　冰 ,张振书 .世界华人消化杂志 ,2 0 0 4 ;12 (1) :16 - 19]　　目的 :研究肠型胃癌发生发展的基因表达变化 .方法 :利用肠型胃癌和相应非癌组织的mRNA通过逆转录方法 ,将Cy3和Cy5两种荧光分别标记到两种cDNA上制成探针 ,然后与表达谱芯片 (含 4 0 96条基因 )进行杂交后扫描 ,通过计算机辅助判别基因的差异表达 .结果 :肠型胃癌和相应非癌组织组织中差异表达的基因有 6 6 6条 ,上调表达 333条 ,下调表达 333条 .参与细胞增生、凋亡、分化和转移调控的多种基因的表达水平…     

以基因芯片技术研究Kkay小鼠2型糖尿病相关基因

目的以基因芯片技术研究Kkay2型糖尿病小鼠的差异表达基因。方法以包含8192条小鼠的cDNA基因表达谱芯片研究Kkay2型糖尿病小鼠肝脏的基因表达谱。结果共筛选出差异表达基因154条,包括全长基因68条,表达序列标识(EST)86条;其中40条基因表达增加,114条表达降低。结论多数已知功能基因的表达异常与以往的研究结论是一致的;cDNA基因芯片技术能够高通量分析糖尿病相关基因。     

大鼠骨髓基质细胞分化为成骨细胞相关基因表达谱分析

目的：利用cDNA微阵列技术研究大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化中基因表达谱的变化。方法：分离、培养大鼠骨髓基质细胞,以地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C诱导分化,抽提细胞mRNA并逆转录成cDNA探针,用含有1176个基因片段的cDNA芯片检测相关基因的差异表达。结果：经诱导后的细胞可见有钙化结节,与正常传代的细胞相比有292个基因的差异表达超过了3倍,而参与转录、翻译、糖基化修饰和调节细胞外基质、信号分子形成及参与代谢的相关基因表达均有不同程度的上调。结论：cDNA微阵列技术可显示细胞在诱导分化中多基因的差异表达,这些差异表达基因是大鼠骨髓基质细胞在增殖和成骨分化诱导中所必需参与的基因。     

多发性骨髓瘤患者BAG-1和BCL-2在骨髓活检组织的表达

目的:通过观察BCL-2结合抗凋亡基因1(BAG-1)和BCL-2在多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓活检塑料包埋切片中的表达,探讨MM的发病机制和预后。方法:用SP免疫组化法检测MM患者骨髓活检组织塑料包埋切片中BAG-1和BCL-2的表达。结果:BAG-1和BCL-2在MM组中高表达,在对照组中低表达,P<0.05差异具有统计学意义;与BAG-1和BCL-2低表达患者相比,高表达BAG-1和BCL-2的患者骨损害明显,白蛋白低,β2微球蛋白高。结论:BAG-1和BCL-2在MM发病中具有促进作用,BAG-1可能参与MM的发生,提示预后不良。     

基因微阵列技术筛选结肠癌转移相关基因的研究

目的以cDNA表达基因芯片技术筛选与原发性结肠癌转移相关的基因,对部分基因进行分析,探讨原发性结肠癌转移发生发展的分子机制。方法收集2例未发生转移及2例已发生转移的原发性结肠癌患者的新鲜冻存癌组织。杂交芯片采用含16k余个点的cDNA表达谱芯片。差异表达基因的筛选标准为该基因在50%以上样本中的荧光强度比(ratio比值)>=2或<=0.5。结果基因芯片筛选获得与细胞粘连、细胞周期、信号传导、分子结构等功能相关的差异表达基因共196条,其中上调基因112条,下调基因84条。结论运用cDNA芯片进行原发性结肠癌转移倾向相关基因的表达谱分析,有助于从分子水平全方位阐明结肠癌转移的发生机制及生物学特性。     

大鼠骨髓基质细胞传代培养中相关基因的差异表达

目的:研究大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)体外传代培养中相关基因的差异表达.方法: 取大鼠骨髓,分离、培养骨髓基质细胞并传代,抽取细胞(mRNA)并逆转录成cDNA探针,用含有1176个基因片段的cDNA芯片检测相关基因的差异表达,整理、分析实验数据.结果: 传至P3代细胞与原代细胞(P0)相比有104个基因的差异表达超过了3倍,其中有53个基因表达量明显上升,51个基因表达量明显下降,主要涉及一些细胞粘附分子及胞外基质、细胞信号与传导、细胞受体和细胞骨架等方面的相关基因.结论: 通过基因芯片技术可以显示BMSCs在体外传代培养中众多基因的差异表达,而这些基因的差异表达与细胞的增殖和分化存在一定的关系,此为今后从基因水平上评价BMSCs在传代及临床应用中的稳定性提供了理论依据.     

表达谱基因芯片筛选大隐静脉曲张致病相关基因的初步研究

目的:运用基因芯片技术研究曲张大隐静脉基因表达谱的变化.方法:选取原发性大隐静脉曲张病人隐-股交界瓣膜区静脉6条,取6条正常静脉作对照.提取血管组织总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,应用含有4096种人类基因cDNA的表达谱芯片进行差异表达谱分析.结果:在原发性大隐静脉曲张的基因表达谱中差异表达基因共有168条,上调基因96条,下调基因72条,共存性差异表达基因39条,其中上调基因28条,下调基因11条.差异表达基因中有细胞凋亡相关基因、原癌基因和抑癌基因、细胞信号和传递蛋白基因等多种基因.这些基因可能与原发性大隐静脉曲张的发病机制有关.结论:采用基因芯片技术筛选大隐静脉曲张的致病相关基因,可能为其病因和发病机制的研究提供新思路.     

应用基因芯片技术筛查肺癌变相关基因的研究

目的 使用基因芯片技术研究肺鳞癌及化学致癌物诱导入气管上皮细胞恶性转化的癌变相关基因。方法 应用含4096条人类全长基因的cDNA芯片分别检测6例肺鳞癌和6例正常肺组织的基因表达谱;并用上述芯片研究苯并(a)芘代谢产物BPDE[anti-Benzo(a)pyrene diolepoxide,BPDE]和结晶型硫化镍所诱导的人支气管上皮细胞恶性转化与正常的人支气管上皮细胞系(16HBE)在基因表达谱上的差异;将3类标本共同的差异表达基因确定为肺癌变的相关基因。结果 在肺鳞癌／正常肺组织之间、BPDE诱导的恶性转化细胞／正常16HBE细胞之间及硫化镍诱导的恶性转化细胞/正常16HBE细胞之间发现差异表达基因分别为171条、143条和151条。通过比较,发现89条与肺癌变相关的共同基因,其中表达显著增加的基因39条,它们是：癌基因6条;细胞周期相关基因4条;细胞增殖基因6条;肿瘤转移基因8条;神经内分泌基因3条;耐药基因1条;凋亡抑制基因1条;氧化基因1条;其他基因9条。表达显著下降的基因50条,它们是：抑癌基因7条;DNA修复基因11条;抗氧化基因1条;GST基因家族3条;细胞骨架基因3条;凋亡诱导基因2条;信号传导基因5条;细胞因子及其受体基因5条;细胞代谢基因7条,细胞外基质基因1条;其他基因5条。结论 cDNA基因芯片技术能有效地研究基因的表达谱,筛查出肺癌变相关基因。     

应用基因表达谱技术研究人脑动脉瘤细胞信号传导相关基因

应用基因芯片分析人脑动脉瘤基因表达谱 ,分析细胞信号传导相关基因的差异表达。提取 4例人脑动脉瘤标本及作为正常对照的人颅底动脉环标本总RNA、mRNA ,进行线性扩增 ,通过逆转录的方法标记、制成cDNA探针 ,探针与84 6 4点基因表达谱芯片杂交 ,扫描芯片荧光信号图像 ,分析比较差异表达的基因。结果 :在 84 6 4条基因中 ,有 15条细胞信号传导相关基因表达有显著差异 ,其中表达上调 13条 ,表达下调 2条。提示 :差异表达的细胞信号传导相关基因及其参与的病理过程与脑动脉瘤的病理发生有关。     

骨髓瘤细胞可诱导骨髓间充质干细胞的基因表达谱发生暂时和 (或)长期性改变

目的:正常骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)在与骨髓瘤细胞相互作用过程中,MSC的全基因表达谱的改变目前尚未有报道,本研究就对此进行研究并进一步探索多发性骨髓瘤的发病机制。方法:正常人骨髓MSC与骨髓瘤细胞株在Transwell共培养体系培养前后,用全基因表达芯片检测MSC全基因mRNA的表达谱,比较正常MSC在与骨髓瘤细胞共培养(MC组)或共培养后去除骨髓瘤细胞后继续单独培养的MSC(MA组),和MSC单独培养的对照组(MK组)基因表达谱的变化。结果:MC组与MK组相比较,在所有分析的10 000个基因中共发现837个差异基因(837/10 000,8.37%),其中有472个基因表达上调(472/837,56.39%),365个基因表达下调(365/837,43.61%)。而MA组与MK组相比较,共发现367个差异基因,其中有218个基因表达上调(218/367,59.40%),149个基因表达下调(149/367,40.60%)。从芯片结果中筛选出MMP1、FGFR2、ANGPTL4、MFAP5、TGM2、STC1、CCL7和IL-32这8个基因,经定量PCR验证后的结果与基因芯片结果相一致。结论:骨髓瘤细胞可以诱导正常骨髓MSC多种基因表达改变,并且有些改变即使在骨髓MSC脱离骨髓瘤细胞后仍可存在;此外,初步筛选到8个差异表达基因,其中7个基因在多发性骨髓瘤发病机制中的作用既往未见报道,有待今后进一步研究。     

Bone Marrow Urokinase Plasminogen Activator Receptor Levels are Associated with the Progress of Multiple Myeloma△

Objective To determine the mRNA and protein levels of urokinase plasminogen activator receptors (uPAR) in bone marrow fluid and bone marrow tissue from multiple myeloma (MM) patients and assess association of uPAR level with prognosis of MM. Methods uPAR levels in bone marrow fluid of 22 MM patients at the stable and progressive stages and 18iron deficiency anemia patients with normal bone marrow (control) were examined by ELISA. Furthermore, uPAR expression in bone marrow tissue was investigated by RT-PCR and Western blot, respectively. The distribution of uPAR in MM cells was examined using immunofluorescence staining. The pathological changes in different stages of MM patients were studied by HE staining. Results uPAR level in bone marrow fluid of MM patients (1.52±0.32μg/ml) was found to be higher than that in the control group (0.98±0.15μg/ml). Interestingly, uPAR protein (0.686±0.075vs. 0.372±0.043, P<0.05) and mRNA (2.51±0.46vs. 4.46±1.15,P<0.05) expression levels of MM patients at the progressive stage were significantly higher than those at the stable stage. The expression of uPAR in MM bone marrow was confirmed by immunofluorescence staining.Moreover, HE staining revealed a great increased number of nucleated cells and severe impairment of hematopoietic function in the bone marrow of patients with progressive-stage myeloma. Conclusion Our study reveals that uPAR expression is positively correlated with the development and progress of MM.     

多发性骨髓瘤中人类疱疹病毒8型的定量分析及其相关基因的表达

目的 确定多发性骨髓瘤（MM）骨髓活检标本中是否存在人类疱疹病毒8型（HHV8）感染,病毒负荷量的差异与临床表现之间的关系。方法 实时荧光定量PCR确定骨髓活检标本中的HHV8病毒的负荷量,采用筑巢式PCR扩增患者外周血、骨髓穿刺和骨髓活检标本中HHV8 KS330233Bam片段,用逆转录－PCR方法了解HHV8病毒的致病基因病毒源白细胞介素－6（vIL-6)和病毒源干扰素调节因子－1（vIRF-1)的表达情况。结果 多数MM患者的骨髓活检标本可检出HHV8,荧光定量PCR发现阳性率为69．6％（16／23）;筑巢式PCR时的阳性率为82．6％（19／23）,骨髓穿刺和外周血标本的阳性率分别为4％（1／25）和0。临床分析表明病毒的检出可能与化疗有关。vIRF-1在骨髓活检标本中表达率很高,为83．3％（10／12）, vIL-6的表达率为0。结论 多发性骨髓瘤和HHV8感染有关,高表达的vIRF－1在多发性骨髓瘤发病的过程中可能起一定的作用。     

Bcl-1 Rearrangement and Cyclin D1 Protein Expression in Multiple Myeloma Precursor Cells

Nonrandomized chromosomal translocations of-- 1ten take place in multiple myeloma (MM) patientsand many of them involve immunoglobulin heavychain gene flgH) at 14q32. 3 and BCLI gene at11q13, leading to the rearrangement of Bcl-l/lgHgenes and the overexpression of cell cyclin DI protein[1'2]. In this study, the MM precursor cells werestudied in the respects of cyclin DI protein overexpression and BCL--l gene rearrangement to investigate the role of cyclin DI protein in the pathogenesiso…     

碱性成纤维生长因子在多发性骨髓瘤塑包切片中的表达

目的检测多发性骨髓瘤(MM)骨髓活检塑料包埋切片中的碱性成纤维生长因子(b-FGF2)的表达情况,探讨b-FGF2在MM发病机制中的作用。方法对20例初诊的MM患者和10例正常对照者进行骨髓活检,制成塑料包埋切片,应用免疫组织化学SP染色法检测骨髓组织中b-FGF2表达及MVD测定,进行分析研究。结果20例初诊MM患者骨髓中MVD高于对照组,12例b-FGF2表达阳性。结论b-FGF2和MM的血管生成密切相关。抑制b-FGF2的分泌将有可能成为一个新的有效的治疗方法。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓微小RNA-340-3p的表达情况及生物信息学分析

目的 探讨微小RNA(miR)-340-3p在骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓中的表达情况,并应用生物信息学技术分析其靶基因及功能.方法 利用基因表达谱芯片结合分层聚类在9例MDS患者和6例健康正常人骨髓中筛选出差异表达的miR-340-3p,并利用miRBase和Miranda软件预测其靶基因,并对预测的靶基因进行功能富集和信号通路分析.结果 与健康正常人比较,miR-340-3p在MDS患者骨髓中表达下调(P<0.05).获得共同76个潜在靶基因,包括BANP、KIF2C、DIDO1、GRM1等.基因本体(GO)分析显示靶基因主要富集于细胞生物学、分子功能、细胞组分,信号通路分析显示其主要富集于FoxO信号通路、NOD样受体信号通路、造血细胞系、Gap连接等信号转导通路等.结论 miR-340-3p在MDS患者骨髓中表达下调,其可能通过靶向负向调控下游的靶基因而参与MDS的发生发展.     

Survivin在多发性骨髓瘤中的表达及其与VEGF的相关性研究

目的观察Survivin在多发性骨髓瘤中的表达及其与VEGF的相关性。方法选择2011年1月～2012年6月在我院就诊的MM患者40例,所有患者均符合张之南主编的《血液病诊断和疗效标准》（1998年）中提出的MM诊断标准及疗效标准。采用免疫组化S—P法检测多发性骨髓瘤患者Survivin、VEGF的表达以及二者间的相关性。结果Survivin在MM患者骨髓组织中的阳性率达72．5％（29／40）,VEGF在MM患者骨髓组织中的阳性率达65．0％（26／40）。Survivin、VEGF在MM患者骨髓组织中的表达与治疗情况及肿瘤分期关系密切,差异存在显著性（P〈0．05）。Sun,ivin与VEGF在MM患者骨髓组织中共同阳性表达例数为23例,共同阴性例数8例,MM患者骨髓组织中Survivin和VEGF表达呈正相关（r=0．562,P〈0．05）。结论Survivin和VEGF均参与了MM的发生、发展过程．且与疾病的进展关系密切,Survivin和VEGF存在协同关系,值得临床予以关注。     

基因表达谱芯片检测肺鳞癌与正常肺组织差异表达的基因

目的：用基因芯片技术探讨肺鳞癌异常基因的表达。方法：提取肺鳞癌组织及正常肺组织的RNA,分别用Cy5-dCTP或Cy3-dCTP标记,再与4096点基因芯片杂交,筛选肺鳞癌组织和正常肺组织表达差异的基因。结果：肺鳞癌组织与正常肺组织表达差异基因225条,其中癌组织中上调基因为116条．下调基因109条;差异极显著性基因37条,表达上调24条,下调13条。结论：多基因参与肺鳞癌发病,基因芯片技术是肺癌基因筛选的有效方法。