复方红芪减方对周围神经再生影响的实验研究

目的　研究复方红芪提取液进行减方后对周围神经再生的作用。方法　建立钳夹损伤大鼠双侧坐骨神经的动物模型。按术后每日灌服药物的不同将 40只SD雄性大鼠随机均分为 4组。对照组 :灌服生理盐水 ;复方红芪组 :灌服复方红芪提取液 2ml ;减方组 :灌服复方红芪减方后提取液 2ml;补阳还五汤组 :灌服补阳还五汤 2ml。术后 2周及 4周 ,观察坐骨神经功能指数、运动神经传导速度及单位视野有髓神经纤维计数。结果　坐骨神经功能指数 :红芪组和减方组与对照组、红芪组与减方组的差异均有显著意义 (P >0 .0 5 ) ,且减方组优于红芪组 (P >0 .0 5 )。有髓神经纤维计数 :复方红芪组优于对照组 (P<0 0 1) ,减方组明显优于对照组 (P <0 .0 1) ,而红芪组与减方组间无显著差异。运动神经传导速度 :红芪组、减方组、补阳还五汤组与对照组相比 ,均优于对照组 (P <0 .0 5 ) ,但前 3组间无明显差异。结论　复方红芪减方提取液早期可以促进周围神经再生 ,药效更为专一 ,且优于传统方剂补阳还五汤。     

复方红芪减方提取液对坐骨神经损伤后表达bFGF、NGF和Trk的影响

目的 研究复方红芪减方提取液对坐骨神经损伤后表达bFGF、NGF和Trk的影响，从而进一步探讨复方红芪减方提取液促进损伤坐骨神经再生的机制。方法 将48只SD大鼠建成单侧坐骨神经钳夹损伤动物模型。大鼠随机分为2组。A组为复方红芪减方组：术后每日灌服复方红芪减方提取液2ml。B组为对照组：术后每日灌服生理盐水2ml。分别在损伤后1周、2周、3周及4周时每组处死6只取坐骨神经损伤处的远近端，用HE及免疫组化染色，进行有髓神经纤维计数及观察bFGF、NGF和Trk的表达。结果 有髓神经纤维计数在术后各时间点实验组均多于对照组，两者差异有统计学意义（P〈0．05）。bFGF和NGF的表达在术后1、3、4周时实验组多于对照组，但在术后第2周时两组差异无统计学意义（P〉0．05）。Trk表达在术后第1周时两组差异显著（P〈0．05），其他时间组两组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 复方红芪减方提取液促进周围神经再生，与其促进神经营养因子及其受体的表达或运输有关。     

促红细胞生成素促进大鼠坐骨神经再生作用的实验研究

目的 探讨促红细胞生成素(Erythoropoietin,EPO)对大鼠坐骨神经损伤修复后神经再生的影响,为周围神经损伤的临床治疗提供实验依据.方法 雄性SD大鼠40只,随机分为两组,即EPO组和神经生长因子(NGF)组,用硅胶管桥接10 mm的坐骨神经缺损,EPO组和NGF组分别注射EPO和NGF.术后4周和8周时每组分别提取10只大鼠,以坐骨神经功能指数(SFI)、运动神经传导速度(MNCV)、形态学观察和蛋白基因产物9.5(PGP 9.5)免疫组织化学染色,评估EPO对大鼠坐骨神经再生的影响.结果 术后4周SFI,EPO组为[(-78.85±3.87),x-±s,下同],NGF组为(-79.98±4.58),差异无统计学意义(P>0.05);术后8周SFI,EPO组为(-60.26±2.91),NGF组为(-64.65±4.11),差异有统计学意义(P<0.05).术后4周和8周时,EPO组MNCV、有髓神经纤维数目以及PGP9.5免疫阳性神经纤维的平均光密度和积分光密度均优于NGF组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 EPO 能促进大鼠坐骨神经损伤后的修复与再生.     

复方红芪提取液对许旺细胞分化的影响

目的　在对复方红芪提取液的研究中 ,发现其能促进外周神经损伤的修复 ,并发现其有促进许旺细胞增殖的作用。为了进一步探索复方红芪提取液对神经修复影响的机制 ,观察其对许旺细胞中的酪氨酸蛋白激酶 (PTKs)活性的影响。　方法　使用按 1∶160 0 ,1∶32 0 0 ,1∶64 0 0 ,1∶12 80 0稀释的复方红芪提取液 ,培养新鲜切取的SD大鼠坐骨神经。于培养后第 2 4、48和 96h时 ,使用 [Iγ 32 P]ATP掺入、液闪计数法 ,观察许旺细胞中PTKs的活性变化。使用神经生长因子 (NGF)作阳性对照 ,正常培养液作阴性对照。　结果　正常培养条件下 ,离体神经中许旺细胞的PTKs呈无活性状态。神经生长因子组可见PTKs轻度升高 ,至 96h活性仍有活性且较前稍强 ,峰值为 0 15 48。红芪组可见PTKs活性显著增加 ,随后即下降。峰值出现在第 48h ,1∶160 0 ,1∶32 0 0和 1∶64 0 0三种浓度间变化不明显 ,峰值分别为0 44 60、0 332 6和 0 4169,1∶12 80 0浓度时PTKs活性无变化。秩和检验第 48h、1∶64 0 0以上浓度的红芪培养与神经生长因子及正常对照组差异有显著性 (P <0 0 0 5 ) ,以后各时间间差异则无统计学意义。不同浓度的红芪提取液培养不同时间 ,PTKs活性呈负相关变化 ,秩和检验差异有显著性 (P <0 0 0 5 )。　结论　复方红     

纤维蛋白胶载神经生长因子促进周围神经再生的研究

目的　探讨纤维蛋白胶 (FG)作为神经生长因子 (NGF)载体对周围神经再生的促进作用。方法　将Wistar大鼠 96只随机分为 4组 ,即对照组、FG组、NGF组、FG +NGF组 ,每组 2 4只 ,以大鼠左侧坐骨神经为修复神经模型进行实验。术后 2、4、8周进行组织学检查 ,术后 8周进行电生理检查、肌湿重检测、图像分析和透射电镜观察。结果　FG +NGF组的神经传导速度、肌张力、肌湿重、有髓纤维截面积恢复率分别为 ( 84.10± 2 .33) %、( 83 .88± 2 .96 ) %、( 6 2 .5 4± 5 .94) %、( 71.0 1± 3 .6 2 ) % ,吻合口有髓纤维通过率为 ( 6 5 .5 1± 4.5 4) % ,高于对照组、FG组 ( P <0 .0 1) ,高于NGF组 (P <0 .0 5 ) ,FG +NGF组大鼠坐骨神经再生优于单纯NGF组。结论　纤维蛋白胶可作为NGF的载体 ,用纤维蛋白胶载NGF修复周围神经损伤 ,有促进周围神经再生的作用。     

丙戊酸钠充填导管促进大鼠外周神经再生的实验研究

目的 观察丙戊酸钠(VPA)充填导管对缺损外周神经再生的促进作用.方法 通过建立大鼠坐骨神经缺损模型.用硅胶管(1 cm)进行缺损神经段(0.8 cm)的桥接,局部应用8%VPA注射液10ul,观察VPA对神经再生和运动神经功能恢复的影响.30只大鼠随机分成2组,实验组在硅胶管局部注射VPA注射液;对照组在硅胶管局部注入生理盐水. 结果 术后每只大鼠每2周进行坐骨神经功能指数(SFI)检测,每4周做电生理检查,最后术后12周处死所有大鼠,对坐骨神经进行组织形态学分析.用数字图像分析软件检测有髓神经纤维髓鞘厚度.并对再生神经纤维轴突计数.通过统计软件分析发现SFI,电生理检查,神经组织性形态上两组差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 局部使用VPA于神经缺损的大鼠,可以促进损伤神经的轴突再生和运动功能恢复.因此VPA有望在临床上应用于外周神经损伤病例的治疗.     

NGF/MAG双基因共表达腺病毒修复大鼠周围神经损伤的实验研究

目的构建携带NGF及髓磷脂相关糖蛋白(myelin associated glycoprotein,MAG)基因序列的双基因共表达腺病毒(adenovirus expressing NGF and MAG,Ad-NGF-MAG),探讨其在大鼠坐骨神经损伤修复中的作用。方法将NGF和MAG共同克隆至5型腺病毒穿梭质粒p CA 13,并在HEK 293细胞中包装得到重组腺病毒Ad-NGF-MAG并测序鉴定。取雄性SD大鼠32只,体质量180~200 g;随机分成4组(n=8):对照组(正常对照)、空病毒组(Ad组)、单独表达NGF组(Ad-NGF组)和共表达NGF、MAG组(Ad-NGF-MAG组)。Ad组、AdNGF组和Ad-NGF-MAG组大鼠制备右侧坐骨神经损伤模型后,分别于术侧腓肠肌注射空腺病毒、Ad-NGF及AdNGF-MAG(1×108 PFU),隔天1次,共3次。对照组仅暴露右侧坐骨神经后关闭切口,术后对应时间点注射生理盐水10μL。术后31 d,分别行坐骨神经功能指数(sciatic nerve function index,SFI)、神经电生理检测;切取坐骨神经标本,行RT-PCR及Western blot检测NGF及MAG m RNA及蛋白表达水平,以及组织学观察。结果实验成功构建重组腺病毒Ad-NGF和Ad-NGF-MAG。32只大鼠术后均成活,切口Ⅰ期愈合。Ad-NGF-MAG组SFI、神经传导速度、诱发电位波幅、潜伏期均明显优于Ad-NGF组和Ad组,但未达对照组水平,比较差异均有统计学意义(P0.05)。Ad-NGF-MAG组内MAG m RNA和蛋白表达最高,NGF m RNA和蛋白表达高于对照组和Ad组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。组织学观察显示,对照组神经连续性好,Ad组神经纤维层次混乱,Ad-NGF组神经纤维层次结构清晰,局部断端再生良好,但神经纤维结构紊乱;Ad-NGF-MAG组神经纤维生长有序,神经直径较Ad-NGF组粗,神经纤维结构良好。结论坐骨神经损伤后修复过程中,腺病毒介导NGF与MAG共表达,既可促进神经纤维生长,又可抑制神经异常分支形成,促进神经结构与功能的恢复。     

复方红芪减方提取液促进坐骨神经损伤后修复的实验研究

目的研究复方红芪减方提取液对坐骨神经损伤后修复的效果，探讨利用传统中药治疗周围神经的损伤。方法30只SD大鼠随机分为三组。建立大鼠左侧坐骨神经切断原位缝合模型。A组为健康对照组，6只大鼠；B组为复方红芪减方组，C组为生理盐水对照组，每组各12只大鼠。分别在损伤后第8周和第12周时各取6只大鼠行坐骨神经电生理检测，之后取坐骨神经损伤处远、近端神经作冰冻切片，S100和NF200免疫荧光双染，DAPI复染核和计数有髓神经纤维数目。结果神经电生理检测大鼠坐骨神经传导速度B组明显高于C组。有髓神经纤维计数B组也明显多于C组。结论复方红芪减方提取液对促进周围神经的修复有明显的效果。     

腹腔注射ATP对大鼠坐骨神经再生影响的实验研究

目的 观察腹腔注射细胞外ATP对大鼠坐骨神经再生的影响。方法 健康雌性Wistar大鼠48只，随机分成两组。将两组大鼠左侧坐骨神经切断后立即行外膜吻合术。术后实验组腹腔注射ATP（2mg／kg）0．4ml，对照组注射生理盐水0．4ml。术后1周、4周和8周从每组随机取8只大鼠，检测每只大鼠双侧小腿三头肌湿重、术后1周时测神经纤维再生速度、术后4周时电镜检测髓鞘横截面积和髓鞘厚度。结果实验组与对照组相比，1周时神经再生速度快（P〈0．05）、4周时髓鞘横截面积大（P〈0．05）、髓鞘厚（P〈0．05），4周、8周时小腿三头肌湿重明显优于对照组（P〈0．05）。结论 腹腔注射细胞外ATP对大鼠神经再生和功能恢复具有较强促进作用。     

早期应用神经营养因子对周围神经损伤修复的研究观察

[目的]研究探索神经生长因子(nervegrowth factor NGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor bFGF)联用对大鼠坐骨神经钳夹损伤后神经纤维再生修复的促进作用和对失神经支配的小腿三头肌的保护作用。[方法]手术钳夹损伤坐骨神经后，损伤处神经内注射NGF和bFGF，对照组注射等量生理盐水，术后每日在术侧腓肠肌内注射药物，术后4、8、12周，进行足印分析及坐骨神经功能指数测定，取小腿三头肌称湿重，取脊髓及神经肌肉行组织病理观察。[结果]联用NGF bFGF，能显著改善神经损伤后引起的神经功能指数，有效地减轻由于失神经支配后肌肉的萎缩，促进神经纤维的修复与再生。[结论]联用NGF、bFGF对大鼠坐骨神经钳夹损伤后神经纤维再生修复具有显著的促进作用，可减轻失神经支配的小腿三头肌的萎缩。     

Compound injection of Radix Hedysari to promote peripheral nerve regeneration in rats

OBJECTIVE: To study the effect of compound injection of Radix Hedysari on peripheral nerve regeneration in rats. METHODS: Seventy-five healthy adult SD male rats, weighing 150 g, were randomized into 5 groups (15 rats in each group). The bilateral sciatic nerves of the rats were exposed and clamped with a smooth clamp to make an injury area of 2 mm. After clamp operation Group 1 was injected with compound injection of radix Hedysari (CIRH) 1.5 ml/day, Group 2 with CIRH 1.0 ml/day, Group 3 with CIRH 0.5 ml/day, Group 4 with nerve growth factor (NGF) 50 U/day, and Group 5 was taken as the control group without any management. The bilateral sciatic nerve was taken out at 3 days, 1, 2 and 4 weeks after clamping, stained with osmic acid and observed microscopically. The myelinated nerve fibers were counted. The nerve conduction velocity was determined 2 and and 4 weeks before sample taking the sciatic nerve function index was measured 4 weeks before sample taking. RESULTS: The results of nerve conduction velocity, the myelinated nerve fiber count and the sciatic functuion index in the CIRH treated groups were better than those in the control group. The results of the nerve conduction velocity and the myelinated nerve fiber count at 2 weeks and the nerve conduction velocity at 4 weeks in Group 1 were better than those of Group 4. Biological observation showed that degenerated and necrotic myelin sheath in CIRH treated Groups at 2 and 4 weeks decreased remarkably compared to the NGF treated group. CONCLUSIONS: CIRH can promote regeneration of peripheral nerves and absorption of degenerated and necrotic injured nerves. It has the same effect as NGF.     

碱性成纤维细胞生长因子在大鼠坐骨神经损伤修复中的作用

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂ Ｆ Ｇ Ｆ）对周围神经损伤的促修复作用。方法　建立大鼠坐骨神经离断模型,镜下进行神经外膜缝合,局部滴加药物和术后肌注ｂ Ｆ Ｇ Ｆ 以及临床用药神经生长因子（ Ｎ Ｇ Ｆ）,通过神经传导速度和功能指数评定观察坐骨神经修复情况。结果　术后１ 个月,以正常对照为标准,０ 基线为正常水平,生理盐水、 Ｎ Ｇ Ｆ、ｂ Ｆ Ｇ Ｆ 使用组神经功能指数评定结果分别为：－ １１４．３０±１０．３４、－ ７０．５０±１１．０１、－ ５０．４５±７．８２;术后３ 个月,分别为：－ ５４．９６±１６．４６、－ ３５．２１±１０．８０、－ ２７．５３±１１．２３,ｂ Ｆ Ｇ Ｆ组神经传导速度明显快于生理盐水组和 Ｎ Ｇ Ｆ 组（ Ｐ＜ ０．０１）。结论　ｂ Ｆ Ｇ Ｆ对坐骨神经损伤具有显著的促功能修复作用,并且在神经损伤早期就能最有效地发挥作用,效果明显优于临床用药 Ｎ Ｇ Ｆ。     

银杏叶提取物对坐骨神经再生的影响

目的：研究银杏叶提取物局部应用对坐骨神经再生的影响。方法：选Wistar大鼠32只，随机分为银杏叶提取物组和对照组。在双目放大镜下切断两组大鼠右侧坐骨神经，于神经损伤处和周围肌肉间隙内注射药物后立即行缝合术。2周后进行坐骨神经功能指数、电生理学和组织形态学观测评定。结果：银杏叶提取物组各项指标均优于对照组，其坐骨神经功能指数的恢复、神经纤维的生长速度及数量明显优于对照组。结论：银杏叶提取物局部应用可有效促进大鼠坐骨神经损伤的早期再生，加快神经再生速度与神经功能恢复。     

Effect of bilateral median nerve excision on sciatic functional index in rat: an applicable animal model for autologous nerve grafting

Autologous nerve graft is still the treatment of choice in peripheral nerve injury when end-to-end nerve repair is not possible. The sciatic nerve is the most widely used nerve in rat experimental studies. To assess the possibility of using the rat median nerve as a delayed animal autologous nerve graft model in nerve regeneration studies, the effect of median nerve excision on the sciatic functional index (SFI) was evaluated. Thirty rats were distributed into three equal groups: in the sciatic and median nerve excision (SMNE) group, 10 mm of the right sciatic nerve was excised and 5 mm of both median nerves were excised a week later; in the median nerve excision (MNE) group, 5 mm of both median nerves were excised (both sciatic nerves remained intact); in the control group, no intervention was performed. SFI was calculated before and after each intervention. There was no significant difference between mean SFI values calculated before and after median nerve excision in SMNE (-86.8 versus -88.4, P = 0.61) and MNE groups (-3.9 versus -3.3, P = 0.93). Therefore, it may be suggested that median nerve excision does not affect SFI measurements in intact and/or completely injured sciatic nerve, which may propose the median nerve as an autologous donor nerve graft model in rats.     

甲基泼尼松龙局部应用对周围神经损伤修复后的形态学研究

目的 观察甲基泼尼松龙对周围神经损伤修复后的形态学变化。方法 采用45只成年SD雄性大鼠，取双侧股外侧切口，钳夹双侧坐骨神经造成神经损伤，即刻于神经损伤局部肌肉间隙内给药，根据药物不同分为5组。大剂量甲基泼尼松龙组：每侧剂量为30mg；小剂量甲基泼尼松龙组：每侧15mg；地塞米松组：每侧2mg；对照组：用等量生理盐水；及正常组。术后4周取损伤神经远端神经，作成横切片后锇酸染色，计数轴索总数目及单位视野再生髓鞘数目，并行统计学分析。结果 腓总神经轴索总数目：大剂量甲基泼尼松龙组及地塞米松组优于对照组（P〈0．05）；小剂量甲基泼尼松龙组明显优于对照组（P（0．01），与正常组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。单位视野有髓神经纤维数目：大、小剂量甲基泼尼松龙组均明显优于地塞米松组及对照组（P〈0．01），与正常组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 神经损伤后局部应用甲基泼尼松龙可起到促周围神经再生的作用。     

周围神经损伤后急性期NGF、BDNF基因表达变化的实验研究

目的 观察大鼠坐骨神经损伤急性期神经生长因子(NGF)、脑源性神经生长因子(BDNF)mRNA含量的变化.方法 取SD大鼠48只,随机均分为8组.其中7组切断右侧坐骨神经并原位缝合,另1组为健康对照组.分别于术后1,2,3,4,5,6,7 d以吻合口为中心,取上下各5 mm共1cm坐骨神经提取总RNA,采取反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测组织中NGF、BDNF mRNA含量变化.结果 大鼠周围神经中NGF mRNA含量在正常组织有低水平表达.在损伤后1 d即明显升高,在损伤后5 d降低,随即恢复较高水平.BDNF在正常组织亦低水平表达,在损伤后4 d明显增高,5,6 d低至正常组织水平,7 d恢复较高水平.结论 大鼠坐骨神经损伤急性期NGF、BDNF基因表达变化不同步,提示不同因素在损伤后急性期NGF、BDNF含量变化中起作用.     

再生小室内间断给予蛋白激酶C激动剂对周围神经表达NGF及损伤修复的影响

目的探讨大鼠坐骨神经再生小室内间断给予蛋白激酶C激动剂-佛波醇酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)后,坐骨神经蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)mRNA、神经生长因子(nerve growth factor, NGF)mRNA表达变化规律及轴突数目变化. 方法 SD大鼠42只行双侧坐骨神经中段切断约5 mm,"T"形硅胶管套接,随机分为6组,分别为损伤1、3天,1、2、3和4周组.右侧间断给予1×10-9mol/L PMA(PMA侧);左侧注射等量生理盐水(对照侧).采用组织切片核酸原位杂交(in situ hybridization,ISH)技术检测各组术后各不同点PKC mRNA和NGF mRNA在坐骨神经表达的动态变化及轴突数目变化. 结果对照侧大鼠坐骨神经PKC mRNA在损伤后表达上调,第2周达高峰后下降;NGF mRNA在损伤后表达上调,第3周达高峰值后下降.PMA侧PKC mRNA于第2、3和4周表达较对照侧明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);NGF mRNA第2、3和4周表达也较对照侧明显增强,差异有统计学意义(P＜0.01).轴突数目在2、3和4周时多,差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 PKC介导了周围神经损伤修复中的NGF mRNA表达及神经再生,而且PMA能够促进NGF mRNA表达及促进轴突生长.