广藿香醇研究概述

广藿香是传统的芳香化湿药,其挥发油不仅被用作药用提取物,还被用作食品添加剂和香料,广泛应用于药品、食品及日用化妆品行业.广藿香醇作为广藿香挥发油的主要成分,是历版《中华人民共和国药典》规定的用于评价广藿香药材及广藿香油质量的指标成分[1].而广藿香醇是否具有广藿香及广藿香油的生物活性?其应用现状如何?有何开发应用的价值?这些都是值得关注的问题.为此,笔者对近年来国内外广藿香醇相关研究文献进行了系统查阅和综合分析,从其生物来源、应用概况、生物活性、制备与检测、代谢转化等多方面进行概述,以期为广藿香醇的开发利用提供参考.     

中药抑制幽门螺杆菌及其作用机制的研究进展

幽门螺杆菌被证明与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等消化系统疾病密切相关,近年来利用中药抑杀该菌已经成为医学界的研究热点。本文检索了近几年来国内外关于中药抑杀幽门螺杆菌的研究文献,从现代医学角度整理了有该功效的中药,并按照其作用机制进行分类,同时也分析了目前相关研究过程中存在的问题。     

中药及其有效成分抑制幽门螺杆菌的研究进展

通过分析中药及其有效成分对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)的体外抑杀试验结果以及治疗HP相关性疾病的临床疗效,并对研究中存在的问题进行了探讨,为寻找、开发抗HP感染治疗药物提供依据。鉴于中药作为一个庞大的天然化合物资源库,结合现代分子生物学的理论和技术,很可能从中找到新的抑制HP的有效成分,为开发治疗HP相关性疾病的有效药物开辟一条新途径。     

广藿香PcHAD基因克隆及其参与广藿香醇生物合成功能分析

目的 从广藿香Pogostemon cablin中克隆HAD(haloacid dehalogenase)超级家族蛋白水解酶基因PcHAD,验证其编码蛋白与广藿香醇合酶（patchoulol synthase,Pc PTS）蛋白互作,探究其参与调控广藿香醇生物合成的作用。方法 从广藿香转录组数据中,筛选出一条具有完整编码区并且包含HAD-like结构域的HAD基因序列（Pc HAD）,并对该基因进行克隆和生物信息学分析。利用q RT-PCR对Pc HAD的表达模式进行分析。利用酵母双杂交实验进一步验证Pc HAD与广藿香Pc PTS蛋白的互作情况。通过瞬时过表达Pc HAD,分析其对广藿香醇甲羟戊酸合成途径（mevalonatepathway,MVA）相关基因的表达以及对广藿香醇含量的影响。结果 从广藿香中克隆得到HAD-like基因Pc HAD,其开放阅读框为1149 bp,编码蛋白长度为382个氨基酸,蛋白相对分子质量为43 000,且为不稳定的亲水性蛋白,亚细胞定位结果表明该蛋白定位于叶绿体。酵母双杂交实验结果表明Pc HAD完整蛋白能与Pc PTS完整蛋白互作,且Pc HADN...     

广藿香醇的急性毒性研究

目的观察广藿香醇对小鼠的急性毒性,评价其安全性,为新药研发和临床用药提供理论依据。方法采用口服和腹腔注射给药途径,观察小鼠给予不同剂量广藿香醇花生油溶液后的死亡率,Bliss法计算半数致死量。结果广藿香醇花生油溶液的灌胃给药的LD50是4.693 g/kg,95%的置信区间上限是5.498 g/kg,下限是4.038 g/kg;广藿香醇花生油溶液的腹腔注射给药的LD50是3.145 g/kg,95%的置信区间上限是3.675 g/kg,下限是2.663 g/kg。结论广藿香醇的安全性较高,属于低毒药物。     

幽门螺杆菌试纸口腔幽门螺杆菌530例分析

目的:观察分析幽门螺杆菌试纸口腔幽门螺杆菌的临床应用。方法:选取我院从2011年3月到2012年3月收治的口腔扁平苔藓患者共530例。入选患者均需要进行幽门螺旋杆菌快速检验试纸进行口腔幽门螺旋杆菌的检查以及传统的氮素呼气试验对胃部的幽门螺旋杆菌进行检查。结果:胃部试验幽门螺旋杆菌的阳性率为76.4%,口腔试验中幽门螺旋杆菌的阳性率为87.0%,两组对比有显著性差异(P<0.01);另外采用幽门螺旋杆菌快速试纸对口腔幽门螺旋杆菌的检测阳性率为87.0%,其检测率相对较高。结论:幽门螺旋杆菌能够有效检测出口腔内部的幽门螺旋杆菌,并且口腔中幽门螺旋杆菌的阳性率要高于胃部的阳性率。因此需要注重口腔幽门螺旋杆菌的感染,其有可能是诱发胃部感染的一个主要的细菌存储位置。     

分子蒸馏法纯化广藿香挥发油中广藿香醇

目的 对广藿香挥发油进一步纯化,得到含广藿香醇更高的产品.方法 采用正交试验法优化分子蒸馏技术纯化广藿香挥发油所需温度、进料速度、刮膜转速的最佳工艺参数,采用了弹性石英毛细管柱HP-5,在检测器温度为280℃,气化温度为280℃;分流比为20:1条件下进行GC法测定.并用内标法定量,考察了蒸发温度对广藿香挥发油提取率的影响以及分子蒸馏技术与传统的水蒸气法的比较.结果 利用分子蒸馏提纯广藿香挥发油的最佳蒸发温度为65℃时,广藿香挥发油的质量分数和提取率分别达到40.71%和76.55%.结论 分子蒸馏法比传统的水蒸气蒸馏法所得产物中有效成分质量分数和转移率要高,在广藿香挥发油提纯的工业化生产方面有很好的应用前景.     

创建酿酒酵母细胞工厂发酵生产广藿香醇

广藿香醇是存在于中药广藿香挥发油中的一种重要倍半萜类化合物,被认为是广藿香油药理功效和香味的主要贡献成分,具有抗菌、抗肿瘤和抗氧化等多种生物学活性。目前,全球广藿香醇及其混合精油需求量大,传统植提法存在浪费土地,污染环境等诸多问题,因而亟需一种新的方法高效、低成本的生产广藿香醇。为了拓宽广藿香醇的生产方式,实现在酿酒酵母中异源生产广藿香醇,该研究首先将来源于广藿香Pogostemon cablin的广藿香醇合酶(PS)基因进行密码子优化后置于诱导型强启动子GAL1下,转入萜类底盘菌YTT-T5,成功获得可发酵生产(4.0±0.3)mg·L^-1广藿香醇的工程菌PS00。为了提高转化率,采用了蛋白质融合手段将丹参来源的SmFPS基因与PS基因进行融合,广藿香醇摇瓶产量提高25倍,达(100.9±7.4)mg·L^-1。在此基础上,进一步优化融合基因的拷贝数,广藿香醇的产量提升了90%,达到(191.1±32.7)mg·L^-1。最终通过发酵工艺优化,该菌在精确发酵体系中广藿香醇产量能达到2.1 g·L^-1,...     

狙击幽门螺杆菌

幽门螺杆菌是20年前由两位澳大利亚医生马歇与华伦,从人体胃窦部的粘膜中分离出来．因呈螺旋形、弯曲状而得名。此菌对人类的威胁相当大,据统计,在发达国家人群的感染率达到50％,至于发展中国家这个比例还要高．已成为人类的健康公敌。     

广藿香醇药理作用研究进展

广藿香醇(PA)是广藿香的主要活性成分,药理研究表明,PA具有抗炎、抗胃溃疡、抗癌、保护肺和脑损伤、抗菌、预防乳腺炎、结肠炎和动脉粥样硬化、抗光老化、治疗腹泻型肠易激综合征、抗氧化应激、血管舒张和抗伤害等多种作用,初步的作用机制研究表明,其抗炎作用与下调炎症介质的mRNA表达来抑制促炎细胞因子产生及减少细胞外调节蛋白激酶(ERK)介导的NF-JB活化等有关;抗胃溃疡、保护肺损伤和脑损伤及抗光老化作用的作用与其抗氧化和抗炎作用有关;PA抑制MV4-11细胞增殖和诱导其凋亡可能与核转录因子-κB(NF-κB),磷酸化M2型丙酮酸激酶(p-PKM2)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达发生明显改变有关;其抗人结直肠癌细胞作用可能与抑制组蛋白去乙酰化酶(HDAC)-2的表达和HDAC酶活性,以及随后下调c-myc和激活NF-κB通路有关;通过阻断表皮生长因子受体(EGFR)通路的磷酸化和激活c-Jun氨基末端激酶(JNK)诱导A549癌细胞凋亡;抗前列腺癌与线粒体细胞色素C凋亡途径激活有关;其抗病毒作用可能与调节1型螺旋酶(RLH)信号通路或与病毒蛋白或核酸以及病毒与细胞结合的位点直接结合来阻断病毒吸附细胞;其抗菌、预防乳腺炎、结肠炎和动脉粥样硬化作用机制与抗炎有很大的关系,PA的药理作用仍需进一步的研究。为了加快PA药理作用分子机制的探索和发现,扩大其应用前景,本文综述了近10年来PA的代谢、生物活性及其可能的作用机制,以期为PA的开发和应用提供参考。     

载锰单原子纳米酶和驱蛔素的壳聚糖水凝胶制备及其抗幽门螺杆菌活性

目的 设计一类共载锰单原子纳米酶(manganese single-atom nanozyme,MnSAE)和驱蛔素(ascaridole,Asc)的壳聚糖靶向水凝胶,为幽门螺杆菌Helicobacter pylori的根除治疗提供一种新思路。方法 首先以NH₂-PEG-COOH为连接臂,将脲基(urea-)修饰到壳聚糖的C₆-羟基上,制备壳聚糖靶向材料脲基PEG壳聚糖(Urea-PEG-Cs,UPCs),然后以中空的沸石咪唑酯骨架材料-8(zeolitic imidazolate frameworks-8,ZIF-8)为模板吸附锰离子(Mn²⁺),并通过高温热解法构建MnSAE,最后将MnSAE和土荆芥Chenopodium ambrosioides的药效成分驱蛔素加入到UPCs溶液中,构建共递送MnSAE和驱蛔素的壳聚糖靶向水凝胶(Asc/MnSAE@UPCs);利用核磁共振氢谱(¹H-NMR)、傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,...     

泻黄散加减治疗幽门螺杆菌相关性口臭

目的:观察泻黄散加减结合抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)三联疗法治疗Hp相关性口臭的临床疗效.方法:选取符合Hp相关性口臭脾胃湿热证的患者71例,随机分为治疗组36例和对照组35例,对照组予常规抗Hp治疗,治疗组在抗Hp治疗基础上给予泻黄散加减,治疗后1周,统一复查口臭值,观察近期疗效;治疗后4周再次复查口臭值,并复查Hp,观察远期疗效.结果:治疗组与对照组口臭疗效比较,近期疗效,治疗组总有效率为94.44％;对照组总有效率为80.00％,两组比较有显著性差异(P＜0.05),同样远期疗效(治疗后1个月),两组比较仍有显著性差异,治疗组优于对照组.两组在根治Hp方面疗效对比,治疗组有效率86.11％,对照组62.85％,两组有显著性差异(P＜0.05).结论:泻黄散加减结合抗Hp三联疗法治疗Hp相关性口臭疗效确切.     

重组幽门螺杆菌菌毛蛋白FLaA IgY乙基纤维素微囊对胃炎小鼠的治疗作用

 目的 研究重组幽门螺杆菌菌毛蛋白FlaA IgY-硫糖铝乙基纤维素微囊对幽门螺杆旋菌(Helicobacter pylori)感染小鼠的治疗和清除效果。方法 采用有机溶剂蒸发技术制备经硫糖铝处理后的IgY乙基纤维素微囊。模拟胃部环境,检测在不同pH的正常胃蛋白酶浓度(0.02 mg·mL^-1)和异常胃蛋白酶浓度(0.04 mg·mL^-1)的条件下不同浓度硫糖铝对rFlaA IgY的保护效果。将rFlaA IgY-硫糖铝微囊按0.8、1.6、3.2及6.4 mg·g^-1·d^-14种不同剂量灌服实验组小鼠,通过检测治疗前后血清中抗幽门螺杆旋菌抗体水平以及胃黏膜的尿素酶水平,评价不同浓度rFlaA IgY对小鼠胃部幽门螺杆旋菌的治疗和清除效果。结果 结果表明,40%的硫糖铝处理过的IgY在pH 3.0条件下的模拟胃液中能维持77.87%~82.14%的活性达8 h,而在pH 2.0的模拟胃液条件中处理8 h能保持57.76%~63.28%,在pH 1.0模拟胃液中处理8 h能保持21.52%~22.79%。制备的rFlaA IgY-硫糖铝乙基纤维素微囊的包封率为83.79%,5 h体外释放率为95.92%。各组小鼠经rFlaA IgY微囊治疗后血清中幽门螺杆旋菌抗体水平与阳性对照组相比均显著下降(P<0.001)。当使用剂量为0.8 mg·g^-1·d^-1时,对幽门螺杆旋菌的清除率为50%,当剂量为1.6 mg·g^-1·d^-1时,幽门螺杆旋菌清除率为70%,当剂量为3.2 mg·g^-1·d^-1时,H. pylori清除率为80%,当剂量达到6.4 mg·g^-1·d^-1时,H. pylori的清除率可达100%。结论 40%的硫糖铝对rFlaA IgY具有很好的保护作用,可以作为rFlaA IgY的保护剂。 rFlaA IgY-硫糖铝乙基纤维素微囊具有良好的缓释效果,经口服对小鼠胃部幽门螺杆旋菌感染具有良好的治疗和清除效果。     

运用近红外光谱法建立广藿香中 百秋李醇的定量模型

目的:建立广藿香中百秋李醇含量的近红光谱外定量模型,快速测定广藿香中百秋李醇含量。方法:用气相色谱法测定102批广藿香的百秋李醇含量,采集并用一阶导和标准归一化预处理近红外光谱,结合偏最小二乘法建立百秋李醇的定量模型。结果:建立的校正模型,内部交叉验证决定系数达到0.991 10,校正均方差为0.012 9,预测均方差为0.012 8,内部交叉验证均方差为0.033 15。结论:建立的近红外定量模型稳定,准确可靠,可快速对广藿香百秋李醇含量进行测定。     

Anti-Helicobacter pylori activity of anacardic acids from Amphipterygium adstringens

Amphipterygium adstringens (Schltdl.) Standl. (Anacardiaceae) is widely used in traditional Mexican medicine for the treatment of gastritis and ulcers. In this work, we studied the anti-Helicobacter pylori activity of its bark, this Gram-negative bacterium is considered the major etiological agent of chronic active gastritis and peptic ulcer disease, and it is linked to gastric carcinoma. From a bio-guided assay of the fractions obtained form a continuous Soxhlet extraction of the bark, we identified that petroleum ether fraction had significant antimicrobial activity against Helicobacter pylori. From this fraction, we isolated an anacardic acids mixture and three known triterpenes: masticadienonic acid; 3α-hydroxymasticadienonic acid; 3-epi-oleanolic; as well as the sterol β-sitosterol. Only the anacardic acids mixture exhibits a potent dose-dependent antibacterial activity (MIC = 10 μg/ml in broth cultures). It is enriched in saturated alkyl phenolic acids (C_15:0, C_16:0, C_17:0 C_19:0) which represents a novel source of these compounds with potent anti-Helicobacter pylori activity. The promising use of anacardic acids and Amphipterygium adstringens bark in the development of an integral treatment of Helicobacter pylori diseases is discussed.     

荆花胃康胶丸联合双歧杆菌治疗幽门螺杆菌感染的回顾性研究

[目的]回顾性分析荆花胃康胶丸联合双歧杆菌治疗幽门螺杆菌(Hp)感染证属脾胃湿热证患者的临床疗效和安全性.[方法]选取首都医科大学附属北京中医医院门诊Hp感染证属脾胃湿热证病例115例,将其按照治疗方案分为3组,分别为标准四联组(35例)、荆花胃康胶丸+标准四联组(42例)、荆花胃康胶丸+双歧杆菌组(38例).治疗2周...     

On the potential of Tephrosia purpurea as anti-Helicobacter pylori agent

Aim of the study

Since Tephrosia purpurea (Linn.) Pers. (Fabaceae) has traditional use in curing different types of wounds including gastroduodenal ulcers, it was of interest to evaluate the in vitro anti-Helicobacter pylori activity profile of the plant extract and its fractions with a view to examining its therapeutic potential, if any.

Materials and methods

Employing clinical isolates and standard strains of Helicobacter pylori, the extract and fractions were bioevaluated in terms of MIC and MBC values, acid stability, time-kill kinetics, drug resistance, and synergistic potential.

Results

The methanolic extract showed promising activity against clinical isolates and standard strains of Helicobacter pylori, including metronidazole-resistant strains. Fractionation of the extract revealed the n-hexane and chloroform fractions to possess marked activity. The extract and the less polar fractions remained functionally active in acidic condition similar to stomach environment, exhibited consistent bacteriostatic activity during repeated exposure, and demonstrated synergism, complete or partial, even with antibiotic-resistant strains.

Conclusion

Apolar fractions of Tephrosia purpurea may have therapeutic potential in combating Helicobacter pylori mediated gastroduodenal disorders.     

Aqueous extracts and polysaccharides from Liquorice roots (Glycyrrhiza glabra L.) inhibit adhesion of Helicobacter pylori to human gastric mucosa

Aims

Aqueous extracts from the roots of Glycyrrhiza glabra L. (Fabaceae) are widely used for treatment of stomach ulcer. The clinical proven effects are related to the presence of anti-inflammatory 12-keto-triterpensaponins in the extracts. Apart from that the influence of Glycyrrhiza glabra extract on the bacterial adhesion of Helicobacter pylori to stomach tissue was to be investigated. Additionally the influence of Glycyrrhiza glabra secondary compounds on the bacterial adhesion of Porphyromonas gingivalis, a major pathogen for induction of periodontal inflammations was to be investigated.

Methodology

In vitro cytotoxicity against Helicobacter pylori was investigated by agar diffusion assay; antiadhesive properties of aqueous extract, raw polysaccharides and purified polysaccharide fractions was investigated by means of an in situ adhesion assay with FITC-labelled bacteria on tissue slides of human stomach resectates.

Results

Aqueous extract (1 mg/mL) of Glycyrrhiza glabra significantly inhibited the adhesion of Helicobacter pylori to human stomach tissue. This effect was related to the polysaccharides isolated from the extract, with one purified acidic fraction (0.25 SPB) as main active polymer. Purified polysaccharides did not exhibit direct cytotoxic effects against Helicobacter pylori and did not influence hemagglutination. Additionally raw polysaccharides from Glycyrrhiza glabra were shown to have strong antiadhesive effects against Porphyromonas gingivalis.

Conclusion

Aqueous extracts and polysaccharides from the roots of Glycyrrhiza glabra are strong antiadhesive systems, which may be used as potent tools for a further development of cytoprotective preparations with anti-infectious potential.     

左金方对幽门螺旋杆菌感染的人GES-1细胞增殖与凋亡的作用研究

目的研究左金方对幽门螺旋杆菌引起人正常胃黏膜上皮(GES-1)细胞增殖与凋亡的影响。方法幽门螺旋杆菌以不同的感染复数(1∶1、50∶1、100∶l、200∶1、300∶1)感染GES-1细胞,于12、24、48 h后,CCK-8检测细胞的增殖活性;以不同质量浓度(0.5、1.0、2.0、4.0μg/m L)左金方作用幽门螺旋杆菌感染的GES-1细胞12、24、48 h后,收集细胞,CCK-8检测细胞的增殖活性,流式细胞仪和Western blotting检测细胞的凋亡率;Hochest染色检测凋亡细胞的形态学改变。结果幽门螺旋杆菌感染GES-1细胞后,感染复数越大,侵染时间越长,抑制细胞生长和促进细胞凋亡的作用越强,幽门螺旋杆菌以100∶1的感染复数作用人GES-1细胞12、24、48 h后,细胞存活率分别降低到(80.57±1.21)%、(70.04±3.21)%、(67.74±2.91)%,细胞的凋亡率分别增加到(23.74±1.71)%、(53.60±1.87)%、(70.67±2.87)%;与1.0μg/m L左金方共培养24 h后,细胞存活率上升到(97.67±1.04)%,细胞凋亡率降低到(31.04±1.02)%,与相应模型组对比,差异显著(P0.01);Westernblotting结果表明,左金方各处理组细胞Caspase-3蛋白水平表达均明显降低;Hochest荧光染色,从形态学的角度进一步验证了这一结果。结论幽门螺旋杆菌感染人GES-1细胞后,可以抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,左金方可以降低幽门螺旋杆菌引起的细胞损伤,保护GES-1细胞。