苦瓜蛋白体外抗柯萨奇B3病毒感染

柯萨奇病毒B组(Coxsackievirus B group, CoxB)是病毒性心肌炎常见病原,目前尚无有效的治疗方法,近年来发现苦瓜核糖体失活蛋白(Ribosom e-inactivating protein, RIP)具有明显的抗病毒、抗肿瘤及调节免疫等多种生物活性[1],有很高的药用价值.笔者从苦瓜果肉中分离纯化苦瓜蛋白,并进行体外抗CoxB 3病毒感染作用的研究,旨在寻找高效抗CoxB3病毒感染作用的药物,现将结果报告如下.     

槐果碱体外抗柯萨奇病毒B3m的作用

目的 以HeLa细胞为模型,观察从苦参中提取的槐果碱在体外抗柯萨奇病毒B3m(CVB3m)的作用.方法 ①用微量细胞培养法观察槐果碱对HeLa细胞的毒性.②用细胞病变效应(CPE)抑制法观察槐果碱体外抗CVB3m作用.③用MTT法和结晶紫染色法观察槐果碱对CVB3m感染的HeLa细胞的保护作用:在96孔板上种植HeLa细胞并予CVB3m吸附1 h,加入不同浓度的槐果碱,并设立病毒、细胞、槐果碱对照,培养15 h后以MTT法和结晶紫染色法测定比较各组细胞能量代谢率和细胞存活数.结果 ①槐果碱稀释到＜391 μg/mL,对HeLa细胞无毒性;≥783 μg/mL引起HeLa细胞CPE.②槐果碱6.25 ～ 50 μg/mL有直接抗病毒作用,减轻CPE;＞100 μg/mL反而会加重、加快CPE.③槐果碱1.56 ～ 25 μg/mL对感染CVB3m的HeLa细胞有保护作用,用MTT法和结晶紫染色法测得细胞能量合成代谢、细胞存活数较病毒对照组增加(P＜0.05);槐果碱在50、100 μg/mL时反而加重病毒对细胞的抑制,使细胞存活数、细胞代谢率较病毒对照组下降(P＜0.05).结论 一定浓度的槐果碱在体外有抗CVB3m作用,对感染CVB3m的HeLa细胞有保护作用.     

槐果碱体外抗柯萨奇病毒B3m的作用

目的以HeLa细胞为模型,观察从苦参中提取的槐果碱在体外抗柯萨奇病毒B3m(CVB3m)的作用。方法①用微量细胞培养法观察槐果碱对HeLa细胞的毒性。②用细胞病变效应(CPE)抑制法观察槐果碱体外抗CVB3m作用。③用MTT法和结晶紫染色法观察槐果碱对CVB3m感染的HeLa细胞的保护作用:在96孔板上种植HeLa细胞并予CVB3m吸附1h,加入不同浓度的槐果碱,并设立病毒、细胞、槐果碱对照,培养15h后以MTT法和结晶紫染色法测定比较各组细胞能量代谢率和细胞存活数。结果①槐果碱稀释到<391μg/mL,对HeLa细胞无毒性;≥783μg/mL引起HeLa细胞CPE。②槐果碱6.25~50μg/mL有直接抗病毒作用,减轻CPE;>100μg/mL反而会加重、加快CPE。③槐果碱1.56~25μg/mL对感染CVB3m的HeLa细胞有保护作用,用MTT法和结晶紫染色法测得细胞能量合成代谢、细胞存活数较病毒对照组增加(P<0.05);槐果碱在50、100μg/mL时反而加重病毒对细胞的抑制,使细胞存活数、细胞代谢率较病毒对照组下降(P<0.05)。结论一定浓度的槐果碱在体外有抗CVB3m作用,对感染CVB3m的HeLa细胞有保护作用。     

阿昔洛韦抗柯萨奇病毒B3作用的初步观察

目的观察阿昔洛韦抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用.方法通过活细胞计数评价阿昔洛韦对Hep-2细胞的细胞毒作用;通过观察病毒感染后的细胞病变效应计算病毒抑制率,评价阿昔洛韦在Hep-2细胞培养中的抗CVB3作用.结果阿昔洛韦对Hep-2细胞的半数细胞毒性浓度(TC50)在0.2mg/mL以上;CVB3的半数抑制浓度TC50为25μg/mL,治疗指数为8.4.结论阿昔洛韦安全性较高并能有效地抑制柯萨奇病毒B3在Hep-2细胞中的增殖.     

甲基强的松龙对柯萨奇病毒B3m体外作用的研究

目的：探讨甲基强的松龙体外在无免疫因素影响下与柯萨奇病毒B3m(CVB3m)作用情况。方法：首先测定甲基强的松龙对Hela细胞的毒性，并以微量法及全量法从最大无毒浓度开始2倍系列稀释后作用于感染CVB3m的Hela细胞，并收集各稀释度上清液进行病毒半数感染量（TCID50）重新滴定。结果：（1）甲基强的松龙高浓度（＞1．25mg/ml)对Hela细胞有毒性作用，最大无毒浓度为1．25mg/ml；（2）低家度甲基强的松龙可促进细胞生长，且在1．25mg/ml,0.625mg/ml有限制病毒复制作用，其细胞病变及培养上清液的TCID50均低于病毒对照孔，抑制倍数分别为249和31．8倍。结论：甲基强的松龙本身无直接促进病毒增殖作用，低浓度反而保护细胞，并可借助体内免疫系统，发挥免疫抑制作用，在柯萨奇病毒感染时，适时、适量应用激素利于病情恢复。     

大黄提取液抗柯萨奇病毒B3的实验研究

采用微量细胞培养法观察细胞病变效应 (Cytopathiceffect,CPE) ,测定经不同剂量大黄提取液作用后的病毒滴度 ,用逆转录—聚合酶链反应 (RT PCR)检测药物作用后细胞冻融液中的病毒核酸(CVB RNA) ,研究大黄提取液的抗柯萨奇病毒B组 (CVB)作用 ,探讨其抗病毒作用机制。结果 :不同剂量大黄提取液和病毒作用后 ,细胞均出现CPE ;不同剂量药物作用于细胞后 ,不能阻止CVB3感染 ;当CVB3感染细胞后 ,大黄提取液能阻止病毒增殖 ,并表现出一定的量效关系 ,其治疗指数(TI) =10。提示大黄提取液不能直接杀灭CVB3,不能阻止CVB3吸附、穿入易感细胞 ,而通过阻止CVB3核酸复制或 /和以后环节发挥抗病毒作用。     

柯萨奇病毒B组3型疫苗研究进展

柯萨奇病毒B组3型（coxsackie virus B3,CVB3）属于小核糖核酸病毒科（picornaviridae）,肠道病毒属（enterovirus）,通常感染后会使人出现发热、打喷嚏、咳嗽等感冒症状,但也可导致新生儿、婴幼儿以及免疫缺陷的成人出现严重的心脏、胰腺及中枢神经系统症状[1]。根据美国疾病预防控制中心（CDC）统计数据发现,     

柯萨奇B3病毒抗体与心肌细胞结合的发病作用

目的 研究柯萨奇B3病毒单克隆抗体（CVB3－mAb0与心肌细胞结合，以探讨CVB3－mAb对心肌细胞的致病作用。方法 采用细胞副合技术制备CVB3-mAb，并应用各细胞株分泌的mAb与人、牛、大鼠心肌细胞进行免疫组化分析,比较各株分泌的CVB3－mAb与不同种动物心肌细胞间结合的差异。结果 利用细胞融合技术制备出26种CVB3-mAb。其部分CVB3－mAb可与心肌细胞膜或心肌细胞内的肌原纤维结合，呈棕黄色环状重叠或横纹，CVB3－mAb 2A4，2D4，1G6，1H9，1H10，1H11与人、牛、大鼠心肌细胞均呈阳性反应；CVB3－mAb 2A2仅与人的心肌细胞结合；CVB3－mAb 2B2，2H4，1C10，1G4与人及大鼠心肌细胞结合；CVB3－mAb 2A3与牛和大鼠心肌细胞结合；CVB3－mAb 2G12仅与大鼠心肌细胞结合；CVB3-mAb 1E8仅与牛的心肌细胞结合，且CVB3－mAb 2D4与人心肌的结合为心肌细胞膜，而与牛及大鼠心肌的结合为心肌细胞内的肌原纤维。结论 各CVB3－mAb与不同动物心肌细胞间的结合及结合形式不同；且同一动物的心肌细胞与CVB3－mAb结合有差异。部分柯萨奇B3病毒抗体与动物心肌细胞结合，可引起心肌炎。     

酸枣仁总生物碱抗抑郁作用的实验研究

【目的】研究酸枣仁总生物碱对小鼠抑郁模型的影响。【方法】将50只小鼠按体重随机分为空白对照组、阳性对照组、酸枣仁总生物碱低、中、高剂量组,总共5个组。利用拮抗小鼠的利血平诱导体温下降实验、悬尾应激实验和空场实验等抑郁模型考察酸枣仁总生物碱的抗抑郁活性。【结果】酸枣仁总生物碱能缩短小鼠悬尾的不动时间,3个剂量组之间存在剂量依赖关系。在拮抗利血平引起的体温下降实验中,给予酸枣仁总生物碱1h后能有效地拮抗小鼠体温下降。空场实验表明各组间小鼠自主活动无显著性差异。【结论】酸枣仁总生物碱具有一定的抗小鼠实验性抑郁作用。     

香鳞毛蕨有效部位对红色毛癣菌体外抗真菌的作用

目的 采用试管稀释法和CLSI M38-A2微量液基稀释法研究香鳞毛蕨有效部位(简称DF)对红色毛癣菌的体外抗真菌作用,并比较两种方法的一致性.方法 利用两种方法测定DF对红色毛癣菌标准株(6株)和临床分离菌株(7株)的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC).结果 试管稀释法测定DF对13株红色毛癣菌的MIC范围为生药0.469～ 15.0 mg/mL;MFC范围为生药0.938～ 15.0 mg/mL.其中DF对标准菌株MIC范围为生药0.469 ～ 7.5 mg/mL,几何均值为2.652 mg/mL,MFC范围为生药0.938～ 15.0 mg/mL,几何均值为3.750 mg/mL.微量稀释法测定DF对红色毛癣菌标准菌株的MIC范围为生药0.312 5～5.0 mg/mL,几何均值为1.25 mg/mL;其MFC范围为生药1.25 ～ 20.0 mg/mL,几何均值为5.0 mg/mL.结论 香鳞毛蕨有效部位对红色毛癣菌有抑菌作用和杀菌作用,两种方法的测定结果有较好的一致性.     

金银花体外抗流感病毒有效部位研究

目的:筛选金银花抗流感病毒的有效部位,为金银花药效物质基础阐明提供依据。方法:通过观察金银花不同提取部位对流感病毒(甲型和乙型)侵染的宿主MDCK(狗肾细胞系,为流感病毒宿主细胞株)细胞的保护作用,以MDCK细胞病变(CPE)百分率为指标,经Reed-Muench方法测定各半数有效浓度(EC50)及治疗指数(TI),从而筛选出金银花抗流感有效部位。结果:金银花的石油醚提取物、丙酮提取物、乙醇提取物、水提取物以及粗提取物均有抑制流感病毒的作用,而三氯甲烷提取物与乙酸乙酯提取物均无抑毒效果;其中石油醚提取物及乙醇提取物的EC50较利巴韦林还要小,抑菌活性强。结论:金银花具有确切的抗流感病毒作用,其石油醚提取物及乙醇提取物是抗流感病毒有效成分最为集中的部位,其效果较利巴韦林更好。     

卫矛抗心肌缺血有效部位的化学成分研究

目的 对卫矛Euonymus alatus抗心肌缺血有效部位的化学成分进行研究.方法 利用各种色谱法分离化学成分,通过理化性质和波谱法鉴定化合物的结构.结果 从卫矛中分离得到5个化合物,分别为1-[3-(α-D-吡哺葡萄糖氧基)-4,5-二羟基苯基]-乙酮(Ⅰ)、8-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基苯乙醇(Ⅱ)、丁香酚苷(Ⅲ)、金丝桃苷(Ⅳ)、橙皮苷(Ⅴ).结论 化合物Ⅰ为新化合物,命名为鬼箭羽苷(guijianyuside),化合物Ⅱ、Ⅲ为首次从卫矛中分离得到.     

山苦茶利胆作用活性部位的筛选

目的筛选山苦茶利胆作用的活性部位。方法将豚鼠离体胆囊肌条置于恒温浴槽，分别加入山苦茶不同部位并比较其对肌条张力的影响，以及采用胆总管插管引流胆汁方法。观察各部位对大鼠胆汁分泌的作用。结果山苦茶部位B和D对胆囊肌条具有剂量依赖的的收缩作用，并显著促进大鼠胆汁分泌。结论山苦茶B和D部位具有显著的利胆作用。     

8种中药注射剂体外抗内毒素作用的观察

目的：观察板蓝根、双黄连、清开灵等8种中药注射剂的体外抗内毒素作用。方法：注射剂经稀释后取0．2mL与内毒素0．2mL(1EU/mL）温孵，然后利用鲎试剂定量测定内毒素含量，计算各注射剂对内毒素的清除率，比较不同注射剂的抗内毒素作用。结果：双黄连粉针剂、清开灵注射液、板蓝根注射液、穿琥宁注射液和鱼腥草注射液都有明显的体外抗内毒素作用，其中双黄连、清开灵和板蓝根的抗内毒素作用最强，稀释2500倍仍能够清除70％以上的内毒素；穿琥宁、鱼腥草和鱼金注射液其次；复方大青叶注射液和抗腮腺炎注射液的体外抗内毒素作用较弱。结论：在清热解毒中药中寻找抗内毒素作用的制剂将有一定的发展前景。     

中草药浸提温度对有效成分浸出浓度的影响

目的：建立中草药浸提过程的温度与有效成分浸出浓度之间的关系的数学模型，方法：在前文提出的中草药浸提过程动力学模型的基础上，进一步研究扩散系数和浓度梯度随温度的变化。结果：对不同温度下从丹参Ｓalvia miltiorrhizaBge.中浸提有效成分丹参酮（tanshinone)的实验表明，该模型能满意地反映实验事实，结论：本工作建立的模型能描述湿度与有效成分浸出浓度之间的关系。     

回心草心脏保护作用的活性部位筛选

目的探讨回心草各极性部位抗心律失常、抗心肌缺血及耐缺氧作用,初步筛选其活性部位。方法采用导联生理仪观察回心草不同极性部位对氯仿诱发小鼠室颤的作用;并采用常压耐缺氧、特异性心肌缺血、缺氧及小鼠断头模型,观察回心草各部位对小鼠存活时间的影响。结果回心草醋酸乙酯相低剂量和正丁醇相低剂量均可显著降低氯仿诱发小鼠室颤的发生率、延长心律失常出现时间;还可明显延长小鼠常压耐缺氧存活时间,并可使特异性心肌缺血、缺氧小鼠存活时间显著增加,其中醋酸乙酯相各剂量还可显著延长断头小鼠张口动作持续时间。结论回心草可提高小鼠耐缺氧能力,具有明显的抗心律失常、抗心肌缺血作用,其95%乙醇提取物的醋酸乙酯及正丁醇部分可能是有效活性部位。     

麻杏石甘汤体外抗A型流感病毒作用靶点的研究

目的研究麻杏石甘汤体外抗A型流感病毒的作用靶点。方法运用细胞培养技术、血凝试验和MTT法检测麻杏石甘汤在4种给药方式中对流感病毒血凝滴度和流感病毒感染的MDCK细胞活性的影响。结果在直接灭活病毒作用中,麻杏石甘汤在3.19￣31.25 mg/mL浓度范围内的血凝滴度低于病毒对照组,在15.63￣31.25mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组;在干预病毒吸附作用中,麻杏石甘汤在1.95￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度低于病毒对照组,在7.81￣31.25 mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组;在保护宿主细胞作用中,麻杏石甘汤在3.19￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度低于病毒对照组,在7.81￣31.25 mg/mL时病毒血凝滴度低于利巴韦林组,差异均有统计学意义(P<0.01￣0.05)。在这3种给药方式中,麻杏石甘汤对流感病毒感染的MDCK细胞的治疗指数高于利巴韦林。在抑制病毒增殖的作用中,麻杏石甘汤在7.81￣31.25 mg/mL浓度范围内病毒血凝滴度显著低于病毒对照组,差异有统计学意义(P<0.01￣0.05)。与利巴韦林组比较,检测的麻杏石甘汤5个浓度点的作用不明显,在给药方式中,麻杏石甘汤对MDCK细胞的治疗指数也低于利巴韦林组。结论麻杏石甘汤通过直接杀伤病毒、干预病毒吸附、抑制病毒增殖、保护宿主细胞而发挥抗流感病毒作用,该方直接杀伤病毒、干预病毒吸附和保护宿主细胞的作用优于利巴韦林片,抑制病毒增殖的作用不及利巴韦林片。