建立大鼠C6脑胶质瘤模型的有效方法

大鼠Ｃ6脑胶质瘤模型是脑胶质瘤实验研究中应用最为广泛的模型之一[1,2]。建立此模型的常用方法有2种,即徒手法和立体定向法[35]。我们以此为基础,配以两种细胞悬浮介质即无血清双倍1640和含质量分数为1%琼脂糖的无血清双倍1640,探讨了建立此模型的有效方法。一、材料和方法1.材料:成年雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠100只,购自本校动物中心;Ｃ6胶质瘤细胞株购自中科院上海细胞生物学研究所;其他物品由本研究所提供。2.细胞培养与处理:Ｃ6胶质瘤细胞以含体积分数为10%新生牛血清(购自Ｈｙｃｏｌｏｎｅ公司)的1640培养基(购自Ｇｉｂｃｏ公司)常规培养…     

脑胶质瘤白细胞介素-6自分泌或旁分泌环路的研究

目的　研究白细胞介素 6(IL 6) /IL 6受体 (IL 6R)自分泌或旁分泌环路与脑胶质瘤的关系。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测IL 6和IL 6R基因在 4株脑胶质瘤细胞株、62例脑胶质瘤组织标本、5例良性脑膜瘤组织和 5例人正常脑胶质细胞中的表达 ;将IL 6单抗 (McAb)或IL 6RMcAb与脑胶质瘤细胞共同孵育 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测对细胞生长的抑制作用。结果　脑胶质瘤细胞株C6、9L、U 2 5 1和SHG44均有IL 6和IL 6R的表达 ,脑胶质瘤组织标本中 47例 (75 .81% )表达IL 6、5 2例 (83 .87% )表达IL 6R、41例 (66.13 % )同时表达IL 6和IL 6R ;良性脑膜瘤组织 4例表达IL 6,人脑正常胶质细胞仅有IL 6弱表达 ,两者均无IL 6R表达。IL 6McAb和IL 6RMcAb能够显著抑制脑胶质瘤细胞的增殖 ,并存在剂量依赖关系(P <0 .0 1)。结论　脑胶质瘤很可能存在IL 6/IL 6R自分泌或旁分泌环路 ,阻断此环路可以明显抑制胶质瘤细胞的恶性增殖     

阿霉素控释剂对大鼠C6脑胶质瘤治疗的研究

目的 探讨自制阿霉素控释剂在体内、外释药效果及对大鼠Ｃ６胶质瘤动物模型的治疗作用。方法 应用荧光光谱法检测阿霉素控制剂在人工脑脊液及１８只正常家兔脑内药物释放的情况；检测阿霉素控释剂对１０只脑内荷瘤ＳＤ大鼠生存期的影响以及不同给药方式（避部或腹腔给药）对３０只ＳＤ大鼠皮下接种肿瘤生长的抑制作用。结果 阿霉素控释剂在人工脑脊液和兔脑内可持续释放达１０ｄ以上；局部控释化疗可明显延长脑内荷瘤大鼠的生存期，实验组中位生存时间为３１ｄ。局部阿霉素控释化疗对于皮下肿瘤有明显抑制效应，与腹腔注射等量阿霉素化疗组相比，差异有非常显著性（Ｐ〈０．０１）。结论 控释化疗在避免系统化疗全身毒性的，增加肿瘤局部药物浓度，可有效抑制肿瘤生长。     

Angiostatin基因联合反义HIF-1α基因治疗人肝癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的研究Angiostatin基因联合反义缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因治疗人肝癌裸鼠皮下移植瘤的协同抑制作用。方法用人肝癌细胞株SMMC-7721建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。四组荷瘤裸鼠分别注射质粒PcDNA3、Angiostatin/PcDNA3、HIF-1α/PcDNA3B、Angiostatin/ PcDNA3 HIF-1α/PcDNA3B。观察肿瘤生长曲线,检测肿瘤的Angiostatin、血管内皮生长因子(VEGF)、HIF-1α表达和微血管密度(MVD),利用TUNEL染色法行原位细胞凋亡分析。结果Angiostatin基因治疗在早期具有抑制肿瘤生长的作用;Angiostatin基因治疗组的MVD(24.8±2.8)低于空质粒对照组(30.2±4.1),VEGF表达高于空质粒对照组,细胞凋亡指数(2.87±0.48)高于空质粒对照组(1.55±0.43);联合治疗组有明显抑制肿瘤生长的作用,HIF-1α局部低表达,MVD (14.6±2.1)低于Angiostatin基因治疗组(24.8±2.8),VEGF表达低于单独治疗组,细胞凋亡指数(5.12±0.63)高于单独治疗组。结论肿瘤对Angiostatin基因治疗可以产生耐受性;反义HIF-1α基因阻断肿瘤的缺氧适应途径在一定程度上解决了抗血管生成治疗的耐药性问题。     

不同方法转染人前列腺癌PC-3细胞pEGFP-N1基因的体外实验研究

目的:探讨转染人前列腺癌PC-3细胞pEGFP-N1基因的最佳转染方法。方法:以超声微泡造影剂、超声辐照、脂质体转染及其相互结合的方法,将质粒pEGFP-N1基因转染人前列腺癌PC-3细胞,24h后以荧光显微镜观察前列腺癌PC-3细胞中的绿色荧光蛋白表达情况,并用流式细胞仪测定转染率。结果:以超声+微泡+脂质体组基因转染效率最高,与其他组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:超声联合微泡与脂质体结合能明显提高pEGFP-N1基因在人前列腺癌细胞中的转染率,是一种较理想的基因转染方法。     

转染抑癌基因KLF6对前列腺癌PC-3细胞的作用研究

目的:研究抑癌基因KLF6对人前列腺癌细胞系PC-3细胞的生长增殖、细胞周期和对Bc l-2和Cyc lin D1蛋白表达的影响及其可能的作用机制。方法:利用RT-PCR法克隆目的基因KLF6,采用阳离子脂质体介导将含或不含KLF6的pEGFP-C1质粒转染入PC-3细胞,分别作为转染组和对照组。分别进行噻唑蓝(MTT)法观察PC-3细胞的生长抑制率,流式细胞仪检测细胞周期比例变化和凋亡率,免疫组化法观察PC-3细胞Bc l-2和Cyc lin D1的表达水平变化。结果:转染了抑癌基因KLF6的前列腺癌PC-3细胞生长抑制率为(30.0±5.4)%(对照组为0%,P<0.01);细胞周期比例表现为G2/M期减少为(11.2±0.9)%[对照组为(25.2±2.8)%,P<0.05],G0/G1期比例增加为(80.0±9.8)%[对照组为(58.6±7.3)%,P<0.05];细胞凋亡峰为(24.3±2.3)%[对照组为(5.2±0.7)%,P<0.01];Bc l-2的表达率为(18.7±3.2)%[对照组为(41.8±5.9)%,P<0.01];Cyc lin D1的表达率为(25.3±3.7)%[对照组为(38.5±4.6)%,P<0.05]。结论:抑癌基因KLF6的转染可以明显抑制前列腺癌PC-3细胞的生长增殖,并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调Bc l-2和Cyc lin D1的表达有关。     

应用羊膜双池系统对颗粒细胞和内泡膜细胞在甾体激素分泌中相互作用的研究

采用羊膜双池培养系统观察猪卵巢颗粒细胞（Ｇ－Ｃ）和内泡膜细胞（Ｔ－Ｃ）在甾体激素分泌中的相互作用，并与纤维膜双池相比较。分别将Ｇ－Ｃ和Ｔ－Ｃ种在羊膜两侧，内池为Ｇ－Ｃ，外池为Ｔ－Ｃ；经４８小时培养后收集内、外地培养液，测定雌二醇（Ｅ２）、孕酮（Ｐ）和睾酮（Ｔ）含量。结果表明：在羊膜双池系统中生长的Ｇ－Ｃ和Ｔ－Ｃ比纤维膜双池培养的细胞保持了更活跃的甾体激素分泌功能。外地Ｔ－Ｃ分泌的更多Ｔ透过羊膜到达内地，作为芳香化酶底物，使Ｇ－Ｃ合成更多Ｅ２（可达２４３５ｐｍｏｌ／Ｌ）；Ｇ－Ｃ的Ｐ（５２５μｍｏｌ／ｕ和Ｔ（１０．２μｍｏｌ／Ｌ）产量也高于纤维膜双池。本研究还观察了促性腺激素对羊膜双池培养Ｇ－Ｃ和Ｔ－Ｃ分泌功能的作用。羊膜双池培养模拟了在体的两种卵巢细胞在甾体激素合成和分泌过程中的相互作用，是研究Ｇ－Ｃ和Ｔ－Ｃ的旁分泌调节较理想的模型。     

转化生长因子-β1对肾小球系膜细胞TRPC6表达的影响

目的：观察转化生长因子-β1（TGF-β1）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）瞬时受体势C6（TRPC6）表达的影响,并探讨糖尿病肾病（DN）的发病机制。方法：GMC予TGF—β1 10ng／ml刺激24h后,间接免疫荧光法检测GMC TRPC6的表达;免疫印迹法观察TRPC6的表达。结果：GMC存在TRPC6的表达,以细胞膜表达为主;TGF-β1刺激GMC可有TRPC6表达下调（P〈0．05）。结论：肾小球系膜细胞存在TRPC6的表达,TGF-β1刺激后TRPC6表达下调;TGF-β1可能通过下调TRPC6参与了DN的发病。     

脾内转染白细胞介素-2和/或12基因增强接种肝癌大鼠T细胞功能研究

目的　探讨脾内直接注射白细胞介素IL 2、12基因对血IL 2和IL 12 ,以及T细胞活性的影响。方法　构建IL 2和或IL 12基因的逆转录病毒载体。含IL 2和或IL 12基因的包装细胞于不同时间进行脾内注射转染脾细胞。比较大鼠血IL 2和IL 12浓度、T细胞活性和毒性反应。结果　IL单基因治疗后血清IL 2或IL 12明显增高。IL 2 /IL 12联合基因组中血清IL 2和IL 12增加较单基因组显著。病理示肝癌组织中淋巴细胞浸润明显增多。IL治疗组治疗后 7d ,T细胞活性较对照组显著增高 (P <0 .0 5 )。联合基因组治疗后 7d ,T细胞功能较IL单基因组增强(P <0 .0 5 )。结论　脾内直接注射IL 2和或IL 12基因可增强T细胞活性 ,IL联合基因治疗优于IL单基因。     

黏附分子T-cadherin表达对胶质母细胞瘤C6细胞的生抑制作用

目的 探讨T—cadherin分子表达对胶质母细胞瘤C6细胞增殖的影响。方法 利用脂质体将pcDNA3和pcDNA3．T—cadherin表达质粒转染C6细胞，以克隆形成试验和细胞增殖试验研究T-cadherin表达对C6细咆增殖的影响。结果 转pcDNA3．T-cadherin质粒的C6细胞形成的细胞克隆数显著少于转染pcDNA3载体质粒的C6细胞形成的克隆数，两者差异有统计学意义（P〈0．01）。转染后表达T—cadherin分子C6细胞的生长速度明显慢于转染空载体不表达T—cadherin的C6克隆（P〈0．01），且T—cadherin表达水平与C6细胞增殖速度呈负要关。结论 T—cadherin分子表达显著抑制胶质母细胞瘤C6细胞的增殖。     

Nonhypercalcemic 1,25-(OH)2D3 analogs potently induce the human osteocalcin gene promoter stably transfected into rat osteosarcoma cells (ROSCO-2).

1,25-Dihydroxyvitamin D3 [1,25-(OH)2D3] is the active hormonal form of vitamin D3 and has potent effects on bone and calcium regulation. Over the past decade it has become apparent that 1,25-(OH)2D3 has other effects on cellular proliferation that potentially could be developed for therapy in human malignancy. Since the hypercalcemic effects of 1,25-(OH)2D3 have limited that use in the human, novel nonhypercalcemic analogs of 1,25-(OH)2D3 have been synthesized. The molecular mechanism of this divergence in these antiproliferative and calcium-regulating actions is unexplained. We have previously examined the human bone-specific gene osteocalcin as a model of the molecular mechanisms of vitamin D action in bone and have shown that induction of the osteocalcin gene by 1,25-(OH)2D3 is mediated through an unique and complex palindromic region of the promoter similar to but distinct from those of other steroid hormone-responsive elements. Using an osteosarcoma cell line permanently transfected with the vitamin D-responsive promoter of the human osteocalcin gene linked to a "reporter" gene, we have shown that there is a dose-dependent induction of CAT activity by 1,25-(OH)2D3 and that the potencies of vitamin D metabolites and analogs are comparable to those found in other vitamin D bioassays. Furthermore, vitamin D analogs, including MC-903, 22-oxa-1,25-(OH)2D3, and delta 22-1,25S,26-trihydroxyvitamin D3, which effect cellular differentiation but lack hypercalcemic activity in vivo, exhibit osteocalcin promoter inductive actions virtually identical to those of 1,25-(OH)2D3. Consideration of these and other data support the hypothesis that the divergent effects of such analogs on differentiation and calcium homeostasis reflect pharmacokinetic differences in vivo rather than distinct 1,25-(OH)2D3-sensitive pathways.     

转染BIG-3基因的人骨髓基质干细胞向软骨细胞诱导分化的实验研究

目的研究转染BIG-3基因对人骨髓基质干细胞(hBMSCs)向软骨纠胞诱导分化的影响。方法将构建好的pMSCVpuro-BIG-3转染至建系的hBMSCs,5μg/mL嘌罗霉素筛选12 d后,扩增并收集细胞,电泳证实特定条带无误。实验分三组：hBMSCs-BIG-3组、hBMSCs-EV组和hBMSCs组,每组重复6次,将三组细胞制成微粒模拟三维培养模式,分别加入浓度为400 ng/mL的重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP一2)作用14 d后,检测甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原mRNA,利用MPS60病理图象分析系统采集图像,并进行灰度分析,半定量比较基质表达量。结果灰度值：hBMSCs-BIG-3组为684 481 822,hBMSCs-EV组为439 101 780,hBMSCs组为441 082 183,hBMSCs-BIG-3组灰度值明显高于后两组(P＜0．05),hBMSCs-EV组和hBMSCs组之间差异无显著性意义(P=0．862)。结论BIG-3基因有助于hBMSCs向软骨细胞诱导分化。     

Functional activity of human hepatoma cells transfected with adenovirus-mediated hepatocyte nuclear factor (HNF)-4 gene

Fulminant hepatic failure (FHF) is still associated with high mortality despite recent advances in medical management. There is need of an effective and safe bioartificial liver (BAL) support to help keep patients with FHF alive until an organ becomes available for transplantation or the native liver recovers. The aim of this study was to establish highly functional liver cells by means of transfecting hepatocyte nuclear factor (HNF)-4 gene for the development of BAL. We constructed adenovirus vector carrying rat HNF-4 cDNA, and transfected to hepatoma-derived cell lines, HepG2 and HuH-7, to enforce expression of the exogenous HNF-4 gene. We analyzed expression of HNF-4, HNF-1, and liver-specific genes in cells infected by the adenovirus vector expressing HNF-4. Adenovirus-mediated HNF-4 gene transfer resulted in increases in expressions of HNF-4, HNF-1, and liver-specific genes such as apolipoproteins, alpha1-antitrypsin (alpha1-AT), phosphoenolpyruvate carboxy-kinase, cytochrome P450 families, and glutamine synthetase in transfected hepatoma cells. Cells overexpressing HNF-4 removed ammonia from medium supplemented with NH4Cl to a greater extent than control cells. These findings demonstrated that transfected cell lines restored differentiated gene expressions and liver-specific function by the overproduction of HNF-4. HNF-4-overexpressing hepatocyte cell lines are useful for bioreactor of BAL systems.     

放线菌素D和VM-26对大鼠胶质瘤细胞增殖的影响的体内实验研究

目的研究放线菌素D（Actinomycin D，ACTD）和替尼泊苷（Teniposide，VM-26）对大鼠胶质瘤细胞增殖的体内治疗效果。方法将野生型的C6鼠胶质瘤细胞接种于鼠脑右侧尾状核（对照组10只，空载组10只），并对鼠脑内已形成的C6胶质瘤分别用ACTD及VM-26抗瘤缓释剂瘤区原位注射（治疗组各10只）。观察各组大鼠的一般情况、生存期、肿瘤病理学和磁共振成像（MRI）动态改变，采用PCNA计数、TUNEL法检测肿瘤细胞增殖活性及凋亡。结果对照组及空载组大鼠平均生存期为19．3天，ACTD组6只及VM-26组3只大鼠生存期明显延长，存活期超过200天；除因病理检查人为处死各2只外，ACTD组治疗后4周内死亡2只，VM-26组5只。MRI检查对照组大鼠脑内有明显瘤灶，治疗组大鼠脑内瘤灶治疗后明显减少或消失，均与病理学检查结果一致，而且治疗组大鼠C6细胞增殖活性降低，大量细胞凋亡，ACTD较VM-26显著。结论ACTD可望成为体内局部应用治疗胶质瘤的优选化疗药物。     

枸橼酸氢钾钠治疗泌尿系混合性结石的疗效分析(附44例报告)

目的：探索枸橼酸氢钾钠[Uralyt-U[（C6H5O7）5-H3K6Na6]]治疗泌尿系结石的确切疗效。方法：将44例患者随机分为A、B两组。A组20例采用654-2、黄体酮及排石中药方剂治疗,所选剂量较大;B组24例采用枸橼酸氢钾钠治疗。两组均于10天内取已排出的结石样一同送检,结果进行统计学对照分析。结果：Uralyt-U[（C6H5O7）5-H3K6Na6]治疗混合性结石的疗效最好,B组显著性好于A组。结论：Uralyt-U[（C6H5O7）5-H3K6Na6]对泌尿系结石有较好作用,疗效满意。     

L-N6-(1-亚氨乙基)赖氨酸对大鼠移植肺缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨L-N6-(1-亚氨乙基)赖氨酸(L-NIL)对大鼠移植肺缺血再灌注损伤的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠18只,体重250～350 g,随机分为3组(n=6),假手术组(S组);肺移植组(L组)肺移植后恢复再灌注,冷缺血时间约1 h;L-NIL组再灌注即刻经尾静脉输注L-NIL 3 mg/kg.各组均于再灌注即刻经尾静脉注射0.5%伊文氏蓝0.2 ml.再灌注2 h时取左肺组织,测定肺湿/干重(W/D)比、伊文氏蓝含量、MDA含量、髓过氧化物酶(MPO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)活性;并行病理学观察.结果 与S组比较,L组肺组织W/D比和伊文氏蓝含量增加,MDA含量、MPO及iNOS活性升高,eNOS活性降低(P＜0.05).与L组比较,L-NIL组肺组织W/D比和伊文氏蓝含量减少,MDA含量、MPO及iNOS活性降低,eNOS活性升高(P＜0.05),肺组织毛细血管内充血减少,炎性细胞浸润减少.结论 再灌注早期静脉注射L-NIL可减轻大鼠移植肺缺血再灌注损伤.