高三尖杉酯碱诱导HL-60细胞凋亡过程的研究

目的：探讨高三尖杉酯碱对HL—60细胞凋亡过程的影响。方法：DNA电泳及流式细胞术。结果：DNA电泳出现细胞凋亡时特征性生化改变—DNA“Ladder”样带。FCM显示在G0／G1峰前有一低DNA含量峰，即凋亡细胞峰。不同研究方法均表明HHT能诱导HL—60细胞凋亡，其影响强度和作用时间及剂量呈依赖关系。结论：HHT抗白血病的机理可能是通过诱导细胞凋亡实现的。     

高三尖杉酯碱和异三尖杉酯碱对人急性早幼粒白血病细胞凋亡 …

目的 研究高三尖杉酯碱和异三尖酯碱对人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０凋亡的影响。方法采用流式细胞术、ＤＮＡ凝胶电泳、光镜及透电镜等方法。结果 证明高三尖杉酯碱及异三尖杉酯碱能快速、显著地诱导ＨＬ－６０细胞的凋亡,其作用有明显的浓度及时间依赖性。高三尖酯碱的活性明显高于异三尖杉酯碱。结论 高三尖杉酯碱及三尖杉酯碱皆可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,但高三尖杉酯碱的生物活性明显高于异三尖杉酯碱。     

高三尖杉酯碱诱导HL60细胞端粒酶活性的变化

目的研究高三尖杉酯碱(Homohrringtonine,HHT)对HL60细胞端粒酶活性的影响.方法不同浓度HHT作用于HL60细胞12 h及0.02 mg/L HHT作用HL60细胞不同时间后,采用TRAP-PCR-ELISA检测HL60细胞端粒酶活性.结果HHT浓度增加至0.04 mg/L和0.05 mg/L时,HL60细胞端粒酶活性与0 mg/L组相比明显下降(P均＜0.05).0.02 mg/L HHT作用HL60细胞18 h、24 h、30 h后,HL60细胞端粒酶活性明显低于0 h组(P均＜0.05),且低于空白对照(P均＜0.05).结论HHT是一种有效的端粒酶活性抑制剂,其对端粒酶活性的抑制呈时间和浓度依赖性.     

低分子RNA及5—Fu对白血病细胞系K562细胞抑制作用的实验观察

目的：观察低分子ＲＮＡ及５－Ｆｕ在白血病细胞系Ｋ５６２细胞中的作用。方法：在Ｋ５６２细胞培养中加低分子（实验组１）、５－Ｆｕ（实验组２）、低分子ＲＮＡ和５－Ｆｕ（实验组３）及Ｐ．Ｂ．Ｓ（对照组）,观察集落细胞数,死、活细胞计数及细胞蛋白含量。结果：集落细胞数对照组为１４２个,实验组１为７０个,抑制率为５０．７％,实验组２为７１个,抑制率为５０．５％,实验组３为４１个,抑制率为７１．１％;活、死细胞     

高三尖杉酯碱治疗急性白血病机制的研究

目的探讨高三尖杉酯碱（HHar）对急性髓细胞白血病（AML）的疗效明显优于急性淋巴细胞白血病（ALL）的可能机制.方法以成人急性白血病（AL）原代细胞为研究对象,充分利用其遗传性和体内细胞相似的特点,模拟人体用药后的最大血药浓度,采用高、中、低3种浓度梯度对HHar进行研究.首先采用光镜、扫描电镜、透射电镜、DNA凝胶电泳、二苯胺法、流式细胞术等一系列国内外检测细胞凋亡的经典方法,充分证实HHar确可诱导AL原代细胞凋亡.尔后,进一步选取其中较为经济的光镜下计数细胞凋亡率、二苯胺法定量测定凋亡细胞的DNA片段化率及锥虫蓝染色光镜下计数坏死率3种方法定量观察HHar对ALL及AML原代细胞的诱导凋亡和杀伤,得出相应的时间、剂量和效应关系,并进行对比分析.结果HHar可诱导AL原代细胞凋亡,AML原代细胞对HHar诱导凋亡的敏感性高于ALL原代细胞.结论AML原代细胞对HHar诱导凋亡的敏感性高于ALL原代细胞,这是其临床疗效优于ALL的可能机制.     

三尖杉酯碱及高三尖杉酯碱对体外培养瘤细胞集落形成率的影响

用软琼脂集落法研究了几种正常及癌细胞对三尖杉酯碱(H)及高三尖杉酯碱(HH)的剂量反应曲线。三种瘤细胞对药物的敏感性依次为HL-60,L1210及B16。正常小鼠粒系祖细胞GM-CFC对药物较耐受。HH的活性约为H的2倍。HH对L1210细胞的杀伤具有高度的时间依赖性。直接取自一名病人的肿瘤克隆原细胞对HH的敏感性低于体外传代的细胞系。     

HHT诱导HL-60细胞凋亡的细胞形态学及细胞动力学变化

本文应用细胞培养及电镜等技术，探讨了高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）对ＨＬ－６０细胞凋亡过程的影响，结果表明ＨＨＴ能诱导ＨＬ－６０细胞出现凋亡细胞典型的形态学改变，即胞浆空泡增多，染色质浓集，且向核膜聚集，或浓集形成境界分明的颗粒块状或新月形小体；且其作用强度和时间及剂量呈一定的依赖关系。明确了ＨＨＴ其抗白血病的机理是通过诱导细胞凋亡实现的，为指导临床用药提供了科学依据。     

Ca^2＋螯合剂对三尖杉酯碱诱导HL60细胞凋亡的影响

目的 了解细胞内Ｃａ＾２＋在三尖杉酯碱诱导ＨＬ６０细胞凋亡中的作用。方法 以三尖极酯碱单独或与Ｃａ＾２＋螯合剂ＥＧＴＡ共同处理ＨＬ６０细胞后，用流式细胞仪和ＤＮＡ凝胶电泳检测细胞凋亡的发生。结果 Ｃａ＾２＋螯合剂ＥＧＴＡ抑制了细胞凋亡，结论三尖杉脂碱诱导的ＨＬ６０细胞凋亡需要Ｃａ＾２＋参与。     

高三尖杉酯碱为主方案治疗急性非淋巴细胞白血病40例报告

本文总结高三尖杉酯碱为主方案治疗４０例急性非淋巴细胞白血病，获得满意的疗效，其完全缓解率为６０％。     

高三尖杉酯碱治疗慢性期慢性粒细胞白血病21例

目的 研究小剂量,长疗程高三尖杉酯碱(LD-HHT),对慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)完全血液学缓解(CHR)及疾病无进展长期生存的影响.方法 对2006年一月前在我院确诊的CML-CP患者21例,行肌肉注射或静脉滴注给药:HHT1mg/d 持续8周,2mg/d 持续4周,间歇4-5周,再进行下1个疗程,并作为维持治疗方案.血象分类中有原始细胞者:WBC长至4.0×109/L左右给药,降至1.2×109/L时停药.不受间歇期限制.结果 连续LD-HHT长疗程治疗4年,于2010年1月统计,19例无进展生存(85%)2例急变,其中13例达CHR,6例仍在CML-CP.结论 LD-HHT长疗程治疗能显著延长CML的慢性期,提高患者血液学缓解率.     

Survivin基因RNAi真核表达载体对HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的 构建Survivin的shRNA表达质粒并将其导入白血病细胞株HL-60细胞以探讨PNA干扰对HL-60细胞增殖及凋亡的影响.方法 设计、合成两对针对survivin的shRNA序列,连接到带有人U6启动子的裁体质粒pSINsi-Hu6中,将构建重组质粒命名为pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2.pSIN/shRNA1转染HL60细胞,应用四唑盐(MTT)比色法观察细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 酶切分析和测序证实pSIN/shRNA1和pSIN/shRNA2构建成功.MTT测定显示转染重组质粒pSIN/shRNA1入HL-60细胞48、72和96 h后细胞增殖明显受到抑制,分别与阴性对照组、空白对照组组比较,差异有显著性(P＜0.05).流式细胞仪分析pSIN/shRNA1组胞凋亡率达(20.21±0.75)%,明显高于阴性对照组的(2.58±0.48)%和空白对照组的(1.26±0.30)%.结论 成功地构建了survivin基因RNAi真核表达栽体,且pSIN/shRNA1可序列特异性地抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,为白血病的基因治疗奠定基础.     

氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和诱导凋亡的影响,为其抗肿瘤研究提供理论依据。方法：将HL-60细胞分为不同浓度氟伐他汀处理组（终浓度分别为0、0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1）,对照组不加氟伐他汀,阳性药对照组加入全反式维甲酸(ATRA,终浓度为10 μmol•L^-1）,计数活细胞数目检测细胞增殖情况;用CCK-8试剂盒检测HL-60细胞生长抑制率;用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果：与对照组比较,氟伐他汀0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1处理1~4 d 的HL-60细胞,活细胞数有不同程度减少(P<0.01),且随着氟伐他汀剂量的增加和作用时间的延长,活细胞数明显减少。用氟伐他汀处理HL-60细胞2~72 h后,细胞生长抑制率随着氟伐他汀剂量的增加和处理时间的延长逐渐升高,其中氟伐他汀10.0和20.0 μmol•L^-1处理48和72 h后,细胞生长抑制率明显高于同浓度氟伐他汀作用2 h后（P<0.01）。流式细胞仪分析结果表明,与对照组比较,氟伐他汀处理HL-60细胞48 h后,G₀/G₁期细胞百分比明显上升（P<0.05）,S期细胞百分比明显下降及细胞凋亡率增加（P<0.01）。当用甲羟戊酸和氟伐他汀共同处理HL-60细胞后,可逆转氟伐他汀的上述作用（G₀/G₁期细胞56.11% ,S期细胞37.12%）。结论：氟伐他汀能抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡₀作用可能是通过甲羟戊酸途径介 导的。     

二烯丙基二硫对人白血病细胞增殖和钙网蛋白表达的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对人白血病HL-60细胞增殖和钙网蛋白(CRT)表达的影响。DADS(1.25 mg/L)处理HL-60细胞24、48和72 h,siRNA抑制CRT的表达,采用MTT法检测细胞活力,实时定量PCR和Western blot检测CRT的表达。与对照组比较,DADS处理24、48和72 h组HL-6细胞的增殖水平均显著性降低,呈现时间依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,siRNA瞬时转染显著降低了CRT mRNA的表达(P<0.05),也显著降低了细胞的增殖水平(P<0.05),与DADS具有协同效应。DADS抑制了HL-60细胞增殖,其机制可能与下调钙网蛋白的表达有关。     

竹节参总皂苷对人白血病细胞株HL-60的作用

目的:研究竹节参总皂苷(total saponins of Panax japonicus,TSPJ)对人白血病细胞HL-60的作用,探讨其作用机制,为进一步开发竹节参提供理论依据。方法:体外培养人早幼粒白血病细胞HL-60,细胞计数法观察TSPJ对细胞活力的影响,四唑氮蓝(nitroblue tetrazolium,NBT)测定其对细胞还原能力的影响,流式细胞仪检测细胞周期变化和膜表面分化抗原CD11b的表达情况。结果:和阴性对照组比较,不同浓度TSPJ处理的细胞活力显著下降,NBT阳性细胞增多,G_0/G_1期细胞增多,S期细胞减少,膜表面分化抗原CD11b的表达量增多。结论:TSPJ对体外培养的HL-60细胞生长育一定抑制作用,其作用机制与诱导细胞分化和周期阻滞有关。     

AsI_3-Tu与RNA诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的探讨新型砷剂配合物碘化砷-硫脲(AsI3-Tu)与RNA联用对HL-60细胞凋亡的影响。方法应用四唑盐(MTT)比色法分析细胞增殖,倒置显微镜观察细胞形态学变化、凯氏定氮法测定细胞蛋白质的含量、流式细胞术定量检测细胞凋亡。结果①1-16/μmol/LAsI3-Tu对HL-60细胞增殖均有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。②RNA能增强AsI3-Tu对HL-60细胞增殖的抑制作用。结论AsI3-Tu能有效诱导白血病细胞系HL-60细胞凋亡,RNA与AsI3-Tu联合应用能增强AsI3-Tu的作用。     

雷公藤甲素对白血病HL-60和Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨雷公藤甲素对人急性髓系白血病HL-60细胞、急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法、PI染色法、透射电镜观察不同浓度雷公藤甲素作用于两种细胞,对其生长增殖、凋亡、细胞周期及形态等方面的影响。结果:雷公藤甲素能显著抑制HL-60、Jurkat细胞的增殖,降低其存活率。给药24 h后,半数细胞抑制剂量(IC50)分别为(42.50±9.38)nmol/L和(60.91±9.77)nmol/L。能以剂量依赖方式诱导两种细胞凋亡,细胞周期分布G1期比例增加,S期比例降低(P<0.05),且伴有典型的细胞凋亡形态学改变。结论:雷公藤甲素能显著抑制HL-60、Jurkat细胞的生长增殖,并诱导细胞凋亡。     

雷公藤红素对白血病HL-60和Jurkat细胞增殖及凋亡的影响

探讨雷公藤红素对人急性髓性白血病HL-60细胞、急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。采用MTT法、AnnexinV-FITC/PI双染法、PI染色法、透射电镜观察不同浓度雷公藤红素作用于两种细胞后对其生长增殖、凋亡、周期及形态等方面的影响。结果表明雷公藤红素能显著抑制HL-60细胞、Jurkat细胞的增殖,降低其存活率。给药24 h后,半抑制浓度(IC₅₀)分别为(0.46±1.05)μmol/L和(0.88±1.13)μmol/L。以剂量依赖方式诱导两种细胞凋亡,细胞周期分布G₁期比例增加,S期比例降低(P<0.05),且伴有典型的细胞凋亡形态学改变。雷公藤红素能显著抑制HL-60细胞、Jurkat细胞的生长增殖,并诱导细胞凋亡。     

昆布多糖硫酸酯对急性髓性白血病HL-60细胞株NF-κB表达的实验研究及CD11b在HL-60细胞株的表达

目的 研究昆布多糖硫酸酯(LAMS)对急性髓性白血病HL-60细胞株NF-κB表达的影响及CD11b在HL-60细胞株的表达。方法 用MTT法测定不同浓度LAMS对HL-60细胞株的增殖抑制作用；流式细胞仪分析不同浓度作用下细胞凋亡率，免疫组化法测定MMS对HL-60细胞株NP-κB家族P65亚单位的作用及CD11b表达。结果 HL-60细胞增殖抑制程度与昆布多糖硫酸酯的浓度呈正相关；HL-60细胞凋亡率随药物浓度的增加而升高；在LAMS浓度为0．75μg/ml作用下，P65在12h表达呈强阳性，24h几乎不表达，而IKbα在6h表达呈强阳性，CD11b不表达。结论 LAMS可以诱导体外HL-60细胞凋亡，其中对凋亡的调控作用可能为负调控；LAMS能够调控NF—κB的表达，其表达有时间差异性。说明LAMS已作用于分子水平，且对CD11b在HL-60细胞株的表达无影响。