三氧化二砷对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1细胞的作用

目的:研究三氧化二砷(AS2O3)在体外对人骨髓增生异常综合征难治性贫血伴原始细胞过多型(MDS-RAEB)细胞株MUTZ-1细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:采用细胞形态学、MTT法、DNA凝胶电泳、RT-PCR、诱导分化检测、流式细胞术等多参数分析.结果:①低浓度AS2O3(0.05～0.25 μmol/L)对MUTZ-1细胞无明显生长抑制作用,细胞培养2周后,细胞阳性表面抗原CD38、CD7、CD10、HLA-DR表达明显下降(P<0.05),粒系分化抗原CD11b无明显表达增多(P>0.05).②AS2O3 1.0～20.0 μmol/L对MUTZ-1细胞有凋亡作用,且呈浓度依赖(r=-0.999,P<0.05).bcl-2 mRNA随AS2O3浓度增加表达明显下调(P<0.05),bcl-2/bax比例明显下降(P<0.05).结论:0.05～0.25 μmol/L AS2O3对MUTZ-1细胞可能具有部分分化作用;1.0～20.0 μmol/L AS2O3主要通过诱导凋亡使MUTZ-1细胞死亡.     

苦参碱诱导MDS细胞株SKM-1凋亡作用的研究

目的:研究苦参碱诱导骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1的凋亡作用及其机制。方法:采用WST-1法检测不同浓度的苦参碱对SKM-1细胞生长的抑制作用;应用流式细胞术检测早期凋亡细胞以及线粒体跨膜电位的变化;用分光光度法检测caspase-9活性。结果:0.25～2.0mg/ml苦参碱对SKM-1细胞有生长抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);苦参碱处理48小时后,细胞凋亡率明显增加,并呈剂量依赖性(P<0.05);1.0mg/ml苦参碱处理后48小时内,细胞线粒体跨膜电位逐渐降低,caspase-9活性逐渐升高,呈时间依赖性(P<0.01)。结论:苦参碱可能通过降低细胞线粒体跨膜电位、激活caspase-9而诱导SKM-1细胞早期凋亡。     

三氧化二砷对人骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞的作用

目的:研究不同浓度三氧化二砷(As2O3)对人骨髓增生异常综合征难治性贫血伴原始细胞过多型(MDS-RAEB)细胞株MUTZ-1细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用MTT法分析细胞生长曲线,用细胞形态学观察细胞凋亡。结果:低浓度As2O3(0.05～0.25μmol/L)对MUTZ-1细胞无明显生长抑制作用,高浓度As2O3(1.0～20.0μmol/L)对MUTZ-1细胞有明显生长抑制作用,且呈浓度、时间效应-依赖关系(P<0.01)。结论:低浓度As2O3(0.05～0.25μmol/L)对MUTZ-1细胞无明显生长抑制作用。高浓度As2O3(1.0～20.0μmol/L)对MUTZ-1细胞有明显生长抑制作用,且呈浓度、时间效应依赖关系。     

活性氧诱导细胞凋亡的研究进展

活性氧(ROS)作为细胞调控中的一种信号分子，诱导细胞凋亡，目前已经为广大生命科学的学者所接受。ROS在细胞凋亡过程中扮演两种角色，作为外界诱因，ROS诱导细胞凋亡；然而当其他诱因在体内激发细胞凋亡时，ROS是这一过程中的产物，然后作为信号分子，具有调节细胞凋亡的作用，其机制可发生在凋亡过程的各环节。对ROS与细胞凋亡关系的研究进展进行综述。     

维生素K2对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1增殖抑制作用的实验研究

目的研究维生素K2(VK2)对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1的生长抑制作用.方法采用光镜或电镜技术观察VK2作用于MUTZ-1细胞株后细胞形态和超微结构的改变;应用四甲基偶氮唑蓝( MTT)法检测细胞的增殖抑制作用.结果VK2作用于MUTZ-1 72 h后呈现典型凋亡细胞的形态学改变, 且随着VK2浓度的增加和作用时间的延长凋亡细胞所占的百分比增高;MTT结果显示10 μmol·L-1及以上浓度的VK2处理MUTZ-1细胞株后细胞生长明显受抑,并呈浓度依赖性,与对照组比有显著性差异(P＜0.05);且随着VK2作用时间的延长细胞凋亡率也逐渐增高,且呈明显的时间依赖性(P＜0.05).5μmol·L-1的VK2有促MUTZ-1细胞株增生的趋势,但与对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论低浓度VK2(5μmol·L-1)对MUTZ-1细胞株有促增殖趋势;较高浓度的VK2(10～40μmol·L-1)主要是通过诱导MUTZ-1细胞凋亡而抑制其增殖.     

维生素K_2对MDS细胞株SKM-1增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的研究维生素K2（VK2）对骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株SKM-1的增殖抑制和诱导凋亡作用并探讨其可能机制。方法 （1）应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定VK2对SKM-1细胞增殖的抑制作用;（2）通过Annexin-V/PI标记VK2作用后的SKM-1细胞,用流式细胞术分析其凋亡情况;（3）通过流式细胞术检测SKM-1细胞线粒体膜电位（ΔΨm）的变化;（4）应用RT-PCR检测凋亡抑制基因Survivin的表达,分析VK2诱导SKM-1细胞凋亡的机制。结果 （1）5、10、20、40μmol/L VK2分别作用于SKM-1细胞24、48、72 h后,细胞增殖抑制明显（均P〈0.05）,生长抑制率的增加呈剂量依赖性（P〈0.05）;（2）不同浓度VK2处理后48h,SKM-1细胞发生凋亡（均P〈0.01）,细胞凋亡率的增加呈剂量依赖性（P〈0.05）;（3）不同浓度VK2作用后24 h,SKM-1细胞线粒体膜电位降低明显（均P〈0.01）,且呈剂量依赖性（P〈0.01）;（4）不同浓度VK2处理后48 h,SKM-1细胞Survivin基因表达随着VK2浓度的增大而明显下调（均P〈0.05）。结论 （1）VK2对SKM-1细胞增殖有抑制作用,呈剂量依赖性;（2）VK2可诱导SKM-1细胞早期凋亡,呈剂量依赖性;（3）在此凋亡过程中,SKM-1细胞线粒体膜电位降低、凋亡抑制基因Survivin表达下调;（4）Survivin基因的表达下调可能是VK2诱导SKM-1细胞凋亡的机制之一。     

三氧化二砷联合阿糖胞苷在 MDS 患者中的疗效探讨

目的：探析三氧化二砷（As2O3）+阿糖胞苷（Ara-c）联合治疗在骨髓增生异常综合征（MDS）患者中的临床疗效及价值。方法：分析2014年5月～2016年4月在我院接受治疗的82例 MDS 患者的临床资料。随机将入选者分成观察组（As2O3+Ara-c,40例）和对照组（HA 方案,42例）两组。比较两组患者的基线资料、治疗效果、不良反应发生率以及治疗前后血管内皮生长因子（VEGF）水平的变化。结果：两组患者的基线资料无显著差异。观察组患者的总有效率（90.0%）明显高于对照组（71.4%）。治疗前两组患者的 VEGF 水平无显著差异,治疗后观察组患者的 VEGF 水平明显低于对照组;治疗后同组患者的 VEGF 水平较治疗前显著降低。两组患者的不良反应无显著差异。结论：As2O3+Ara-c 联合治疗可以有效提升 MDS 患者的三系血细胞,降低骨髓原始细胞的数量,同时不良反应发生率低,耐受性较高,值得临床推广和应用。     

全反式维甲酸和小剂量阿糖胞苷治疗高危MDS34例

目的　观察全反式维甲酸 (ATRA)和小剂量阿糖胞苷 (LD -Ara -C)诱导治疗高危骨髓增生异常综合征 (MDS)的疗效。方法　高危MDS 34例 ,应用LD -Ara -C 10～ 15mg·m-2 ,每 12h皮下注射 1次 ,2 1d为 1疗程 ,间隔 10～ 15d重复 ;ATRA　 30～ 6 0mg·d-1,分 3次口服。结果　完全缓解 11例 (32 .35 % ) ,部分缓解 7例 (2 0 .5 9% ) ,6例进步 ,10例无效 ,总有效率 5 2 .94% ;12例 (35 .2 9% )在治疗中或CR/PR后转变为急性白血病。结论　ATRA和LD -Ara -C诱导高危MDS有明显疗效。     

二硫化二砷和靛玉红对骨髓增生异常综合征细胞MUTZ-1凋亡及其相关蛋白的影响

目的研究中药青黄散主要成分二硫化二砷(As_2S_2)和靛玉红对骨髓增生异常综合征(MDS)细胞株MUTZ-1细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和Caspase-3的影响。方法实验于2015年6月-2016年6月在中国中医科学院西苑医院血液科实验室进行。以MDS-RAEB细胞株MUTZ-1为研究对象,实验分4组:对照组、As_2S_2组、靛玉红组和联合组(As_2S_2和靛玉红联合应用)、以As_2S_2、靛玉红及二者联合分别作用MUTZ-1细胞48 h和72 h,以流式细胞术检测细胞周期,以Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡情况,以流式细胞术检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达。结果 As_2S_2和靛玉红对MUTZ-1细胞有明显的抑制作用。与对照组相比,As_2S_2组和联合组在48 h时S期和G2/M期细胞的比例减少、G0/1期细胞比例增加(P均<0.05);在72 h时S期细胞的比例减少、G0/1期细胞比例增加(P均<0.01),G2/M期细胞的比例无明显变化(P=0.842)与对照组比较,靛玉红组细胞不同时间点各细胞周期无明显变化(P均>0.05)。与As_2S_2组和靛玉红组相比,联合组在48 h时S期和G2/M期细胞比例减少,G0/1期细胞比例增加(P均<0.01);72 h时S期细胞比例减少。G0/1期比例增加(P<0.01)。与对照组相比,As_2S_2组和靛玉红组细胞早期凋亡明显增加(P<0.05)。与As_2S_2组和靛玉红组相比,联合组促进早期凋亡作用也增强(P<0.05)。与对照组比较,靛玉红组和联合组在48 h时细胞表达Caspase-3增加(P<0.01);As_2S_2组在72 h时细胞表达Bcl-2减少(P<0.01)、Bax增加(P<0.05)。与As_2S_2、靛玉红组相比,联合组对MUTZ-1细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的无影响(P>0.05)。结论中药青黄散主要成分As_2S_2和靛玉红通过促进MDS细胞MUTZ-1的凋亡、影响凋亡相关蛋白起到治疗MDS的作用,单用As_2S_2可抑制MUTZ-1细胞的增殖,与靛玉红联合应用能增强其调控细胞周期、促进细胞凋亡的作用。     

二乙酰己二胺诱导骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞凋亡及其机制研究

目的体外研究二乙酰己二胺（CAHB）对人骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株MUTZ-1细胞的作用以及可能的作用机制。方法用CAHB处理MUTZ-1细胞，光学显微镜下观察不同浓度的CAHB处理后MUTZ-1细胞形态的改变；利用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测CAHB对MUTZ-1细胞的增殖抑制作用；采用流式细胞仪分析细胞DNA含量分布变化；利用RT—PCR技术检测凋亡相关基因Survivin、Bcl-2的表达变化。结果CAHB能抑制MUTZ-1细胞的生长，具有浓度和时间依赖性：随着CAHB药物浓度的增加MUTZ-1细胞出现凋亡细胞的典型形态学特征改变；CAHB作用后，MUTZ-1细胞的DNA含量在细胞周期的分布有明显变化，G0／G1期细胞比例无明显变化，S期细胞减少，而GJM期细胞增多，细胞被阻滞在G：期，呈浓度依赖；在细胞凋亡过程中抗凋亡基因Bcl-2、Survivin基因下调。结论CAHB不但能抑制MUTZ-1细胞生长而且能诱导细胞凋亡，诱导细胞凋亡是其主要细胞毒作用之一。抗凋亡基因Bcl-2、Survivin基因下调可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

HHT诱导骨髓增生异常综合征细胞MUTZ-1凋亡过程中活性氧和线粒体膜电位的变化

目的研究活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)在高三尖杉酯碱(HHT)诱导骨髓增生异常综合征细胞MUTZ-1凋亡过程中的变化,以期进一步探讨HHT诱导细胞凋亡的机制.方法以100ng/mlHHT作用于MUTZ-1细胞一定时间后应用流式细胞仪,以Annexin V FITC和PI双染的方法检测细胞凋亡率,ROS捕获剂HE反应法检测细胞内ROS的水平,JC-1染色法检测细胞MMP的变化.结果HHT作用MUTZ-1细胞0、6、12、24h后的凋亡率分别为5.68%±0.52%、16.88%±0.96%、43.75%±2.33%、55.48%±3.67%.在细胞凋亡的同时,细胞内ROS水平升高(P＜0.01),线粒体膜电位下降(P＜0.01).结论细胞内ROS水平升高和线粒体膜电位下降是HHT诱导MUTZ-1细胞凋亡的重要机制之一.     

活性氧在顺铂致HepG2凋亡中的作用

目的利用Acivicin阻断GGT的功能,观察其单独对HepG2凋亡及联用顺铂后对HepG2的凋亡、细胞内ROS产生的影响.方法细胞毒性测定采用MTT法.Acivicin和顺铂分别或联合处理HepG2细胞.采用DCFH-DA能被ROS作用发光的特性.通过流式细胞仪测定细胞内ROS的变化.凋亡检测采用细胞凋亡原位检测法(TUNEL法).结果MTT法测定HepG2I IC50值Acivicin为1.4 mmol/L,顺铂为67μmol/L.Acivicin 1.4 mmol/L和顺铂67μmol/L以及Acivicin(1.4mmol/L) 顺铂(67μmol/L)HepG2 24h细胞内的ROS显著升高,尤其是在当与顺铂联用时HepG2细胞内的ROS升高就更加明显.TUNEL法测定Acivicin(1.4 mmol/L)在24、48、72 h致HepG2的凋亡率分别分(16.3±3.5)%、(27.9±4.3)%、(47.2±3.0)%.与对照组相比差异显著(P＜0.05).顺铂(67μmol/L)HepG2 24h的凋亡率为(73.4±1.5)%,Acivicin(1.4 mmol/L) 顺铂(67 μmol/L)HepG2 24h的凋亡率为(94.7±0.5)%,较单用显著增加(P＜0.01.结论顺铂致HepG2凋亡的机制之一是增加细胞内ROS的产生.Acivicin抑制GGT,干扰GSH代谢,可致HepG2细胞内的ROS升高,使细胞凋亡,并增强顺铂的细胞毒性.     

Mechanisms of MPP+-induced PC12 cell apoptosis via reactive oxygen species

Apoptosis of dopaminergic neurons in the nigrostriatal projection plays a crucial role in the pathogenesis of Parkinson’s disease (PD). Although the detailed mechanisms responsible for dopaminergic neuron loss are still under investigation, oxidative stress is identified as a major contributor for neuronal apoptosis. In the current study, we studied the effects of MPP+, a substrate that mimics oxidative stress, on neuron-like PC12 cells and the underlying mechanisms. PC12 cells were cultured and treated by 100 μmol/L MPP+ for 4, 8, 16, 24 and 48 h, respectively. For drug pretreatment, the PC12 cells were incubated with N-acetyl-l-cysteine (NAC, 5 mmol/L), an antioxidant, SP600125 (20 μmol/L) or PD98059 (100 μmol/L), two pharmacological inhibitors of JNK and ERK1/2, for 1 h before addition of MPP+. Cell apoptosis was measured by flow cytometry. The mRNA expression of Cu2+/Zn2+-SOD, GSH-Px, Bcl-2 and Bax was detected by RT-PCR. The protein expression of p-ERK1/2 and p-JNK was determined by Western blotting. Our results showed that MPP+ exposure could induce substantial PC12 cell apoptosis. The pretreatment of SP600125 or PD98059 could effectively reduce the apoptosis rate by reducing the ratio of Bax/Bcl-2 mRNA levels. MPP+ exposure also induced high level of reactive oxy-gen species (ROS), marked by dramatic increase of Cu2+/Zn2+-SOD and GSH-Px mRNA levels. The elevated ROS was strongly associated with the activation of JNK and ERK1/2 signal pathways after MPP+ exposure, since the pretreatment of NAC significantly reduced the upregulation of p-JNK and p-ERK1/2. Finally, the pretreatment of SP600125, but not PD98059, alleviated the increase of Cu2+/Zn2+-SOD and GSH-Px mRNAs induced by MPP+, suggesting that the activation of the JNK signal pathway, but not the ERK1/2 signal pathway, could, in some degree, antagonize the generation of ROS induced by oxidative stress. In conclusion, our results suggest that JNK and ERK1/2 signal pathways, which are activated via ROS, play a crucial role in neuronal apoptosis ind     

活性氧在大黄素联合顺铂诱导食管癌EC-9706细胞凋亡中的作用

目的探讨大黄素联合顺铂诱导人食管癌EC-9706细胞凋亡过程中的作用及可能机制。方法不同浓度大黄素、顺铂与二药联合分别作用于EC-9706细胞,应用吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）双荧光染色法测细胞凋亡（形态学变化）;MTT法检测细胞抑制率;用Annexin V-FITC/碘化丙啶（PI）双染法及流式细胞术检测细胞凋亡情况（计算凋亡细胞百分率）;流式细胞术检测细胞内活性氧变化情况。结果大黄素、顺铂均可明显抑制EC-9706细胞增殖,并且呈一定的时间依赖性;大黄素、顺铂分别及联合作用24 h,细胞早期凋亡率分别为（15.39±3.40）%、（12.80±2.41）%和（23.09±3.97）%,较对照组〔（1.42±0.14）%〕明显增加（P均〈0.05）;两药分别及联合作用2 h,细胞内活性氧的含量分别为（35.57±3.16）%、（29.44±2.43）%和（43.23±3.68）%,较对照组〔（4.73±2.12）%〕明显升高（P〈0.05）。结论大黄素能抑制EC-9706细胞增殖,通过诱导细胞内活性氧的产生促进凋亡,与顺铂联用存在协同作用,其机制可能与通过诱导细胞内活性氧的产生促进细胞凋亡有关。     

活性氧、白细胞和精子凋亡关系的探讨

目的 探讨活性氧与精子凋亡的相关性及其影响.方法 分析21例男性不育患者样本,活性氧含量采用分光光度比色法检测,瑞-姬染色检测精子凋亡率,采用Percoll法进行精子优选.结果 本底水平活性氧含量、白细胞受激发后产生活性氧含量、白细胞和精子受激发后产生活性氧含量与精子凋亡率均有显著正相关性(P＜0.05,P＜0.01);Percoll优选后,加入H2O2组精子凋亡率显著高于对照组(P＜0.001),且0.2 mM过氧化氢组精子凋亡率均高于相应的0.02 mM过氧化氢组(P＜0.05).结论 精子凋亡率与ROS浓度有正相关关系,外加H2O2增高,精子凋亡率增高.     

沙蚕毒素类农药巴丹对Vero细胞的毒性及活性氧在细胞损伤中的作用

目的研究沙蚕毒素类农药巴丹对Vero细胞的毒性作用及活性氧（ROS）在其引起的细胞损伤中可能发挥的作用。方法以10μmol／L～1000μmol／L浓度的巴丹作用于Vero细胞4h、8h、12h、24h、48h后,通过MTT法观察细胞存活率,并在倒置显微镜下观察对细胞形态的影响。不同浓度作用8h、16h、24h、48h后通过乳酸脱氢酶（LDH）漏出率检测法观察巴丹对Vero细胞的杀伤率。不同浓度作用1h后,荧光分光光度计检测巴丹对Vero细胞内ROS含量的影响。结果能引起Vero细胞LDH漏出率升高、细胞增殖率下降、细胞内ROS水平升高,呈时间、剂量依赖关系。结论巴丹对Vero细胞存在明显的毒性作用,ROS在其引起的细胞损伤可能发挥重要作用。     

去甲斑蝥素对人黑色素瘤A375细胞周期、活性氧自由基及细胞凋亡的影响

［摘要］ 目的探讨去甲斑蝥素（Norcantharidin,NCTD）对人黑色素瘤A375细胞周期、ROS自由基及细胞凋亡的影响及其机制。 方法培养人A375黑素瘤细胞,分别采用10,20,40 μmol/L NCTD预处理,培养48 h后,采用流式细胞术测定NCTD对人A375黑素瘤细胞周期的影响,采用免疫印迹法检测NCTD对人A375黑素瘤细胞蛋白Cyclin D1和P21表达的影响,采用流式细胞术测定NCTD对人A375黑素瘤细胞ROS及凋亡水平的影响。 结果10,20,40 μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于对照组,S期和G2期细胞比例低于对照组,20,40 μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于10 μmol/L NCTD组,S期和G2期细胞比例低于10 μmol/L NCTD组,40 μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于20 μmol/L NCTD组,S期和G2期细胞比例低于20 μmol/L NCTD组（P＜0.05）。40 μmol/L NCTD组处理人A375黑色素瘤细胞48 h后,细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin A和CDK2低于对照组,P21蛋白高于对照组（P＜0.05）。10,20,40 μmo/L NCTD组细胞内ROS水平高于对照组,20,40 μmol/L NCTD组细胞内ROS水平高于10 μmol/L NCTD组,40 μmol/L NCTD组细胞内ROS水平高于20 μmol/L NCTD组（P＜0.05）。10,20,40 μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于对照组,20,40 μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于10 μmol/L NCTD组,40 μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于20 μmol/L NCTD组（P＜0.05）。NAC组细胞凋亡率低于对照组,NCTD组和NAC+NCTD组细胞凋亡率高于对照组,NAC+NCTD组细胞凋亡率低于NCTD组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论NCTD通过阻滞细胞G1周期、减少S期抑制人A375黑色素瘤细胞的增殖,通过诱导ROS水平升高诱导细胞凋亡。