穿山龙总皂苷通过Nrf2信号通路对阿霉素诱导MPC-5细胞氧化应激损伤保护作用研究

目的 探讨穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞损伤的保护作用及其机制研究。方法 通过阿霉素诱导MPC-5细胞建立细胞损伤模型,采用MTT法测定细胞活力,考察阿霉素对MPC-5细胞的毒性及穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞损伤的保护作用,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞凋亡的影响;采用探针DCFH-DA检测穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞内活性氧（ROS）的影响;采用超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）试剂盒检测穿山龙总皂苷对阿霉素诱导MPC-5细胞内氧化应激因子的影响;采用Western Blot法检测MPC-5细胞内相关凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达以及细胞质、细胞核和细胞整体内核因子红细胞2相关因子2(Nrf-2)蛋白的表达。结果 与空白组相比,阿霉素模型组中细胞活力显著降低（P<0.01）;细胞内MDA含量、ROS含量、细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,SOD活性、GSH-Px含量显著降低（P<0.01）;细胞核和细胞总体中Nrf2蛋白表达显著升高（P<...     

Popdc2表达下调通过Akt磷酸化促进新生大鼠心肌细胞增殖

目的:探讨Popdc2对新生大鼠心肌细胞增殖作用及其机制?方法:分离出生后第0?7?14天大鼠心脏组织,荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测心脏组织中Popdc2 mRNA表达情况?分离出生后0~2 d SD大鼠原代心肌细胞和成纤维细胞,qRT-PCR检测Popdc家族mRNA在心肌细胞表达情况?Popdc2 mRNA在心肌细胞和成纤维细胞表达情况;大鼠原代心肌细胞分别转染阴性对照小干扰RNA(NC组)和Popdc2特异性小干扰RNA(si-Popdc2组),EdU实验?Ki67染色检测心肌细胞增殖,免疫荧光检测心肌细胞特异性蛋白辅肌动蛋白(actinin)和心肌钙蛋白2(TNNT2)表达,qRT-PCR检测转染小干扰RNA后心肌细胞Popdc2及转录因子TBX20?TBX5 mRNA表达?增殖抗原蛋白Ki67 mRNA表达情况,Western blot检测总Akt及磷酸化Akt蛋白表达水平?结果:① Popdc家族中Popdc2 mRNA在心肌细胞表达最高(P均<0.01),且随着出生后天数增加Popdc2表达逐渐升高(P均<0.01),Popdc2 mRNA在心肌细胞表达高于成纤维细胞(P < 0.05);②与对照组相比,沉默Popdc2可促进原代心肌细胞DNA合成(P < 0.05),并增加Ki67阳性心肌细胞数量(P < 0.05);③qRT-PCR显示沉默Popdc2可上调转录因子TBX20(P < 0.01)?TBX5(P < 0.05)的mRNA表达,沉默Popdc2促进Ki67的mRNA表达 (P < 0.05),Western blot结果显示沉默Popdc2可促进Akt蛋白磷酸化,Akt308(P < 0.05),Akt473(P < 0.001)?结论:Popdc2表达下调可能通过调节转录因子表达及Akt蛋白磷酸化促进新生大鼠心肌细胞增殖,Popdc2 有可能成为心肌损伤后修复和再生治疗靶点?     

珠子参总皂苷对小鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的 探讨珠子参总皂苷预处理对局灶性脑缺血小鼠脑损伤保护作用及其可能的作用机制.方法 实验小鼠完全随机分为假手术组、模型组和珠子参总皂昔组;预给药7d后,通过栓塞小鼠大脑中动脉,制作局灶性脑缺血模型,并记录各组小鼠成活率.术后24h,进行神经症状评分、斜板实验然后处死小鼠,取脑并用2,3,5-三苯基四氮唑染色后测定...     

柴胡皂苷B通过Nrf2/ARE信号缓解Caco-2细胞氧化损伤

目的 探讨柴胡皂苷B(saikosaponin B,SSB)对棕榈酸(palmitic acid,PA)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS联合诱导的人结直肠腺癌细胞(Caco-2)屏障损伤的保护作用及潜在机制。方法 利用Caco-2细胞构建肠道屏障模型,采用随机数字表法将细胞分为对照组(CON组,n=6),模型组(PA+LPS组,n=6)和柴胡皂苷B干预组(PA+LPS+SSB组,n=6),通过测量跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)值和紧密连接蛋白的表达水平,评价SSB对Caco-2细胞屏障损伤的保护作用。通过检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化物含量评估细胞氧化压力。通过定量聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法检测SSB对Nrf2/ARE信号通路相关基因及蛋白的表达水平的影响。通过敲降Nrf2验证SSB改善细胞屏障功能是否通过Nrf2/ARE途径。结果 PA+LPS+SSB组Caco-2细胞的TEER值、ZO-1和Occludin-1的蛋白水平显著高于PA+LPS组...     

和营安心方对胚胎心肌细胞氧化应激性损伤的影响

[目的]研究和营安心方对过氧化氢(H2O2)所致大鼠胚胎心肌细胞氧化应激损伤的影响。[方法]用70%乙醇冷凝回流提取和营安心方,采用H2O2建立大鼠胚胎心肌细胞氧化应激损伤模型。实验分为5组,分别为:正常对照组、H2O2(200μmol/L)模型组、和营安心方高、中、低剂量组,其中和营安心方高、中、低剂量组分别加入和营安心方提取物500、250、125mg/kg,24h之后加入与模型组同浓度的H2O2(200μmol/L),共同作用2 h。观察心肌细胞四甲基偶氮唑盐(MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(LDH)含量、丙二醛(MDA)含量及各组细胞培养液中过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量。[结果]H2O2组MTT代谢率显著性降低(P0.01),LDH及MDA含量显著性升高(P0.01),CAT及SOD含量显著性降低(P0.05);和营安心方可使H2O2损伤的心肌细胞MTT代谢率提高,MDA含量减少(P0.05),LDH活性降低(P0.05),并且显著性提高心肌细胞的CAT和SOD含量(P0.05)。[结论]和营安心方对受损伤的心肌细胞具有明显的保护作用,其机制可能与抑制氧化损伤有关。     

番茄红素对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：探讨番茄红素（Lycopene）对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法体外培养 H9c2心肌细胞,分为正常对照组（对照组）、番茄红素预处理组（Lycopene组）、模型组（H2 O2组）和番茄红素预处理后建立模型组（Lycopene加H2 O2组）。除对照组及Lycopene组外,其余各组用过氧化氢（H2 O2）200μmol／L处理6 h ,建立心肌细胞氧化应激损伤模型。Lycopene组建模前30 min加入5μmol／L的番茄红素。6 h后M T T观察H9c2心肌细胞存活率;分光光度计检测细胞培养液上清中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）活性和细胞中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活性;激光共聚焦联合流式细胞仪观察细胞内活性氧（ROS）的产生和线粒体膜电位;流式细胞仪检测细胞凋亡;酶标仪检测细胞内ATP水平。结果与对照组比较,H2O2组LDH、CK-BM、ROS、MDA及细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（P＜0．05）;H9c2心肌细胞存活率、SOD、ATP及线粒体膜电位显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）。与 H2O2组比较,Lycopene加 H2O2组LDH、CK-BM、ROS、MDA及细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）;H9c2心肌细胞存活率、SOD、ATP及线粒体膜电位显著增加,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论番茄红素可以减轻氧化应激条件下H9c2心肌细胞的损伤,其机制可能与清除细胞内氧化应激产物,增强细胞内抗氧化酶活性及改善线粒体功能有关。     

褐藻素通过调控Nrf2/Keap1通路缓解糖尿病大鼠心肌肥大

目的 探索褐藻素（FX）对糖尿病心肌病的保护效应和作用机制。方法 腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,进行分组：糖尿病组（DM）、褐藻素干预糖尿病组（DM+FX）和二甲双胍干预糖尿病组（DM+Met）,另取正常大鼠给予正常喂养作为正常组（Con）。造模成功后连续12周每日灌胃给药,褐藻素组每日给予200 mg/kg褐藻素灌胃,二甲双胍组每日给予230 mg/kg灌胃,糖尿病组同步灌胃生理盐水。HE染色观察各组大鼠心脏细胞肥大情况;Western blot法检测大鼠心脏中纤维化蛋白TGF-β1和FN蛋白表达水平。H9C2细胞分为3组：正常糖组（NG,5.5 mmol/L葡萄糖）、高糖组（HG,45 mmol/L葡萄糖）和褐藻素干预高糖组（HG+1 μmol/L FX）。FITC标记的鬼笔环肽检测大鼠心肌细胞H9C2表面积变化;qRT-PCR法测定各组细胞肥大因子ANP、BNP和β-MHC基因表达变化;Western blot法检测各组大鼠心脏组织和H9C2细胞中Nrf2、Keap1、HO-1、SOD1蛋白表达水平;DCFH-DA探针检测细胞内活性氧水平变化。结果 褐藻素改善糖尿病大鼠心肌纤维化和心肌细胞肥大,同时上调心脏组织中Nrf2和HO-1蛋白表达,抑制Keap1蛋白表达（P<0.05）。褐藻素可抑制高糖诱导H9C2心肌细胞表面积增加,降低ANP、BNP和β-MHC的mRNA表达水平（P<0.05）。褐藻素可促进高糖诱导的H9C2细胞中Nrf2入核,上调下游靶蛋白SOD1和HO-1蛋白表达（P<0.05）来增强细胞抗氧化能力,降低细胞内活性氧的水平。结论 褐藻素具有良好的抗糖尿病心肌纤维化和心肌细胞肥大作用,同时上调Nrf2信号通路并促进下游抗氧化蛋白SOD1和HO-1的表达,降低活性氧水平。     

人参皂苷通过Nrf2/ARE信号通路干预波动性高糖致内皮细胞损伤的作用机制研究

目的 观察人参皂苷通过调控Nrf2/ARE信号通路,对波动性高糖所致内皮细胞损伤的影响,探讨人参皂苷起保护作用的部分机制。 方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、波动性高糖模型组及人参皂苷低中高剂量治疗组。Western blot检测NF-E2相关因子2(Nrf2)的核转位及下游抗氧化蛋白血红素加氧酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和醌氧化还原酶(NQO1)的表达;RT-PCR检测下游抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS和NQO1的mRNA表达。瞬时转染Nrf2siRNA质粒, Western blot检测Nrf2总蛋白和核蛋白表达,及下游HO-1、γ-GCS和NQO1蛋白的表达。 结果 人参皂苷治疗后,HUVECs中的Nrf2核蛋白及下游抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS和NQO1的表达均明显增强。瞬时转染Nrf2siRNA质粒后,人参皂苷的治疗作用消失。 结论 人参皂苷通过促进Nrf2核转位,调控Nrf2/ARE信号通路发挥其抗波动性高糖所致内皮细胞损伤的氧化应激损伤作用。     

藏药八味沉香散对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨八味沉香散对过氧化氢（H2O2）所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法 SD乳鼠心肌细胞原代培养,H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤,用不同剂量藏药八味沉香散处理24 h后,测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、过氧化氢酶（CAT）的含量;同时检测培养液中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性。结果八味沉香散可明显减轻H2O2所致乳鼠心肌细胞培养液中LDH、CK和CAT的释放量,同时能够升高SOD、GSH-Px活性,降低MDA活性。结论八味沉香散对H2O2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤有明显保护作用。     

局部应用肉桂醛通过激活Nrf2通路促进糖尿病小鼠创口愈合

目的 探讨局部应用肉桂醛(cinnamic aldehyde,CA)对糖尿病小鼠创口愈合的影响及其机制.方法 8周龄Nrf2野生型(Nrf2+/+)和Nrf2敲除型(Nrf2-/-)雄性SKH-1无毛小鼠各8只,持续5d腹腔注射链脲霉素(streptozotocin,STZ,50 mg/kg),建立糖尿病小鼠模型.采用随机数字表法分为:①Nrf2+/+鼠对照组(Nrf2+/+Veh组);②Nrf2+/+鼠CA治疗组(Nrf2+/+ CA组);③Nrf2-/-鼠Veh组(Nrf2-/-Veh组);④Nrf2-/-鼠CA组(Nrf2-/-CA组)(n=4).STZ注射后第4周,在小鼠背部建立直径6 mm的全层皮肤切除创口.Nrf2+/+CA组和Nrf2-/-CA组术后当日开始局部应用20 μL含4μmol/LCA的聚乙二醇400(polyethylene glycol400,PEG400),每隔1天干预直至第14天,收集创缘处皮肤,Nrf2+/+Veh组和Nrf2-/-Veh组采用20 μL PEG400(Vehicle,Veh)局部应用作为空白对照.术后2周内每隔1天监测皮肤创口愈合面积评估愈合速率.免疫组化染色对比各组创缘处皮肤组织Nrf2蛋白、下游靶蛋白HO-1和氧化应激损伤相关指标8-oxo-dG的表达水平.结果局部应用CA明显加速Nrf2+/+糖尿病小鼠创口愈合(P＜0.05),但是并不影响Nrf2-/-糖尿病小鼠创口愈合(P＞0.05).免疫组化示Nrf2+/+糖尿病溃疡小鼠局部应用CA后,其创缘皮肤Nrf2的表达水平[(2.42±0.29) vs (7.42±0.73),P＜0.05]和下游靶蛋白HO-1的表达水平[(5.92 ±0.36) vs (8.88 ±0.53),P＜0.05]显著增强,8-oxo-dG的表达水平则明显减少[(9.46 ±0.28)vs(8.46 ±0.23),P＜0.05].Nrf2-/-糖尿病小鼠创口局部外用CA后,其创缘处皮肤Nrf2、HO-1及8-oxo-dG的表达水平与Nrf2-/-Veh组相比并无明显变化.结论 局部应用CA通过激活糖尿病小鼠皮肤组织Nrf2通路,减轻氧化应激损伤,从而促进糖尿病创口愈合.     

金丝桃苷通过激活Keap1/Nrf2/HO-1通路保护小鼠GC-2细胞的氧化损伤

目的 从Keap1/Nrf2/HO-1通路角度研究金丝桃苷（Hyp）对H2O2所诱导的小鼠精母细胞（GC-2）氧化损伤的保护作用。方法 将GC-2细胞随机分为正常组、模型组、氮乙酰半胱氨酸组（阳性组,NAC,2.5 mmol/L)以及金丝桃苷组（50、100、200 μmol/L）,各组按剂量孵育48 h后,除正常组外其余各组细胞加入H2O（2 150 μmol/L）处理2 h,正常组给予等容量培养基。采用CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,酶联免疫法检测超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、过氧化氢酶（CAT）活力以及丙二醛（MDA）含量,Western blot和RT-qPCR检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的相对表达水平,免疫荧光法检测Nrf2核转位水平。结果 150 μmol/L H2O2干预2 h可制备GC-2细胞氧化损伤模型。与正常组比较,模型组GC-2细胞增殖率以及SOD、GSH、CAT活力显著降低,MDA含量、细胞凋亡率,Keap1和Nrf2 mRNA表达显著升高（P<0.05）以及Keap1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,NAC组和金丝桃苷200 μmol/L组细胞增殖率和SOD、GSH-PX、CAT活力显著升高,MDA含量、细胞凋亡率显著下降（P<0.05）;金丝桃苷200 μmol/L组Keap1 mRNA表达显著下降,HO-1 mRNA表达显著升高（P<0.01）;金丝桃苷200 μmol/L组Nrf2核蛋白（NEs-Nrf2）以及HO-1的蛋白表达显著升高（P<0.05）,Keap1蛋白表达显著下降（P<0.01）;金丝桃苷组出现了明显的核转位现象（P<0.05）。结论 金丝桃苷可能通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,对H2O2诱导的GC-2细胞氧化损伤具有保护作用。