Nrf2/Keap1/ARE信号通路与难治性呼吸系统疾病研究进展

Nrf2/Keap1/ARE是重要的抗氧化信号通路,对维持体内抗氧化物与过氧化物平衡有重要作用。氧化应激发生时,Nrf2/Keap1/ARE信号通路被激活,调控下游抗氧化蛋白表达,减轻氧化应激对机体的损伤并减弱氧化应激的程度。近年来的研究发现,Nrf2/Keap1/ARE信号通路与肺纤维化、肺癌、慢性阻塞性肺病等难治性呼吸系统疾病的发生发展有密切联系,该通路可能作为治疗这类疾病的潜在靶点。该文就Nrf2/Keap1/ARE信号通路在难治性呼吸系统疾病中的作用进行综述,进一步了解其在难治性呼吸系统疾病中的作用机制,为这类疾病发病机制和治疗方案的研究提供可靠的参考。     

穿心莲内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用

目的探讨穿心莲内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及其作用机制。方法采用噻唑蓝比色(MTT)法分析穿心莲内酯对RAW264.7细胞活力的影响。通过脂多糖处理RAW264.7细胞24 h建立细胞炎症模型,造模前1 h用穿心莲内酯2.5、5、10、20μmol/L预处理。荧光定量PCR法检测RAW264.7细胞内相关抗氧化应激酶基因和i NOS水平。穿心莲内酯单独处理RAW264.7细胞24 h,Western blotting法检测Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白和Keap1、Nrf2、HO-1蛋白水平。免疫荧光检测转录因子Nrf2在胞质及核内的分布情况。结果与对照组比较,穿心莲内酯剂量相关性地抑制RAW264.7细胞活力,差异具有统计学意义(P0.05、0.01、0.001)。穿心莲内酯显著抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞的i NOS水平(P0.001),增加相关抗氧化酶基因HO-1、NQO1 m RNA水平。穿心莲内酯抑制Keap1表达,增加Nrf2和HO-1蛋白水平的表达。结论穿心莲内酯可抑制脂多糖诱导的炎症反应,其作用机制可能与激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路从而调控抗氧化酶HO-1、NQO1 m RNA表达水平相关。     

美洲大蠊提取物对H2O2诱导的PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨美洲大蠊提取物(PAS840)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞氧化损伤模型的保护作用及机制。方法:采用H₂O₂刺激PC12细胞建立神经细胞氧化损伤模型,实验分为正常组(Con)、模型组(Mod)、PAS840低中高剂量组(20,50,125 μg·mL^-1的PAS840培养基溶液进行处理),采用倒置显微镜观察细胞形态并采用CCK-8法检测各组细胞存活率,生化试剂盒检测各组超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的水平;DCFH-DA荧光探针检测各组活性氧簇(ROS)的水平;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;JC-1法染色检测各组细胞线粒体膜电位(MMP);RT-qPCR检测各组Nrf2/HO-1通路因子(Nrf2、Keap1、HO-1和NQO1)、凋亡因子(Bcl-2、Bax和Caspase-3)、炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)、乙酰胆碱酯酶(AchE)和过氧化氢酶(CAT) mRNA的表达水平;Western blot法检测各组Nrf2、HO-1、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达水平。结果:PAS840可显著提高氧化损伤细胞的存活率、MMP及SOD、GSH-Px和GSH的水平,降低LDH、MDA和ROS的水平;显著降低Keap1、TNF-α、IL-1β、IL-6和AchE mRNA表达的同时,显著增加CAT和NQO1 mRNA的表达,显著降低Nrf2、Bax和Caspase-3的mRNA及其蛋白表达,显著增加HO-1和Bcl-2的mRNA及其蛋白表达。结论:PAS840可以抑制H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡,减轻炎症,其机制可能与降低ROS、调控Nrf2/HO-1通路因子减轻细胞的氧化损伤程度有关。     

茯苓酸调节Nrf2/Keap1/ARE信号通路改善脂多糖诱导肺泡上皮细胞氧化应激损伤研究

摘要：目的:研究茯苓酸（PA）对脂多糖（LPS）诱导的人肺泡上皮细胞氧化应激损伤的影响,以及核因子红细胞2相关因子2/Kelch样ECH关联蛋白1/抗氧化反应元件（Nrf2/Keap1/ARE）信号通路在此过程中的作用。方法:培养人肺泡上皮细胞HPAEpiC,使用CCK-8法筛选适合的PA处理浓度。将HPAEpiC细胞分为Control组、LPS组、LPS+PA组、LPS+PA+sh-NC组和LPS+PA+sh-Nrf2组。TUNEL染色法检测各组HPAEpiC细胞凋亡情况;检测各组HPAEpiC细胞中活性氧（ROS）的产生、丙二醛（MDA）水平以及总超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性;Western blot检测各组HPAEpiC细胞中p53、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白（Bax）、Nrf2、Keap1和血红素氧化酶1（HO-1）蛋白表达情况。结果:根据CCK-8结果选用4μmol·L-1的PA用于后续研究。LPS诱导后HPAEpiC细胞中TUNEL阳性细胞率与p53和Bax蛋白水平均升高;ROS的产生、MDA水平均增高,SOD和GSH-Px活性降低;Nrf2、HO-1蛋白质水平减少,Keap1蛋白质水平增加（P＜0.05）。使用PA处理可以减轻LPS诱导对以上指标的影响（P＜0.05）。敲低Nrf2可部分逆转PA处理对LPS诱导的HPAEpiC细胞的影响（P＜0.05）。结论:PA可抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞氧化应激损伤和凋亡反应,其机制可能与激活Nrf2/Keap1/ARE信号通路有关。     

亚硒酸钠通过Keap1/Nrf2/ARE信号通路诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的探究亚硒酸钠诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用及可能的分子机制。方法 MTT法检测不同浓度亚硒酸钠对人肺腺癌A549细胞的抑制增殖率;倒置荧光显微镜观察细胞经亚硒酸钠处理后的形态学改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;激光共聚焦观察活性氧荧光强度;多功能酶标仪测定氧化应激参数含量;Western blot检测Keap1/Nrf2/ARE信号通路蛋白的表达,以及Nrf2在细胞质和细胞核中的蛋白表达情况。结果亚硒酸钠剂量依赖性地抑制人肺腺癌A549细胞增殖,亚硒酸钠作用于人肺腺癌A549细胞24 h后,通过Hoechst 33342固定和流式细胞术分析,细胞凋亡率明显增加;亚硒酸钠可使活性氧和丙二醛水平明显升高,还原型谷胱甘肽和超氧化物歧化酶含量明显下降;同时亚硒酸钠能够下调Keap1、Nrf2和HO-1蛋白的表达,并且抑制Nrf2发生核位移。结论亚硒酸钠通过抑制人肺腺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,调节细胞内的氧化应激反应,调控Keap1/Nrf2/ARE抗氧化信号通路,从而促进肿瘤细胞凋亡。     

香豆素调节Keap1/Nrf2/ARE信号通路对过氧化氢诱导的人卵巢颗粒细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨香豆素调节Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人卵巢颗粒细胞氧化损伤的改善作用。方法 将人卵巢颗粒细胞株COV434分为空白组(正常培养)、模型组(0.5 mmol·L^-1 H₂O₂)、香豆素组(0.5 mmol·L^-1 H₂O₂+320μmol·L^-1香豆素)、抑制药组(0.5 mmol·L^-1 H₂O₂+10μmol·L^-1 Keap1/Nrf2/ARE通路抑制药compound 20c)、联合组(0.5 mmol·L^-1 H₂O₂+320μmol·L^-1香豆素+10μmol·L^-1...     

Nrf2-Keap1蛋白相互作用小分子抑制剂的研究进展

转录因子E2相关因子2(Nrf2),受Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)蛋白的调控,是细胞氧化应激反应中的关键因子。氧化应激时,Keap1的半胱氨酸残基被修饰,构象改变后导致Nrf2蛋白释放,Nrf2进入细胞核并促进Ⅱ相解毒酶的表达,发挥细胞保护作用;病理条件下,机体无法使Nrf2-Keap1解离,导致疾病发生。近年来,通过非共价修饰作用于Nrf2-Keap1蛋白相互作用界面,成为激活Nrf2防御机制发挥抗氧化防制的重要策略。本文综述了近年来各类Nrf2激活剂的研究进展。     

Nrf2/ARE信号通路及其相关药物研究进展

Nrf2/ARE信号通路是细胞氧化应激反应中的关键通路,其调控的下游抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶在细胞防御保护中发挥重要作用。现有研究显示Nrf2/ARE通路在抗炎、抗肿瘤、神经保护、抗凋亡等多方面具有重要作用,以Nrf2为靶点的药物有望用于多发性硬化、糖尿病、神经退行性疾病、肿瘤等多种疾病的治疗,其中已有富马酸二甲酯、巴多克沙龙等多个新药进入临床研究阶段。就Nrf2/ARE通路与疾病的关系及以其为靶点的新药研发进展做一综述。     

藏药三果汤调节Nrf2/HO-1信号通路干预高脂血症大鼠的作用机制研究

目的：基于Nrf2/HO-1信号通路探讨藏药三果汤对高脂血症大鼠保护作用及相关作用机制。方法：雄性SD大鼠48只,随机分为6组,即正常对照组、模型对照组、辛伐他汀组（3.5 mg/kg）,藏药三果汤低、中、高剂量组（0.43 g/kg、0.86 g/kg、1.72 g/kg）,每组8只。正常组给予基础饲料喂养,其余各组给予H00016高脂饲料喂养,制备高脂血症大鼠模型,造模的同时,各给药组每天一次给予相应药物灌胃,正常对照组、模型对照组给予等体积的生理盐水（1次/d）,连续灌胃6周。实验期间每周固定时间称取各组大鼠体重一次,6周后试剂盒检测血清中血脂（TC、TG、LDL与HDL）及氧化指标（MAD、SOD与GSH）的水平。Western Blot法测定肝组织中Nrf2、HO-1、Keap1、NQO1蛋白表达,采用person相关性分析分析血脂与氧化指标之间的相关性。结果：与正常对照组比较,模型对照组的体重明显增加,血清中的TC、TG、LDL、MDA含量明显升高,而血清中HDL含量明显减低,SOD、GSH活力明显减低（P<0.05或P<0.01）;与模型对照组比较,各给药组的体重减轻,血清中的TC、TG、LDL、MDA含量明显减低,血清中的HDL含量明显升高,SOD、GSH活力明显升高（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,模型对照组Keap1蛋白水平表达明显上调,Nrf2、HO-1与NQO1蛋白水平表达明显下调（P<0.05或P<0.01）,与模型对照组比较,三果汤低、高剂量肝组织中的Keap1蛋白水平表达明显下调,Nrf2、HO-1与NQO1蛋白水平表达明显上调（P<0.05或P<0.01）。相关性分析可见TG与SOD、HO-1及NQO1呈负相关,与Keap1呈正相关,TC与SOD、HO-1、GSH及Nrf2呈负相关,与Keap1及MDA呈正相关。结论：藏药三果汤可改善高脂血症大鼠体重及血脂水平,其机制可能与调节Nrf2/HO-1信号通路,改善氧化应激有关。     

透骨草提取物通过Bcl-2和Bax蛋白诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡

目的探讨Bax和Bcl-2蛋白在透骨草提取物诱导人乳腺癌细胞株MCF-7细胞凋亡过程中的作用,为透骨草提取物治疗乳腺癌提供实验依据。方法采用吖啶橙染色方法透骨草提取物对MCF-7细胞形态的影响;采用流式细胞术检测透骨草提取物对MCF-7细胞凋亡率的影响;采用蛋白印迹法检测MCF-7细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 30.5μg/ml透骨草提取物可诱导MCF-7细胞胞体皱缩,胞核固缩、呈新月状且边集,出现凋亡小体。30.5μg/ml透骨草提取物处理的MCF-7细胞凋亡率（22.3±1.2）%明显高于对照组（3.2±1.0）%（P〈0.05）。30.5μg/ml透骨草提取物可使MCF-7细胞Bcl-2蛋白表达明显低于对照组（P〈0.05）,而Bax蛋白表达明显高于对照组（P〈0.05）。结论透骨草提取物对MCF-7细胞有诱导凋亡作用,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。     

美洲大蠊提取物通过介导Nrf2/HO-1通路抑制氧化应激的抗肝纤维化作用

目的:探究美洲大蠊提取物(PA-B)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化Nrf2/HO-1通路及氧化应激指标的影响.方法:采用腹腔注射40％ CCl4橄榄油溶液建立大鼠肝纤维化模型,48只大鼠随机分成正常对照组、肝纤维化模型组、秋水仙碱组、PA-B低剂量组、PA-B中剂量组、PA-B高剂量组,每组8只.治疗第4周末...     

The Nrf2‐ARE pathway is associated with Schisandrin b attenuating benzo(a)pyrene‐Induced HTR cells damages in vitro

As is ubiquitous in the environmental sources, benzo(a)pyrene (BaP) has been reported to induce reprotoxicity in previous studies. Toxicity to trophoblast cells may be one key factor, but evidences were absent. We speculated that BaP can induce cytotoxicity in human trophoblast HTR‐8/SVneo (HTR) cells, and Schisandrin B (Sch B) as a potential protector can inhibit the cytotoxicity. MTS assay identified that BaP induced HTR cells death while Sch B played a cytoprotective role. And after Nrf2 interference, the ability of Sch B‐induced cytoprotection was declined. Furthermore, PCR, western blot, ELISA, and SOD assays were found that Sch B significantly increased the mRNA and protein expression of Nrf2, HO1, NQO1, and SOD in the Nrf2‐ARE pathway, and the extents of increase were declined after Nrf2 interference. These results demonstrated that the Nrf2‐ARE pathway plays an important role in Sch B attenuating BaP‐induced HTR cells damages in vitro. © 2015 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol 31: 1439–1449, 2016.     

Xyloketal B对发育期大鼠惊厥后脑损伤的保护作用及机制研究#br#

目的　探讨Xyloketal B（Xyl-B）对发育期大鼠惊厥后脑损伤的保护作用及对氧化应激通路的调控。方法　40只20日龄SD大鼠随机分为Control组、海人酸（KA）组、KA+Xyl-B（25 mg/kg）组及KA+Xyl-B（50 mg/kg）组,通过腹腔注射KA制作大鼠惊厥模型,Control组注射生理盐水;KA+Xyl-B各组在KA诱导惊厥前2 h腹腔注射Xyl-B预治疗。惊厥后24 h处死大鼠,取海马组织,采用免疫荧光检测成熟神经元和活化星形胶质细胞,实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot分别检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）、核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶1（HO-1）、依赖还原型辅酶/Ⅱ醌氧化还原酶1（NQO1）、caspase3、Bcl-2和白细胞介素（IL）-6 mRNA及蛋白的表达。结果　与Control组比较,KA组神经元数量明显减少,活化星形胶质细胞显著增多;Keap1 mRNA和蛋白表达水平升高,Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA和蛋白表达水平降低;caspase3和IL-6 mRNA和蛋白表达水平升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低（P＜0.05）。Xyl-B干预可逆转惊厥后上述病理变化,且KA+Xyl-B（50 mg/kg）组的干预效果整体上优于KA+Xyl-B（25 mg/kg）组。结论　Xyl-B能激活Nrf2抗氧化应激通路,抑制星形胶质细胞活化、炎性因子及凋亡蛋白的表达,对惊厥后脑损伤发挥保护作用。     

基于Nrf2/Keap1信号通路探讨金盏银盘水提液对四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠抗氧化应激作用

目的 探究金盏银盘Bidens biternata(Lour.)Merr.&Sherff.水提液对四氯化碳诱导的急性肝损伤改善作用及其机制。方法 将60只雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组、水飞蓟素（0.15 g/kg）组和金盏银盘低、高剂量（3.9、7.8 g/kg）组,每组12只。各组小鼠连续ig给予相应药物7 d,末次给药后除对照组外均ip 0.4%四氯化碳构建急性肝损伤小鼠模型。24 h后收集小鼠血清及肝脏组织。用生化试剂盒检测血清中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量,并取肝组织匀浆检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。采用苏木精–伊红染色（HE）切片观察小鼠肝脏病理变化。Western blotting测定肝组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、抗体Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、血红素氧合酶1(HO-1)蛋白的表达情况。结果 与模型组比较,金盏银盘水提液组小鼠组织病理学观察发现肝脏炎症细胞浸润明显减少,血清AST、ALT、MDA水平降低,血清SOD和肝组织GSH-Px活性...