Sonic hedgehog信号通路在口腔颌面部的研究进展

<正>Hedgehog信号通路最早被发现于果蝇胚胎发育的研究中,而在哺乳动物中共发现了3种Hedgehog家族的成员,它们分别是Sonic hedgehog(Shh)、Desert hedgehog(Dhh)和Indian hedgehog(Ihh)。随后的研究证实Sonic hedgehog信号通路在胚胎发育、机体组织器官的形成中有着重要作用~([1-2]),该信号通路的异常可导致口腔颌面部发育的缺陷。Sonic hedgehog信号通路的持续异     

PTPRO基因启动子甲基化在大肠癌中的表达及作用

目的 :研究大肠癌组织及癌旁正常组织PTPRO基因启动子甲基化状态及m RNA表达情况,并探讨其在大肠癌发生中的关系。方法 :应用甲基化特异性PCR(MSP)和RT-PCR分别检测30例大肠癌组织及癌旁正常组织中PTPRO基因启动子甲基化状态及m RNA表达状态。结果 :大肠癌组织中PTPRO基因启动子甲基化率高于癌旁正常组织,其甲基化样本中PTPRO基因m RNA表达明显受抑。结论 :PTPRO基因启动子甲基化在大肠癌发生中起着重要作用,可能与大肠癌的发生、发展及预后有关。     

大肠癌组织MALmRNA、蛋白表达及其启动子甲基化状态研究

目的探讨MAL基因对大肠癌筛查及早期诊断的价值。方法选取10例正常大肠组织作为对照,应用RT-PCR、甲基化特异性PCR、Westernblot方法分别检测并比较大肠癌组织（40例）及相应癌旁组织（40例）中MALmRNA、蛋白的表达情况以及MAL基因启动子甲基化状态。结果大肠癌组织中MALmRNA、蛋白的表达阳性率（10.0%、20.0%）均低于其在癌旁组织（75.0%、85.0%）和正常大肠组织（100.0%、100.0%）中的表达阳性率（均P＜0.05）,而大肠癌组织中MAL基因启动子甲基化率（90.0%）均高于其在癌旁组织（40.0%）和正常大肠组织（0.0%）中的甲基化率（均P＜0.05）。结论大肠癌组织中MAL基因或可作为大肠癌筛查及早期诊断的高潜力分子标志物。     

Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Glil蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义。方法收集85例胃癌组织及25例正常胃粘膜组织构建成组织芯片，应用免疫组化S—P法检测胃癌组织中Smo蛋白及Gli1蛋白的表达，并以正常胃粘膜组织作对照，分析两者的相关性。结果Smo和Gli1蛋白均在正常胃粘膜中不表达或弱表达；在胃乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌中，两者的表达强度和阳性表达率显著高于正常胃粘膜（P〈0．05，并随着胃腺癌分化程度下降而上升；相关分析显示Smo和Gli1蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关，相关系数为0．989，P〈0．001。结论胃癌发生过程中的Sonic hedgehog信号通路异常激活可能通过Smo蛋白高表达上调下游转录因子Gli1蛋白的表达参与部分胃腺癌的发生。     

ALX4基因启动子区甲基化在大肠癌早期诊断中的意义

目的通过检测血液样本中ALX4基因启动子区甲基化状态,为大肠癌早期诊断寻找非侵入性的筛查方法。方法收集25例大肠癌患者和25例健康对照者的血液样本,使用亚硫酸氢钠提取血DNA,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)分析ALX4基因启动子区Cp G岛的甲基化情况。结果 25例大肠癌患者中有18例存在ALX4基因甲基化,25例健康对照组中4例存在甲基化。肿瘤组样本中启动子区甲基化检测的敏感性为72%,特异性为84%。肿瘤组与对照组之间ALX4基因启动子的甲基化状态差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ALX4基因启动子区甲基化检测在大肠癌诊断中具有较高的敏感度和特异度,可能成为大肠癌早期筛查的血清学标志物。     

乳腺癌雌激素受体α基因启动子甲基化与其蛋白表达的关系

目的：检测乳腺癌雌激素受体α（estrogen receptor α,ERα）基因启动子区CpG岛甲基化状态,探讨乳腺癌ERα启动子甲基化与其蛋白表达及临床病理的关系。方法：采用免疫组化EnVisionTM二步法检测20例正常乳腺组织、44例乳腺癌组织ERα基因的表达,同时运用甲基化特异性PCR（Methylation-Specific PCR,MSP）及测序法分别检测ERα基因启动子A区和B区CpG岛的甲基化状态。结果：32例ERα阳性乳腺癌组织中,ERα启动子A区、B区甲基化率分别为28.2%和18.8%。12例ERα阴性乳腺癌组织中,ERα启动子A区、B区甲基化率分别为66.7%和58.3%。ERα阳性乳腺癌组、ERα阴性乳腺癌组、乳腺癌组的ERα启动子A、B区甲基化率均较正常组显著增高（P〈0.05）;ERα阴性乳腺癌组的ERα启动子A、B区甲基化率较ERα阳性乳腺癌组均显著增高（P〈0.05）。乳腺癌组织ERα表达与启动子区甲基化之间呈显著负相关。结论：乳腺癌组织ERα基因表达沉默与其启动子A区、B区CpG岛甲基化相关,后者有可能成为乳腺癌预后不良的分子检测指标。     

LTF基因在胃癌细胞株BGC823中的表达及其与启动子甲基化的相关性

目的：检测Lactotransferrin（LTF）基因在胃癌细胞株BGC823内的甲基化和表达情况,探讨LTF的DNA启动子区甲基化异常与其在胃癌内表达的相关性。方法：用亚硫酸氢盐测序PCR方法（BSP）检测BGC823启动子区甲基化状态,使用real-timePCR和Westernblot法分别检测LTF基因在BGC823内的mRNA和蛋白表达水平。同时使用去甲基化剂5-aza-CdR处理胃癌细胞株,观察给药前后的DNA甲基化状态和mRNA表达情况。结果：BGC823启动子甲基化率达53.6%,使用5-aza-CdR后,药物处理的两组（药物浓度2μmol/L组和药物浓度10μmol/L组）和对照组甲基化率差异和LTF的mRNA表达差异有统计学意义（P＜0.05）,并且随着BGC823启动子甲基化程度的下降,其mRNA和蛋白表达增加。而药物处理组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：LTF基因在胃癌细胞株BGC823内表现为较高甲基化状态,而且LTF的表达和其启动子区甲基化情况相关,使用去甲基化剂能逆转DNA的甲基化情况从而使其mRNA重新表达。     

大肠癌组织白细胞介素-6表达与其甲基化之间的关系

目的:检测大肠癌中白细胞介素-6(IL-6)表达及启动子甲基化状态,进一步阐明大肠癌(CRC)的发病机制。方法:实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测20例CRC癌组织及癌旁组织IL-6mRNA水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL-6蛋白浓度,亚硫酸氢盐测序(BSP)检测IL-6启动子甲基化状态。结果:与癌旁组织相比,癌组织中IL-6mRNA及蛋白表达均显著增高(P<0.05),并且其蛋白表达随着Dukes分期逐渐升高,差异具有显著性(P<0.05);癌组织中,IL-6启动子-633、-611、-575、-575bp位点甲基化水平均低于相应癌旁组织(P<0.05),且非甲基化概率随着Dukes分期和分化程度增加而增高(P<0.05)。结论:IL-6在大肠癌中表达增加,并与Duke分期相关,其启动子区低甲基化或去甲基化可能是其表达增高的机制之一;初步筛选出IL-6基因启动子区低甲基化位点,为后续研究奠定基础。     

Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Glil蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的 探讨Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义.方法 收集85例胃癌组织及25例正常胃粘膜组织构建成组织芯片,应用免疫组化S-P法检测胃癌组织中Smo蛋白及G1il蛋白的表达,并以正常胃粘膜组织作对照,分析两者的相关性.结果 Smo和Gli1蛋白均在正常胃粘膜中不表达或弱表达;在胃乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌中,两者的表达强度和阳性表达率显著高于正常胃粘膜(P＜0.05,并随着胃腺癌分化程度下降而上升;相关分析显示Smo和Gli1蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关,相关系数为0.989,P＜0.001.结论 胃癌发生过程中的Sonic hedgehog信号通路异常激活可能通过Smo蛋白高表达上调下游转录因子Gli1蛋白的表达参与部分胃腺癌的发生.     

sonic hedgehog及patched基因在角化囊肿中的表达

目的:了解Shh(Sonic hedgehog),Bmp-4,Ptc(patched)基因在角化囊肿中的表达情况,明确Shh及其相关基因在角化囊肿发病中的作用.方法:选取角化囊肿石蜡切片.将Shh,Bmp-4,Ptc分别转染与大肠杆菌XL-1-Blue,提质粒,线性化质粒,体外转录法合成地高辛标记的RNA探针,原位杂交检测角化囊肿中Shh,Bmp-4,Ptc的表达情况.结果:Shh,Bmp-4共同表达于角化囊肿上皮细胞,胞浆呈强阳性表达;Ptc表达于角化囊肿间充质细胞,胞浆表达较弱.结论:Shh,Bmp-4,Ptc在角化囊肿中都有异常表达,提示(1)角化囊肿的发生与生长发育中的上皮残余有关;(2)Shh与Ptc之间平衡的破坏是发生角化囊肿的条件之一;(3) 角化囊肿与正常生长发育相似,存在Bmp-4与Shh协同表达.     

PIAS1通过调控Sonic hedgehog信号通路使胰腺癌细胞SW1990获得对吉西他滨的耐药性

目的:研究吉西他滨耐药性胰腺癌细胞中Sonic hedgehog(Shh)信号通路异常激活的机制?方法:通过间歇梯度倍增法筛选出对吉西他滨产生耐药性的胰腺癌细胞SW1990-GEM,荧光实时定量PCR和蛋白质印迹法检测耐药细胞中PIAS1的表达;利用RNA干扰技术构建稳定低表达PIAS1的细胞株SW1990-GEM-shPIAS1,从增殖速度?克隆形成能力及裸鼠皮下成瘤能力等方面考察PIAS1?Shh信号通路与胰腺癌耐药性的相关性?结果:耐药株SW1990-GEM中PIAS1基因表达量明显升高;PIAS1的高度表达正向激活了Shh信号通路的活性,使得细胞获得耐药能力;人为降低PIAS1的高表达后,耐药株的耐药能力同时被减弱?结论:PIAS1是使耐药株获得耐药性的关键因子,PIAS1通过正向调控Shh信号通路使其获得耐药能力?     

Shh信号通路在神经胶质瘤发生发展中的作用

Sonic hedgehog(Shh)信号转导通路是脊椎动物hedgehog信号通路家族成员之一,主要由分泌型糖蛋白Shh配体、跨膜蛋白受体Ptch和Smo以及下游转录因子Gli蛋白组成,在胚胎发育尤其是神经系统发育中起着重要的作用。近年研究发现Shh信号通路与多种肿瘤的形成有着密切的关系。神经胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤,生长迅速且多呈浸润性,易复发,是脑肿瘤中治疗效果最差的肿瘤之一,主要原因是多种信号通路的异常激活增强了胶质瘤细胞的增殖能力。此外,神经胶质瘤是由不同属性的肿瘤细胞混合构成,胶质瘤中的肿瘤干细胞具有无限增殖能力,这一特性也对胶质瘤的发生、发展和复发起着重要作用。有研究发现Shh信号通路与神经胶质瘤的发生、增殖及胶质瘤干细胞有密切关系。本文主要就Shh信号通路的组成和其在神经胶质瘤发生及胶质瘤干细胞中的相关作用作一综述。     

HHIP基因启动子区甲基化在食管癌细胞系中的研究

目的 探索人食管癌细胞系Hedgehog信号通路相关基因的表达状况、HHIP基因启动子区甲基化状态与HHIP表达的关系.方法 采用RT-PCR方法检测5个食管癌细胞系Hedgehog信号通路SHH、PTCH1、SMO、HHIP和Gli的表达情况.用基于甲基化敏感酶和甲基化依赖酶酶切、并结合荧光定量PCR方法分析食管癌细...     

CADM1在大肠癌细胞系中的表达及与启动子甲基化的关系

目的：探讨CADM1在大肠癌细胞系中的表达及与启动子甲基化的关系。方法用RT－PCR法检测大肠癌细胞系中 CADM1基因 mRNA 表达水平,Western blot 法检测细胞系 CADM1蛋白表达情况,BSP 法和 MSP法检测 CADM1基因启动子甲基化状态。结果CADM1 mRNA 在24％大肠癌细胞系表达缺失,在50％细胞系中CADM1 mRNA 表达减少。75％大肠癌细胞系检测到 CADM1基因启动子甲基化阳性,且表达缺失。结论CADM1基因启动子甲基化与大肠癌的发生发展有密切关系,该基因的甲基化检测可作为癌症早期筛选、监测预后的肿瘤标志物。     

Activation of sonic hedgehog signaling pathway in S-type neuroblastoma cell lines

The effects of Sonic hedgehog(Shh) signaling pathway activation on S-type neuroblastoma(NB) cell lines and its role in NB tumorigenesis were investigated.Immunohistochemistry was used to detect the expression of Shh pathway components- Patched1(PTCH1) and Gli1 in 40 human primary NB samples.Western blotting and RT-PCR were used to examine the protein expression and mRNA levels of PTCH1 and Gli1 in three kinds of S-type NB cell lines(SK-N-AS,SK-N-SH and SHEP1),respectively.Exogenous Shh was administrated to ...     

DNA甲基化与大肠癌相关性的研究

DNA甲基化属于表观遗传学范畴,它能在DNA序列不发生改变的情况下参与基因的调控与表达。在大肠癌的发病过程中,伴随着DNA的异常甲基化。抑癌基因和原癌基因的异常甲基化均影响肿瘤的发生发展。现对目前与大肠癌相关的基因甲基化的情况,以及在治疗和预防中的作用进行总结与展望。     

Shh对发育中小鼠视觉传导通路的影响

目的探察Shh对E13-E15小鼠胚胎中视觉传导通路发育的影响。方法E13至E15小鼠胚胎的眼至视束部分制备成脑厚片,置于含10%的小牛血清的DMEM/F12的培养液中,在37℃恒温滚动培养箱中培养5h。实验组中将Shh抗体加入培养液中。培养结束后,将脑厚片以4%多聚甲醛固定,将DiI颗粒置于视盘。7d后,在手术显微镜下,暴露被标记的视神经纤维,在激光扫描共聚焦纤维镜下观察。结果用Shh抗体阻抑Shh的功能,可引起E13跨越中线的视神经纤维减少以及E15投射至同侧的视束的神经纤维的增多。结论在视交叉形成的早期,Shh引导视神经纤维跨越中线。在视交叉形成的后期,Shh引导视神经转弯。     

巢式甲基化特异性PCR检测p16基因的研究

目的检测p16基因启动子区异常甲基化发生情况,探讨p16基因异常甲基化作为结直肠癌临床辅助诊断分子生物学标志物的可能性.方法应用巢式甲基化特异性PCR技术(Nested-MSP)及甲基化特异性PCR(MSP),检测了结直肠癌患者肿瘤组织中p16基因的异常甲基化情况;比较MSP及Nested-MSP两方法的灵敏度.结果应用MSP方法,Dukes A、B期病人和Dukes C、D期病人p16启动子区甲基化率分别为23.8%和59.4%;应用巢式-MSP方法,甲基化率上升至52.4%和84.4%.结论巢式-MSP的灵敏度明显高于普通的MSP技术,分析患者DNA的p16基因异常甲基化有可能成为辅助结直肠癌诊断的有效方法之一.     

非小细胞肺癌患者血清死亡相关蛋白激酶基因启动子甲基化的分析

目的：分析非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清中死亡相关蛋白激酶（DAPK）基因启动子区域甲基化的改变状况及其临床意义。方法：运用甲基化特异性PCR技术，检测65例NSCLC组患者血清DAPK基因启动子区域甲基化的改变情况，并分析与临床病理资料的关系。结果：NSCLC组患者血清DAPK基因甲基化检出率为30．8％（20／65），而对照组未检出，DAPK基因甲基化检出率与NSCLC病理类型、分期及转移状态无明显相关性。结论：DAPK基因启动子区域异常甲基化是NSCLC早期辅助诊断的分子标记物之一。