NF—kB激活的信号传导机制研究进展

1986年,Baltimore.D在成熟B细胞核提取物中发现一种与免疫球蛋白к轻链基因的增强子中特定DNA位点结合的蛋白,命名为核转录因子( NF-кB). NF-кB最初被认为是淋巴特异性的,后来发现其广泛存在于各种细胞中. NF-кB能被多种因素激活,包括细胞因子TNFα、IL-1,细菌脂多糖,T细胞白血病病毒表达的Tax蛋白(HTLV-1),佛波脂,紫外线等等.激活的NF-кB参与调节免疫、炎症反应,粘附分子的表达,生长控制以及细胞凋亡的过程.本文就NF-кB激活的信号传导机制的研究进展作一综述. 1 NF-кB/Rel蛋白及其IкB抑制蛋白 到目前为止,在哺乳动物细胞中发现5种NF-кB/Rel家族成员:RelA(p65),RelB,C-Rel,NF-кB(p50),NF-KB2(p52).它们都拥有与Rel基因(原癌基因)的编码产物相似的Rel同源区.Rel同源区大约由300个氨基酸组成,内含DNA结合功能域、二聚体化功能域及核定位信号(NLS).RelA(P65)、RelB、C-Rel,除Rel同源区外,尚有一个或多个转录活性区域.NF-кB是由亚单位p50和p65组成的异源二聚体,p50与DNA直接结合,p65具有转录活性.静息状态下,NF-кB和抑制性蛋白IкB结合滞留于细胞浆中,在一定刺激作用下NF-кB释放进入细胞核激活靶基因.目前发现的NF-кB抑制蛋白有IкBα、IкBβ、IкB(p105)、IкBσ(P100)、IкBε及Bcl-3,构成IкB蛋白家族.IкB蛋白的共同特点是存在多个紧密相邻的由33个氨基酸组成的重复序列,称为锚蛋白基序(ankrin     

核转录因子-κB与甲状腺癌的关系研究进展

1 核转录因子-κB（nuclear factor kappa-B,NF-κB）的概述1.1 NF-κB家族的组成NF-κB家族是由Rel蛋白家族成员组成的同源或异源二聚体蛋白.在哺乳动物细胞中有5种NF-κB/Rel家族成员：RelA（P65）、RelB、c-Rel、NF-κB1（P50/P105,P105是P50的前体）和NF-κB2（P52/P100,P100是P52的前体）,该家族N端均含有一个高度保守的约300个氨基酸组成的Rel同源结构域（rel homology domain,RHD）,内含DNA结合功能区、蛋白质二聚化区和核定位信号（nuclear localization signal,NLS）.RelA（P65）、RelB、c-Rel还包含一个反式激活结构域,通过与靶结构相互作用调节转录水平.     

NF-κB与心脏移植

1 NF～κB概述 核因子-κB（nuclear factor—κB NF-κB）首先是由Sen和Baltimore于1986年报道，NF-κB是一组真核细胞转录因子，由NF—κB／Rel蛋白家族成员NF—κB1（p50，其前体p105），NF-κB2（p52，前体p100），RelA（p65），RelB和C—Rel以同源或异源二聚体形式组成，不同的NF—κB／Rel蛋白双双结合形成不同的NF—κB，以p50／p65发现最早，分布和作用最广泛，是通常所说的NF-κB。通常情况下，大多数细胞中的NF—κB与其抑制因子（IκB）蛋白家族成员（包括bcBα，IκBβ，IβBγ和BcL-3等，其中M3a是最重要的NF-κB活性调控成员）相结合，     

转录因子NF-κB在HIV-1表达中的作用

NF-κB／Rel转录因子是由P50和P65组成的同源二聚体以及异源二聚体。它参与许多基因产物的表达和激活，NF—κB／Rel蛋白家族在炎症反应(如调控合成多种炎症细胞因子，趋化因子，粘附因子，细胞表面受体，急性期蛋白等)、免疫、应激、细胞生长及癌症发生与生长等诸多生物学过程中的作用受到越来越多的关注。近年来，人们     

IκB激酶结构和功能研究进展

在哺乳动物中,核转录因子NF—κB家族包括五个成员：NF—κB1（p105／p50）,NF—κB2（p100／p52）,RelA（p65）,RelB,and c—Rel。它们调控与炎症反应,细胞增殖分化及凋亡相关基因的表达。IKK（IκB激酶）是一个蛋白激酶复合体,属于丝／苏氨酸激酶,在核转录因子的活化过程中起着重要的作用。外部刺激因子通过激活IκB激酶（IKK）,引起核转录因子的抑制蛋白IκB磷酸化,泛素化和降解,从而使核转录因子活化,进入细胞核内,调节相应基因的转录。此外,有很多研究也表明,IKK的组成性活化和细胞的恶性转化有密切关系。目前已经发现并克隆出了细胞因子诱导的IKK复合体的四个主要组分：IKKα、IKKβ、IKKγ和IKAP。本文综述了IKK的结构、功能,及其与肿瘤发病的关系。     

NF—кB活化在放化疗诱导肿瘤细胞凋亡中的作用

NF-кB是由Rel蛋白家族中的成员以同源或异源二聚体形式组成的一类蛋白蛋，以非活性形式存在于胞质。一旦接受刺激信号，NF-кB活化并易位核内，调节下游基因的表达。最近发现，许多诱导细胞凋亡的因子，如化疗药物、电离辐射在诱导肿瘤细胞凋亡的同时，由于活化了NF-кB，会使其诱导凋亡的作用下降，因此NF-кB活化的抑制已成为肿瘤治疗研究的热点之一。本就NF-кB家族的构成与活化诱导机制；抑制NF-кB活化在增强化疗药物及辐射诱导细胞凋亡中的作用等作一综述。     

葡聚糖硫酸钠诱导结肠炎小鼠NF-κB活性及其对ICAM-1表达的调控

目的 探讨葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠NF-кB活性、ICAM-1蛋白表达变化及NF-кB对其调控作用.方法 取健康雄性BABC/L小鼠20只,采用5%DSS溶液结肠炎小鼠模型和0.9%盐水溶液(NS)为正常对照组.免疫组化方法检测细胞间粘附分子(ICAM-1)和NF-кB p65表达水平,凝胶滞留迁移试验(EMSA)测定NF-кB的DNA结合活性.结果 DSS组较NS组NF-кB DNA结合活性显著升高,具统计学意义(P<0.01),NF-кB p65成份主要表达于粘膜下层的炎症细胞及部分血管内皮细胞,出现核移位现象,正常对照组仅少数细胞表达p65,ICAM-1.相关性分析提示NF-кB活性与ICAM-1表达呈正相关性.结论 DSS诱导结肠炎小鼠结肠粘膜的NF-кB明显活化,可能上调了ICAM-1基因的表达,参与肠道炎症的发生发展.     

不同核因子κB二聚体对永生化神经前体细胞存活的影响

目的 探讨不同核因子κB(NF-κB)二聚体在缺氧缺糖条件下对永生化神经前体细胞(INPC)生存的影响.方法 将含巨细胞病毒启动子的对照载体(RC/CMV)及NF-κB亚基p50、p65的真核表达载体RcCMV-p50、RcCMV-p65分别及共转染INPC.蛋白质印迹法分析不同细胞株p50及p65的表达.凝胶电泳迁移实验(EMSA)检测胞核内NF-κB的DNA结合活性.蛋白质印迹法分析胞质蛋白IκBα的表达.缺氧缺糖13 h后,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率.结果 转基因后,共得到5株不同细胞,分别命名为INPC、INPC/CMV、INPC/p50、INPC/p65和INPC/p50p65.蛋白质印迹分析显示,p50和p65基因均能在转染相应质粒的细胞株中高效表达.EMSA表明,INPC/p50、INPC/p65和INPC/p50p65细胞胞核中分别形成p50同源二聚体、p65同源二聚体、p50 p65异源二聚体和p50同源二聚体.INPC/p65和INPC/p50p65细胞株中,IκBα在胞质中表达明显升高,并且缺氧缺糖处理13 h后,细胞存活率显著低于其他细胞株(Games-Howell检验,均P＜0.05).结论 p50、p65的高表达可直接导致胞核内不同NF-κB二聚体DNA结合活性的升高.在神经前体细胞中,具有转录活性的NF-κB二聚体减少了缺氧缺糖刺激后细胞的存活,但无转录活性的NF-κB二聚体并未发挥保护性作用.     

NF-кBp 65和HIF-1α在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨宫颈鳞癌组织中NF-кB p65、HIF-1α的蛋白表达水平及临床病理意义.方法 采用免疫组织化学(PowerVision TM)二步法对56例宫颈鳞癌和25例正常宫颈组织进行NF-кB p65、HIF-1α蛋白检测.结果 宫颈鳞癌组织NF-кB p65、HIF-1α的表达均高于对照组正常宫颈组织(P<0.01).NF-кB 065的蛋白表达与患者的病理分级及有无淋巴转移存在相关性(P<0.05);HIF-1α的蛋白表达与患者的临床分期及有无淋巴转移存在相关性(P<0.05).NF-кB p65和HIF-1α的蛋白表达呈正相关(r=0.439,P<0.01).结论 联合检测NF-кB p65和HIF-1α蛋白表达对诊断宫颈鳞癌的意义优于单纯检测NF-кB p65或HIF-1α蛋白表达.     

胶原性及溃疡性结肠炎患者结肠黏膜转录因子NFкB的激活

背景及目的:在胶原性及溃疡性结肠炎患者的结肠黏膜中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达显著上调。转录因子核因子кB(NF-кB)是iNOS基因表达的主要诱导物。本文从以下患者结肠黏膜活检样本中比较NF-кB的激活,及其转录活性。研究对象:胶原性结肠炎8例,复发性溃疡性结肠炎6例以及8例结肠无炎症反应的患者。方法:通过电泳迁移率变动分析法(EM SA)分析NF-кB DNA结合活性,通过免疫复合体激酶分析NF-кB抑制蛋白(IкB)激酶(IKK)的活性。通过染色质免疫沉淀法分析体内NF-кB对iNOS启动子的募集发应,并通过NF-кB基因表达谱分析转录…     

X射线诱导小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB的量效关系

目的：观察不同剂量X射线对小鼠腹腔巨噬细胞转录因子NF-κB的影响。方法：用凝胶电泳迁移率变化分析法得到电泳带,用Phosphor Imager扫描仪分析数据。 结果：不同剂量X射线照射后小鼠腹腔巨噬细胞NF-κB异源二聚体p65/50的DNA结合活性与假照组相比有所增强,在0.100 Gy处出现峰值,然后逐渐回降,到6.000 Gy时再一次升高;但同源二聚体p50/50的DNA结合活性无明显变化。 结论：高、低剂量X射线诱导小鼠腹腔巨噬细胞转录因子NF-κB的DNA结合活性增强以异源二聚体p65/50增强为主。     

肾癌组织中NF-κB信号分子的表达及As2O3对人肾癌786-0细胞中NF-kB信号通路影响的研究

目的:探讨NF-κB信号通路与肾癌发生和发展的关系以及三氧化二砷(As2O3)对人肾癌细胞系786-0的NF-κB信号转导的影响.方法:采用ICC、ISH、Western blot和EMSA技术检测15例肾癌组织和10例正常肾组织中NF-κB信号分子IKKα/β、IkBα、p65和ICAM-1的表达和NF-κB DNA结合活性;As2O3处理肾癌786-0细胞后NF-κB信号分子蛋白表达、p65mRNA表达和NF-κB DNA结合活性的改变.结果:肾癌组织中NF-κB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白表达量升高(P＜0.01),但IκBα蛋白明显降低(P＜0.01);经2μmol/L浓度As2O3处理786-0细胞72h后,p65mRNA含量、NF-k B DNA结合活性及p65、IKKα/β、IκBα和ICAM-1蛋白的表达量均降低(P＜0.01).结论:NF-κB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白增加可能与肾癌的发生和进展有关;2μmol/L以上浓度As2O3可以全面抑制786-0细胞中p65、IKKα/β、IκBα和ICAM-1蛋白和p65 mRNA的表达,抑制NF-κB DNA结合活性,可能是As2O3抑制786-0细胞增殖的另一种机制,NF-κB有可能成为抗肾癌治疗的靶点之一.     

核因子-кB在TNF-α诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的了解白血病细胞系HL-60中,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的核因子-кB(NF-кB)活化与细胞凋亡之间的关系.方法采用脂质体基因转染技术,将突变的核因子抑制蛋白(IкBα)质粒(pCMV4-IкBαs32/36A)转染HL-60细胞,于48 h后测其瞬时表达效应.用间接免疫荧光和Western bbt技术检测转染组和非转染组HL-60细胞的NF-кB活化状态,同时用流式细胞术和MTT法分别检测TNF-α对两组HL-60细胞的凋亡诱导及生长抑制效应.结果 TNF-α可诱导非转染组HL-60细胞的NF-кB活化,不能诱导转染组细胞的NF-кB活化,即突变型IкBα可特异性抑制HL-60细胞的NF-кB活化.结论用突变型IкBα特异性抑制HL-60细胞的NF-кB活化,能明显增加其对TNF-α的敏感性.     

NF-κB及其活化的研究进展

核因子-κB/Rel蛋白(NF-κB)是一种分布和作用均十分广泛的真核细胞转录因子，因首先发现于B细胞Igκ轻链转录调控而得名。NF-κB可双向调控一系列基因的表达，这些基因的表达产物主要是参与调控机体的免疫反应和炎症反应。     

系膜细胞增殖及NF-кBp65核转位的影响

目的:探讨高糖对大鼠肾系膜细胞增殖及NF-кBp65核转位的影响.方法:大鼠HBZY-1肾系膜细胞进行体外培养,用5.6nunol/L葡萄糖(正常对照组)、10、20、30mmo1/L高糖分别作用12、24、48小时,用噻唑蓝(MTT)法测各组肾系膜细胞增殖,western-blot法测各组肾系膜细胞NF-кBp65总蛋白的表达;双染免疫荧光激光共聚焦显微镜测各组肾系膜细胞NF-кBp65核转位.结果:48h内,各高糖组大鼠肾系膜细胞的增殖无统计学差异(P>0.05);各高糖组NF-кBp65总蛋白的表达无统计学差异(P>0.05);高糖组NF-кBp65核转位增加(P<0.01),呈时间浓度依赖性.结论:在48h内,高糖直接促进肾系膜细胞NF-кBp65核转位导致NF-кB信号通路激活,并不促进大鼠肾系膜细胞的增殖及NF-кBp65总蛋白的表达增加.     

HCVC蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究

目的 探讨丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV C)在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)的调控作用。方法 利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939HCV C ),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCVC蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性。RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及P50、P65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响。结果 ①EMSA结果显示QBC939HCV C 细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高。②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCVC蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C 细胞中活化NF-κB为12．8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2．6倍。③RT-PCR显示IκB mRNA在QBC939HCV C 细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCVC蛋白的QBC939HCV C 细胞株的胞核中的P50、P65蛋白高水平表达,而未转染HCVC蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的P50、P65蛋白。在QBC939HCV C 细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达。QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反。结论 HCVC蛋白通过增加IκB降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用。     

小干扰RNA沉默NF-κB P65基因表达对胰腺癌细胞株PANC-1增殖与凋亡的影响

目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术阻断胰腺癌细胞株PANC-1中NF-κB P65基因表达,并研究该基因沉默后对细胞增殖与凋亡的影响.方法:利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的人NF-κB P65的小干扰RNA转染入胰腺癌细胞株PANC-1中.RT-PCR法测定胰腺癌细胞内NF-κB P65mRNA与细胞周期素D1(cyclinD1)mRNA的表达.ELISA法检测NF-κB亚单位P65的DNA结合活性的改变.MTT法测定细胞生长曲线观察细胞增殖的抑制情况.流式细胞仪测定细胞凋亡率及细胞周期的变化.结果:化学合成的人NF-κB P65 siRNA能有效地抑制PANC-1细胞中NF-κB P65与cyclinD1基因在mRNA水平上的表达(P＜0.01),同时ELISA结果显示,RelA siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).RelA siRNA组中细胞增殖减慢,凋亡率较对照组明显增加(P＜0.01),同时G1期细胞所占的比例较对照组增加了10%,S期和G2/M期细胞则分别减少了4%与6%.结论:体外实验初步证明NF-κB P65基因在胰腺癌细胞株增殖分化与凋亡方面扮演重要角色,通过沉默其表达可抑制胰腺癌细胞株PANC-1增殖并诱导其凋亡.     

利用CRISPR/Cas9技术建立RelB敲除小鼠模型

目的：利用CRISP/Cas9技术敲除C57BL/6小鼠中的RelB基因,为核因子（nuclear factor,NF）?κB转录因子蛋白家族的RelB基因与肿瘤转移等方面的研究提供RelB基因敲除实验动物模型。方法：利用基因编辑技术CRISPR/Cas9系统,设计并构建针对目的基因RelB第4外显子sgRNA,同时利用T7 RNA聚合酶体外转录Cas9 mRNA。取C57BL/6小鼠受精卵体外注射sgRNA和Cas9 mRNA后,进行胚胎移植,实现靶基因敲除。待小鼠出生后提取DNA并进行PCR鉴定,获得F0代,后与野生型交配后繁殖,取样提取DNA,测序分析鉴定后获得F1代小鼠,并在蛋白质水平和基因组水平分别验证敲除效果。结果：获得了4个在RelB基因突变的首建鼠,并得到了稳定遗传的RelB基因敲除小鼠。基因组测序结果示,敲除实验组中RelB的mRNA出现无义突变,令其mRNA翻译终止。与对照组相比,敲除实验组检测不到RelB蛋白表达。同时,Western blot结果显示,NF?κB家族中其他成员RelA、p50和p52的蛋白表达不受影响。结论：成功获得特异性敲除RelB的C57BL/6小鼠,为RelB在肿瘤转移、耐药中的研究提供了重要工具。     

TRB3基因生物学功能的研究进展

TRB3是果蝇tribbles基因的哺乳动物同源基因,在啮齿类动物中亦被称为神经细胞死亡诱导假激酶(neuronal cell death-inducible putative kinase,NIPK)基因.除此之外,此基因的其他名称还包括SKIP3(skp1 interacting partner 3)和SINK(p65-interacting inhibitor of NF-кB).     

核因子кB介导病毒基因反式激活途径在激素敏感型单纯性肾病发病中的作用

目的研究核因子кB(NF-кB)介导的病毒基因反式激活途径在激素敏感型单纯性肾病(SRSNS)发病中的作用,探讨呼吸道病毒触发该病的机制.方法采用电泳迁移率改变分析、RT-PCR和ELISA法分别对SRSNS、肾炎性肾病、继发性肾小球疾病、毛细支气管炎和正常儿童外周血单个核细胞(PBMC)NF-кB转录活性、呼吸道病毒基因和抗体表达、血清IL-8水平进行检测.结果①SRSNS活动期NF-кB转录活性增高,与SRSNS恢复期、缓解期和其它组比较差异有统计学意义(P<0.05);②SRSNS活动期血清IL-8水平增高,与NF-кB转录活性呈直线正相关关系(r=0.88,P<0.001),NF-кB活性与呼吸道病毒检出阳性率亦呈正相关趋势.结论 NF-кB介导的病毒基因反式激活途径能使IL-8等基因表达增高而致病,这可能是呼吸道病毒触发SRSNS的主要机制之一.