中枢神经系统脱髓鞘疾病脑脊液蛋白质组学研究

目的建立中枢神经系统脱髓鞘疾病蛋白质组学技术体系,寻找并鉴定与中枢神经系统脱髓鞘疾病发生有关的生物标识物。方法以中枢神经系统脱髓鞘疾病患者的脑脊液为研究对象,分别采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离总蛋白质,凝胶经银染显色后,用图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,离线应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱得到相应的肽指纹图谱;同时用超高压液相色谱分离酶解肽段,在线采用电喷雾四极杆飞行时间质谱鉴定肽段氨基酸序列;搜索数据库鉴定部分蛋白质。结果分别获得中枢神经系统脱髓鞘疾病患者组和对照组的脑脊液双向电泳蛋白质组表达图谱,筛选并鉴定出表达有明显差异的蛋白质10个,其中在疾病组中血红蛋白有明显上调而前列腺素H2表达下调明显。结论这些差异蛋白可能成为具有临床诊断意义的中枢神经系统脱髓鞘疾病潜在标识物,从而为中枢神经系统脱髓鞘疾病的早期诊断和治疗提供理论和实验依据。     

小鼠肝脏磷酸化蛋白质组的二维液相色谱分离

目的利用二维液相色谱法分离小鼠肝脏磷酸化蛋白质组。方法取正常小鼠肝脏，裂解肝脏后利用金属磷酸盐亲和层析树脂提取磷酸化蛋白．将磷酸化蛋白用初始缓冲液置换后，进行一维色谱聚焦分离，再将一维收集的pH值在8．5至4．0之间的组分分别进行二维无孔硅胶反相高效液相色谱分离。最后利用ProteoVue软件将二维UV图转换成胶图进行分析。结果成功提取了小鼠肝脏磷酸化蛋白，并在浓缩除盐后通过二维液相色谱分离成功建立小鼠肝脏磷酸化蛋白质组pI／UV图谱。其中．一维色谱聚焦分离pH值在8．5至4．0之间共收集16个组分，每个组分的二维UV图转换成pI／UV胶图。结论磷酸化蛋白纯化技术与二维液相色谱技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法，为下一步鉴定和研究磷酸化蛋白的功能打下坚实的基础。     

小鼠肝脏磷酸化蛋白质组的二维液相色谱分离

目的 利用二维液相色谱法分离小鼠肝脏磷酸化蛋白质组。方法 取正常小鼠肝脏,裂解肝脏后利用金属磷酸盐亲和层析树脂提取磷酸化蛋白。将磷酸化蛋白用初始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,再将一维收集的pH值在8.5至4.0之间的组分分别进行二维无孔硅胶反相高效液相色谱分离。最后利用ProteoVue软件将二维UV图转换成胶图进行分析。结果 成功提取了小鼠肝脏磷酸化蛋白,并在浓缩除盐后通过二维液相色谱分离成功建立小鼠肝脏磷酸化蛋白质组pI/UV图谱。其中,一维色谱聚焦分离pH值在8.5至4.0之间共收集16个组分,每个组分的二维UV图转换成pI/UV胶图。结论 磷酸化蛋白纯化技术与二维液相色谱技术的结合是研究磷酸化蛋白质组的有效方法,为下一步鉴定和研究磷酸化蛋白的功能打下坚实的基础。     

维吾尔族妇女宫颈癌患者血清蛋白质组的二维液相色谱分析

目的：利用蛋白质二维液相色谱方法建立维吾尔族妇女宫颈癌患者血清蛋白质组特异的蛋白质差异表达谱。方法：收集与制备维吾尔族妇女宫颈癌患者血清样品,采用蛋白质二维液相色谱系统(ProteomeLabTM PF-2D)对血清样品进行分离与数据比较分析。结果：成功建立了基于蛋白质等电点和疏水性特征的血清蛋白质组差异表达图谱,能够鉴别出56个差异表达蛋白位点,其中12个位点的峰值存在显著差异。结论：蛋白质二维液相色谱是建立血清蛋白质组差异表达谱的有效和可行方法,为维吾尔族妇女宫颈癌患者血清蛋白质标志物的筛选开辟了新的途径。     

小鼠肝脏细胞质膜蛋白质组的提取和二维液相色谱分离

摘要：目的提取小鼠肝脏细胞质膜蛋白并建立一种利用二维液相色谱法分离细胞质膜蛋白质组的方法。方法采用差
速离心结合蔗糖密度梯度离心分离和富集分小鼠肝脏细胞质膜蛋白,样品经脱盐及用起始缓冲液置换后,进行一维色
谱聚焦分离, 然后收集pH!8.5~4.0 之间的组分进行二维反相高效液相色谱分离, 最后将获得的二维UV 图通过
ProteoVue软件转换成UV/pI 图谱。结果成功提取了肝脏细胞质膜蛋白,并通过二维液相色谱成功建立了小鼠肝脏细
胞质膜蛋白的二维UV/pI 图谱,收集了一维色谱聚焦分离的pHL8.5~4.0 区间的16 个组分,并将每个组分分进行二维色
谱分离后转换为UV/pI 图谱。结论为进一步全面研究小鼠肝脏细胞质膜蛋白功能和疾病差异蛋白质组研究打下了基础。
     

应用液体芯片-质谱技术筛选肺鳞癌患者血清标志蛋白

目的 探讨液体芯片-质谱技术(CLINPROT系统)在肺鳞癌患者血清标志蛋白筛选中的应用.方法 应用CLINPROT系统检测34例肺鳞癌患者(肺鳞癌组)、46例良性肺疾病患者(良性对照组)及44名正常人(正常对照组)的血清蛋白表达谱,应用FlexAnalysis 3.0软件进行数据分析,筛选差异表达蛋白质;采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术鉴定标志蛋白.结果 分别比较肺鳞癌组与正常对照组以及肺鳞癌组与良性对照组血清蛋白表达谱,在质荷比(M/Z)800～10 000范围内,前者筛选出96个差异表达蛋白峰,其中M/Z为4054.13和4267.46的蛋白峰在2组间差异最大,用这2种差异蛋白建立的坐标系具有良好的区分肺鳞癌与正常人的能力;后者筛选出99个差异表达蛋白峰,其中M/Z为5065.27和4054.02的蛋白峰在2组间差异最大,用这2种差异蛋白建立的坐标系具有良好的区分肺鳞癌与良性肺疾病的能力.取M/Z为1778和1865的蛋白行LC-MS/MS鉴定,结果提示二者可能均为补体C3片段或C3前体.结论 肺鳞癌患者与正常人以及与良性肺疾病患者之间血清蛋白表达谱存在明显差异,应用液体芯片-质谱技术可能从血清中筛选出敏感性高、特异性强的肺鳞癌标志蛋白.     

人类巨细胞病毒感染的特异性血清蛋白差异表达

目的应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术结合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术,筛选在人类巨细胞病毒(HCMV)血清差异表达蛋白。方法收集HCMV感染者与正常人的血清各10例,去除高丰度蛋白,iTRAQ试剂标记后采用液相色谱-串联质谱技术鉴定特异性蛋白,并比较蛋白的表达差异。结果共鉴定出362种蛋白质。对比发现有49种血清蛋白的表达差异超过两倍,其中蛋白表达显著上调的有19种,显著下调的有30种;这些差异蛋白中有6种与HCMV感染具有较高的相关性,分别是:脂联素、α-1抗胰蛋白酶、载脂蛋白E、C反应蛋白、结合珠蛋白和血清淀粉样蛋白A1。结论定量的血清蛋白质组学分析,可有效地获得HCMV感染者与正常人的血清蛋白质组差异表达图谱,筛选出与HCMV感染相关的特异性蛋白,为HCMV的早期诊断与治疗提供依据。     

肿瘤细胞蛋白质组的二维液相色谱分离

目的:建立一种利用二维液相色谱法分离肿瘤细胞全细胞裂解液的方法.方法:将肿瘤细胞裂解样品用初始缓冲液置换后,进行一维色谱聚焦分离,然后先对二维色谱条件进行优化和重现性分析,再将一维收集的pH值8.5～4.0之间的组分分别进行二维反相HPLC分离,利用ProteoVue软件将UV图转换成胶图.结果:一维色谱聚焦分离pH值8.5～4.0之间的组分共收集到16个,每个组分的二维UV图转换成pI/UV胶图.结论:二维液相色谱分离法是一种有效的分离肿瘤细胞裂解液的方法.     

Clus-human蛋白在精神分裂症患者脑脊液中的差异表达

目的：分析精神分裂症患者脑脊液中蛋白质的差异表达。方法：选取精神分裂症及非精神分裂症患者各12例,抽取脑脊液,用蛋白质分离技术———二维聚丙烯酰氨凝胶技术和蛋白质识别与鉴定技术———生物质谱技术筛选脑脊液中标志性蛋白质。结果：精神分裂症组Clus-human蛋白含量为（2.560 6±0.319 2） μg/L,对照组Clus-human蛋白含量为（2.134 9±0.418 7） μg/L,精神分裂症蛋白Clus-human含量与对照组Clus-human含量具有统计学差异（t=2.801,P=0.010）。结论：精神分裂症患者脑脊液中发现Clus-human蛋白,对精神分裂症的诊断可能具有重要意义。     

二维液相色谱技术及其在中药研究中的应用

随着分析技术的进步,基于高效液相色谱发展出二维液相色谱技术。二维液相色谱是将分离机制不同而又相互独立的两根色谱柱串联起来构成的分离系统。相比于传统的一维液相色谱,二维液相色谱具有峰容量大、特异性强、灵敏度高、分离能力强等优点,广泛应用于药品、食品等研究领域。中药成分复杂,许多成分结构相似、极性差异小,难以分离,传统的分析技术对于中药基质的研究具有一定局限性,二维液相色谱的出现使中药分析更加简便、快速、全面,推动了中药研究的进展。文章总结了二维液相色谱技术的概念、特点,以及对近年来不同分离模式的二维液相色谱在中药研究中的应用,为该技术今后的进一步发展与应用提供一定参考。     

静注心律平治疗室上性心动过速

静注心律平２ｍｇ／ｋｇ治疗室上性心动过速４７例，其中包括房室折返型心动过速３２例，房室结内折返型心动过速１０例，房内折返型心动过速４例，自律性房速１例，有效率６７％。静注心律平前后进行心电图和经食管心房调搏检查，结果表明心律平对房室传导系统和房室传导系统和房室旁路的传导有抑制作用，并延长心房、房室结和旁道有效不应期。     

人类脑脊液的蛋白质组学研究

脑脊液成分的改变可精确地反映疾病的病理过程。蛋白质组学研究方法的出现为分析脑脊液的蛋白质组成提供了一个很好的平台。文章综述了用于脑脊液蛋白质组学分析的方法,以及利用这些方法对脑脊液蛋白质组成进行研究的进展,包括脑脊液样本的准备、二维凝胶电泳、质谱分析技术、蛋白质组学的生物信息学、脑脊液的比较蛋白质组学、脑脊液的功能蛋白质组学等。     

T1期声门区喉癌差异蛋白质组学的初步分析

目的采用差异蛋白质组学分析声门区T1期喉癌患者术前与术后血清蛋白质组,寻找靶标蛋白。方法提取声门区T1期喉癌患者术前与术后血清蛋白质,二维凝胶电泳分离后,利用ImageMaster软件寻找差异蛋白点,通过质谱鉴定差异表达蛋白质,Western Blot检测其结果的表达。Elisa试剂盒检测患者及对照组血清丙二醛(MDA)和超氧化物岐化酶(SOD)表达水平。结果共鉴定T1期声门区喉癌患者术前与术后差异蛋白质12个,其中6个蛋白质在术前样本组上调表达,而与术后组差异无统计学意义(P>0.05)。术前组MDA表达水平高于对照组与术后组(P<0.01),SOD表达水平低于对照组(P<0.05)。结论氧化应激和免疫反应相关蛋白质在T1期声门区喉癌检测与治疗中具有潜在重要作用,差异蛋白质对于反应T1期声门区喉癌病理进程具有一定的研究意义。     

万古霉素静脉持续输注时脑脊液药物代谢动力学变化

目的探讨静脉持续输注万古霉素后脑脊液药物代谢动力学的变化规律。方法选择开颅术后保留脑室引流的患者12例。于手术后12h内开始以万古霉素0.5g精确静脉内泵入60min,后以2g/24h匀速持续泵入,顺序采集静脉血和脑脊液标本,用高效液相色谱法测定万古霉素浓度。结果万古霉素首剂负荷量500mg泵入结束后1h脑脊液的药物浓度达到前期峰值为1.67±0.82mg/L,12h后即相对稳定（2.23±1.20mg/L～3.42±1.18mg/L）。万古霉素脑脊液稳态药物浓度达到并超过神经外科术后颅内感染常见致病菌葡萄球菌属的MIC90（2mg/L）,其脑脊液穿透率,以脑脊液与血清药物浓度—时间曲线下面积之比计算为22%;脑脊液与血清最高药物浓度之比是13%。结论常规剂量万古霉素静脉持续输入时,脑脊液中稳态药物浓度可达到颅内感染主要致病菌（葡萄球菌）的MIC90水平,但为提高疗效,更高的剂量可能是需要的。     

多发性硬化病人体内高水平cICAM-1和TNF-α的研究

目的 研究多发性硬化（ＭＳ）免疫异常过程中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）和循环细胞间粘附分子－１（ｃＩＣＡＭ－１）的变化及与血脑屏障（ＢＢＢ）的相关性。方法 用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及单项琼脂扩散（ＳＩＲＤ）检测临床确诊为ＭＳ的３１例病人血清及脑脊液（ＣＳＦ）中ＴＮＦ－α、ｃＩＣＡＭ－１及白蛋白（Ａｌｂ）比值。结果 ①例ＭＳ虱中Ａｌｂ比值轻度异常８例（２５％）,正常者２３例;ＩｇＧ指数增高（〈     

两性霉素B持续椎管内给药治疗新型隐球菌性脑膜炎的脑脊液药动学监测

目的探讨两性霉素B(AMB)椎管内持续给药治疗新型隐球菌性脑膜炎的脑脊液药代动力学特点。方法对3例新型隐球菌性脑膜炎患者进行了AMB椎管内持续给药疗法,用高效液相色谱法(HPLC)对其脑脊液(CSF)中AMB的药物浓度进行连续测定。结果 AMB椎管内持续给药后脑脊液中AMB的药物浓度大于AMB对新型隐球菌的最低抑菌浓度(MIC)。药-时曲线显示在开始进行AMB椎管内持续给药当天以及每次药物加量当天的AMB在CSF中的药物浓度出现较大波动,第2天处于稳定水平,AMB在CSF中的药物浓度维持在0.61~1.21μg/ml。结论椎管内持续给药能显著提高脑脊液中AMB浓度,而且能维持稳定有效的药物浓度,从而达到有效治疗的目的。     

脑脊液双向电泳技术体系的建立

目的:建立用于脑脊液(CSF)蛋白分离的双向电泳(2-DE)技术体系,寻找多发性硬化患者和对照组脑脊液蛋白质差异,从分子水平探讨多发性硬化患者脑脊液蛋白整体变化规律。方法:分别取对照组及多发性硬化患者的脑脊液,用三氯乙酸(TCA)沉淀蛋白质后,加入适量裂解液使蛋白质充分裂解,离心后取上清液上样。进行第1向等电聚焦(IEF)电泳和第2向十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),染色脱色后,分析所得蛋白质斑点。结果:对照组和多发性硬化患者脑脊液2-DE图谱上均可得到近200个蛋白质斑点,其中2个蛋白质在多发性硬化患者脑脊液中含量增加,4个蛋白质在多发性硬化患者脑脊液中含量减少,12个蛋白质斑点为多发性硬化患者脑脊液特有。结论:对照组和多发性硬化患者脑脊液的双向电泳图谱存在明显差别,这些发现可为研究多发性硬化疾病机制提供线索。     

髓鞘碱性蛋白和白细胞介素16在多发性硬化发病机制和临床中的探讨

目的探讨髓鞘碱性蛋白(MBP)和白细胞介素16(IL-16)在多发性硬化(MS)发病过程中的水平变化和临床意义。方法用ELISA法检测MS组(CSF31例、Serum32例)、Guillain-Barre综合征(GBS)组(CSF和Serum均为24例)和对照组(CSF24例、Serum28例)中MBP和IL-16的水平。结果MS组中CSF和Serum中MBP水平均显著高于GBS及对照组(P<0.01),CSFIL-16的水平显著高于对照组(P<0.01),但SerumIL-16水平和对照组相比无明显差异性。MS组CSF中MBP的水平和IL-16的水平显著相关(r=0.463,P<0.05),但Serum中两者间无相关性。结论MBP对MS的发病有很高的敏感性,IL-16主要在中枢神经系统局部产生并参与MS的炎症过程。     

影响颈动脉斑块的相关因素分析

目的:研究颈动脉斑块的影响因素及药物治疗的效果。方法:运用彩色多普勒超声检测颈动脉斑块及血管中内膜厚度,并检测血脂、血小板、C-反应蛋白等指标的变化,观察经阿托伐他汀治疗后各指标的变化。结果:经阿托伐他汀治疗后,颈动脉斑块有所缩小,且中内膜厚度变薄,差别有显著意义(P<0.05),CRP、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、血小板治疗前后及与对照组比较,差别均有显著意义(P<0.01)。结论:颈动脉斑块与C-反应蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白及血小板的水平相关;阿托伐他汀治疗能稳定、逆转斑块。     

精神分裂症亚型与脑脊液中高香草酸水平的探讨

用高压液相色谱仪(HPLC)测定46例阳性和阴性精神分裂症患者腰段脑脊液中高香草酸(HVA)水平,结果发现;阴性精神分裂症HVA水平与正常人和阳性患者相比显著降低,提示精神分裂症阴性患者,多巴胺(DA)活动降低。HVA水平与兴奋、行为怪异等症状呈正相关,与情感平淡呈负相关,与思维障碍不相关,提示思维障碍不能用某一递质系统的变化来解释。