人膀胱癌组织中p16与HPV的相关表达

目的 探讨膀胱癌组中抑癌基因p16及高危性人乳头瘤病毒之间的关系。方法 选取40例人膀胱癌标本,分别采用免疫组化染色方法-LSAB法检测p16及聚合酶链反应技术检测人乳头瘤病毒DNA。结果抑癌基因p16阳性表达率为52.5％(21/40),HPV-DNA阳性表达率为55.0％(22/40),9例标本p16与HPV-DNA同时表达阳性。结论 抑癌基因p16蛋白的表达随着膀胱癌病理分级、临床分期的上升其阳性表达率下降。HPV在病理分级低恶性的组织中表达阳性率高,说明HPV所致的膀胱癌大多数其分化程度较高。在病理分化较好、临床分期早期的同一膀胱癌的9份标本中,HPV-DNA与p16蛋白可同时表达阳性。抑癌基因p16与人乳头瘤病毒在膀胱癌的发生、发展过程中无明显相关性。     

ING1启动子甲基化在散发性结直肠癌中的研究

具有完整活性的抑癌基因可有效地抑制肿瘤发生。p53是目前研究得比较透彻的抑癌基因。文献报道p53发挥抑癌作用．需要ING1（inhibitor of growth）的参与。若ING1表达缺失或受到拮抗，p53的抑制生长作用即明显受到抑制。ING1具有抑制细胞生长、促进凋亡，参与细胞衰老调控等作用。我们发现，在散发性结直肠癌中，ING1基因的异常改变少见，癌组织中ING1的表达强度比相应的正常组织明显降低。     

胆囊癌组织中抑癌基因p53突变与肿瘤血管生长的相关性研究

目的：探讨胆囊癌中抑癌基因p53突变与肿瘤血管生长的相关性。方法：1998年1月至2000年12月共收集44例胆囊切除标本，其中24例胆囊癌，20例胆囊腺瘤。用免疫组化方法定性检测突变抑癌基因p53蛋白产物的表达，同时检测标本中血管内皮生长因子（VEGF）的表达以反映肿瘤血管生长的情况，比较二者的相关性。结果：胆囊癌中p53蛋白的阳性率达到62．5％。VEGF的阳性率为75％，其阳性表达率随胆囊癌的病理分期的进展而逐渐增强（P＜0．05）。p53与VEGF的阳性率显著相关（P＜0．01）。结论：抑癌基因p53突变在胆囊癌早期发生中起重要作用，在胆囊癌晚期则通过促进肿瘤血管的生长，导致癌肿的浸润转移。     

p15、p16对人胆管癌细胞增殖影响的实验研究

目的 研究抑癌基因p15、p16对人胆管癌细胞的生长抑制作用。方法 将抑癌基因p15、p16的cDNA构建到真核表达的质粒载体pcDNA3-neo中形成p15真核表达质粒pcDNA3 p15及p16真核表达质粒pcDNA3 p16。通过脂质体法将重组质粒pcDNA3 p15,pcDNA3 p16质粒分别转染人胆管癌细胞系QBC939，获得稳定高表达p15或p16的人胆管癌细胞模型。用MTT法测定细胞生长曲线，流式细胞光度术测定细胞生长周期。结果 p15、p16高表达的人胆管癌细胞QBC939的增殖受到抑制，p15、p16均明显阻遏细胞由G1期向S期的转换。结论 抑癌基因p15、p16均参与了细胞周期的阻抑作用。     

p16基因启动子甲基化与结直肠癌发生发展的关系

目的　探讨p16基因启动子甲基化在结直肠癌发生、发展过程中的作用及其临床意义。方法　采用RT PCR、免疫组化方法检测p16基因表达 ,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测p16基因启动子甲基化。结果　 5 8例结直肠癌中 ,癌旁肠粘膜、原发灶、肝转移灶中p16表达阳性率分别为97% (5 6 /5 8)、31% (18/5 8)、7% (2 /2 8) ,原发灶、肝转移灶中p16表达明显降低 (P <0 0 1)。癌旁肠粘膜组织中未发现p16基因启动子甲基化 ,而癌原发灶、肝转移灶中p16甲基化阳性率分别为 5 0 %(2 9/5 8)、75 % (2 1/2 8) ,3种组织p16基因启动子甲基化率的差别有显著性意义 (P <0 0 1)。在 2 8例出现肝转移者外周静脉血、胆汁中可检测到p16甲基化启动子序列者分别为 2 3例 (82 % )、2 0例 (71% )。结论　p16基因启动子甲基化导致p16抑癌基因失活与结直肠癌的发生、转移有密切关系。     

抑癌基因p15对人胆管癌细胞增殖的影响

目的　通过构建稳定高表达抑癌基因p15的人胆管癌细胞模型 ,探讨 p15对胆管癌细胞增殖的影响。方法　将抑癌基因 p15的cDNA构建到高效真核表达的质粒载体 pcDNA -neo中的EcoRⅠ /XbaⅠ位点 ,构建成 p15真核表达质粒pcDNA3 p15 ;通过脂质体法将 pcDNA3p15质粒传染人胆管癌细胞系QBC93 9,经G418筛选 ,获得稳定高表达p15的人胆管癌细胞模型及相应的表达空载体的对照细胞模型 ,并经Wistern分子杂交分析证实。结果　与对照组相比 ,p15高表达的人胆管癌细胞生长速率明显下降 ,第 4天细胞增殖结果被抑制了 3 8.6% ;克隆形成能力降低 ,克隆抑制率达 5 5 % ;S期的细胞明显减少 ,G1期、G2 期的细胞均有增加 ;癌基因c myc蛋白水平低。结论　在人胆管癌细胞中高表达抑癌基因p15抑制了细胞增殖 ;p15同时阻遏细胞由G1期向S期及G2 期向M期转换 ;癌基因c myc蛋白水平降低可能是p15抑制作用的分子机理之一。     

胆管癌中PTEN和p16抑癌基因蛋白的表达及其临床意义

目的　探讨抑癌基因PTEN和p16蛋白表达与胆管癌生物学行为的关系。方法　应用免疫组化方法检测 43例胆管癌组织和 10例慢性胆管炎胆管壁组织的PTEN和p16基因蛋白的表达 ,并综合分析它们与胆管癌临床病理因素间的关系。结果　在胆管癌组织中 ,PTEN和p16表达阳性率分别为3 9 .5 %和 44 .2 %。PTEN和p16表达与胆管癌的TNM分期、分化程度和转移密切相关 (P <0 .0 5 )。PTEN表达与p16表达呈正相关 (r =0 .62 ,P <0 .0 0 5 )。结论　检测PTEN和p16抑癌基因表达可作为评估胆管癌生物学行为和预后的参考指标。     

p73基因生物学功能及其在胃癌组织表达的临床意义

p53基因是与人类恶性肿瘤相关性最高的抑癌基因，约半数以上恶性肿瘤的发生发展与其基因突变、失活及缺失密切相关。p73被认为是抑癌基因p53基因家族的新成员之一，具有p53活性，如诱导生长阻滞和细胞凋亡及诱导分化等，其异常表达（缺失或失活）与很多肿瘤的发生发展存在密切相关。     

肝细胞癌病人血清中GSTP1、p16基因启动子甲基化的检测

肝细胞癌（HCC）是我国常见的恶性肿瘤之一。血清AFP测定仍是HCC诊断的主要肿瘤标志物，但30％HCC病人AFP阴性，探讨HCC新的分子肿瘤标志物有重要意义。GSTP1和p16是两个抑癌基因。我们采用MSP法检测了25例HCC病人和22例非HCC病人血清中GSTP1、p16基因启动子甲基化，探讨其可能的临床意义。     

zebularine对人胃癌SGC-7901细胞株抑癌基因p16表达的影响

目的:观察甲基化转移酶抑制剂zebularine对人胃癌SGC-7901细胞株抑癌基因p16表达的影响。方法:采用MTT法和划痕实验检测zebularine对人胃癌SGC-7901细胞株的抑制率及其细胞迁移率的影响,采用real-time PCR检测作用前后抑癌基因p16表达的变化。结果:⑴终浓度100μmol/L的zebularine作用24 h能显著抑制SGC-7901细胞株的增殖率和迁移率。MTT法对照组吸光度为0.50±0.01,实验组为0.45±0.02,两组间差异有统计学意义(P0.05);对照组划痕愈合率为(47.45±10.05)%低于实验组的(88.23±5.45)%(P0.05)。⑵zebularine作用24 h能显著增加抑癌基因p16mRNA的表达,实验组为5.21±0.67显著高于对照组的1.04±0.09(P0.05)。结论:甲基化转移酶抑制剂zebularine可以有效抑制SGC-7901细胞株的增殖和迁移并提高抑癌基因p16mRNA的表达。     

肝癌抑癌基因GSTP1、p16、RIZ1、RASSF1A异常甲基化检测及其临床意义

目的 研究肝细胞癌中的GSTP1、p16、RIZ1、RASSF1A 4种基因启动子区域甲基化状态的表达差异,并探讨其在肝癌发生中的作用.方法运用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation-specific PCR,MSP）技术,分别检测35例肝癌组织及其相应的癌旁组织和20例正常对照肝组织中4种候选抑癌基因（GSTP1、p16、RIZ1、RASSF1A）启动子区域的甲基化表达情况,并结合临床病理资料进行分析.结果在肝细胞癌、癌旁及正常对照肝组织中检测到GSTP1基因启动子区的甲基化率分别是57.1 （20/35）,25.7％（9/35）,0％ （0/20）;p16基因启动子区甲基化率分别是54.3％ （19/35）,37.1％ （13/35）,0％ （0/20）; RIZ1基因启动子区甲基化率分别是68.6％ （24/35）,14.3％ （5/35）,0％ （0/20）;RASSF1A基因启动子区甲基化率分别是88.6％ （31/35）,74.3％（26/35）,10％ （2/20）,其中癌组织中GSTP1和RIZ1基因甲基化率均显著高于相应的癌旁组（P＜0.01）和正常对照肝组织（P＜0.01）,癌组织中p16、RASSF1A启动子区甲基化率高于癌旁组织,但二者无统计学意义（P＞0.05）,但明显高于正常对照肝组织（P＜ 0.01）.在肝癌组织中肿瘤有包膜侵犯者GSTP1基因甲基化阳性率明显高于无包膜侵犯者（P＜0.05）;乙肝表面抗原（HbsAg）阳性的肝癌患者p16基因甲基化阳性的比率要显著高于HbsAg阴性者（P＜0.05）;而RIZ1、RASSF1A与临床病理资料间均没有统计学意义（P＞ 0.05）.结论RIZ1、GSTP1基因甲基化状态具有肝癌特异性,或可作为临床肝癌辅助诊断的分子标记物.慢性HBV感染可能是导致p16甲基化而失活的原因,GSTP1基因启动子甲基化可能与肝细胞癌的侵袭性有关.     

膀胱移行细胞癌患者血浆p14基因异常甲基化检测的意义

目的检测膀胱移行细胞癌患者血浆p14基因启动子异常甲基化状态,探讨血浆p14基因甲基化改变作为膀胱移行细胞癌分子生物学标志物的可能。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)技术,分别检测62例膀胱移行细胞癌患者血浆和相应肿瘤组织DNA的p14基因甲基化状态。结果血浆和肿瘤组织中,p14基因甲基化的阳性率分别为43.5%(27/62)和46.8%(29/62),血浆和肿瘤组织的总体符合率93.1%(27/29),血浆p14基因的甲基化状况与肿瘤组织中是否出现p14基因甲基化具有显著相关性(P<0.01)。血浆和肿瘤组织中,p14基因甲基化与膀胱移行细胞癌的病理分级和临床分期均呈正相关。结论p14基因的甲基化状态改变在膀胱移行细胞癌的发生起重要的作用。血浆p14基因甲基化的检测是膀胱移行细胞癌诊断和判断预后的一个有效的分子生物学指标。     

胃癌p16、p53、C-erbB-2基因表达与淋巴转移关系的研究

本研究运用免疫组化SP法，对92例手术切除胃癌组织及所属淋巴结和28例癌旁正常黏膜组织石蜡标本进行了抑癌基因p16、p53突变型、原癌基因C-erbB-2蛋自进行了检测，就3个基因对胃癌淋巴转移的作用进行了分析。报告如下。     

卵巢上皮性肿瘤中p16抑癌基因的表达及意义

目的 探讨抑癌基因p16在卵巢上皮癌的发生及发展的关系。方法 应用标记抗生蛋白链菌素生物素法（LSAB）检测正常卵巢、良性卵巢瘤、交界性卵巢上皮瘤以及卵巢上皮癌的组织中抑癌基因p16的表达情况。结果 p16基因的蛋白表达在恶性卵巢肿瘤中检出率为18．4％，明显低于良性卵巢肿瘤（85％）、交界性卵巢上皮瘤（90％）、正常卵巢组织（100％），P＜0．001。结论 提示p16基因广泛存在于卵巢组织中，其突变或缺失与卵巢上皮癌发生发展及预后有关。     

胰腺癌中p16基因甲基化改变及其蛋白表达分析

目的:探讨胰腺癌与癌旁组织中p16基因启动子区异常甲基化的改变及其蛋白表达的特点,以及其与胰腺癌发生发展的关系。方法:分别采用免疫组化SP法及甲基化特异PCR(MSP)检测46例人胰腺癌和癌旁组织中p16基因表达及其甲基化的水平,并结合临床资料进行分析。结果:胰腺癌中p16蛋白表达率为41.3%(19/46),而癌旁组织表达率为95.7%(44/46),两者有差异显著性(P<0.01)。p16蛋白阳性的19例胰腺癌标本中均未检出基因甲基化;p16蛋白缺失的27例标本中有18例检出基因甲基化,甲基化率为39.1%。p16基因甲基化与蛋白缺失有明显关系(P<0.05)。p16基因表达及其启动子区甲基化的发生率与胰腺癌的大小,患者性别﹑年龄的差异无显著意义(P>0.05),但与组织分化程度﹑淋巴结转移﹑PTNM分期有显著意义(P<0.05)。结论:p16基因启动子的异常甲基化可影响p16蛋白的表达,它们与胰腺癌的发生发展有关;p16甲基化和蛋白表达可能成为胰腺癌诊断及预后的候选标志物之一。     

瘢痕疙瘩p53基因突变高发区基因结构的研究

目的 探讨p53抑癌基因在病理性瘢痕组织中的结构异常与临床病理的关系。方法 采用PCR-SSCP及基因测序技术，以增生性瘢痕及正常皮肤为对照，检测瘢痕疙瘩组织标本p53基因突变高发区外显子4～6的基因结构。结果 瘢痕疙瘩p53基因外显子4、5、6均存在突变，对照组未发现突变。结论 提示瘢痕疙瘩p53基因抑制细胞进程及介导细胞凋亡等功能丧失。     

多发性结直肠癌中抑癌基因p53的表达与突变

目的探讨抑癌基因p53与多发性结直肠癌的关系。方法实验组为同时多发性结直肠癌19个癌灶和结直肠再发癌12个癌灶,对照组为散发性结直肠癌17个癌灶。分别采用免疫组织化学抗生物素蛋白生物素过氧化物酶复合物(ABC)方法和单链DNA构像多态性(PCRSSCP)方法对癌组织和癌旁正常组织进行p53蛋白以及p53基因第5、7、8外显子突变的检测,比较各组蛋白表达和基因突变的不同。结果在同时多发癌组、再发癌组以及对照组中p53蛋白阳性表达率分别为73.7%、75%、35.3%,3组比较差异有统计学意义(χ2=6.952,P<0.05);突变率3组分别为52.6%、41.7%、29.4%,差异均无统计学意义。癌旁正常组织均未检出突变;但蛋白表达在同时性三发性癌患者中为阳性。结论多发性结直肠癌中p53基因突变率和蛋白表达高于散发性结直肠癌。p53过度表达的结直肠癌患者要警惕多发癌的发生。     

抑癌基因CpG岛甲基化与结直肠癌关系的研究进展

CpG岛甲基化可导致抑癌基因的表观遗传学转录失活,在某些情况下可能是抑癌基因失活的惟一机制,直接导致肿瘤的发生.笔者对Syk,p15,hMLH1,APC,DCC,p16等抑癌基因CpG岛甲基化与结直肠癌的关系进行简要综述,并提出存在的问题和展望.     

原发性胆囊癌染色体比较基因组杂交分析

目的 探讨原发性胆囊癌组织中的基因组变化，寻找与胆囊癌相关的癌基因和抑癌基因的染色体候选区域。方法 采用比较基因组杂交方法（CGH）分析28例原发性胆囊癌组织基因组的不平衡即DNA的扩增和丢失。结果 胆囊癌常见的染色体扩增区域是7p、7q、8q、17q、5p、11q、1q；常见的缺失染色体为17p、9p、5q、6q、3p、15p、13p。结论 胆囊癌中存在多条染色体拷贝数的改变，7p、7q、8q和17p、9p等部位可能分别存在与胆囊癌密切相关的癌基因和抑癌基因。     

抑癌基因甲基化检测结直肠癌患者的研究

目的 应用甲基化特异的聚合酶链反应(PCR)法(MSP)法分析抑癌基因高甲基化对诊疗结直肠癌的应用价值。方法 应用MPS法检测20例结直肠癌患者血清、术中癌旁组织及癌组织中的抑癌基因hLMH1、p15、p16甲基化的发生率。结果 20例结直肠癌患者术前血清及术中癌组织的hLMH1、p15、p16甲基化发生率为61％—97％；癌旁组织略低；术后1周血清中hLMH1、p15、p16与术前比较明显下降(P＜0．01)，而正常对照组抑癌基因甲基化发生率均为0。结论 MSP法的建立，直接检测结直肠癌患者的抑癌基因的高甲基化状态，有助于临床判断和动态观察治疗效果。