雄激素受体在人类前列腺癌发展中的作用研究

目的:研究雄激素受体在前列腺癌雄激素非依赖性生长中的作用。方法:通过连续传代培养,建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞模型。用Western blot方法检测AR和PSA在上述过程中的表达情况。结果:连续传代培养后,LNCaP C-33细胞(传代次数少于33次)生物学行为发生改变。同C-33和C-51(传代次数介于33次和80次之间)细胞相比,C-81细胞(传代次数大于80次)表现出更强生长能力和更低雄激素依赖性。C-81细胞分泌高水平PSA,且DHT对其分泌作用的影响比C-33细胞小。3种LNCaP细胞总AR表达水平相同,但C-81表现为特征性AR-B表达丢失和AR-A表达增加。结论:前列腺癌进展是多因素作用的结果,其中包括AR亚型的差异性表达。     

45例人前列腺癌雄激素受体基因B~H外显子的突变研究

目的和方法：为探讨雄激素受体（ＡＲ）与前列腺癌（ＰＣ）发生发展及内分泌治疗不敏感的关系，我们首先建立了用ＰＣ的穿刺和石蜡切片组织检测ＡＲ基因突变的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（双链构象多态性）－双链ＤＮＡ循环测序法。并用上述方法检测了４５例国人前列腺癌组织ＡＲ基因Ｂ￣Ｈ我显子的突变。结果：在６例２的癌组织中证实有７个ＳＳＣ溘 变位片段（其中一患者有两个外显子异常）。这６例 ４例为低分化腺癌，其中２例已有远处转     

前列腺癌雄激素受体表达与细胞凋亡的关系

目的：探讨前列腺癌雄激素受体与细胞凋亡的关系及其生物学特性,方法：56例前列腺癌和20例良性前列腺增生症,应用免疫组化方法检测石蜡蜡包埋的组织切片中雄激素受体（AR）表达和应用原位末端标记技术（TUNEL）检测细胞凋亡指数（AI）。结果：AR在良恶性前列腺组织中的表达差异无显著性（P＞0．05）。AR和AI与前列腺癌Gleason分级无关。AI在前列腺癌组织中的表达明显高于良性前列腺增生症（P＜0．05）,AR阳性的前列腺癌AI亦明显高于AR阴性的前列腺癌。结论：前列腺癌组织中AR的表达可诱导其细胞凋亡,并对前列腺癌的功能性分类和内分泌治疗的疗效判断具有实用的临床意义。     

45例人前列腺癌雄激素受体基因B～H外显子的突变研究

目的和方法:为探讨雄激素受体(AR)与前列腺癌(PC)发生发展及内分泌治疗不敏感的关系,我们首先建立了用PC的穿刺和石蜡切片组织检测AR基因突变的PCR-SSCP(双链构象多态性)-双链DNA循环测序法.并用上述方法检测了45例国人前列腺癌组织(6例穿刺组织,39例石蜡切片)AR基因B～H外显子的基因突变.结果:在6例患者的癌组织中证实有7个SSCP泳动变位片段(其中一患者有两个外显子异常),这6例患者中4例为低分化腺癌,其中2例已有远处转移,而序列分析证实这2例转移患者SSCP异常的外显子H片段各存在一错义突变(Glu 872 Gln、Met 886 Ile).这两种AR的基因突变国内外均未见报道,为在PC中新发现的突变.结论:实验发现AR突变均发生在前列腺癌的中晚期,提示AR基因突变可能与PC的进展和转移有关.     

雄激素受体在良恶性前列腺组织中的表达及与细胞增殖凋亡的 …

一、材料与方法1.收集本院病理科 1977～ 1999年间手术切除及穿刺前列腺癌标本共 5 6例 ,其中切除标本 34例 ,穿刺标本 2 2例 ,所有标本均为 4%甲醛固定 ,石蜡包埋 ,连续切片 ,切片厚度 4μｍ。根据Ｇｌｅａｓｏｎ分级和临床医生分级标准将前列腺癌分为 3级 ,2～ 5分 (高分化 ) 8例 ,6～ 8分 (中分化 ) 32例 ,9～ 10分 (低分化 ) 16例。另选 18例良性前列腺增生症作对照组。2 .免疫组织化学采用超敏感ＳＰ法。雄激素受体 (ＡＲ)和Ｋｉ 6 7(ＭＩＢ 1)单克隆抗体为美国Ｍａｘｉｍ公司产品 ,分别用已知阳性乳腺癌和胃癌切片作ＡＲ和Ｋｉ 6 7阳…     

性激素对裸鼠移植性人前列腺癌（PC—3M）生长和雄激素受体水 …

用已烯雌酚（ＤＥＳ）和不同剂量的丙酸睾丸素（ＴＰ）治疗移植于裸鼠体内的雄激素非依赖性ＰＣ－３ｍ前列腺癌肿瘤模型，并以放射配体结合分析测定肿瘤的雄激素受体（ＡＲ）水平，治疗结束进测量瘤重和瘤体积。ＤＥＳ组的瘤重、瘤体积和ＡＲ水平与与照组的相比，差异不显著，说明ＤＥＳ对肿瘤的生长无明显抑制作用。与对照组的相比，低剂量ＴＰ（５０ｍｇ／ｋｇ）组的瘤重、瘤体积和ＡＲ水平显著增高（Ｐ〈０．０１）；而高剂量ＴＰ     

性激素对裸鼠移植性人前列腺癌（PC－3m）生长和雄激素受体水平的影响

用己烯雌酚（ＤＥＳ）和不同剂量的丙酸睾丸素（ＴＰ）治疗移植于裸鼠体内的雄激素非依赖性ＰＣ－３ｍ前列腺癌肿瘤模型，并以放射配体结合分析测定肿瘤的雄激素受体（ＡＲ）水平，治疗结束时测量瘤重和瘤体积。ＤＥＳ组的瘤重、瘤体积和ＡＲ水平与对照组的相比，差异不显著，说明ＤＥＳ对肿瘤的生长无明显抑制作用。与对照组的相比，低剂量ＴＰ（５０ｍｇ／ｋｇ）组的瘤重、瘤体积和ＡＲ水平显著增高（Ｐ＜０．０１）；而高剂量ＴＰ（４００ｍｇ／ｋｇ）组的瘤重、瘤体积和ＡＲ水平则显著降低（Ｐ＜０．０１）。这说明丙酸睾丸素对裸鼠体内ＰＣ－３ｍ前列腺癌的生长具有双相效应，即低剂量ＴＰ促进肿瘤的生长，高剂量ＴＰ抑制肿瘤生长。肿瘤的生长受到促进还是抑制可能与雄激素水平、ＡＲ水平的高低有关，低剂量、高剂量ＴＰ各自所具有的促瘤和抑瘤作用可能分别通过升高或降低肿瘤的ＡＲ水平这一环节来实现。     

前列腺癌非编码RNA1在雄激素非依赖去势抵抗型前列腺癌细胞中的作用

目的 探讨长链非编码RNA前列腺癌非编码RNA1(PRNCR1)在雄激素非依赖的前列腺癌细胞中的作用.方法 应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测雄激素依赖的前列腺癌细胞LNCaP及雄激素非依赖的前列腺癌细胞C4-2中PRNCR1的表达情况,通过RNA干扰技术沉默C4-2细胞中的PRNCR1,Western blot技术检测C4-2细胞中雄激素受体(AR)的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,MTT实验检测沉默PRNCR1表达对细胞增殖的影响,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 PRNCR1在雄激素非依赖的细胞系C4-2中高表达,干扰其表达可以明显降低前列腺癌细胞中AR的表达,抑制前列腺癌细胞的细胞增殖及细胞的侵袭能力,并促进细胞的凋亡.结论 PRNCR1介导AR在前列腺癌去势抵抗中发挥着重要作用.     

激素受体及CgA表达与去势抵抗性前列腺癌的关系

目的探讨嗜铬粒蛋白A(chromogranin A, CgA)、AR、ER、PR表达与前列腺癌(prostate cancer, PCa)去势抵抗的关系。方法收集行TURP术有临床随访资料的63例PCa标本,采用免疫组化SP法检测CgA、AR、ER、PR在PCa组织中的表达情况,并分析去势抵抗与PCa各临床病理特征、CgA、AR、ER、PR的关系,以及CgA与PCa各临床病理特征、AR、ER、PR的关系。结果去势抵抗性PCa的发生与PCa PSA≥20 ng/mL、Gleason评分8～10、CgA阳性、AR阴性具有相关性,CgA阳性与PCa PSA≥20 ng/mL、Gleason评分8～10、AR阴性具有相关性。ER、PR表达与去势抵抗性PCa的发生及CgA表达无相关性。多因素Logistic回归分析结果显示Gleason评分是进展为去势抵抗性PCa的独立危险因素,AR是CgA的独立危险因素。结论 CgA表达与前列腺的恶性程度呈正相关,AR表达与前列腺的恶性程度呈负相关。Gleason评分、CgA及AR与PCa去势抵抗密切相关,监测CgA与AR的表达情况,结合Gleason评分对PCa的治疗方案选择和预后判断有一定的临床指导意义。     

维吾尔族前列腺癌与雄激素受体CAG重复多态性的关系

目的　探讨雄激素受体 (androgenreceptor ,AR )基因CAG重复长度与维吾尔族前列腺癌(prostatecancer ,PC)危险性及临床表现的关系。方法　应用PCR和直接测序的方法对维吾尔族 3 1例PC和 80名健康老年男性患者外周血标本进行AR基因CAG重复长度测定。结果　PC和对照组AR基因CAG重复长度平均为 2 2 .3和 2 2 .8,范围为 13 3 0 ,两者比较差异无显著性 (P =0 .5 72 )。AR基因CAG重复长度 <2 2与≥ 2 2比较 ,OR值为 2 .3 2 ( 95 %可信区间为 1.0 0 5 .46,P =0 .0 5 ) ,AR基因CAG重复长度与PC发病年龄 (相关系数 0 .2 0 1,P =0 .2 8)、前列腺特异抗原 (相关系数 -0 .0 92 ,P =0 .62 )无相关性 ,与前列腺癌分级也无关 (P >0 .0 5 )。结论　短的AR基因CAG重复长度与维吾尔族前列腺癌的危险性有关 ,而与前列腺癌的发病年龄、PSA水平及病理分级无关。     

RNAi沉默PSMA基因对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响

目的：构建LNCaP细胞PSMA基因的shRNA真核表达载体，探讨其对LNCaP细胞中PSMA基因表达的干扰作用。方法:针对PSMA mRNA序列设计合成3对编码shRNA的寡核苷酸链，退火形成双链，连接入含有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的pSilencer 2.1-U6-neo真核表达载体，双酶切及测序鉴定。使用脂质体转染的方法将重组质粒导入LNCaP细胞，G418筛选后RT-PCR、Western blotting检测其对PSMA基因干扰作用，并观察对LNCaP细胞生物学行为的影响。结果:经酶切及测序鉴定，成功构建shRNA真核表达载体p-shRNA1,2,3转染LNCaP后，对细胞PSMA mRNA表达抑制率分别为33.15%、9.26%、41.97%，Western blotting结果显示对PSMA蛋白表达的抑制率分别为26.26%、6.47%、40.69%。选择抑制效率较高的p-shRNA3进行体外生长及侵袭力实验，发现干扰后对LNCaP细胞侵袭力增强, 但是对细胞生长影响不大。结论:成功构建了人PSMA基因的RNAi的真核表达载体，并在LNCaP细胞中有效地发挥了对PSMA基因表达的干扰作用，初步发现PSMA在前列腺癌的侵袭中起负向调节作用，为进一步研究PSMA的生物学功能，探索前列腺癌的发病机制奠定一定的实验基础。     

Pleiotropic functional properties of androgen receptor mutants in prostate cancer

The androgen receptor (AR) signaling pathway plays an important role during the development of the normal prostate gland, but also during the progression of prostate cancer on androgen ablation therapy. Mutations in the AR gene emerge to keep active the AR signaling pathway and to support prostate cancer cells growth and survival despite the low levels of circulating androgens. Indeed, mutations affecting the ligand binding domain (LBD) of the AR have been shown to generate so-called "promiscuous" receptors that present widened ligand specificity and allow the stimulation of these receptors by a larger spectrum of endogenous hormones. Another class of mutations, arising in the amino-terminal domain (NTD) of the receptor, modulate AR interactions with coregulators involved in cell proliferation regulation. Besides characteristics of these well-known types of mutations, the properties of other classes of AR mutants recently described in prostate cancer are currently under investigation. Most interestingly, in addition to their potential role in the mechanisms which allow prostate cancer cells to escape androgen ablation therapy, data suggest that certain AR mutations are present early in the natural history of the disease and may play a role in many aspects of prostate cancer progression. Surprisingly, singular truncated AR devoid of their carboxy-terminal end (CTE) region seem to exert specific paracrine effects and to induce a clonal cooperation with neighboring prostate cancer cells, which may facilitate both the invasion and metastasis processes. In this article, we review the functional properties of different classes of AR mutants and their potential impact on the natural history of prostate cancer. Hum Mutat 0, 1-14, 2008. (c) 2008 Wiley-Liss, Inc.     

Prognostic significance of neuroendocrine differentiation, proliferation activity and androgen receptor expression in prostate cancer

Androgen, acting via the androgen receptor (AR), is associated with the development and progression of prostate cancer. Anti-androgen therapy is widely used to manage prostate cancer. However, the conversion of the tumor from a hormone-sensitive to a hormone-insensitive status causes such therapy to fail. Several mechanisms have now been put forward for this conversion, including neuroendocrine (NE) differentiation of the tumor cells. In this study, we evaluated the prognostic significance of tumor-cell proliferation activity, NE differentiation and AR expression. Formalin-fixed, paraffin-embedded sections were prepared from 42 patients with adenocarcinoma of the prostate. Using antibodies to AR, the Ki-67 antigen (MIB-1), chromogranin A and synaptophysin, immunohistochemical expression of AR, tumor proliferation activity and NE differentiation were analyzed. Our study revealed that AR expression was significantly lower in adenocarcinoma (52.2 +/- 27.1%) than in non-tumorous prostate tissue (68.3 +/- 18.3%; P < 0.001). NE differentiation was found in 50% of the tumors, which was correlated with the Gleason score (P < 0.05). An univariate analysis revealed a significant correlation between progression-free survival with both AR expression (P < 0.01) and proliferation activity (P < 0.001). NE differentiation was not a prognostic factor in this study.     

雄激素对正常男性及一睾丸女性化综合征患者外阴部皮肤成纤维细胞雄激素受体的调节

本文研究了人工合成的雄激素－Ｒ１８８１对三例正常男性及一例睾丸女性化（ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒｆｅｍｉｎｉｚａｔｉｏｎ，ｔｆｍ）综合征患者外阴部皮肤成纤维细胞（ｇｅｎｉｔａｌｓｋｉｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＧＳＦ）系雄激素受体（ＡＲ）的影响。实验表明，Ｒ１８８１均可增加上述细胞系ＡＲ的水平。当正常ＧＳＦ和患者ＧＳＦ（ＧＳＦｔｆｍ３）与５ｎｍｏｌ／Ｌ的Ｒ１８８１预温育２４ｈ后，其ＡＲ水平分别增至１．９６倍（为三个正常ＧＳＦ系的平均值）及１．８倍。这种增加具有时间、浓度依赖性及可逆性，表明雄激素可正向调节这些细胞系ＡＲ的水平。     

雌激素受体2对前列腺癌细胞系PC-3M增殖的影响

目的： 构建带有人雌激素受体2（ESR2）全长cDNA的重组质粒pcDNA3.1-hERβ,转染人前列腺癌PC-3M细胞株,观察ESR2对细胞增殖能力的影响。 方法：RT-PCR方法从人正常卵巢组织中获取ESR2全长cDNA,利用基因重组技术与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hERβ;瞬时转染前列腺癌PC-3M细胞株,应用细胞计数、MTT法及流式细胞术检测细胞增殖能力的改变;半定量RT-PCR法及Western blotting法分别检测增殖相关基因cyclinD1和 P21Cip1 mRNA及蛋白表达。 结果：DNA测序结果显示扩增的ESR2序列与GenBank（NM_001437）所公布的序列完全一致。重组质粒pcDNA3.1-hERβ瞬时转染人PC-3M细胞48 h后,与质粒对照组相比：RT-PCR法及Western blotting法显示,ESR2基因在mRNA水平和蛋白水平的表达均明显增加;细胞计数及MTT结果发现,细胞数目减少,细胞增殖活性下降（P<0.01）;流式细胞实验显示,G0/G1期细胞比例增加（P<0.05）,S期及G2/M期细胞比例减少（P<0.05）;RT-PCR及Western blotting结果还发现cyclinD1的表达减弱,而P21Cip1的表达增强。 结论：成功构建pcDNA3.1-hERβ重组质粒;带有ESR2全长基因的重组质粒转染PC-3M细胞后,细胞的增殖活性受到抑制;RSR2可能通过影响细胞增殖相关基因cyclinD1和 P21Cip1的表达抑制细胞的增殖。     

所谓肺硬化性血管瘤组织中两种主要细胞的雄激素受体、磷酸甘油酸酯激酶基因多态性分析

目的探讨所谓肺硬化性血管瘤（PSH）组织内的多角形细胞和表面立方细胞的克隆性组成及意义。方法选PSH患者手术切除标本19例,其中女性17例。石蜡切片HE染色,应用激光捕获显微切割技术获取PSH组织中多角形细胞和表面立方细胞,分别提取基因组DNA,用甲基化敏感的限制性内切酶HhaⅠ或HpaⅡ消化,巢式聚合酶链反应扩增X染色体连锁的雄激素受体（AR）基因及磷酸甘油酸酯激酶（PGK）基因。AR基因产物经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显示其长度多态性;PGK基因产物经Bst XI消化后,琼脂糖电泳显示其酶切位点的多态性。结果17例女性PSH组织,扩增成功AR基因及PGK基因的多态性分别为53％（8／15）和27％（4／15）。对适合于检测的10例标本分别进行AR、PGK位点克隆性分析,所有标本均表现为相同的一条等位基因带完全消失（克隆率=0）或不均衡的甲基化模式（克隆率〈0．25）。结论PSH组织中的多角形细胞和表面立方细胞具有相同的单克隆增生模式,提示二者可能均为肿瘤的实质细胞。     

c-FLIP在前列腺癌过表达的研究进展

前列腺癌(prostatic carcinoma,PCa)为欧美发达国家男性最常见的恶性肿瘤之一,是老年男性恶性肿瘤死亡的首要原因[1]。在我国随着社会人口老龄化、前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)普查和临床诊疗技术的提高,PCa的发病率呈上升趋势。PCa患者早期诊断时多对激素剥夺治疗