淫羊藿苷对大鼠肾脏缺血再灌注后炎性损伤的保护☆

肾移植过程中移植肾缺血再灌注损伤不可避免,采用药物减轻该损伤有助于提高肾移植近远期疗效.淫羊藿苷对心肌和脑缺血的治疗效果较好,对肾脏缺血再灌注的作用尚不清楚.目的:探索淫羊藿苷对肾脏的缺血再灌注损伤的保护机制.方法:54只SD大鼠随机等分为假手术组、淫羊藿苷组和模型组,后2组大鼠建立单侧肾脏缺血再灌注损伤模型,假手术组大鼠仅游离肾蒂而不钳夹阻断肾血管.淫羊藿苷组和模型组在造模前2 d至造模后12 d分别给予100 mg/kg淫羊藿苷和1 mL/kg 0.3%羧甲基纤维素钠灌胃,1次/d.结果与结论:相比于对照组,肾脏缺血再灌注损伤后大鼠血肌酐明显升高,肌酐清除率下降,肾组织出现病理性损伤,而给予淫羊藿苷的大鼠,大鼠肾组织诱生型一氧化氮合酶 mRNA和蛋白表达水平下降,肾组织内的促炎因子(肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β,6)、趋化因子(干扰素诱导蛋白10、单核细胞趋化蛋白1、巨噬细胞炎性蛋白2)mRNA的表达水平降低,肾脏缺血再灌注损伤后6 h,大鼠血浆亚硝酸盐/硝酸盐和肾组织内髓过氧化物酶水平最高,而后逐渐下降;且淫羊藿苷组大鼠血浆亚硝酸盐/硝酸盐和肾组织内髓过氧化物酶水平低于模型组(P<0.05).提示淫羊藿苷可通过抑制诱生型一氧化氮合酶酶表达及其下游的炎症级联反应而减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤.     

腺苷对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤的保护作用

目的：探讨腺苷对肾脏缺血－再灌注损伤的保护作用机制。方法：将大鼠随机分为对照组（ＣＯＮ）、缺血－再灌注组（ＩＲ）、给予腺苷后缺血－再灌注组（ＡＤ）。除病理组织学变化外,分别检测各组不同灌注时间Ｎａ－Ｋ－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活力的变化。结果：病理组织学肾小管评分,ＡＤ组和ＣＯＮ组均明显低于ＩＲ组,ＡＤ组和ＣＯＮ组之一无显著性差异。Ｎａ－Ｋ－ＡＴＰ酶和Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶的活性,在ＡＤ组和Ｃ     

缺血预处理对常温下肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :探讨缺血预处理对大鼠常温缺血再灌注损伤是否有保护作用。方法 :SD大鼠分为 3组 ,假手术组 (S组 ) ,缺血再灌注组 (IR组 ) ,预处理组 (PC组 )。于再灌注 2 4h取血、尿及肾组织标本 ,行血肌酐 (Scr)、尿素氮(BUN)、丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)、一氧化氮 (NO)、尿微量白蛋白 (UALB)、尿α1 微球蛋白 (U α1 M)测定及形态学检查。结果 :(1 )血Scr、BUN、MDA、尿UALB、Uα1 M :PC组明显低于IR组 (P <0 .0 5 )。 (2 )血SOD、NO :PC组明显高于IR组 (P <0 .0 5 )。 (3)形态学 :IR组可见大量肾小管坏死 ,超微结构多呈不可逆性改变。PC组肾小管坏死较少 ,超微结构多为可逆性改变。结论 :缺血预处理对常温下大鼠肾缺血再灌注损伤具有保护作用     

大鼠肾脏热缺血再灌注损伤的缺血后处理模型的建立

目的：建立大鼠肾脏缺血再灌注损伤（IRI）的缺血后处理模型。方法：行右肾切除，左肾蒂分别钳夹0分钟、30分钟、45分钟、60分钟，再灌注24小时后，根据肾功能检测指标确定大鼠IRI模型；大鼠随机分为4组，对照组、缺血再灌注组、缺血后处理1组和缺血后处理2组，再灌注24小时后根据肾功能检测指标和肾组织病理损伤程度分级的变化确定缺血后处理模型。结果：右肾切除，左肾蒂钳夹60分钟，再灌注24小时后，肾脏功能检测指标显著升高（P〈0．05），确定IRI模型肾蒂钳夹时间为60分钟；与I／R组相比，经缺血后处理-1干预后，大鼠肾脏功能检测指标显著降低（P〈0．05），肾组织损伤明显改善，病理损伤分级明显降低（P〈0．05）；经缺血后处理-2干预后，大鼠肾脏功能和组织损伤程度无明显改善（P〉0．05）。结论：采用缺血后处理1-的方法可以成功建立大鼠肾脏IRI的缺血后处理模型。     

磷酸化膜突蛋白与大鼠肾脏缺血再灌注损伤的关系

目的研究磷酸化膜突蛋白(phosphorylated moesin,p-Moesin)与大鼠肾脏缺血再灌注损伤的关系。方法 2.5月龄Wistar雄性大鼠15只。随机选取5只行假肾脏缺血再灌注手术,即打开腹腔后未进行肾脏动静脉夹闭(假手术组);10只行肾脏缺血再灌注手术(行双侧肾脏动静脉夹闭45min再灌注24h),其中5只未给予治疗(手术组),其他5只在手术后给予盐酸法舒地尔治疗(治疗组)。留取肾组织免疫组化法观察p-Moesin在肾组织的表达情况。结果 p-Moesin定位于大鼠肾脏肾小管上皮细胞胞浆和胞核。手术组大鼠肾脏p-Moesin的表达(阳性着色面积评分)(3.55±0.04)较假手术组(1.04±0.08)增多(P<0.05);治疗组大鼠肾脏p-Moesin的表达(1.86±0.09)较手术组减少(P<0.05)。结论 p-Moesin在大鼠肾脏定位于肾小管上皮细胞胞浆与胞核,其表达与大鼠肾脏缺血再灌注损伤有关。     

一氧化氮合酶在缺血预处理对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤保护中的作用

目的：探讨一氧化氮合酶（ＮＯＳ）在缺血预处理对大鼠肾脏缺血－再灌注损伤保护中的作用。方法：将大鼠随机分为对照组（ＣＯＮ）、缺血－再灌注组（ＩＲ）和血预处理后血－再灌注组（ＩＰＣ）。光镜下观察并行肾小管评分,用免疫组化法检测各组中不同灌注时间的３种ＮＯＳ的变化。结果：不同缺血－再灌注时间点病理组织学肾小管评分ＩＰＣ组均低于ＩＲ组,而ＩＰＣ组和ＣＯＮ组之间无显著性差异;诱导型ＮＯＳ在ＩＲ组中的表达明显     

左旋精氨酸与褪黑激素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的:诱导型一氧化氮合酶来源的一氧化氮与内皮型一氧化氮合酶来源的一氧化氮的平衡对维持血流动力学稳定及内环境动态平衡有重要作用.观察左旋精氨酸与褪黑激素对肾脏缺血再灌注损伤中诱导型一氧化氮合酶与内皮型一氧化氮合酶的影响.方法:实验于2006-07/2007-03在中山大学医学院动物实验中心完成.①实验分组:健康雄性清洁级SD大鼠60只,体质量170～210 g,随机数字表法分为缺血再灌注组、左旋精氨酸治疗组、褪黑激素治疗组、联合治疗组,每组15只.②实验方法:建立大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型,术前1 h各组大鼠腹腔内注射生理盐水及相应药物,每隔24 h重复注射1次,连续5d.③实验评估:观察各组术前及术后1,3,5 d血肌酐、诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶的变化规律及肾脏病理组织学的改变,并采用Paller法对术后第3天肾小管进行评分.结果:纳入大鼠60只,均进入结果分析.①血肌酐的表达:术后第1天联合治疗组水平显著低于缺血再灌注组(P＜0.05);术后第3,5天左旋精氨酸治疗组、褪黑激素治疗组与联合治疗组显著低于缺血再灌注组(P＜0.05).②内皮型一氧化氮合酶的表达:术后第3天缺血再灌注组比术前降低(P＜0.05);术后第3天和第5天左旋精氨酸治疗组、联合治疗组高于缺血再灌注组(P＜0.05).③诱导型一氧化氮合酶的表达:术后第1天缺血再灌注组与术前相比升高,第3天达到高峰,第5天仍高于术前(P＜0.05);褪黑激素治疗组、联合治疗组术后第3天与第5天明显低于缺血再灌注组(P＜0.05).④血肌酐水平与诱导型一氧化氮合酶的表达呈正相关,r=0.57,P＜0.01,与内皮型一氧化氮合酶/诱导型一氧化氮合酶呈负相关,r=-0.61,P＜0.01.⑤肾小管损伤Palller法评分:依次为联合治疗组＜褪黑激素治疗组＜左旋精氨酸治疗组＜缺血再灌注组.结论:通过调高内皮型一氧化氮合酶的表达、抑制诱导型一氧化氮合酶的表达可以减轻肾脏缺血再灌注损伤,联合应用左型精氨酸与褪黑激素即通过以上途径更有效的起到对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用.     

利用扩散加权成像评估MitoQ对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨扩散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)评估线粒体靶向抗氧化剂Mito Q对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)保护作用的可行性。材料与方法暂时夹闭大鼠左侧肾动脉45 min以建立IRI模型。10只雄性SD大鼠随机分为Mito Q组(5只,IRI+Mito Q)和对照组(5只,IRI+生理盐水)。在术前(第0天)和术后不同时间(第2、5、7和14天)对大鼠进行DWI扫描,并测量双侧肾外髓外带(the outer stripe of the outer medulla,OSOM)的ADC值。最后一次MRI检查结束后对肾脏组织病理学损伤程度进行评分。采用最小显著差法比较不同时间点组间及组内ADC值的差异。借助Kruskal-Wallis H检验和Mann-Whitney U检验比较不同肾脏组织病理学评分之间的差异。结果术前两组大鼠双肾ADC值无明显差异。术后两组大鼠右肾ADC值无明显差异,在术后各时间点,每组大鼠左肾OSOM的ADC值均低于右肾(P0.01),对照组左肾ADC值于各时间点均低于Mito Q组。第2天Mito Q组和对照组左肾分别为(3.66±0.29)×10-4 mm2/s、(3.09±0.39)×10-4 mm2/s,P0.05;第5天Mito Q组和对照组左肾分别为(3.75±0.32)×10-4 mm2/s、(2.95±0.79)×10-4 mm2/s,P0.05;第7天Mito Q组和对照组左肾分别为(3.77±0.42)×10-4 mm2/s、(2.98±0.49)×10-4 mm2/s,P0.05;第14天Mito Q组和对照组左肾分别为(3.93±0.23)×10-4 mm2/s、(3.05±0.20)×10-4 mm2/s,P0.05。肾脏组织病理学分析表明肾损伤最严重的区域发生在对照组IRI肾脏OSOM,其组织病理学损伤评分高于Mito Q组IRI肾脏(P0.01)。结论肾脏扩散加权成像可无创评价Mito Q减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用。     

缺血预处理对大鼠冷缺血再灌注损伤的保护作用的实验研究

目的：探讨缺血预处理对大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤的保护作用。方法：36只SD大鼠制备成肾脏冷缺血再灌注损伤模型，随机分为假手术组（A组）、冷缺血再灌注组（B组）、缺血预处理组（C组），免疫组化观察Bcl2、Bax蛋白表达，测定肾功能、肾组织超氧化物歧化酶、丙二醛，病理切片观察肾组织损伤形态学的变化。结果：B组、C组BUN、CR测定值均显著高于A组，而C组低于B组，差异具有显著性（P〈0.01）；C组大鼠肾组织超氧化物酯化酸水平较B组显著升高，而丙二醛水平显著性下降（P〈0．01）；B组、C组Bcl2、Bax蛋白较A组均明显增加，C组较B组Bcl—2表达显著增强，Bax表达明显下降（P均〈0．01），肾组织损伤的病理分级显著减轻。结论：缺血预处理对肾脏冷缺血再灌注性损伤具有保护作用，其机制可能与上调Bcl2和下调Bax蛋白表达相关。     

ARNT基因失活小鼠的肾脏缺血再灌注损伤

背景：如何有效防治肾脏的缺血再灌注损伤,一直是肾移植领域的研究重点。但目前其机制仍然不是很清楚。目的：探讨缺氧诱导因子系统对小鼠肾缺血再灌注损伤的影响及可能的作用机制。方法：选取两种小鼠,一种为芳香族碳氢化合物核转移子（aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator,ARNT）基因敲除小鼠,一种为同窝对照组小鼠。每种小鼠分别进行假手术、缺血再灌注、缺血再灌注时注射重组人促红细胞生成素、缺血再灌注时注射等量生理盐水。建立小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型,分别比较再灌注损伤后1h血清促红细胞生成素含量、24h血清肌酐值、肾组织PAS染色肾小管损伤评分和TUNEL法计算肾小管细胞凋亡数。结果与结论：再灌注后1h血清促红细胞生成素水平ARNT敲除组明显低于对照组（P〈0.01）。24h血清肌酐水平ARNT敲除组明显高于对照组（P〈0.01）。ARNT敲除组明显比对照组损伤程度重,肾小管评分明显高于对照组（P〈0.01）。ARNT敲除组阳性凋亡细胞数明显多于ARNT＋/＋组（P〈0.01）。补充促红细胞生成素后,ARNT敲除组与对照组比较,差异无显著性意义（P〉0.05）。结果表明,缺氧诱导因子系统对肾脏缺血再灌注损伤有重要的保护作用。可能是促红细胞生成素来介导其最大的保护效应。     

促红细胞生成素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的抗炎保护作用及其机制

目的探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠肾脏缺血再灌注损伤（瓜I）的抗炎保护作用及其机制。方法36只雄性SD大鼠随机分为假手术（SOR）组、IRI组和EPO组,每组12只。于再灌注2h、6h、12h、24h各时相点观察肾脏病理改变,检测血尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）水平,ELISA法检测肾组织匀浆肿瘤坏死因子-a（TNF-a）含量,Western印迹法检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）蛋白表达。结果IRI组血BUN、Scr水平和肾组织匀浆TNF=Ⅱ含量显著升高,并出现明显的肾脏病理改变;肾组织p-p38MAPK蛋白表达明显增强,于再灌注12h达到峰值,24h表达减弱。而在EPO组,BUN、Scr和TNF=a水平显著低于IRI组（P〈0．05）,在各时相点的肾脏病理改变与同期IRI组比较明显减轻,p-p38MAPK表达在各时相点较IRI组明显减弱。结论EPO可显著改善IRI造成的肾脏病理和肾功能异常,其肾脏保护作用可能与抑制p38MAPK活化、降低TNF．Ct水平、减轻炎性损伤有关。     

高压氧干预对大鼠肾缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的探讨高压氧(HBO)对大鼠肾缺血再灌注损伤(IRI)的作用及其机制。 方法建立大鼠肾IRI模型,54只Wistar大鼠分为假手术组、肾IRI组和HBO治疗组,每组18只。各组分别于再灌注后1,3,5 h（每个时间点6只）采血测定血浆肿瘤坏死因子（TNF-α）、丙二醛（MDA）的水平及肾功能［肌酐(SCr）、尿素氮（BUN)］;同时肾组织HE染色后光镜观察病理变化。 结果(1)肾IRI组血浆TNF-α、MDA和SCr、BUN的水平明显高于假手术组(P<0.05);与肾IRI组相比,HBO治疗组血浆TNF-α、MDA和SCr、BUN的水平显著降低(P<0.05)。(2)假手术组各时间点肾小球、肾小管上皮细胞结构正常;肾IRI组随时间延长,肾小球毛细血管、肾小管上皮细胞损伤逐渐加重;HBO治疗后肾损伤的程度明显减轻,再灌注后1 h和3 h肾损伤减轻的程度明显优于再灌注后5 h。 结论TNF-α和MDA促进了肾IRI的发生发展。HBO通过减少TNF-α的生成和防止组织脂质过氧化,明显减轻了肾IRI,保护了肾功能。HBO早期干预更有利于防治肾IRI。     

葛根素注射液对大鼠短暂肾缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 :研究葛根素对急性肾缺血再灌注损伤的保护作用及可能机制。方法 :无创动脉夹夹闭双侧肾蒂制成急性缺血再灌注损伤大鼠模型 ,静脉注射葛根素注射液 (30 mg/ kg)。采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA )含量 ,采用亚硝酸盐法测定超氧化物歧化酶 (SOD)活性 ,放射免疫法测定血浆血栓素 B2 (TXB2 )及6酮前列腺素 F1α(6 keto PGF1α)含量。结果 :急性肾缺血再灌注损伤后 ,葛根素组大鼠 MDA含量显著下降 ,SOD活性明显提高 ,肾组织病理改变明显轻于对照组 ;同时 ,葛根素组在缺血后 30分钟时的 TXB2 及6 keto PGF1α含量均明显升高 ,4小时时恢复至缺血前水平 ,再灌注 18小时时再次升高 ,其中对照组 TXB2升高更显著 (P<0 .0 5 ) ,而 6 keto PGF1α升高与对照组相比无显著差异。各生理参数变化 2组间无差异。结论 :葛根素对急性肾缺血再灌注损伤具有保护作用 ,其机制可能与其抗氧化损害的作用及改善缺血后血浆TXA2 PGI2 平衡失调有关。     

氨基酸对大鼠肾缺血-再灌流损伤保护作用的研究

目的　探讨八种L 支链氨基酸合剂对肾脏热缺血 再灌流损伤的保护作用。方法　采用大鼠急性缺血性肾损伤模型 ,肾缺血 4 5min、再灌流 180min。 2 4只大鼠随机分成 3组 ,A组 :假手术组 (缺血前 60min及再灌流全程输注生理盐水 ) ;B组 :对照组 (生理盐水 ,同A组 ) ;C组 :治疗组 (缺血前 60min及再灌流全程输注氨基酸合剂 ) ,观察缺血后肾功能和肾脏组织学改变。结果　该氨基酸合剂增加大鼠缺血 再灌流后肾小球滤过率 ,180minCcrB组 (2 2 7± 2 7 0 ) μl/min、C组 (471 0± 12 1 5 ) μl/min ,P <0 0 1;增加尿量 ,90minB组 (2 4 3 7± 7) μl/min、C组 (63 6± 15 2 ) μl/min ,P <0 0 1;减缓血肌酐、尿素氮升高 ,2 4h时B组血Cr (112 71± 9 5 ) μmol/L、血BUN (2 0 7± 6 6)mol/L ,C组血Cr (85 0± 7 7) μmol/L、血BUN (11 4± 3 9)mol/L ,P <0 0 5 ;减轻肾小管的损伤程度 ,Paller评分B组 (168 8± 14 8) ,C组 (10 8 7± 15 7) ,P <0 0 1。结论　该氨基酸合剂对大鼠肾脏缺血 再灌流损伤有明显的保护作用。     

Endotoxin tolerance enhances interleukin-10 renal expression and decreases ischemia-reperfusion renal injury in rats

The potential implication of interleukin (IL) 6, tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), and IL-10 in the protective effect of low-dose lipopolysaccharide (LPS) administration against renal ischemia-reperfusion injury was evaluated in a rat model. Eighteen male Sprague-Dawley rats were injected intravenously with either 0.5 mg/kg of LPS (tolerant group) or saline (control group) 2 days before surgery. Ischemic renal injury was induced by clamping the left renal artery for 60 min on rats immediately after right-side nephrectomy. Reperfusion was obtained by clamp removal and was studied at R0 (no reperfusion), 2H (R2), and 24H (R24) by renal tubular disorder characterization and by plasma creatinine as well as renal cytokine (IL-6, IL-10, and TNF-alpha) studies. No differences were observed between the two groups as concerns the period immediately after renal ischemia (R0). The endotoxin-tolerant group was associated with a significantly lower creatinine level at R24 (231 +/- 28 vs 315 +/- 36 micromol/L; P = 0.007). Pretreatment with LPS significantly reduced the degree of proximal tubule necrosis and outer medulla congestion. In such tolerant animals, renal IL-6 production was decreased, whereas IL-10 production was significantly increased at R2 and R24. There were no differences in TNF-alpha renal production. In this study, we demonstrated that administration of low doses of LPS to rats had a protective effect from renal reperfusion injury, and our data suggest that IL-10 might play a role in this phenomenon.     

rhKD/APP对肾脏缺血再灌注损伤大鼠的肾保护作用

目的 观察对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护和治疗.方法 取wistar大鼠60只,根据给药不同随机分为6组,伪手术组,模型组,小、中、大剂量组、对照组.造模24小时后检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(SUN)、尿NAG,并光镜、电镜观察肾脏组织病理变化.结果 各实验组与伪手术组比较Cr、BUN、NAG明显升高(P<0.05),与模型组比较rhKD/APP中、大剂量组、对照组Cr、BUN、NAG明显降低(P<0.01 or P<0.05),小剂量组无明显差异.光镜电镜观察rhKD)/APP中、大剂量组、对照组细胞损害较模型组明显减轻.结论 rhKD/APP对大鼠肾缺血再灌注损伤确实具有器官保护作用.     

异丙酚对大鼠肾缺血-再灌注后肺损伤的影响

目的:探讨异丙酚对肾缺血-再灌注后肺损伤是否具有保护作用,以及在不同时间点给予异丙酚,其保护作用是否有差异。方法:Wistar大鼠48只,随机分为假手术对照组(C组)、肾缺血-再灌注组(R组),以及异丙酚用药组[分别在缺血前1h(P1组)、缺血即刻(P2组)、再灌注即刻(P3组)和再灌注后1h(P4组)给予异丙酚],共6组,异丙酚输注速度为20mg/(kg·h),共3h。制作肾缺血-再灌注模型。实验结束即刻取动物血样及肺组织,测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量以及肺组织形态学变化。结果:与C组相比,R组红细胞及肺组织的SOD活性明显降低(均P<0.01),血清及肺组织的MDA含量明显升高(均P<0.01),光镜下,R组肺组织结构明显受损;与R组相比,各用药组除P4组外,均有所改善;各用药组间变化也有差异。结论:肾缺血-再灌注会引起肺损伤;异丙酚对肾缺血-再灌注所造成的肺损伤有良好的保护作用;给药时间点不同,对异丙酚的保护作用有影响。