应用环磷酰胺构建C57BL/6J小鼠免疫抑制模型

背景:在免疫增强剂的研究中,常用到免疫抑制模型,如何建立免疫抑制模型成为免疫增强剂作用评价的关键。目的:应用环磷酰胺构建C57BL/6J小鼠免疫抑制模型。方法:将小鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺50mg/kg5d组,环磷酰胺80mg/kg3d组,环磷酰胺80mg/kg5d组,环磷酰胺100mg/kg5d组和环磷酰胺100mg/kg隔天给药组。正常对照组小鼠腹腔注射生理盐水0.1mL,连续5d。环磷酰胺50mg/kg5d组,环磷酰胺80mg/kg3d组,环磷酰胺80mg/kg5d组和环磷酰胺100mg/kg5d组小鼠分别以环磷酰胺50,80,80,100mg/kg腹腔注射连续5,3,5,5d。环磷酰胺100mg/kg隔天给药组小鼠腹腔注射100mg/kg环磷酰胺,隔天1次,共注射3次。结果与结论:与正常对照组比较,腹腔注射环磷酰胺可导致小鼠外周血中CD3+T,CD3+CD4+T及CD3+CD8+T细胞明显下降(P<0.05);谷丙转氨酶(除环磷酰胺50mg/kg5d、80mg/kg3d组)、谷草转氨酶、尿素显著升高(P<0.05),其中环磷酰胺80mg/kg5d组、环磷酰胺100mg/kg5d组和环磷酰胺100mg/kg隔天给药组对肝肾功能的影响更为明显。提示腹腔注射环磷酰胺可建立CD3+T,CD3+CD4+T及CD3+CD8+T细胞明显下降的免疫抑制模型,其中以环磷酰胺50mg/kg5d和80mg/kg3d方式对肝肾功能的损伤较小。     

不同剂量环磷酰胺对正常ICR小鼠外周血象的影响

目的:探讨制备白细胞减少症ICR小鼠模型时环磷酰胺(CTX)的给药剂量。方法:96只正常ICR小鼠分为CTX80、CTX100、CTX120、CTX150和CTX300 5组,前4组用CTX 80、100、120和150 mg/kg,每天1次,连续3 d腹腔注射;第5组CTX 300 mg/kg单次腹腔注射,观察给药前和给药后不同时间外周血象的变化。结果:CTX首次注射后4 d外周血白细胞数检测值最低,在CTX80、CTX100、CTX120、CTX150和CTX300组分别为CTX前检测值的35.0%、26.7%、12.6%、12.7%和27.9%,表明CTX80组CTX剂量偏小,白细胞数最低值30%,而CTX120和CTX150对造血损伤太重。结论:连续3 d每天1次腹腔注射CTX 100 mg/kg可制备较理想的化疗ICR小鼠模型。     

删除CD4^＋CD25^＋T细胞对OVA诱导的小鼠体液免疫应答的影响

目的观察删除CD4＋CD25＋T细胞对OVA免疫小鼠体液免疫应答的影响。方法小鼠腹腔注射抗CD25单克隆抗体,分别于3天、10天、27天采血流式检测外周血中CD4＋CD25＋T细胞的比例;注射抗CD25单克隆抗体3天后,OVA加铝佐剂免疫未删除和删除CD4＋CD25＋T细胞小鼠,7天后加强免疫一次,分别于初次免疫后7天,加强免疫后14天采血制备血清,ELISA法检测血清中OVA特异性IgE和IgG1的浓度。结果注射抗CD25单克隆抗体3天和10天,外周血中无CD4＋CD25＋T细胞;27天后CD4＋CD25＋T细胞的比例部分恢复。初次免疫7天后,删除CD4＋CD25＋T细胞小鼠总IgE、OVA特异性IgE和IgG1浓度较未删除组升高;加强免疫14天后,删除CD4＋CD25＋T细胞小鼠OVA特异性IgE较未删除组升高。结论删除CD4＋CD25＋T细胞能够影响小鼠OVA特异性体液免疫应答。     

静脉输注过氧化氢溶液上调小鼠脾脏和外周血CD4~＋Foxo3~＋调节性T细胞

背景：现已证实,天然生成的调节性T细胞在维护机体免疫稳态、抑制炎性反应、抗移植排斥、抑制抗肿瘤免疫应答以及防治自身免疫病中都有重要的功能和作用。目的：探讨静脉输注过氧化氢对BALB/c小鼠CD4＋CD25＋Foxo3＋调节性T细胞的影响。方法：取BALB/c小鼠12只,随机分为两组。H2O2处理组小鼠尾静脉注射含有H2O2的PBS;PBS组小鼠静脉注射无菌PBS。分别在注射2周后处死小鼠,采集小鼠外周血、脾脏和胸腺,采用流式细胞仪检测其中CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞比例。结果与结论：H2O2处理组小鼠外周血和脾脏CD4＋Foxp3＋T细胞比例、CD4＋Foxp3＋/CD4＋细胞比例均高于对照组小鼠（P〈0.05）。提示静脉注射H2O2能上调小鼠外周血和脾脏内CD4＋Foxp3＋调节性T细胞的比例。     

淫羊藿、鹌鹑复方对免疫力低下小鼠免疫功能的影响

目的:观察验方淫羊藿、鹌鹑复方对免疫力低下小鼠免疫功能的影响。方法:实验于2005-09/10在三峡大学医学院天然药物实验室完成。①选用昆明系雄性小鼠30只,鼠龄三四个月,体质量(20±2)g。将昆明系雄性小鼠随机分为3组:空白对照组、模型组和中药复方治疗组,每组10只。②空白对照组:实验进程中正常饲养不作任何处理;模型组:腹腔内注射80mg/kg环磷酰胺造成免疫力低下模型,1次/d,同时灌服生理盐水25mL/(kg·d);中药复方治疗组:腹腔内注射80mg/kg环磷酰胺造成免疫力低下模型,1次/d,同时灌胃淫羊藿、鹌鹑复方粉剂溶解液(复方粉末来源于淫羊藿、鹌鹑复方胶囊,由三峡大学第一临床医学院和长阳县人民医院制备,其主要成分为淫羊藿、鹌鹑、肉苁蓉等中药材。淫-鹑胶囊为医院制剂,2g/粒)25g/(kg·d)。3组均连续干预10d。③用药10d后,取其脾制成脾细胞悬液,采用流式细胞仪检测脾组织T细胞亚群。④组间计量结果差异比较采用t检验。结果:30只小鼠均进入结果分析。①模型组小鼠脾脏CD3 ,CD4 T细胞亚群百分比和CD4 /CD8 明显低于空白对照组[(36.95±2.17)%,(26.27±2.58)%,1.61±0.21;(47.11±1.72)%,(36.14±1.95)%,1.89±0.12,P<0.05～0.01];中药复方治疗组明显高于模型组[(44.04±2.02)%,(28.20±1.37)%,2.23±0.11,P<0.05～0.01]。②模型组小鼠脾脏CD8 T细胞亚群百分比明显低于空白对照组[(16.34±1.72)%,(19.16±2.02)%,P<0.05],高于中药复方治疗组[(12.65±1.12)%,P<0.01]。结论:淫羊藿、鹌鹑复方能够显著改善免疫力低下小鼠的免疫功能。     

玉竹多糖对衰老模型鼠细胞及体液免疫功能的影响

目的：观察玉竹多糖对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠免疫功能的影响，分析玉竹多糖抗衰老的可能作用途径。 方法：实验于2004—07／2005—05在锦州医学院免疫实验室完成。取昆明小鼠50只，按随机数字表法分为5组，即正常对照组、衰老模型组和0．5s／kg。1g／kg，2g／kg玉竹多糖组。除正常对照组外，其余各组每只颈背部皮下注射50g／L D-半乳糖0．5mL，连续6周。同时0．5s／kg，1g／kg，2g／kg玉竹多糖组分别腹腔注射0．5g／kg，1g／kg，2g／kg，0．5mL的玉竹多糖给予治疗，正常对照组和衰老模型组腹腔注射生理盐水0．5mL／只。6周后，将小鼠称重并麻醉剖取小鼠胸腺和脾脏，计算脾指数（mg／g）=脾质量（mg）／小鼠体质量（g）。同法计算胸腺指数。应用MTT法测定脾淋巴细胞转化指数。用免疫荧光法测定脾T淋巴细胞亚群细胞数，观察其对免疫功能的影响。 结果：50只小鼠全部进入结果分析，无脱失。①与正常对照组比较，衰老模型组小鼠胸腺指数和脾指数显著下降（P〈0．05-0．01）；脾T，B淋巴细胞转化刺激指数显著降低（P〈0．05-0．01）；CD8^＋细胞数减少（P〈0．01），CD4^＋／CD8^＋比值增加（P〈0．01）。②与衰老模型组比较，0．5g／kg，1g／kg，2g／kg玉竹多糖组小鼠的脾指数、胸腺指数、B淋巴细胞转化指数及CD8^＋细胞数均显著提高（P〈0．05-0．01）。而CD4^＋／CD8^＋比值显著降低（P〈0．01），但3个剂量组之间差异无显著性意义（P〉0．05）。 结论：玉竹多糖可明显改善D-半乳糖致衰老模型小鼠的细胞及体液免疫功能，提高胸腺指数和脾指数，增加脾T．B淋巴细胞转化刺激指数和CD8^＋细胞的数量，恢复CD4^＋／CD8^＋比值的失衡状态。从而延缓机体的免疫衰老。玉竹多糖不同剂量组间无明显的剂量依赖性。     

CD4~+ CD25~+ T细胞在脂多糖诱导多器官功能障碍综合征小鼠中的保护作用研究

目的探索CD4+CD25+T细胞在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)小鼠中的作用。方法选择雄性BALB/c小鼠,以LPS 9.0 mg/kg腹腔注射制备小鼠MODS模型作为建模组(60只),对照组小鼠(10只)同法注射0.9%氯化钠注射液,应用流式细胞术在第2、5天分别检测两组小鼠体内CD4+CD25+T细胞水平;选择180只小鼠,于-2 d分别腹腔注射磷酸盐缓冲液、IgG1及200μg Anti-CD25 mAb,再于0 d注射LPS分别建立LPS组、IgG1+LPS组和Anti-CD25 mAb+LPS组小鼠模型,每组60只,计算各组CD4+CD25+T细胞百分比,并取各组小鼠肺脏组织行HE染色,观察组织细胞学改变;再建立LPS组小鼠54只,IgG1+LPS组小鼠34只,Anti-CD25 mAb+LPS组小鼠32只,观察3组小鼠的生存率。结果建模组小鼠CD4+CD25+T细胞比例与对照组相比,在2 d时下降(t=2.873,P=0.006),在5 d时上升(t=2.963,P=0.004)。Anti-CD25 mAb+LPS组注射LPS后2 d、5 d CD4+CD25+T细胞比例均下降,与其余两组比较差异均有统计学意义(P均0.01)。肺组织HE染色结果提示中和CD4+CD25+T细胞会加重LPS诱导MODS小鼠的肺部损伤,并增加小鼠的死亡率。结论 CD4+CD25+T细胞在LPS诱导的MODS中起保护作用。     

原发性胆汁性肝硬化动物模型的建立及外周血T淋巴细胞表面CD40配体分析

目的用聚肌苷酸胞苷酸（polyinosinic polycytidylic acid，PolyI：C）注射C57BIL/6小鼠以研究建立原发性胆汁性肝硬化（PBC）动物模型，探讨CD40配体（CD40L）在外周血T淋巴细胞表面的表达，和在PBC中T淋巴细胞的活化情况。方法20只C57BIM6小鼠随机分对照组和模型组。将polyI：C以5ms／kg的剂量腹腔注射模型组小鼠，对照组注射PBS，每周2次，120d后处死，留取外周血和肝组织，间接免疫荧光法检测血清抗线粒体抗体（AMA），HE染色观察胆管病理变化，生化分析仪测定血清碱性磷酸酶（ALP）含量，流式细胞术分析外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞所占比例及CD40L在T淋巴细胞表面的表达情况。结果PolyI：C注射120d后模型组小鼠均出现AMA阳性，肝组织小胆管周围有不同程度的炎性细胞浸润，血清ALP明显高于对照组（P〈0．001）；对照组胆管及血清ALP均未发生明显变化；模型组小鼠CD40L^＋／CD4^＋、CD40L^＋／CD8^＋T淋巴细胞[（4．35±0．34）％，（1．42±0．10）％）显著高于对照组[（0．78±0．10）％，（0．43±0．04）％，P〈0．01]；而模型组小鼠CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞所占比例[（25．83±1．80）％，（24．84±2．70）％]与对照组[（20．51±3．46）％，（17．84±1．53）％]比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PolyI：C腹腔注射C57BIM6小鼠120d可引起PBC病变，活化的CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞在PBC发病中起重要作用。     

夏枯草提取物对小鼠T淋巴肿瘤细胞EL-4原位凋亡的干预作用

目的:观察夏枯草提取物体内抗肿瘤的活性,初步分析其抑瘤的作用途径。方法:实验于2005-04/11在郑州大学肿瘤研究中心实验室完成。选择BALB/C小鼠50只,建立小鼠T淋巴瘤细胞EL-4肿瘤模型。按随机数字表法随机分为5组,每组10只,腹腔注射给药。①夏枯草400,200,100mg/(kg·d)组小鼠分别注射夏枯草提取物400,200,100mg/(kg·d),连续给药8d。②环磷酰胺组小鼠注射环磷酰胺100mg/(kg·d),仅第1天给药。③阴性对照组小鼠注射等容量无菌生理盐水,连续注射8d。观察夏枯草提取物对荷瘤小鼠的抑瘤率以及对平均生存时间的影响。肿瘤组织病理学切片苏木精-伊红染色后进行形态学观察;应用DNA琼脂糖凝胶电泳法和原位末端标记法检测肿瘤细胞的凋亡情况,计数1000个癌细胞中的表达阳性数作为凋亡指数。结果:50只小鼠全部进入结果分析。①各组小鼠的抑瘤率比较:夏枯草100,200,400mg/(kg·d)组及环磷酰胺组的抑瘤率均显著高于阴性对照组[22.70%,67.75%,28.44%,91.09%,0(P<0.05)],夏枯草200mg/(kg·d)组抑瘤率最大,400mg/(kg·d)组反而降低。②各组小鼠的生存期比较:环磷酰胺及夏枯草100,200,400mg/(kg·d)组荷瘤小鼠的生存期均显著长于阴性对照组[(53.6±4.9,27.8±3.9,34.1±3.5,28.4±4.4,23.1±3.5)d(P<0.05)]。夏枯草400mg/(kg·d)组对荷瘤小鼠生存期的延长作用最为明显。③各组小鼠肿瘤EL-4细胞的凋亡指数比较:夏枯草200mg/(kg·d)组小鼠肿瘤细胞凋亡指数显著高于阴性对照组[10.86±1.73,2.31±0.94(P<0.05)]。结论:夏枯草提取物具有较强的体内抗肿瘤作用,促进肿瘤细胞凋亡可能是其作用途径。但其作用并不呈剂量依赖性,夏枯草200mg/(kg·d)组疗效最为显著,而400mg/(kg·d)剂量组可能打破了肿瘤细胞与小鼠机体之间的免疫平衡,反而造成疗效下降。     

玉竹多糖对衰老模型鼠细胞及体液免疫功能的影响

目的:观察玉竹多糖对D-半乳糖致亚急性衰老模型小鼠免疫功能的影响,分析玉竹多糖抗衰老的可能作用途径。方法:实验于2004-07/2005-05在锦州医学院免疫实验室完成。取昆明小鼠50只,按随机数字表法分为5组,即正常对照组、衰老模型组和0.5g/kg,1g/kg,2g/kg玉竹多糖组。除正常对照组外,其余各组每只颈背部皮下注射50g/LD-半乳糖0.5mL,连续6周。同时0.5g/kg,1g/kg,2g/kg玉竹多糖组分别腹腔注射0.5g/kg,1g/kg,2g/kg,0.5mL的玉竹多糖给予治疗,正常对照组和衰老模型组腹腔注射生理盐水0.5mL/只。6周后,将小鼠称重并麻醉剖取小鼠胸腺和脾脏,计算脾指数穴mg/g雪=脾质量穴mg雪/小鼠体质量穴g雪,同法计算胸腺指数。应用MTT法测定脾淋巴细胞转化指数。用免疫荧光法测定脾T淋巴细胞亚群细胞数,观察其对免疫功能的影响。结果:50只小鼠全部进入结果分析,无脱失。①与正常对照组比较,衰老模型组小鼠胸腺指数和脾指数显著下降(P<0.05～0.01);脾T,B淋巴细胞转化刺激指数显著降低(P<0.05～0.01);CD8 细胞数减少穴P<0.01雪,CD4 /CD8 比值增加穴P<0.01雪。②与衰老模型组比较,0.5g/kg,1g/kg,2g/kg玉竹多糖组小鼠的脾指数、胸腺指数、B淋巴细胞转化指数及CD8 细胞数均显著提高(P<0.05～0.01),而CD4 /CD8 比值显著降低穴P<0.01雪,但3个剂量组之间差异无显著性意义穴P>0.05雪。结论:玉竹多糖可明显改善D-半乳糖致衰老模型小鼠的细胞及体液免疫功能,提高胸腺指数和脾指数,增加脾T,B淋巴细胞转化刺激指数和CD8 细胞的数量,恢复CD4 /CD8 比值的失衡状态,从而延缓机体的免疫衰老。玉竹多糖不同剂量组间无明显的剂量依赖性。     

TH17细胞、IL-21因子在鼠肺纤维化中的表达及意义

目的探讨Th17细胞、白介素21（interleukin 21,IL-21）因子在肺纤维化发病机制中的表达及意义。方法采用64只SD大鼠随机分为3组：肺纤维化模型组（P,n=24）、地塞米松3mg/kg干预组（D,n=16）、生理盐水对照组（N,n=24）。P、D组均采用一次性气管内注射博来霉素（Bleomycin,BLM）（5mg/kg）方法建立大鼠肺纤维化模型,N组气管内灌注等量0.9%氯化钠注射液。D组从第7天开始1次/日腹腔注射地塞米松;N、P组腹腔注射等量0.9%氯化钠注射液。造模后7、14、28天每组随机分批处死大鼠（8只/组）观察大鼠肺组织病理变化及测定肺组织中羟脯氨酸（HYP）含量;流式细胞术检测肺组织中Th17细胞占CD4＋T细胞的比例;用荧光RT-PCR法检测IL-21的表达水平。结果 P、D组大鼠肺组织早期炎症反应明显,并逐渐出现纤维化及胶原纤维沉积。P组IL-21表达水平、Th17细胞占CD4＋T细胞的比列均较N组明显升高（P〈0.05）,在第7天表达水平最高,此后逐渐下降,第28天最低。结论 Th17细胞、IL-21因子在大鼠肺纤维化发病过程中起重要作用,可能参与了肺纤维化的发生与发展。     

骨髓间充质干细胞对哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及气道炎症的影响

背景：CD4^＋CD25^＋调节性T细胞功能降低、数量下降已被公认为是哮喘患者免疫失调的重要表现。间充质干细胞具有免疫调节功能，可上调CD4^＋D25^＋调节性T细胞，抑制淋巴细胞增殖，并已在许多免疫性疾病方面成功应用。目的：观察骨髓间充质干细胞移植对哮喘小鼠外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞及气道炎症的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006—09／2008—05在中山大学附属第二医院中心实验室完成。材料：SPF级BALB／c小鼠34只，其中3-4周龄雄鼠4只，用于制备骨髓间充质干细胞：6周龄雌鼠30只，随机分为正常对照组、模型对照组、细胞移植组，10只，组。方法：模型对照组、细胞移植组以500mg/L卵白蛋白溶液0．2mL腹腔注射致敏，以50g/L卵白蛋白溶液雾化吸入激发建立小鼠哮喘模型。正常对照组以生理盐水代替卵白蛋白溶液，细胞移植组在诱导哮喘的第10天经尾静脉注入体外分离培养的小鼠骨髓间充质干细胞。主要观察指标：流式细胞仪检测小鼠外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占淋巴细胞的比例，并检测小鼠支气管肺泡灌洗液中的炎症细胞总数，计数嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞，结合病理切片分析气道炎症情况。结果：与正常对照组比较，模型对照组外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞占淋巴细胞的比例明显降低（t=7．742，P〈0．05）；与模型对照组比较，细胞移植组该比例明显升高（t=-7．455，P〈0．05）。3组小鼠支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞计数比较差异显著（P均〈0．05）：两两比较，模型对照组支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数高于正常对照组（P〈0．05），细胞移植组支气管肺泡灌洗液炎症细胞总数低于模型对照组（P〈0．05）。正常对照组小鼠气道无明显炎症改变?     

自体外周血干细胞动员和采集并联合化疗方案治疗儿童神经母细胞瘤及原始神经外胚层肿瘤35例

背景：自体外周血干细胞移植是目前治疗恶性实体瘤的重要方法之一,干细胞动员与采集是决定造血重建的重要因素。目的：主要评价环磷酰胺,吡柔比星,长春新碱动员方案对儿童神经母细胞瘤及原始神经外胚层肿瘤自体外周血造血干细胞移植动员采集的临床效果。方法：对35例患儿,确诊神经母细胞瘤30例,原始神经外胚层肿瘤5例,采用CDV化疗方案动员,观察采集干细胞效果。结果与结论：所有病例化疗后第4～9天（平均6.5d）白细胞〈2×109L-1,给予粒细胞刺激因子5～10mg/kg刺激造血,化疗后13～19d（平均15.5d）至白细胞〉5×109L-1后开始采集。所有病例均采集到足够的单个核细胞数和CD34＋细胞,总采集次数1～4次,平均2.1次,单个核细胞：（6.1±1.2）×108/kg,CD34＋细胞为（5.3±0.8）×106,锥虫蓝拒染率：99.5%（99%～100%）,动员并发症少,患儿均能耐受。其中25例进行自体外周血干细胞移植后均获快速造血功能重建,白细胞开始回升（中性粒细胞绝对值〉0.5×109L-1）时间为移植后10～20d（平均14d）血红蛋白恢复（〉80g/L）的时间为移植后10～30d（平均18d）,血小板恢复（〉20×109L-1）时间为移植后12～35d（平均20d）。结果提示CDV方案可以安全有效地完成神经母细胞瘤及原始神经外胚层肿瘤患儿自体外周血干细胞动员和采集。     

辣椒素抑制胰腺癌裸鼠皮下移植瘤生长的实验研究

目的 探讨辣椒素增强吉西他滨对胰腺癌T3M4细胞裸鼠移植瘤化疗作用及其机制.方法 建立耐药胰腺癌T3M4细胞的裸鼠皮下移植瘤动物模型,将荷瘤鼠随机分为：N组（生理盐水组）,G组（吉西他滨,125 mg/kg）,C组（辣椒素,20 mg/kg）,G＋C组（联合用药,吉西他滨80 mg/kg,辣椒素20 mg/kg）.各组给药均采用腹腔注射的方法,每3d一次,共8次.实验过程中测量肿瘤体积.免疫组织化学法检测细胞增殖因子Ki-67、多药耐药蛋白P-gp和核转录因子NF-κB的表达.采用RT-PCR检测核转录因子NF-κB和多药耐药基因MDR1的表达.结果 末次用药1周后G＋C组肿瘤体积和质量明显小于其他各组.免疫组织化学染色结果显示C组和G＋C组的NF-κB和P-gp蛋白的表达量明显低于N组和G组.G＋C组Ki-67的表达量明显低于其他各组.RT-PCR结果显示C组MDR1和NF-κB的表达水平明显低于N组和G组,G＋C组NF-κB和MDR1的表达水平明显低于N组和G组.结论 辣椒素可以通过下调NF-κB的表达,抑制MDR1基因表达,有效地增强吉西他滨对胰腺癌T3M4细胞移植瘤的化疗作用.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂对急性移植物抗宿主病模型小鼠 CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞的影响

背景：防治移植物抗宿主病,提高移植存活率是异基因造血干细胞移植急待解决的核心问题;因此寻找新的免疫抑制剂成为必要。近期的研究发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂具有免疫调节作用。目的：通过建立小鼠急性移植物抗宿主病模型,观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对小鼠急性移植物抗宿主病的影响及免疫调节作用。方法：选择C57BL/6（H-2b）→BALB/C（H-2d）作为完全异基因移植供、受体建立移植物抗宿主病小鼠模型,移植后3,5,7,9,11 d,治疗组小鼠腹腔注射组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA 35 mg/（kg·次）（0.2 mL）,对照组小鼠腹腔注射灭菌水0.2 mL/次,通过流式细胞术、实时定量PCR、病理学等方法,比较两组小鼠的急性移植物抗宿主病临床表现、生存时间及CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞百分率。结果与结论：治疗组较对照组小鼠出现急性移植物抗宿主病时间推迟,程度减轻、生存时间延长。治疗组生存率显著高于对照组（P〉0.05）。移植后治疗组小鼠外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞阳性百分率随时间延长呈逐渐递增趋势;反之对照组小鼠外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞阳性百分率随时间延长呈逐渐递减趋势（P 〉0.05）。提示SAHA可延迟急性移植物抗宿主病的发生,减轻急性移植物抗宿主病的严重程度,以上作用可能是通过提升CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞的比例来实现的。     

树突状细胞疫苗调节慢性乙型肝炎患者细胞因子诱导的杀伤细胞相关免疫功能的研究

目的研究树突状细胞（DC）疫苗对培养的慢性乙型肝炎（CHB）患者细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）免疫功能的调节作用。方法采用体外细胞培养的方法培养30例CHB患者CIK细胞,分为DC疫苗组和无DC疫苗组,培养14d后用流式细胞术检测各组ClK中CD3’CIM’、CD3’CD8’及CD3’CD56’T细胞的所占比例,ELISA方法检测培养上清中自细胞介素-12（IL-12）、γ干扰素（IFN-1）及白细胞介素-4（IL4）的浓度。结果DC疫苗组CD3^＋CIM^＋、CD3^＋CD8^＋及CD3^＋CD56^＋T细胞所占比例分别为18．27％、64．36％和20．00％,无DC疫苗组则分别为17．79％（P〉0．05）、54．69％（t=4．130,P〈0．01）和13．39％（t=5．601,P〈0．01）。DC疫苗组的CIK培养上清中IL．12、IL4及IFN-1的浓度分别为（177．82±130．06）、（31．774-9．52）、（86．99±56．30）ng/L,无DC疫苗组分别为（80．83±50．15）n∥L（t=3．811,P〈0．01）、（40．33±19．74）ng／L（t=2．141,P〈0．05）和（42．07±19．68）ng／L（t=4．125,P〈0．01）。结论CIK细胞培养中加入DC疫苗进行诱导,增强了所培养CIK细胞的杀伤活性。     

同种异体肢体移植中他克莫司的应用剂量

背景：他克莫司应用于同种异体肝移植的免疫耐受已多见报道。目的：探索他克莫司在异体肢体移植时的最佳应用剂量。方法：建立同种异体肢体移植大鼠模型,移植造模后设立给予不同他克莫司剂量的0.5,1,2mg/（kg·d）组及对照组,对大鼠进行大体观察、组织学、淋巴细胞亚群测定。结果与结论：移植后出现排斥反应的时间分别是对照组（3.43±0.79）d、0.5mg/（kg·d）组（5.68±0.97）d、1mg/（kg？d）组（9.13±1.17）d、2mg/（kg？d）组（9.61±2.38）d,排斥反应的病理分级4组分别为（2.61±0.38）,（1.57±0.43）,（0.85±0.24）,（0.71±0.19）级。移植后各给药组CD4＋、CD8＋检测值均明显下降,CD4/CD8比值轻度增加或在正常值范围内;对照组CD4＋、CD8＋无明显变化,CD4/CD8比值明显增加。提示,他克莫司的应用剂量在1mg/（kg·d）时就能达到理想的抑制免疫排斥反应,提高用量后意义不大。     

抗原葡萄球菌肠毒素B诱导大鼠肾细胞移植免疫耐受形成过程中对CD4＋CD25＋T细胞的影响

目的：探讨超抗原葡萄球菌肠毒素B（SEB）诱导大鼠肾细胞移植免疫耐受形成过程中对CD4＋CD25＋T细胞的影响情况。方法10只LEW大鼠作为供体,20只F344大鼠作为受体,设为对照组和SEB组各10只。取供体鼠肾脏细胞注入受体鼠血中建立鼠肾细胞移植模型。SEB组大鼠注射剂量为3.0 mg/kg,对照组大鼠注射同量生理盐水。分别用流式细胞仪法和放射免疫法测定受体鼠血中在移植前后第5、10、20天 CD4＋CD8＋T细胞数量百分数和IL-2、TGF-β含量,对结果进行比较和统计学分析。结果肾移植模型成功率100%,SEB组大鼠外周血中CD4＋CD25＋T较对照组第5天和第10天明显增高（P＜0.05）,但第20天无显著差异。对照组血中IL-2不断增高,在第10天、20天时明显高于SEB组;TGF-β表达量无论对照组及SEB组均逐步增加,但 SEB组较对照同期增加显著（P＜0.05）。结论 SEB通过影响CD4＋CD25＋T的表达,调节T细胞亚群的分布,对免疫排斥产生调节作用,在诱导免疫耐受中具有一定的作用。     

右美托咪定对舌癌患者围术期免疫功能的影响

目的:探讨右美托咪定(Dex)对舌癌患者围术期免疫功能的影响.方法:将ASAⅠ~Ⅱ级拟行舌癌根治全麻择期手术患者30例随机分为右美托咪定组(Dex组)和对照组各15例.全麻诱导前,Dex组持续泵入右美托咪定0.5 μg/kg(溶于10 mL生理盐水),对照组静脉持续泵人生理盐水10 mL,均在10 min内完成.以相同药物快速诱导插管,插管后Dex组以Dex、七氟醚、瑞芬太尼维持;对照组以七氟醚、瑞芬太尼维持.分别于TO(诱导前)、T1(切皮前,诱导后20 min)、T2(切皮后,诱导后50min)测定CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK细胞比例.结果:两组在TO时间点CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+以及NK细胞的分布差异无统计学意义(P>0.05).Dex组各个时间点CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及NK细胞变化不明显.相对于TO时间点,对照组T1、T2时间点CD3+、CD4+、C D4+/CD8+和NK细胞呈下降趋势,而CD8+升高.和对照组比较,Dex组在T1、T2时闻点CD4+/CD8+、NK细胞升高,而CD8+降低.结论:Dex作为麻醉辅助药物能减轻全麻药物对舌癌患者免疫功能的影响.     

帕瑞昔布钠超前镇痛对乳腺癌根治术患者外周血辅助性T细胞分化的影响

目的:观察帕瑞昔布钠超前镇痛对乳腺癌根治术患者外周血辅助性T细胞(T helper cells,Th)分化的影响。方法:将50例行乳腺癌根治术的患者随机分为帕瑞昔布钠组(P组)和对照组(C组),P组于术前1 h静脉注射帕瑞昔布钠40 mg(用0.9%氯化钠液稀释至5 mL,下同),术后距首次给药12 h再次静脉注射帕瑞昔布钠40 mg;C组于同时间点静脉注射等剂量的0.9%氯化钠液。术后2组用芬太尼行患者自控静脉镇痛(patient-controlled intravenous analgesia,PCIA)。采用流式细胞术检测2组患者麻醉前(T0)、术后2 h(T1)、术后12 h(T2)、术后24 h(T3)、术后48 h(T4)外周血中Th1、Th2细胞内γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白介素4(interleukin-4,IL-4)的水平,用CD3+CD8-IFN-γ+标识Th1细胞,用CD3+CD8-IL-4+标识Th2细胞,通过计算IFN-γ+/IL-4+值来得出Thl/Th2值。比较2组患者各时间点的视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)、舒适度(Bruggemann comfort scale,BCS)、芬太尼用量。结果:P组T2、T3、T4时间点VAS评分明显低于C组(P0.05);P组T1、T2、T3时间点舒适度评分明显高于C组(P0.05);P组T2、T3时间点芬太尼用量明显少于C组(P0.05)。与T0比较,2组患者T2、T3、T4时间点Th1/Th2值均明显下降(P0.05);P组T2、T3、T4时间点Th1/Th2值均高于C组(P0.05)。结论:乳腺癌根治术后患者Th1/Th2值降低;帕瑞昔布钠超前镇痛辅以芬太尼进行术后PCIA能够抑制Th1/Th2平衡向Th2型偏移。