枸杞多糖对胎儿卵巢组织冷冻保存的影响◆

背景:抗氧化剂的应用对于提高卵巢组织冻存后的活力起着很重要的作用.目的:通过观察冷冻保存的胎儿卵巢组织异种移植到裸鼠肾被膜下的发育情况,探索枸杞多糖在卵巢组织冷冻保存中的作用.方法:实验分为4组.①新鲜移植组:取材后的新鲜胎儿卵巢组织直接进行移植.②冻存对照组:冷冻保护液为基液.③β-巯基乙醇组:冷冻保护液为基液添加100μmol/L β-巯基乙醇.④枸杞多糖组:冷冻保护液为基液添加400 mg/L枸杞多糖.对冷冻复温后的胎儿卵巢皮质块进行祼鼠的肾被膜下移植,并于移植后12周取材.结果与结论:各组在移植物的存活率上差异无显著性意义(P >0.05).在卵泡计数上冷冻对照组最低(P <0.05).在卵泡的存活率上,各组间差异均有显著性意义,其中以冷冻对照组最低,枸杞多糖组最高.β-巯基乙醇组和枸杞多糖组卵巢超微结构较冷冻对照组保存的好.提示400 mg/L的枸杞多糖和100μmol/L的β-巯基乙醇有利于卵巢组织的冷冻保存,并可显著提高冷冻卵巢组织移植后的存活率.     

大鼠胚胎卯巢冷冻保存和异体无血管皮下移植的生长

背景：胚胎卵巢组织免疫原性低，不易引起宿主的免疫排斥反应，是卵巢异体移植的理想供体。但由于获取胎儿卵巢的不随意性和来源限制。标本的冷冻显得至关重要，成功的冷冻保存和复苏技术是建立胎儿卵巢库的关键。 目的：通过对大鼠新鲜或冻融胚胎卵巢组织异体无血管移植后的组织形态和功能的观察，探讨胚胎卵巢组织异体移植和超速冷冻保存的可行性。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006—03／05在云南省第一人民医院生殖遗传科进行课题设计，于2006—05／2007-02在云南大学单克隆抗体研究中心完成实验。 材料：卵巢来源于孕龄为18—20dSD大鼠胚胎。取阴道脱落细胞涂片证实有正常动情周期未交配过的SD成年雌性大鼠作为移植对象，分4组：正常对照组（n=10）、去势对照组（n=-10）、新鲜胚胎卵巢移植组（n=25）、冷冻胚胎卵巢移植组（n=25）。 方法：正常对照组仅行皮肤筋膜肌肉切开缝合术，去势对照组切除双侧卵巢组织。将孕龄为18-20d的新鲜或经超速冷冻法冷冻复苏的大鼠胚胎卵巢植入去势后4周的大鼠颈部皮下作为实验组，分别为新鲜移植组和冷冻移植组。 主要观察指标：通过阴道脱落细胞的观察和血清雌二醇、孕酮的测定了解大鼠内分泌恢复情况，并对移植卵巢进行组织学观察。 结果：新鲜移植组和冷冻移植组分别有52．17％和38．01％大鼠恢复了动情周期，两组血清雌二醇和孕酮在分别在35和49d恢复到正常，且动情周期天数与正常对照组比较，差异无显著性意义。冷冻移植组大鼠恢复动情周期虽稍短于新鲜移植组，但差异并无统计学意义。63d后取出移植物观察，见移植物色泽红润，表面有丰富的血管形成，镜下见卵巢内有大量的小动脉和小静脉：移植物组织学检查发现卵泡的发育，光镜下可见不同发育阶段的卵泡，有成熟卵泡和黄体形成，形态与正常卵巢无明显差别。 结论：大鼠胚胎卵巢异体异位无血管皮下移植后能存活、生长发育并具有与正常卵巢相似的内分泌功能；超速冷冻法能较好的保存胚胎卵巢的活性，复苏后与新鲜胚胎卵巢组织具有相同的生理活性。     

大鼠卵巢组织的冷冻移植

背景:玻璃化冷冻是应用高浓度的冷冻保护液结合极快的制冷速度,使细胞快速冷冻,避免细胞内外冰晶形成对细胞的破坏作用,是一种比较新的冷冻方法,具有操作简单、冷冻效率高等特点.目的:采用玻璃化冷冻技术冷冻大鼠卵巢组织,比较4种冷冻保护剂对大鼠卵巢组织学和功能的影响.方法:将大鼠随机数字表法分为6组,每组6只:二甲基亚砜+乙二醇组、二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖组、二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组、乙二醇+蔗糖+乙酰胺组、去势组、正常对照组.4冷冻组摘除卵巢后应用相应的冷冻保护液冻存,去势组仅摘除卵巢不冻存、不移植,正常对照组不作处理.冻存2周后解冻复苏行同体异位移植,将卵巢组织植入大鼠后肢大腿内侧.移植后30 d,观察阴道上皮类型及动情周期;移植后3个月,经腹主动脉采血检测血清雌二醇水平;回收卵巢组织做组织学检查.结果与结论:4冷冻组均可见卵巢组织结构受损表现,原始卵泡的形态正常率分别为67.9%,71.6%,80.5%,59.4%,初级卵泡形态正常率分别是41.6%,52.3%,55.9%,36.7%.二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组卵泡正常率较二甲基亚砜+乙二醇组、乙二醇+蔗糖+乙酰胺组高(P<0.05);不同发育阶段卵泡构成比差异无显著性意义,均未见典型的次级卵泡.受损的卵细胞主要表现为体积变小、胞浆内出现空泡、核皱缩等.4冷冻组未出现典型动情周期的细胞类型.移植物自周围组织获得可见的血管供应,将卵巢组织块连接形成网络.移植物内毛细血管丰富,皮质中可见成群的原始卵泡,初级卵泡、次级卵泡所占比例低于原始卵泡,形态与正常者相似.4种冷冻方法冻存卵巢组织血清雌二醇水平较正常对照组明显降低(P<0.01),二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组高于其他冷冻组(P<0.05).结果提示4种冷冻方法均对大鼠卵巢组织有一定程度破坏,初级卵泡的损伤大于原始卵泡.冻存复苏后,卵巢功能恢复,但并不完全,二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组效果优于另外3组,但移植后动物没有出现规律的动情周期,提示冷冻方法尚需进一步完善.     

促卵泡刺激素干预改善绵羊卵巢组织玻璃化冻存后异种移植的效果研究

背景:卵巢皮质片移植是无血管吻合移植,因此,提高卵巢组织对冻存-解冻和移植后缺血的耐受力是提高冻存后移植物卵泡存活和延长功能寿命的关键环节.目的:观察促卵泡刺激素在玻璃化冻存过程中对绵羊卵巢组织形态和功能的保存效果,为成人卵巢组织的冻存提供技术方法.方法:BALB/c品系雌性裸鼠随机分为3组.均行羊卵巢皮质片裸鼠异位移植:①新鲜移植对照组,取材后即移植.②玻璃化冻存移植组,采用玻璃化冻存解冻后移植,所用液体均未添加促卵泡刺激素.③添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组,采用冷冻液、解冻液和培养液均添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存后移植.移植后检测受体鼠动情周期恢复率、恢复时间、卵泡数和发育状况,于移植后4周取移植卵巢进行组织学观察、并行血清雌二醇水平分析.结果与结论:含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组与新鲜移植组相比动情周期恢复率、每高倍视野卵泡计数差异均无显著性意义(P>0.05),卵泡计数高于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P<0.05);动情周期恢复需要的天数接近于新鲜移植组,明显短于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P<0.05).移植后4周,含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组组织学观察见卵泡发育,未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组仅偶见原始卵泡.含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组与新鲜移植组相比血清雌二醇水平差异无显著性意义(P>0.05),显著高于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P< 0.05).结果提示,在玻璃化液中加入促卵泡刺激素可提高冻存绵羊卵巢组织移植后卵泡存活率.     

大鼠胚胎卵巢冷冻保存和异体无血管皮下移植的生长

背景:胚胎卵巢组织免疫原性低,不易引起宿主的免疫排斥反应,是卵巢异体移植的理想供体.但由于获取胎儿卵巢的不随意性和来源限制,标本的冷冻显得至关重要,成功的冷冻保存和复苏技术是建立胎儿卵巢库的关键.目的:通过对大鼠新鲜或冻融胚胎卵巢组织异体无血管移植后的组织形态和功能的观察,探讨胚胎卵巢组织异体移植和超速冷冻保存的可行性.设计、时间及地点:随机对照动物实验.于2006-03/05在云南省第一人民医院生殖遗传科进行课题设计,于2006-05/2007-02在云南大学单克隆抗体研究中心完成实验.材料:卵巢来源于孕龄为18～20 d SD大鼠胚胎.取阴道脱落细胞涂片证实有正常动情周期未交配过的SD成年雌性大鼠作为移植对象,分4组:正常对照组(n=10)、去势对照组(n=10)、新鲜胚胎卵巢移植组(n=25)、冷冻胚胎卵巢移植组(n=25).方法:正常对照组仅行皮肤筋膜肌肉切开缝合术,去势对照组切除双侧卵巢组织.将孕龄为18～20 d的新鲜或经超速冷冻法冷冻复苏的大鼠胚胎卵巢植入去势后4周的大鼠颈部皮下作为实验组,分别为新鲜移植组和冷冻移植组.主要观察指标:通过阴道脱落细胞的观察和血清雌二醇、孕酮的测定了解大鼠内分泌恢复情况,并对移植卵巢进行组织学观察.结果:新鲜移植组和冷冻移植组分别有52.17%和38.01%大鼠恢复了动情周期,两组血清雌二醇和孕酮在分别在35和49 d恢复到正常,且动情周期天数与正常对照组比较,差异无显著性意义.冷冻移植组大鼠恢复动情周期虽稍短于新鲜移植组,但差异并无统计学意义.63 d后取出移植物观察,见移植物色泽红润,表面有丰富的血管形成,镜下见卵巢内有大量的小动脉和小静脉;移植物组织学检查发现卵泡的发育,光镜下可见不同发育阶段的卵泡,有成熟卵泡和黄体形成,形态与正常卵巢无明显差别.结论:大鼠胚胎卵巢异体异位无血管皮下移植后能存活、生长发育并具有与正常卵巢相似的内分泌功能;超速冷冻法能较好的保存胚胎卵巢的活性,复苏后与新鲜胚胎卵巢组织具有相同的生理活性.     

冻存卵巢组织移植后抗损伤处理对移植结局的影响

背景:卵巢组织移植是无血管吻合移植,改善卵巢组织对移植后损伤的耐受力是提高冻存后移植卵巢组织卵泡存活和发挥功能的关键环节.目的:比较冻存后卵巢组织自体异位移植后,应用血管内皮生长因子、维生素E、黄芪抗损伤处理对卵巢组织形态和功能恢复的影响.方法:将成年雌性Wistar大鼠随机数字表法分为4组:正常对照组、去势组、自体新鲜卵巢组织移植组(卵巢组织未冻存,直接移植)、冷冻保存卵巢组织移植组.冷冻保存卵巢组织移植组移植后分3组干预:未经抗损伤处理组,血管内皮生长因子、维生素E、黄芪联合抗损伤组,血管内皮生长因子、维生素E联合抗损伤组.移植2个月后检测血清雌二醇水平,苏木精-伊红染色后观察卵泡的形态及正常卵泡数量.结果与结论:应用血管内皮生长因子、维生素E、黄芪联合抗损伤组较未用药物组血清雌二醇水平升高,初级卵泡数量增加,且差异显著(P＜0.05),即抗损伤药物对卵巢形态和功能的恢复有作用.血管内皮生长因子、维生素E、黄芪联合抗损伤组血清雌二醇水平、初级卵泡数量略高于血管内皮生长因子、维生素E联合抗损伤组,但差异无显著性意义.尚不能认为加用黄芪抗损伤处理效果更佳.提示自体异位移植后应用血管内皮生长因子、维生素E、黄芪抗损伤处理对卵巢形态和I功能的恢复均有作用.     

不同冷冻方案保存人类卵巢组织的活性比较

背景：卵巢组织冷冻保存被认为是保存女性生殖内分泌功能安全、有效的方法,但目前尚无统一确定的方案。 目的：探讨3种冷冻方案对人类卵巢组织保存冷冻效果及卵泡活性的影响。方法：采用丙二醇慢速程序冷冻法、二甲基亚砜玻璃化冷冻法、液氮直投法对20例人类卵巢组织进行冷冻保存,复苏后采用细胞存活/死亡荧光分析法计数有活性的细胞,体外培养测定培养液雌二醇浓度及各级卵泡计数,判断3种不同冷冻方案对人类卵巢组织活性的影响。结果与结论：不同冷冻方案冻融后卵巢组织块的活性卵泡率均低于新鲜卵巢组（P 〈 0.05）,二甲基亚砜组最低,液氮直投法组与慢速程序冷冻法组差异无显著性意义。体外培养各冷冻组分泌的雌二醇水平比较,第4天时二甲基亚砜组低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组（P 〈 0.05）,至第8天时各冷冻组雌二醇水平与新鲜卵巢组一致。培养14 d组织学观察,各组卵巢组织内生长期卵泡比例增多,始基卵泡仍然占最主要的。新鲜卵巢组织正常卵泡的总数高于冷冻组（P 〈 0.05）,二甲基亚砜组的正常卵泡数低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组（P 〈 0.05）。提示冷冻保存对卵巢组织卵泡有一定的损伤,但仍能保存大部分始基卵泡的活性,经体外培养后可进一步发育并具有分泌功能,在3种冷冻方案中,慢速程序冷冻法和液氮直投法的冷冻效果优于二甲基亚砜玻璃化冷冻法,液氮直投法操作简便,冷冻效果稳定。     

卵巢组织玻璃化冷冻保存和移植的研究进展

背景:卵巢组织玻璃化冷冻技术作为一种快速、简便、经济的冷冻方式被逐渐应用于卵巢组织的保存。目的:综述国内外关于卵巢组织玻璃化冷冻保存及移植的研究进展。方法:由第一作者检索1995/2011PubMed数据库及清华同方数据库有关卵巢组织玻璃化冷冻保存以及卵巢组织移植技术等方面的文献。结果与结论:玻璃化冷冻是一个超高速的冷冻过程,形成高黏度的"玻璃样凝固状态",可以避免由于冰晶形成所造成的细胞损伤。但至今玻璃化冷冻仍缺乏统一的标准化程序。影响卵巢组织玻璃化冷冻保存效果的主要因素有卵巢组织块的大小、冷冻保护剂的种类、渗透平衡的时间和温度、冷冻载体等。随着低温生物学的发展和卵巢组织冷冻保存效果的提高,卵巢组织的移植已经具备了一定的临床应用可行性。到目前为止,全世界已有一系列关于冻存卵巢组织移植后成功妊娠及分娩的报道,移植成功的关键在于减少缺血再灌注损伤和促进新生血管的形成。     

玻璃化冷冻法保存关节软骨

背景：同种异体骨软骨移植技术是治疗关节软骨缺损有效的方法之一,但由于移植物保存方法不理想,明显制约着该技术的临床应用。目的：探讨玻璃化冷冻法保存关节软骨组织的可行性和优越性。方法：切取成年猪骨软骨,制成约5mm×6mm（直径×长度）大小的圆柱形骨软骨块。以新鲜软骨组为对照,分别采用0.5mol/L甘油、1mol/L二甲基亚砜、1mol/L玻璃化溶液3种方法预处理软骨块,再行冷冻法保存软骨块8周,采用组织化学染色、免疫荧光染色观察并比较软骨细胞活性的变化。结果与结论：玻璃化溶液预处理组的关节软骨细胞存活率达到74.5%,明显高于甘油和二甲基亚砜预处理组,软骨基质成分仅少量丢失。3种方法相比较,玻璃化溶液预处理后慢速梯度降温冷冻保存法可以明显提高冻存关节软骨组织的活性。     

不同冷冻方法对人卵巢组织血管内皮生长因子表达及血管生成的影响

背景:人卵巢组织冷冻已成为一种保存生育能力的手段,卵巢组织移植后必须经过血管重建过程才能恢复血供,冷冻保存和复苏技术是影响移植后卵巢组织血管重建的关键.目的:比较新型玻璃化冷冻和慢速冷冻后人卵巢组织血管内皮生长因子表达情况及微血管密度,探讨不同冷冻方法对人卵巢组织血管重建的影响.方法:8份卵巢组织标本取自子宫内膜癌患者手术切除的正常卵巢组织,将每份卵巢皮质切成1.5 mm×1.5 mm×1.0 mm大小的组织块共12块后,随机数字表法分为3组:对照组(新鲜组)、新型玻璃化冷冻组和慢速冷冻组.将新型玻璃化冷冻组卵巢组织块依次在含体积分数7.5%乙二醇+体积分数7.5%二甲基亚砜+体积分数20%胎牛血清的TCM-199培养液和含体积分数15%乙二醇+体积分数15%二甲基亚砜+0.5 mol/L蔗糖的TCM-199培养液中平衡脱水,然后直接浸入液氮并装入冷冻管保存,解冻时按浓度梯度1.0,0.5,0.25 mol/L蔗糖和含体积分数20%牛血清的TCM-199培养液依次洗脱冷冻保护剂.将慢速冷冻组人卵巢组织块放入盛有1 mL冷冻液(含1.5 mol/L二甲基亚砜+体积分数20%牛血清+0.1mol/L蔗糖的TCM-199培养液)的1.8 mL冷冻管内平衡,然后放入程序冷冻仪中按设定程序进行冷冻.解冻时按浓度梯度1.0 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖、0.5 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖、0.25 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖和0.1 mol/L蔗糖依次洗脱冷冻保护剂.冻融组及对照组均进行体外培养.免疫组织化学观察培养0,2,4,6 d各组人卵巢组织血管内皮生长因子和CD34表达情况,并进行微血管计数.结果与结论:3组人卵巢组织培养前后间质细胞中均见血管内皮生长因子成斑片状弱表达,培养2 d血管内皮生长因子表达均增加并达到峰值,培养4 d均开始减弱,6 d时进一步减弱;与慢速冷冻组相比,新型玻璃化冷冻组血管内皮生长因子表达更接近对照组.3组人卵巢组织培养2 d微血管密度均增加并达到峰值,对照组和新型玻璃化冷冻组明显高于慢速冷冻组(P<0.05):慢速冷冻组培养4 d时微血管密度较培养2 d时显著下降(P<0.05);3组培养6 d时微血管密度较培养2 d时显著下降(P<0.05).与慢速冷冻法相比,新型玻璃化冷冻法能更好地保存人卵巢组织间质细胞和细胞外基质,对卵巢组织血管内皮生长因子表达及微血管生成的影响更少.     

枸杞多糖含药血清对MC3T3-E1细胞内Ca2＋及I型胶原蛋白合成的影响

背景：前期实验发现枸杞多糖对成年去势雌性大鼠骨质疏松有明显的骨质改善作用。目的：观察含枸杞多糖大鼠血清对成骨细胞株MC3T3-E1细胞内Ca2＋及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响。方法：将20%空白血清（对照组）,5%,10%,20%含枸杞多糖血清分别加入成骨细胞株MC3T3-E1细胞培养液中,通过MTT法测定细胞增殖,激光扫描共聚焦显微镜测定胞内游离钙离子浓度,免疫细胞化学方法检测Ⅰ型胶原蛋白表达。结果与结论：与对照组比较,5%,10%含枸杞多糖血清可明显促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖（P 〈 0.05,P 〈 0.01）;10%,20%含枸杞多糖血清组成骨样细胞株MC3T3-E1内细胞内Ca2＋水平及Ⅰ型胶原蛋白合成明显升高（P 〈 0.05,P 〈 0.01）。说明含枸杞多糖血清可能通过影响细胞内Ca2＋水平及Ⅰ型胶原蛋白合成防治骨质疏松症。     

枸杞多糖及其复方对链脲佐菌素所致糖尿病大鼠胰岛功能的保护效应

背景:目前,西药治疗糖尿病主要着眼于刺激已受损的胰岛β细胞加强分泌胰岛素,在保护受损的β细胞这方面,中药治疗尤为重要。目的:观察枸杞多糖及其养阴活血复方对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠胰岛功能的保护作用。设计:随机对照动物实验。单位:河南科技大学第一附属医院,医学院。材料:Wistar雄性大鼠70只,6周龄,体质量200g左右。方法:实验于自2001-10/2002-04在河南科技大学动物房进行。70只大鼠分为两组,第1组10只,为正常对照组,第2组60只,为造模组,造模成功共30只,数字表法随机分为3组:链脲佐菌素模型组和复方治疗组、枸杞多糖治疗组各10只;每天9:00复方治疗组灌胃自拟益气养阴活血中药复方(黄芪、山药、葛根各30g,枸杞子、丹参、花粉、地骨皮各15g,当归、知母各12g,丹皮、五味子各10g,水蛭5g,山萸肉20g,等,中药由河南科技大学第一附属医院药房提供,按常规煎后浓缩至相当于生药3.0kg/L)60g/kg,枸杞多糖治疗组灌胃枸杞多糖(由本室从宁夏枸杞子中分离、纯化得到)0.5g/kg,链脲佐菌素模型组和正常组灌胃相当体积的生理盐水,共3周。测定各组在实验3周前后的空腹血糖和胰岛素,并计算胰岛β细胞功能指数;取胰脏检测超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶活性和一氧化氮、丙二醛浓度。主要观察指标:正常组、链脲佐菌素组、复方组和枸杞多糖组治疗3周前后的空腹血糖、空腹胰岛素和胰岛β细胞功能指数;各组治疗后胰脏超氧化物歧化酶、一氧化氮合酶活性和一氧化氮、丙二醛浓度。结果:实验大鼠正常组10只,模型组入选造模成功者30只,最终进入结果分析40只。①实验初,与正常对照组比较,各模型组空腹血糖均明显升高(t=16.51～10.07,P<0.01),而空腹胰岛素水平和β细胞功能指数明显下降(t=13.64～100.99,P<0.01).②实验3周后,复方治疗组、枸杞多糖组与链脲佐菌素模型组比较,空腹血糖、一氧化氮、丙二醛浓度、一氧化氮合酶活性明显下降(t=8.08～72.68,P<0.01),而空腹胰岛素水平和β细胞功能指数、超氧化物歧化酶活性明显上升(t=4.39～17.87,P<0.05～0.01)。③复方治疗组的空腹血糖、丙二醛浓度、一氧化氮合酶活性、一氧化氮浓度下降,空腹胰岛素及β细胞功能指数上升均显著优于枸杞多糖治疗组(P<0.01)。结论:枸杞多糖及益气养阴活血复方能使链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠空腹胰岛素及β细胞功能指数升高,血糖下降,改善胰岛β细胞功能,可能与提高胰岛超氧化物歧化酶活性、降低一氧化氮合酶活性有关。     

枸杞多糖含药血清对MC3T3-E1细胞内Ca2+及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响

背景:前期实验发现枸杞多糖对成年去势雌性大鼠骨质疏松有明显的骨质改善作用。目的:观察含枸杞多糖大鼠血清对成骨细胞株MC3T3-E1细胞内Ca2+及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响。方法:将20%空白血清(对照组),5%,10%,20%含枸杞多糖血清分别加入成骨细胞株MC3T3-E1细胞培养液中,通过MTT法测定细胞增殖,激光扫描共聚焦显微镜测定胞内游离钙离子浓度,免疫细胞化学方法检测Ⅰ型胶原蛋白表达。结果与结论:与对照组比较,5%,10%含枸杞多糖血清可明显促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05,P<0.01);10%,20%含枸杞多糖血清组成骨样细胞株MC3T3-E1内细胞内Ca2+水平及Ⅰ型胶原蛋白合成明显升高(P<0.05,P<0.01)。说明含枸杞多糖血清可能通过影响细胞内Ca2+水平及Ⅰ型胶原蛋白合成防治骨质疏松症。     

深低温冻存同种异体皮肤移植中转化生长因子β的表达

背景：皮肤移植和创面覆盖是创伤、烧伤治疗的重要措施。目前,同种异体皮仍然是可利用的最佳创面覆盖物。目的：通过检测转化生长因子β在深低温冻存后的大鼠同种异体皮肤移植后的表达,评估深低温贮存同种异体皮在创面上的应用。方法：取大鼠皮肤保存于低温-20℃（低温保存组）及80℃深低温（深低温保存组）,冻存1周、1,2个月后,皮片分组移植于同种大鼠背部进行实验,并以自体移植大鼠作为对照组。结果与结论：同低温保存组相比,深低温保存组转化生长因子β的表达被抑制,移植皮肤排斥反应出现时间延迟及存活时间延长,排斥反应评分也较低。同低温冻存相比,深低温冷冻保存能使同种异体移植物的转化生长因子β抗原表达降低。提示深低温冻存的异体皮作为一种创面临时覆盖物,在存在皮肤组织缺失或皮源不足的情况下具有广阔的应用前景。     

枸杞皂苷通过调控Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的　探究枸杞皂苷介导Suv39H1/JAK2/STAT3通路对鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法　将人鼻咽癌CNE-2细胞株分为枸杞皂苷干预组（5,10,50 μmol/L枸杞皂苷）及对照组,采用CCK-8检测不同浓度枸杞皂苷作用0,24,48和72 h时CNE-2细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测枸杞皂苷干预48 h后CNE-2细胞凋亡率,Transwell小室实验检测CNE-2细胞侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）与蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测组蛋白甲基化酶Suv39H1的表达水平;采用qRT-PCR和Western blot分别检测Suv39H1在鼻咽癌组织和癌旁组织,以及鼻咽癌细胞系（HONE1,C666-1,CNE-1和CNE-2）和人鼻咽癌上皮细胞（NP69）中的表达差异;构建Suv39H1过表达载体（pcDNA-Suv39H1）以及针对Suv39H1的小干扰RNA（Suv39H1 siRNA）,分别转染于CNE-2细胞,检测细胞增殖、侵袭和凋亡;将pcDNA-Suv39H1载体转染于50 μmol/L枸杞皂苷干预的细胞中,分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡。Western blot检测JAK2/STAT3通路相关蛋白p-JAK2和p-STAT3的表达。结果　与对照组相比,枸杞皂苷干预鼻咽癌CNE-2细胞呈剂量依赖性降低细胞增殖（F=12.030,P=0.002 5）和侵袭（F=4.807,P=0.031 5）,增加细胞凋亡率（F=5.232,P=0.026 1）,抑制Suv39H1蛋白表达（F=14.64,P=0.001 3）;与正常组织和NP69细胞相比,鼻咽癌组织和HONE1,C666-1,CNE-1,CNE-2细胞中Suv39H1表达水平显著升高（P<0.01）;转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增强、凋亡率降低;转染Suv39H1 siRNA组细胞增殖、侵袭率降低,凋亡率升高,差异与对照组相比具有统计学意义（P<0.01） ;与50 μmol/L枸杞皂苷干预组相比,转染pcDNA-Suv39H1组细胞增殖、侵袭率增加、凋亡率降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白表达升高（P<0.01）。结论　枸杞皂苷通过下调Suv39H1/JAK2/STAT3通路抑制鼻咽癌CNE-2细胞增殖、侵袭,促进凋亡。     

拉帕替尼对人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤的影响

【目的】探讨新型靶向治疗药物拉帕替尼对人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤生长的影响。【方法】将人SKVO3细胞株接种于裸小鼠胸壁皮下建立卵巢癌裸小鼠移植瘤模型。随机将其分为空白对照组（A组）和实验组（B组）,实验组根据拉帕替尼药物浓度的不同分为两个亚组：100 mg/kg （B1）和200 mg/kg （B2）,检测各组拉帕替尼用药前后荷瘤体积及裸鼠体质量的变化。【结果】拉帕替尼可显著抑制SKOV3裸小鼠移植瘤的生长,呈剂量依赖性,B2组抑瘤率显著高于B1组,其差异有统计学意义（P＜0．05）,但小鼠体质量用药前后比较无显著性差异（P＞0．05）。【结论】拉帕替尼可显著缩小人卵巢癌细胞株SKVO3裸鼠移植瘤的体积,为卵巢癌新型靶向治疗提供了理论基础。     

不同组织冻存体系对牙周膜干细胞体外扩增的影响

背景：冻存是保证干细胞移植治疗的关键步骤之一。传统的冻存是将细胞直接置于冻存液中进行保存,然而冻存液中二甲基亚砜虽能减少细胞复苏过程中冰晶对细胞膜产生的机械性损伤,但同时又对细胞具有毒性作用,直接影响细胞生存状态,不利于临床移植治疗。目的：寻找适宜牙周膜干细胞体外扩增的牙周周组织冻存的最佳方案。方法：收集健康人牙,刮取牙周组织后将其平均分为3等份,随机分为新鲜组、5%二甲基亚砜组和10%二甲基亚砜组,后2组分别以体积分数5%和10%二甲基亚砜添加冻存1个月后提取牙周膜干细胞。新鲜组直接提取牙周膜干细胞。结果与结论：5%二甲基亚砜组原代细胞游出组织团块所需时间和细胞收获量虽不及新鲜培养组,但却明显优于10%二甲基亚砜组（P〈0.05）。新鲜组、5%二甲基亚砜组和10%二甲基亚砜组第1代牙周膜干细胞克隆形成率、活细胞比率、第3代牙周膜干细胞BrdU细胞增殖能力、MTT细胞生长曲线和牙周膜干细胞表面标志物表达差异没有显著性意义（P〉0.05）。提示5%二甲基亚砜添加冻存体系不仅能比10%二甲基亚砜添加的普通冻存体系明显缩短牙周膜干细胞体外扩增所需时间,增加细胞收获量同时还能保持细胞基本生物学特性,降低二甲基亚砜的总体用量和其在反复冻存复苏细胞过程中对细胞造成的直接损伤,为未来更加安全的实施临床移植治疗提供了保障,是供体组织储存新的选择。     

枸杞多糖对顺铂化疗诱导的大鼠卵巢早衰模型的卵巢保护作用

目的:探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)对顺铂诱导的大鼠卵巢早衰模型的作用。方法:将80只雌性SD大鼠随机分为对照组、单纯顺铂给药组(DDP组)、顺铂+低剂量LBP处理组(DDP+LBP-L组)、顺铂+高剂量LBP处理组(DDP+LBP-H组)4组。对照组大鼠正常饲养;DDP组大鼠每天腹腔注射2 mg/kg DDP,持续14 d;DDP+LBP-L组和DDP+LBP-H组大鼠每天分别灌胃5 mg/kg,10 mg/kg LBP溶液后,再腹腔注射2 mg/kg DDP,持续14 d。用药14 d后,采集股静脉血、卵巢组织和子宫组织。取卵巢组织进行HE染色和DDX4免疫组织化学染色;对卵巢各发育阶段的卵泡计数和形态进行分析;检测血清中卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)和雌二醇(estradiol,E2)的含量;取子宫组织进行HE染色。结果:与对照组相比,DDP组大鼠的卵巢受损,原始卵泡、初级卵泡、窦前卵泡、窦卵泡和总卵泡数减少,闭锁卵泡增加。而DDP+LBP组与对照组卵巢相似,其中高剂量LBP组相似程度更高;与对照组相比,DDP能升高血清中FSH含量而降低E2含量,LBP可改善此情况;DDP处理可损伤大鼠子宫内膜,使腺体数目减少,而LBP处理后子宫内膜损伤情况减轻,且高剂量LBP改善程度更明显。结论:顺铂可对大鼠卵巢造成结构和功能的损害,枸杞多糖可在一定程度上减轻这种损伤,对卵巢起保护作用。     

组织深低温冻存中保护剂的应用

背景：深低温冻存可以使离体组织的活性及功能最大限度的保留,对医学研究、临床治疗起到巨大能动作用。但在复合组织深低温冻存中,保护剂及应用还存在着很多问题有待解决。目的：综述近年国内外深低温冻存中保护剂应用的研究进展。方法：第一作者应用计算机检索2003年1月至2012年12月PubMed数据库、中国期刊全文数据』万方数据库相关文章,英文检索词为“cryopreservation,cryoprotectant,compositetissues,vitrificatiion,transplantation”;中文检索词为“深低温保存,保护剂,复合组织,玻璃化,移植”。共检索到1篇相关文献,67篇文献符合纳入标准。结果与结论：自上世纪开始国内外许多学者经过大量动物细胞和组织的基础实验研究,不断探寻各科胞组织的冻存方法,采用了多种多样的冻存技术,使用的保护剂种类繁多,取得一定的研究成果,发保护剂的应用在深低温组织冻存中起到了至关重要的作用,深低温冻存在组织工程、生殖医学、移植领域已有广泛的应用。但目前复合组织深低温冻存保护剂的应用尚处于研究阶段,保护剂的种类、浓以及导入洗脱方法均直接影响最终组织保存的成败。