托吡酯对戊四氮点燃慢性癫(癎)大鼠脑海马胶质细胞增生的影响

目的:探讨脑海马胶质细胞增生在癫(癎)发生、发展中的作用及托吡酯对其的影响.方法:采用戊四氮制备慢性癫(癎)模型,利用托吡酯干扰,选取不同时间点,观察大鼠行为学变化及胶质纤维酸性蛋白在海马回中的表达(免疫组织化学染色).结果:托吡酯组点燃率在27 d明显低于模型组;模型组及托吡酯组胶质纤维酸性蛋白表达增加,并随时间延长更加明显;而不同时间点该表达的增加程度,托吡酯组均低于模型组.结论:胶质纤维酸性蛋白表达的增加,说明出现了胶质细胞活化及脑可塑性变化,而托吡酯明显地抑制了该表达的增加.     

托吡酯对戊四氮点燃大鼠海马生长相关蛋白-43 mRNA表达的影响

目的:观察托吡酯对戊四氮点燃大鼠海马结构内生长相关蛋白(GAP)-43mRNA表达的影响.方法:健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只.I组大鼠胃内注入生理盐水(10 mL/kg)后1 h腹腔注射10 g/L 戊四氮(35 mg/kg);Ⅱ组和Ⅲ组大鼠腹腔注射戊四氮(剂量同I组)前1 h分别按100 mg/kg和40 mg/kg胃内注入10 g/L 托吡酯生理盐水溶液;Ⅳ组大鼠按10 mL/kg和3.5 mL/kg分别胃内注入和腹腔注射生理盐水,间隔1 h.各组选取2个研究时间点,第1个时间点为I组大鼠疒间性发作达到Ⅲ级,第2个时间点为Ⅰ组大鼠疒间性发作达到Ⅴ级,每个时间点各组大鼠为5只.应用RT-PCR半定量检测不同时间点各组大鼠齿状回、海马CA3区及CA1区GAP-43 mRNA的表达.结果:2周和4周时I 组大鼠疒间性发作分别达到Ⅲ级和V级.GAP-43 mRNA RT-PCR 产物经溴乙啶显色后显示出256 bp和385 bp 2个预期的条带.在同一时间点,Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组大鼠齿状回及CA3区的GAP-43 mRNA表达强于Ⅳ组,差异有统计学意义(P＜0.05);各组在CA1区GAP-43 mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05);Ⅱ组和Ⅲ组大鼠齿状回和CA3区的GAP-43 mRNA表达水平较Ⅰ组降低,差异有统计学意义(P＜0.05),而Ⅱ组和Ⅲ组大鼠之间GAP-43 mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).与2周时相比,4周时Ⅰ组大鼠GAP-43 mRNA表达水平进一步增强,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:戊四氮点燃大鼠海马GAP-43 mRNA表达增强,表明突触重建参与了癫(癎)发生的病理过程;托吡酯可抑制GAP-43的表达,可能是托吡酯抗癫(癎)作用的机制之一.     

托吡酯对戊四氮点燃大鼠海马白介素-1β表达的影响

目的:探讨戊四氮(PTZ)点燃大鼠海马结构白细胞介素1β(IL-1β) 表达的特征及托吡酯(TPM)对其表达的影响.方法:将30只成年健康雄性SD大鼠随机分为3组,每组10只.模型组大鼠胃灌入生理盐水(10 mL/kg)1 h后腹腔注射10 g/L PTZ生理盐水溶液 (35 mg/kg);TPM组大鼠按40 mg/kg胃灌注10 g/L TPM生理盐水溶液,1 h后腹腔注射PTZ(剂量同模型组);对照组大鼠按10 mL/kg和3.5 mL/kg分别胃灌注和腹腔注射生理盐水.各组每d给药1次.当模型组大鼠(癎)性发作行为达到点燃标准时, 对大鼠的行为进行观察和记录,采用免疫组织化学方法对各组大鼠海马结构IL-1β的表达进行检测.结果:实验第4周,模型组大鼠达到点燃标准;而TPM组大鼠最高发作级别为3级,均未达点燃标准;对照组大鼠行为正常.与对照组比较,模型组和TPM组大鼠海马结构IL-1β表达增强(P<0.05);TPM组大鼠海马结构IL-1β的表达较模型组降低(P<0.05).结论:癫(癎)大鼠免疫系统处于活化状态,TPM能降低PTZ点燃大鼠海马结构IL-1β的表达而对癫(癎)具有一定的抑制作用.     

托吡酯对戊四氮点燃大鼠海马结构白细胞介素-6表达的影响

目的:探讨戊四氮(PTZ)点燃大鼠海马结构白细胞介素-6 (IL-6) 表达的特征及托吡酯(TPM)对其表达的影响.方法:将30只成年健康雄性SD大鼠随机分为3组,每组10只. Ⅰ组大鼠灌胃生理盐水1 h后,腹腔注射10 g/L PTZ生理盐水溶液(35 mg/kg);Ⅱ组大鼠按40 mg/kg灌胃10 g/L TPM生理盐水溶液1 h后,腹腔注射PTZ(剂量同Ⅰ组);Ⅲ组大鼠按10 ml/kg和3.5 ml/kg分别胃灌注和腹腔注射生理盐水.各组每d给药1次.当Ⅰ组大鼠疒间性发作行为达到点燃标准时,观察各组大鼠的行为,记录脑电图(EEG),采用免疫组织化学SABC法检测海马结构IL-6的表达.结果:给药4周,Ⅰ组大鼠点燃成功,而Ⅱ组大鼠最高发作级别较I组低,对照组大鼠行为正常.Ⅰ、Ⅱ组大鼠海马结构IL-6表达较Ⅲ组增加(P＜0.05),且Ⅰ组的表达高于Ⅱ组(P＜0.05).结论:癫疒间大鼠免疫系统处于活化状态;TPM能降低PTZ点燃大鼠海马结构IL-6的表达而对癫疒间具有一定的免疫抑制作用.     

托吡酯对戊四氮点燃大鼠海马生长相关蛋白-43 mRNA和蛋白表达的影响

目的：观察托吡酯（TPM）对戊四氮点燃大鼠海马生长相关蛋白．43（GAP-43）蛋白和mRNA表达的影响。方法：健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只。模型对照组大鼠灌胃给予生理盐水（10mL／kg）,低、高剂量TPM组分别按40mg／kg和100mg／kg给予10g／LTPM生理盐水溶液,空白对照组给予等量生理盐水,1h后,前3组大鼠腹腔注射10g／L戊四氮（35mg／kg）建立戊四氮点燃大鼠癫痫模型,空白对照组给予等量生理盐水。当模型对照组大鼠行为达到点燃时,应用RT．PCR方法半定量检测GAP-43mRNA的表达,应用免疫组织化学方法检测齿状回、海马CA3区和CA1区内GAP-43蛋白的表达强度。结果：与空白对照组相比,模型对照组,低剂量TPM组和高剂量TPM组大鼠齿状回与CA3区的GAP-43mRNA和蛋白表达强度升高（P〈0．05）;与模型对照组相比,低剂量TPM组和高剂量TPM组大鼠齿状回和CA3区的GAP-43mRNA和蛋白表达强度降低（P〈0．05）。结论：戊四氮点燃大鼠海马GAP-43表达增强,表明突触重建参与了癫痫发生的病理过程。TPM可抑制GAP-43的过表达,2种剂量的抑制作用无差异。     

托吡酯对戊四氮点燃慢性癫痫大鼠海马Fas表达的影响

目的探讨托吡酯(TPM)对戊四氮(PTZ)慢性点燃癫痫大鼠海马Fas表达的影响及其对海马神经元的保护作用。方法48只大鼠随机分为健康对照组(A组)、PTZ单纯致痫组(B组)、TPM40mg/kg干预组(C组)、TPM80mg/kg干预组(D组),通过腹腔注射PTZ建立慢性癫痫模型,观察大鼠行为、脑电图及海马组织学改变,并用免疫组化染色观察Fas蛋白的表达。结果TPM可以明显抑制大鼠的痫性放电,减少其痫性发作级别,C组、D组与B组比较重型发作率明显降低(P<0.01);此外,TPM干预组凋亡相关基因Fas表达明显减低(P<0.01)。结论在PTZ慢性点燃癫痫大鼠模型中,TPM可降低凋亡相关基因Fas表达,从而减轻海马神经元的凋亡程度。     

托吡酯对戊四氮点燃大鼠脑电图影响的定量分析

目的:定量观察托吡酯(TPM)对戊四氮(PTZ)点燃大鼠脑电图(EEG)的影响.方法:72只成年健康雄性SD大鼠随机分为4组.Ⅰ组大鼠胃灌入生理盐水(10 ml/kg)后1 h腹腔注射10g/L PTZ生理盐水溶液(35 mg/kg);Ⅱ和Ⅲ组大鼠腹腔注射PTZ(剂量同Ⅰ组)前1 h分别按100 mmg/kg和40 mg/kg胃灌注10 g/L TPM生理盐水溶液;Ⅳ组大鼠按10 ml/kg和3.5 ml/kg分别胃灌注和腹腔注射生理盐水.各组每d给药1次.当Ⅰ组大鼠痫性发作行为达到Ⅲ级(2周)、Ⅴ级(4周)和Ⅴ级后2周(6周)时分别描记EEG.结果:4周时,Ⅰ组大鼠出现多量阵发性短程高幅棘波、尖波及其综合波,Ⅱ组大鼠出现散在中、高幅尖波及尖慢综合波,Ⅲ组大鼠偶见中、高幅尖波及尖慢综合波.20 minEEG连续描记中,Ⅱ组大鼠出现的异常波数量多于Ⅲ组大鼠(P＜0.01);Ⅱ组、Ⅲ组大鼠发作的潜伏期延长,持续时间缩短(P＜0.05).2周时Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组大鼠注射PTZ后总功率、8、θ和α功率均增加(P＜0.05或0.01),β功率无改变(P＞0.05);4周时,除Ⅰ组大鼠β功率改变外,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组注射PTZ后总功率和其他各频段功率均增加(P＜0.05或0.01).6周时,Ⅰ组大鼠注射PTZ后总功率、δ、α和θ功率增加(P＜0.05或0.01),β功率无变化(P＞0.05);除Ⅱ组总功率增加外(P＜0.01),Ⅱ、Ⅲ组大鼠其他各频段功率无变化(P＞0.05).结论:TPM可拮抗大鼠PTZ点燃,抑制EEG的癫痫样放电.     

杏仁核点燃大鼠海马区损伤与胶质纤维酸性蛋白的表达

目的: 探讨杏仁核点燃癫痫大鼠海马区损伤与胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达及GFAP在实验性癫痫中的作用。 方法: 建立大鼠杏仁核点燃癫痫模型,应用光镜及电镜技术观察大鼠点燃癫痫后海马区的病理变化,同时应用免疫组织化学方法检测大鼠点燃癫痫后海马区GFAP免疫反应阳性细胞的细胞数、面积、周长和积分光密度。结果: 实验组海马区光镜下可见神经细胞变性、肿胀、坏死及神经细胞脱失改变,电镜可见细胞核形态不规则、有切迹、核仁偏位、线粒体肿大、嵴断裂、膜破损和基质空化等改变,随癫痫发作次数增加上述改变越明显,对照组与手术对照组比较,各参数差异无显著性（P＞0.05）,将不同组别大鼠细胞数、面积、周长、积分光密度分别作单因素方差分析,不同组别间均差异有显著性（P<0.01）,同时观察到海马区GFAP免疫反应阳性的胶质细胞随海马损伤的加重而GFAP免疫反应增强。结论：点燃癫痫鼠海马区损伤越重,胶质细胞GFAP免疫反应性越强,通过检测GFAP可以推测星形胶质细胞与癫痫后脑损伤的程度。     

辛伐他汀对创伤性脑损伤大鼠胶质原纤维酸性蛋白表达的影响

目的：利用大鼠创伤性脑损伤（Traumatic brain injury,TBI）模型,探讨胶质原纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic pro－tein,GFAP）在脑组织的表达变化规律及辛伐他汀（Simvastatin,SIM）对其的影响。方法：5周龄SD大鼠54只,随机分3组：假致伤组、对照组、治疗组,每组18只。对照组、治疗组参照Feeney 氏法制造TBI模型。造模前晚及术后每晚治疗组给予SIM 10 mg/kg灌胃;对照组给予等量淀粉灌胃;于伤后3、12、24 h和3、7、14 d处死取脑。采用免疫组化技术,检测大鼠伤侧海马CA3区 GFAP表达变化情况。结果：对照组伤后3 h即见GFAP阳性表达增强,3、7 d,GFAP阳性细胞增加达到高峰（P＜0.01）。治疗组伤后治疗7 d时GFAP的阳性表达较对照组明显下降（P＜0.05）,而治疗≤3 d和治疗14 d时,与对照组相比差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论：SIM可抑制GFAP在TBI后的过度表达。     

耐药性癫痫大鼠海马MRP1与GFAP的表达及托吡酯影响的研究

目的:研究多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)与胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillaracidic protein,GFAP)在马桑内酯(coriaria lactone,CL)耐药性癫痫大鼠模型海马中的表达。方法:成年雄性SD大鼠24只,随机分为对照组、模型组和治疗组。采用反复肌肉注射阈下剂量CL(1ml/kg.84h)法制备耐药性癫痫动物模型。模型组和治疗组点燃后按1ml/.kg.168h继续注射CL四次。治疗组点燃后同时给予托吡酯(topiramate,TPM)200mg/kg.d灌胃治疗30d。采用免疫组织化学方法检测海马MRP1及GFAP的表达。结果:与模型组比较,治疗组海马GFAP阳性细胞数和积分光密度值均显著减少(P<0.05),GFAP免疫反应性降低。与对照组比较,模型组和治疗组海马MRP1阳性细胞数与积分光密度值均显著增加(P<0.05),但治疗组与模型组MRP1阳性细胞数与积分光密度值无统计学差异(P>0.05)。结论:①CL诱发的耐药性癫痫模型海马有显著的星形胶质细胞增生及MRP1的表达增加,可能参与了癫痫耐药的发生;②抗癫痫药物TPM未上调星形胶质细胞MRP1的表达。     

MCMV感染对小鼠海马胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的探讨小鼠巨细胞病毒感染对小鼠学习记忆及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法采用颅内注射制造CMV颅内感染小鼠模型,利用Morris水迷宫试验对2组动物的学习和记忆成绩进行3 d测试,记录其成绩并观察海马组织GFAP表达水平的变化。结果 Morris水迷宫测试的结果显示,病毒感染组小鼠的学习记忆成绩明显下降,海马组织中GFAP的表达较对照组增高,差异有统计学意义(P0.01)。结论巨细胞病毒感染能够导致小鼠学习记忆能力下降,海马组织GFAP的表达明显增强。     

戊四氮点燃大鼠海马脑源性神经营养因子表达的变化

目的:探讨戊四氮点燃大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)表达的变化.方法:40只成年健康雄性大鼠随机分为实验组和对照组,每组20只.实验组大鼠采用戊四氮点燃法制备癫(癎)模型,对照组不做处理.采用免疫组织化学方法观察实验第2周及4周时各组大鼠海马结构内BDNF表达的变化.结果:与对照组相比较,第2周和第4周时,实验组大鼠海马齿状回、门区及CA1、CA3区BDNF表达均升高(P<0.05).结论:BDNF可能参与了癫(癎)后海马异常苔藓纤维出芽及突触重建过程.     

柴胡总皂甙对对戊四氮慢性点燃大鼠海马 GFAP表达的影响

目的 研究柴胡总皂甙对戊四氮（PTZ）慢性点燃癫痫模型大鼠海马区星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。方法48只健康SD大鼠被随机均分为6组,即空白组（A组）、生理盐水组（B组）、丙戊酸钠（VPA）组（C组）和柴胡总皂甙高、中、低3种剂量组（D组、E组、F组）,除A组不做处理外,其他各组采用腹腔注射盯z慢性点燃造模,造模同时给予VPA、柴胡总皂甙等不同处理因素,连续4周后取脑组织切片进行免疫组化染色,从阳性细胞数、截面积、灰度值分析结果。结果B组海马各区的阳性细胞数、阳性细胞截面积高于其他各组（P〈0．01）。B组海马各区阳性细胞灰度值低于其他各组,经统计分析CAI区与A组、C组、D组差异显著（P〈01）,CA2区与A组、C组、D组、E组差异显著（P〈．05）,而在DG区与F组差异有统计学意义（P〈0．05）,与A组、C组、D组、E组有显著性差异（P〈0．01）。结论柴胡总皂甙可以抑制PTZ点燃大鼠海马GFAP的过度表达．柴胡总皂甙存在抑制点燃大鼠海马星形胶质细胞的异常激活的作用。     

戊四氮点燃大鼠海马星形胶质细胞巢蛋白的表达

目的：观察戊四氮点燃大鼠海马各区巢蛋白(nestin)的表达,以探讨其与癫痫发病机制的关系。方法：将20只成年雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组采用戊四氮点燃大鼠模型,观察大鼠痫性发作行为和脑电图表现,用免疫组织化学方法观察海马各区星形细胞活化标志巢蛋白表达的变化。结果：实验组大鼠于4周后均达到点燃状态,而对照组行为正常。2组脑电图背境电活动以a节律为主,实验组Ⅳ或Ⅴ级痫性发作时脑电图均出现典型的高波幅棘慢波、尖慢波。实验组海马各区nestin阳性星形细胞较对照组明显增多。结论：戊四氮点燃引起海马内nestin阳性星性细胞明显增加,提示癫痫脑组织内存在星形细胞增生和活化,这可能是癫痫脑组织胶质化及点燃维持的病理基础。     

PTZ点燃癫痫大鼠海马BMP4的表达研究

目的观察骨形成蛋白4（BMP4）基因在戊四氯（PTZ）点燃癫痫大鼠海马中的表达,并探讨其与癫痫发病机制的关系。方法将40只成年雄性SD大鼠随机分为对照组和实验组。实验组采用PTZ点燃癫痫大鼠,按点燃进程,又随机分为Ⅰ级组、Ⅲ级组、Ⅳ级组和Ⅴ级组。用地高辛标记特异性寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术和图像分析技术,观察海马BMP4表达的变化。结果发现应用PTZ点燃后,Ⅱ级以上大鼠海马区BMP4的表达增加。Ⅲ和Ⅳ级大鼠海马CA3及DGBMP4的表达明显高于对照组（P〈0．01）;Ⅴ级大鼠在发作后海马CA3及DGBMP4的表达呈逐渐下降。结论BMP4可能参与了癫痫的发生、发展过程。     

黄皮酰胺对糖尿病大鼠糖化血红蛋白及海马胶质纤维酸性蛋白mRNA表达的影响

目的研究黄皮酰胺对糖尿病大鼠血糖、糖化血红蛋白及海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)mRNA表达的影响。方法利用链脲佐菌素制备大鼠糖尿病模型,将糖尿病大鼠随机分为模型组、胰岛素治疗组(10 U.kg-1胰岛素皮下注射)、黄皮酰胺高剂量治疗组(50 mg.kg-1黄皮酰胺灌胃给药)和黄皮酰胺低剂量治疗组(25 mg.kg-1黄皮酰胺灌胃给药),另取大鼠腹腔注射pH 4.4柠檬酸缓冲液作为对照组,每组15只。给药3个月后,检测比较各组大鼠血糖和糖化血红蛋白的不同;通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术观察海马GFAP mRNA的表达。结果给药3个月后,与对照组和胰岛素治疗组相比,模型组和黄皮酰胺高、低剂量组大鼠的血糖和糖化血红蛋白值明显升高(P<0.01);而黄皮酰胺组大鼠的血糖和糖化血红蛋白值与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05);RT-PCR结果显示,模型组大鼠海马的GFAP mRNA表达水平明显增加(P<0.01);而黄皮酰胺高、低剂量组大鼠海马的GFAP mRNA的表达水平明显降低(P<0.01)。结论黄皮酰胺可能通过抑制海马GFAP mRNA的表达对糖尿病大鼠起到保护作用,但没有降低血糖和糖化血红蛋白的作用。     

探究胶质纤维酸性蛋白在6-OHDA大鼠胃体中的表达变化

目的 研究胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）在6-羟多巴（6-hydroxydopamine,6-OHDA）大鼠胃体中的表达变化情况,探讨神经胶质细胞在帕金森病（Parkinson’s disease,PD）胃轻瘫中的作用机制。方法 用6-OHDA损毁大鼠中枢黑质多巴胺能神经元,建立PD模型。采用免疫荧光法检测酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）免疫阳性神经元在黑质的分布,并用同样的方法检测GFAP和神经微丝蛋白（neurofilament,NF）在大鼠胃体肌层的分布情况,采用蛋白免疫印记法（Western blotting）检测GFAP在6-OHDA模型大鼠胃体的表达情况。结果 6-OHDA大鼠黑质内神经元大量丢失,并伴有TH免疫反应性明显降低;6-OHDA大鼠胃体肌层GFAP和NF免疫反应性下降;Western blotting结果显示6-OHDA模型大鼠胃体肌层GFAP蛋白下调。结论 6-OHDA模型大鼠胃部GFAP和NF表达降低,可能参与了胃轻瘫发病的过程,本研究可能为PD患者胃轻瘫防治提供新的思路。