醒脑静注射液组分促进缺氧复氧胶质细胞清除胞外谷氨酸提高缺氧神经元活力的研究

[目的]研究醒脑静注射液(XNJI)8种成分促进缺氧复氧(Hypo/Reox)星形胶质细胞对胞外高浓度谷氨酸的清除,及其条件培养液对缺氧后神经元活力的影响。[方法]体外培养大鼠星形胶质细胞,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光鉴定。采用环磷酸腺苷(d BcAMP)和Hypo/Reox诱导胶质细胞活化并进行造模,Cell Counting Kit-8(CCK-8)测定细胞活力;谷氨酸试剂盒检测细胞培养液中谷氨酸浓度,并利用此条件培养液培养缺氧神经元,CCK-8法测神经元活力。[结果]胶质细胞体外培养成功,GFAP染色阳性。dBcAMP 0.062 5 mmol/L协同缺氧4 h复氧3 h(Hypo 4 h/Reox 3 h)处理后胶质细胞对胞外高浓度谷氨酸的清除能力显著降低。XNJI组分β-榄香烯、吉马酮、龙脑、冰片能显著提高受损胶质细胞对胞外谷氨酸的清除能力;XNJI组分吉马酮、龙脑、冰片处理的胶质细胞条件培养液能显著提高缺氧神经元的活力。[结论] XNJI组分能促进缺氧复氧胶质细胞对谷氨酸的清除并提高神经元活力。     

三七皂苷Rb_1对局部脑缺血后大鼠海马CA_1区脑血流及GLT-1的影响

目的探讨三七皂苷Rb1对局部脑缺血后大鼠海马CA1区脑血流(rCBF)及神经胶质谷氨酸转运体(GLT-1)的影响。方法雄性SD大鼠48只,随机分为脑缺血假手术组、模型组、三七皂苷Rb1、尼莫地平治疗组,每组6只,制成局灶性脑缺血模型,各组于缺血后4 h腹腔给药,假手术组、模型组给予生理盐水;缺血后24 h测海马CA1区rCBF水平;测定GLT-1的表达,观测对比上述指标变化。结果与模型组相比,三七皂苷Rb1、尼莫地平治疗组均能增加局部rCBF(P<0.05),并能上调大鼠海马CA1区GLT-1的表达(P<0.05)。结论三七皂苷Rb1能增加rCBF,还能上调GLT-1的表达,发挥对神经元损伤所起的保护作用,为进一步研发三七皂苷Rb1在治疗缺血性脑疾患上提供实验依据。     

银杏叶提取物对氧糖剥夺诱导的体外培养大鼠星形胶质细胞损伤的影响

目的应用体外培养的大鼠脑皮层星形胶质细胞,观察银杏叶提取物（EGb761）对氧糖剥夺再复氧导致细胞损伤的影响,并探讨其作用机制。方法以连二亚硫酸钠和无糖DMEM液造成化学性氧糖剥夺（OGD）模型模拟体内脑缺血再灌注损伤。利用WST-1法检测细胞活性、细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤程度、GFAP染色及Hoechst 33258染色观察细胞形态变化和凋亡,免疫蛋白印迹法测定bcl-2、bax、cas-pase-3蛋白的表达。结果 OGD处理90 min再复氧24 h能使细胞存活率明显下降,LDH漏出量增高,细胞形态损伤性改变、凋亡细胞增多,并能下调bcl-2/bax比值和上调caspase-3表达。而给予EGb761可逆转上述变化,减轻细胞损伤。结论 EGb761对OGD/R诱导的星形胶质细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与调整bcl-2/bax比值、抑制caspase-3激活对抗细胞凋亡有关。     

心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧星形胶质细胞神经营养因子分泌的影响及对神经元的保护作用

[目的]探讨心脑舒通胶囊对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)处理的星形胶质细胞(C8-D1A)神经生长因子分泌的影响,以及研究心脑舒通药物处理的OGD/R胶质细胞条件培养液对神经元细胞(Neuro-2A)的保护作用。[方法] CCK-8检测心脑舒通对正常培养和OGD/R胶质细胞活力的影响;酶联免疫吸附(ELISA)法检测心脑舒通对OGD/R胶质细胞的脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质源性神经营养因子(GDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)释放的影响;CCK-8检测心脑舒通处理的胶质细胞条件培养液对OGD/R神经元细胞活力的影响。[结果] 1)心脑舒通对正常培养的胶质细胞活力无显著影响,但可以提高OGD/R后胶质细胞的增殖活力。2)0.1μg/mL心脑舒通可以显著提高OGD/R胶质细胞BDNF的释放。3)0.1μg/mL心脑舒通药物处理的胶质细胞条件培养液可提高OGD/R神经元的存活能力。[结论]心脑舒通对OGD/R损伤后的胶质细胞有一定保护作用,其处理后的胶质细胞条件培养液对神经元有一定的保护作用。     

基于线粒体能量代谢探讨血府逐瘀汤治疗冠心病血瘀证的作用机制

目的 基于线粒体能量代谢探讨血府逐瘀汤治疗冠心病血瘀证的作用机制。方法 结扎冠状动脉左前降支，建立冠心病血瘀证大鼠模型，将造模成功的70只大鼠随机分成模型组，阿托伐他汀组，血府逐瘀汤低剂量组、中剂量组和高剂量组。另设假手术组及正常组。分组灌胃7天后取材。HE染色观察各组样本心肌组织病理学形态改变，流式细胞仪检测ROS平均荧光强度，免疫组化检测心肌组织Cyt C和Bcl-2/Bax的表达，考马斯亮蓝法检测Na⁺-K⁺-ATPase活性，JC-1检测线粒体膜电位，Calcein AM检测MPTP开放程度，磷钼酸比色法检测ATP浓度。结果 血府逐瘀汤可以明显改善缺血心肌组织病理形态；增加线粒体中ATP浓度，上调Bcl-2/Bax蛋白表达，下调Cyt C蛋白表达，降低ROS含量，增强Na⁺-K⁺-ATPase活性，降低线粒体膜电位，抑制MPTP的开放程度，与模型组比较，差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 血府逐瘀汤可以调控冠心病血瘀证大鼠线粒体能量代谢，与上调Bcl-2/Bax蛋白表达、下调Cy...     

人参皂苷Rb1经鼻给药对戊四唑慢性点燃小鼠的抗癫痫作用

目的：观察人参皂苷Rb₁经鼻给药的抗癫痫作用并对作用机制进行初探研究。方法：采用小鼠戊四唑(PTZ)腹腔注射构建慢性癫痫模型,造模成功后(21 d)将癫痫小鼠随机分为PTZ组、丙戊酸钠(VPA)组、人参皂苷Rb₁低、高剂量组(20、40 mg·kg^-1)。各组小鼠分别经鼻给予相应药物30 d,每日2次,空白组经鼻给予等体积生理盐水。给药期间记录小鼠体质量变化、癫痫发作潜伏期、癫痫发作级别,远程无线记录动物脑电图(EEG)变化。采用神经元特异核蛋白(NeuN)观察大脑皮层及海马神经元损伤,采用离子钙结合衔接分子-1(IBA-1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)分别观察小胶质细胞激活、星形胶质细胞活化现象。用谷氨酸(Glu)转运体-1(GLT-1)、谷氨酰胺合成酶(GS)观察Glu调节关键分子变化。结果：与空白组比较,PTZ明显抑制小鼠体质量增加(P<0.05,P<0.01),显著缩短癫痫发作潜伏期(P<0.01),显著升高癫痫发作最高级别(P<0.01),癫痫样脑电波增加。与PTZ组比较,人参皂苷Rb...     

ERK1/2与p38信号通路介导三七皂苷R1抗H_2O_2致心肌细胞损伤作用

目的:研究三七皂苷R1对过氧化氢(H2O2)诱导乳鼠心肌细胞损伤的影响及对细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase,ERK1/2)与p38通路的调节。方法:以50μmol/L H2O2干预原代培养心肌细胞3 h建立氧化损伤模型,分别观察0.1、1、10μmol/L三七皂苷R1对细胞活力、凋亡及细胞内过氧化物酶LDH、MDA及SOD的表达情况,再检测p-ERK1/2及p-p38蛋白水平;分别以ERK1/2与p38通路特异性阻断剂干预细胞,观察两者对心肌细胞的影响。结果:三七皂苷R1显著增加细胞活力,抑制细胞凋亡,降低LDH与MDA浓度,增加SOD活性,并且能明显降低p-ERK1/2与p-p38表达,以10μmol/L三七皂苷R1干预效果最明显(P0.01)。阻断ERK1/2与p38通路后,细胞活力增加,凋亡率降低,LDH与MDA浓度降低,SOD活性明显增加。结论:三七皂苷R1能显著减轻H2O2诱导心肌细胞损伤,增加细胞活力,降低凋亡率,主要与调节ERK1/2及p38信号通路有关。     

苦碟子注射液对氧糖剥夺/复氧损伤大鼠C6胶质细胞IκBα/NF-κB蛋白的调节作用

目的研究苦碟子注射液对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤大鼠C6胶质细胞的保护作用及对IκBα/NF-κB蛋白活化的影响。方法将C6胶质细胞分为空白对照组、OGD/R模型组、苦碟子注射液组,采用OGD/R方法建立C6胶质细胞损伤模型。MTT法确定氧糖剥夺/复氧时间和苦碟子注射液的最佳有效浓度;LDH漏出率检测细胞死亡率;Western Blot法检测p-IκBα/IκBα、p-NF-κB/NF-κB蛋白表达。结果 C6胶质细胞OGD/R时间为OGD24h/R6h,苦碟子注射液最佳浓度为1.25%。OGD/R损伤后,细胞IκBα和NF-κB的表达上调及磷酸化蛋白增加;苦碟子注射液能够显著降低细胞死亡率,降低细胞p-IκBα和p-NF-κB蛋白高表达。结论 OGD/R损伤C6胶质细胞,促进了IκBα/NF-κB磷酸化,苦碟子注射液可抑制C6胶质细胞中IκBα/NF-κB磷酸化活化,降低细胞死亡率,对胶质细胞起到保护作用。     

三七总皂苷对过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用研究

目的:观察三七总皂苷(PNS)对过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)LDH释放量、胞内SOD活性的影响,研究其对受损细胞粘附分子ICAM-1及MCP-1 mRNA表达的影响,探讨三七总皂苷对HUVECs的保护作用及其在动脉粥样硬化中作用的可能机制。方法:三七总皂苷预孵育细胞4h后,加入300μmol/L H2O2,继续培养24h,MTT法检测细胞活力,采用试剂盒测定LDH释放量、SOD酶活力,荧光实时定量PCR(RT-PCR)法检测三七总皂苷作用下内皮细胞ICAM-1及MCP-1 mRNA的表达。结果:三七总皂苷在25~100μg/ml浓度范围内可显著提高受损细胞活力,并能显著降低LDH漏出率,提高胞内SOD酶活力;RT-PCR结果表明H2O2组内皮细胞表达的ICAM-1和MCP-1 mRNA明显高于正常细胞组,而同时加入50及100μg/ml的三七总皂苷后两者mRNA表达明显下降。结论:三七总皂苷可保护血管内皮细胞免受H2O2的损害,改善受损细胞氧化指标,降低参与动脉粥样硬化相关细胞因子表达,从而预防和治疗动脉粥样硬化。     

基于能量代谢探讨红景清肺方对PM2.5诱导小鼠肺损伤的保护作用

目的 探究红景清肺方对大气细颗粒物(particulate matter 2.5,PM_2.5)诱导小鼠肺损伤的保护作用及机制。方法 40只ICR雄性小鼠,随机分为空白对照组、PM_2.5模型组、中药等效组、中药二倍组。中药各组预给药7 d后,除空白对照组外,各组持续2 d给予0.02 mg·μL^-1浓度PM_2.5混悬液滴鼻制备小鼠肺损伤模型。末次染毒24 h后取肺组织样本,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肺组织形态学变化;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)和Na⁺-K⁺-ATP酶(Na⁺-K⁺-ATPase)、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶(Ca²⁺-Mg²⁺-A...     

电针对局灶性脑缺血大鼠缺血灶周围区胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的:观察电针对不同时间段局灶性脑缺血大鼠缺血灶周围区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达及星形胶质细胞超微结构的影响,探讨电针治疗脑缺血疾病的可能作用机制。方法:随机将90只W istar大鼠均分为假手术组、模型组和电针组,每组又分为1h、1天、3天、7天和21天5个时间段小组,每小组6只大鼠,采用热凝闭大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型,电针组取"百会"、"大椎"穴,选用疏密波,5~10次/s,电压2~3V,留针30m in。每天1次,分别治疗1h、1天、3天、7天和21天后取材。采用透射电镜观察不同时段各组大鼠脑缺血灶周围区星形胶质细胞的超微结构,采用免疫组化法检测星形胶质细胞GFAP表达的变化。结果:电镜下可见星形胶质细胞在缺血性脑损伤后肿胀、增多,电针组的星形胶质细胞肿胀程度较模型组减轻。模型组和电针组GFAP表达在1h时与假手术组比较,差异无显著性意义(P>0.05),在1天、3天、7天及21天时,模型组和电针组GFAP表达都明显高于假手术组(均P<0.01),尤其是在7天时表达最强,而电针组GFAP表达在各时段均明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论:脑缺血后星形胶质细胞出现反应性增生活化,电针可减轻星形胶质细胞肿胀,抑制星形胶质细胞GFAP的过度表达,电针治疗脑缺血的机制可能与其干预星形胶质细胞的活化状态有关。     

黄芪甲苷配伍三七总皂苷对OGD/R大鼠骨髓间充质干细胞增殖、凋亡、迁移及神经分化的影响

目的观察黄芪甲苷(ASTIV)配伍三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、凋亡、迁移及神经分化的影响。方法全骨髓贴壁法分离、培养、扩增、纯化BMSCs,流式细胞仪检测BMSCs表面标志物CD29、CD90、CD34、CD45阳性表达率。取第3代BMSCs,采用AST IV与PNS高(100μmol/L+60μmol/L)、中(50μmol/L+30μmol/L)、低(25μmol/L+15μmol/L)剂量配伍预处理24 h,以OGD/R建立缺血再灌注损伤模型,同时设立对照组和模型组。CCK-8法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移,巢蛋白(Nestin)/神经元特异性烯醇化酶(NSE)、Nestin/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光双标观察BMSCs向神经元及星形胶质细胞分化情况。结果成功培养分离BMSCs,流式细胞仪检测CD29、CD90阳性率分别为94.23%、94.69%;而CD34、CD45阳性表达率分别为5.76%、5.31%;与对照组比较,模型组细胞存活数量明显减少(P0.05)、细胞凋亡率显著增加(P0.05),与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍均能促进BMSCs增殖(P0.05、0.01),并抑制细胞凋亡(P0.05、0.01);与对照组比较,模型组、AST IV与PNS不同剂量配伍均能促进BMSCs迁移(P0.05),与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍组的迁移细胞数量明显增加(P0.05);与对照组比较,模型组与AST IV与PNS不同剂量配伍组均能促进BMSCs向神经元及星形胶质细胞分化(P0.01),与模型组比较,ASTIV与PNS不同剂量配伍组的Nestin/NSE、Nestin/GFAP阳性表达率明显增高(P0.01)。结论 ASTIV配伍PNS在体外能促进缺血再灌注模型BMSCs增殖、迁移,抑制其凋亡,并诱导其向神经元、星形胶质细胞定向分化。     

通窍活血汤通过调节星形胶质细胞Glu-Gln循环降低Glu兴奋性毒性改善CIRI大鼠的神经功能

目的 观察并比较3种不同方法制备的通窍活血汤对脑缺血再灌注损伤（CIRI）大鼠的保护作用,并从星形胶质细胞谷氨酸（Glu）代谢通路探讨其作用机制。方法 选用SPF级雄性SD大鼠,以改良线栓法建立CIRI模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、通窍活血汤水煎组、通窍活血汤酒煎组、通窍活血汤醇提组,并设假手术组,分别给予对应药物灌胃,连续治疗7 d。通窍活血汤3个组的灌胃剂量为6.3 g·kg^-1·d^-1,假手术组和模型组给予同体积生理盐水灌胃。末次灌胃结束后,以神经功能缺损评分（mNSS）检测大鼠神经功能恢复情况,苏木素-伊红（HE）染色观察缺血脑组织的形态学变化,高效液相色谱法（HPLC）检测大鼠缺血脑组织中Glu含量的变化,免疫组织荧光法检测缺血脑组织中谷氨酸转运体-1（GLT-1）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及谷氨酰胺合成酶（GS）和GFAP的共表达情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测缺血脑组织中GFAP,GLT-1和GS蛋白的表达情况。结果 与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分显著升高（P<0.01）,缺血脑组织皮质大片坏死,细胞排列紊乱、边界模糊,出现细胞水肿及炎性浸润;缺血脑组织中Glu的含量显著增加（P<0.01）,GLT-1与GFAP共表达及GS与GFAP共表达显著降低（P<0.01）,GFAP蛋白表达显著升高（P<0.01）,GLT-1,GS蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,3种方法制备的通窍活血组mNSS评分均显著降低（P<0.01）,大鼠缺血脑组织皮质及海马神经细胞的损伤程度均有所减轻;缺血脑组织中Glu的含量均明显减少（P<0.05,P<0.01）,GLT-1与GFAP共表达均明显升高（P<0.05,P<0.01）,GFAP,GLT-1蛋白表达均明显升高（P<0.05,P<0.01）,通窍活血汤酒煎组、通窍活血汤醇提组GS与GFAP共表达明显增加（P<0.05,P<0.01）,GS蛋白的表达显著升高（P<0.01）。与通窍活血汤水煎组比较,通窍活血汤醇提组GLT-1和GFAP共表达及GS和GFAP共表达明显增加（P<0.05）,通窍活血汤酒煎组、通窍活血汤醇提组GS蛋白表达明显升高（P<0.05）,通窍活血汤醇提组Glu含量显著降低（P<0.01）,GFAP,GLT-1蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与通窍活血汤酒煎组比较,通窍活血汤醇提组GFAP,GLT-1蛋白表达升高（P<0.05,P<0.01）。结论 3种方式制备的通窍活血汤皆可改善CIRI大鼠的神经功能,其作用可能通过促进星形胶质细胞的进一步活化,增加GLT-1和GS表达,促进星形胶质细胞通过Glu-Gln循环清除突触间隙中Glu的过度堆积,降低Glu兴奋性毒性作用而实现。通窍活血汤醇提组在降低缺血脑组织Glu含量、促进星形胶质细活化、增强GLT-1和GS蛋白表达方面优于通窍活血汤酒煎组、通窍活血汤水煎组。     

含雄黄血清对星形胶质细胞GLAST、GLT-1和GS蛋白表达的影响

目的:探讨含雄黄血清对星形胶质细胞(AC)兴奋性氨基酸转运体1(GLAST)、兴奋性氨基酸转运体2(GLT-1)和谷氨酰胺合成酶(GS)蛋白表达的影响。方法:以雄黄灌胃大鼠的血清为含药血清,以原代培养AC为实验对象,在总砷浓度分别为0、5、10、15、20、25μmol/L的含药血清培养基中培养48 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,Western blot法检测蛋白表达。结果:与对照组相比,AC活力、GLAST和GLT-1蛋白的表达随含雄黄血清中砷浓度的升高而逐渐降低。其中,25μmol/L含雄黄血清暴露组与对照组比较显著降低。结论:含雄黄血清暴露可对AC活力产生损伤作用,对GLAST和GLT-1蛋白表达均有明显抑制作用。     

姜黄素对缺氧再灌注时体外培养星形胶质细胞载脂蛋白E及类视黄醇X受体、肝X受体表达的影响

目的:本研究旨在观察在姜黄素(Curcumin)对离体缺血再灌注模型中,原代培养新生SD大鼠的大脑皮层星形胶质细胞载脂蛋白E(Apolipoprotein E,Apo E)、类视黄醇X受体(Retinoic X receptor,RXR)和肝X受体(Liver X receptor,LXR)的影响。方法:选取新生SD大鼠,对其大脑皮层的星形胶质细胞进行原代培养,用糖氧剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/Reoxygenation)方法来构建离体的脑缺血再灌注模型。运用免疫荧光法观察神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达来鉴定星形胶质细胞。本实验将培养的细胞分为7组:正常对照组;模型组;姜黄素剂量组:2.5umol/L,5umol/L,10umol/L,20umol/L;尼莫地平阳性对照组:0.5umol/L。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)两个指标分别对细胞的活力以及细胞的毒性进行评定。用ELISA法对原代细胞条件培养液中Apo E和RXR、LXR的含量进行测定,并用蛋白质印迹法(Western Blot)对星形胶质细胞Apo E和RXR、LXR的表达水平进行测定。结果:姜黄素可使细胞活力明显增高,LDH释放量显著降低,并使APOE及LXR、RXR的表达上调。其中20umol/L效果最为明显,而最低剂量2.5umol/L几乎为无效剂量。结论:姜黄素对糖氧剥夺再灌注条件下离体星形胶质细胞具有保护作用,此保护作用可能是通过上调APOE及LXR、RXR的表达所引起的。     

杜仲补天素丸对肾阴虚小鼠的影响

目的 研究杜仲补天素丸对肾阴虚小鼠的影响。方法 采用灌胃复方利血平片和甲状腺片的方法制备肾阴虚模型,测定小鼠体温,痛阈值,力竭游泳时间,血清甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、环磷酸鸟苷(cGMP)、环磷酸腺苷(cAMP)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、促肾上腺皮质素释放激素(CRH)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素6(IL-6)、还原性谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平,乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性,肝组织Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性。结果 与空白组比较,模型组小鼠体质量、胸腺指数、脾脏指数、痛阈值、力竭游泳时间、血清cGMP、GSH水平和LDH、SOD活性降低(P<0.05,P<0.01),血清T3、T4、cAMP、ACTH、CRH、IFN-γ、IL-6、MDA水平升高(P<0.05,P<0.01),肝组织Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg...     

补阳还五汤对局灶性脑缺血后星形胶质细胞谷氨酰胺合成酶的影响

目的观察补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后不同时间点谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)的影响。方法改良线栓法建立大脑中动脉栓塞/再灌注模型,术后进行补阳还五汤灌胃,每天2次,模型组给予等量的生理盐水。分别于第1天、第3天、第5天和第7天灌注取材,采用免疫荧光染色法检测各组大鼠星形胶质细胞GS的表达,免疫荧光双染确定GS的细胞定位。结果同假手术组相比,模型组海马CA1区GS的表达显著下降;同模型组相比,补阳还五汤组可显著提高海马CA1区GS表达,其中第3天和第5天GS达到最高水平。免疫荧光双染表明GS主要表达于星形胶质细胞。结论补阳还五汤可以提高大鼠脑缺血后海马CA1区星形胶质细胞GS的表达,从而增强星形胶质细胞转运谷氨酸的能力。     

mTOR/Akt/FoxO3信号通路在人参皂苷Rg1抗PC-12细胞OGD损伤的作用

目的:研究人参皂苷Rg1对PC-12细胞缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的保护作用,并初步探讨与mTOR/Akt调控FoxO3核浆穿梭相关的可能的分子机制.方法:建立OGD损伤PC-12细胞模型,MTT 法检测OGD对PC-12细胞存活率.人参皂苷Rg110,20,40 μmol·L-1预处理PC-12细胞24h,加OGD损伤,MTT 检测细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量.Western blot法检测mTOR,p-Aktser473,p-Aktthr308,Akt,p-FoxO3,细胞核、细胞质FoxO3和总FoxO3蛋白表达.结果:OGD作用4～24h显著抑制PC-12细胞增殖,呈时间依赖性.Rg1(20,40 μmol·L-1)预处理24h可显著增加细胞存活率,减少LDH释放,增加SOD活力和降低MDA含量.Rg1可抑制由OGD引起的rmTOR,p-Aktser473表达降低.OGD 6 h可减少FoxO3磷酸化,并促进细胞质FoxO3进入细胞核;预处理Rg1增加FoxO3磷酸化,促进FoxO3进入细胞质.提示Rg1可经由调控mTOR/Akt/FoxO3信号通路抑制PC-12细胞损伤.结论:人参皂苷Rg1可抑制OGD引起PC-12细胞损伤,作用机制可能与激活mTOR/Akt信号通路调控FoxO3核质穿梭密切相关.     

注射用丹参多酚酸通过调节Akt/mTOR通路介导的自噬对氧糖剥夺/再灌注Neuro-2a细胞凋亡的影响

目的 研究注射用丹参多酚酸（SalvianolateLyophilizedInjection,SLI）对氧糖剥夺/再灌注（oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R）损伤小鼠脑神经瘤细胞株Neuro-2a的保护作用及机制。方法 体外培养Neuro-2a细胞,建立OGD/R损伤模型,给予SLI(10、25、50μg/mL)以及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）干预,检测SLI对OGD/R损伤Neuro-2a细胞存活率、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）漏出量及细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)的释放;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用Western blotting法检测凋亡及自噬相关蛋白的表达情况。结果 与OGD/R组比较,SLI显著提高OGD 4 h/R 24 h Neuro-2a细胞存活率（P<0.05、0.01）,降低LDH漏出量（P<0.05、0.01）,抑制细胞凋亡和细胞内Cyt-C释放（P<0.05、0.01）,调节活化的半胱氨酸天...     

温胆汤含药血清对谷氨酸条件下原代星形胶质细胞P38MAPK及PKC的影响

目的:探讨温胆汤含药血清在谷氨酸(Glu)环境条件下对星形胶质细胞P38MAPK和PKC表达的影响。方法:将40只SD大鼠随机分为5组:正常组、氯氮平20mg/kg组、温胆汤40g/kg组、温胆汤30g/kg组、温胆汤20g/kg组,每组8只。正常组用等量生理盐水ig,氯氮平组ig 20 mg/kg,ig温胆汤生药40、30、20 g/kg,1次/d,8天后处死取血,制备含药血清。胶质原纤维酸性蛋白免疫染色法鉴定培养的星形胶质细胞纯度。星形胶质细胞在谷氨酸(0、5、10μmol/ml)条件下经含药血清处理,即谷氨酸对照组、正常血清组、氯氮平20mg/kg含药血清组、温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg血清组,处理24h、36h和48h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;ELISA法检测P38MAPK磷酸化和非磷酸化及PKC蛋白表达的影响。结果:培养的星形胶质细胞纯度在95%以上。谷氨酸(0μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg、30g/kg含药血清组在3个时间段不同程度增加星形胶质细胞存活率;谷氨酸(5、10μmol/ml)条件下,温胆汤含药血清处理24h、36h后,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg含药血清组不同程度增加的细胞存活率;48h后,温胆汤40g/kg含药血清组增加的细胞存活率。谷氨酸(0、5、10μmol/ml)条件下,氯氮平20mg/kg含药血清组、温胆汤30g/kg含药血清组能显著上调星形胶质细胞P38MAPK蛋白磷酸化和非磷酸化的表达。谷氨酸(0、5μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg、30g/kg、20g/kg含药血清组显著降低星形胶质细胞PKC表达;谷氨酸(10μmol/ml)条件下,温胆汤40g/kg含药血清组显著降低星形胶质细胞PKC表达。结论:一定谷氨酸环境下温胆汤能不同程度的增加星形胶质细胞的存活率,能上调P38MAPK磷酸化和非磷酸化的表达及降低PKC蛋白的表达,从而间接反映出温胆汤能调节星形胶质细胞GJIC(细胞缝隙连接)的功能。