O157：H7原噬菌体消除菌株的鉴定与分析

目的O157：H7是一种重要的新发传染病病原，它主要引起出血性或非出血性腹泻，出血性结肠炎(HC)或溶血性尿路综合征(HUS)等。研究表明引起HC和HUS的主要毒力因子是由整合到O157基因组中的原噬菌体编码的志贺毒素(Stx)，包括Stx1和Stx2，它们分别由原噬菌体933v和933w所编码。由于原噬菌体本身具有潜在的不稳定性，本研究以O157：H7 86—24为始发菌株，将其进行传代培养，筛选原噬菌体消除菌株，对原噬菌体在O157基因组中的整合位点进行分析，并用Vero细胞对原噬菌体消除菌株的细胞毒性进行鉴定。结果筛选到了原噬菌体消除后的O157菌株，该菌株丧失了对Vero细胞的毒性作用。序列比较分析表明原噬菌体933v的整合位点位于O157：H7 EDL933基因组中第2966137位的相对位置，在整合位点两侧有一个20bp的直接重复序列，原噬菌体933w的整合位点位于基因组中第1330826位的相对位置，在整合位点两侧有一个7bp的直接重复序列。该研究证实了编码Stx的原噬菌体具有不稳定性，原噬菌体对O157的致病性具有重要作用，也提示原噬菌体在致病菌的进化过程中也具有重要作用。     

非O157产志贺毒素大肠埃希菌研究进展

产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)是一类能产生一种或一种以上志贺毒素的大肠埃希菌的总称,包括400余种血清型,其中以O157∶H7血清型为主。近年来,非O157STEC在世界范围内引起散发感染和暴发的报道明显增加,但由于非O157STEC血清型多样,菌株间表型差异较大,目前尚无一种有效的能用于所有非O157STEC菌株分离的方法,因此非O157STEC的流行情况可能被低估。本文就非O157STEC的病原学、致病机制、流行病学特征、实验室诊断、治疗和预防等方面的研究进展做一简要综述。     

O157∶H7原噬菌体消除菌株的鉴定与分析

目的　O15 7∶H7是一种重要的新发传染病病原 ,它主要引起出血性或非出血性腹泻 ,出血性结肠炎 (HC)或溶血性尿路综合征 (HUS)等。研究表明引起HC和HUS的主要毒力因子是由整合到O15 7基因组中的原噬菌体编码的志贺毒素(Stx) ,包括Stx1和Stx2 ,它们分别由原噬菌体 933v和 933w所编码。由于原噬菌体本身具有潜在的不稳定性 ,本研究以O15 7∶H786 - 2 4为始发菌株 ,将其进行传代培养 ,筛选原噬菌体消除菌株 ,对原噬菌体在O15 7基因组中的整合位点进行分析 ,并用Vero细胞对原噬菌体消除菌株的细胞毒性进行鉴定。结果筛选到了原噬菌体消除后的O15 7菌株 ,该菌株丧失了对Vero细胞的毒性作用。序列比较分析表明原噬菌体 933v的整合位点位于O15 7∶H7EDL933基因组中第 2 96 6 137位的相对位置 ,在整合位点两侧有一个 2 0bp的直接重复序列 ,原噬菌体 933w的整合位点位于基因组中第 1330 82 6位的相对位置 ,在整合位点两侧有一个 7bp的直接重复序列。该研究证实了编码Stx的原噬菌体具有不稳定性 ,原噬菌体对O15 7的致病性具有重要作用 ,也提示原噬菌体在致病菌的进化过程中也具有重要作用。     

一株鼠疫噬菌体裂解特性的研究北大核心CSCD

目的测定分离自云南省澜沧县室外捕获黄胸鼠的1株野生型鼠疫噬菌体(命名为Lc-241)的生物特性,初步探讨其在家鼠鼠疫疫源地微生态的作用。方法用透射电镜观察Lc-241形态,双层平板法观察其噬菌斑大小、状态及效价,单层平板法观察鼠疫噬菌体Lc-241对130株菌在28℃、37℃及室温(18℃)条件下的裂解能力。结果 Lc-241为肌尾噬菌体在28℃时Lc-241较鼠疫诊断噬菌体裂解性低,而在37℃时较鼠疫诊断噬菌体裂解性高;在3种温度下,对6株鼠疫耶尔森菌、1株福氏志贺菌2a型、1株福氏志贺菌X变种完全裂解,对宋内志贺菌I相菌半裂解,对其余菌株均不裂解。结论 Lc-241鼠疫噬菌体为1株宽裂解谱噬菌体,其对鼠疫菌的裂解作用随温度升高而增强。     

产志贺毒素大肠杆菌流行病学和stx基因研究进展

感染产志贺毒素大肠埃希菌（Shiga toxin-pro-ducing Escherichia coli,STEC）能引起人严重的疾病,包括：出血性肠炎（Hemorrhagic coltis,HC）、血栓性血小板紫癜（TTP）和溶血性尿毒综合症（He-molyticuremicsyndrome,HUS）甚至死亡。     

猪源产志贺毒素大肠埃希菌耐药性及超广谱β内酰胺酶基因型分析

目的了解我国猪源产志贺毒素大肠埃希菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)产超广谱β内酰胺酶(Extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)情况及其基因型。方法对22株分离自重庆地区2个规模化养殖场健康猪粪的STEC菌株进行药物敏感性检测、ESBLs表型确证及7种类型(blaSHV,blaLEN,blaOKP,blaTEM,blaCTX-M,blaGES及blaKPC)ESBLs基因型PCR检测和测序分析。结果 22株携带stx2e的STEC菌株中2株对所有23种测试抗生素敏感,其余菌株除对亚胺培南和美罗培南敏感外,对其他抗生素均存在不同程度耐药。10株STEC菌株(占45.45%)产ESBLs酶。PCR检测其中1株为blaCTX-M-1基因型,其余9株为blaCTX-M-9+blaTEM-1基因型。结论重庆地区猪源STEC中存在较高比例的产ESBLs菌株。在加强人和动物STEC感染检测与监测的同时,应进行细菌耐药性监测。     

牦牛携带的产志贺毒素大肠杆菌分离株的多位点序列分型研究

目的 对牦牛携带的产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)进行多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)分析,了解菌株的遗传进化关系及致病潜力。方法 根据E. coli MLST数据库(http://mlst.ucc.ie/mlst/dbs/Ecoli)提供的MLST方案,对青海玉树牦牛中分离的54株STEC分离株的7个管家基因进行PCR扩增并测序,通过序列比对确定其等位基因及菌株序列型(Sequence type,ST),并使用BioNumerics软件构建最小生成树(Minimum spanning tree,MST),分析牦牛ST型与HUSEC及人源主要流行血清群STEC菌株ST型间的进化关系。结果 54株牦牛STEC菌株呈现高度遗传多态性,可分为31个ST型别,其中包括7个新的等位基因型和17个新的ST型,并存在与HUSEC及主要流行血清群STEC亲缘关系相同或相近的ST型别。结论 青藏高原牦牛携带的STEC具有遗传多样性及一定的特异性,部分菌株具有对人致病的潜力。     

志贺菌Ⅲ型分泌系统研究进展

Ⅲ型分泌系统（T3SS）是革兰阴性致病菌重要的分泌系统,细菌通过T3SS将毒力蛋白注入宿主细胞。志贺菌在与宿主肠道上皮细胞接触后,激活T3SS并将效应子蛋白注入真核宿主细胞内,引起细菌性痢疾。本文综述了志贺菌T3SS的结构与功能,从分子水平揭示了志贺菌的致病机理。     

肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157：H7志贺毒素研究进展

肠出血性大肠杆菌（EHEC）0157：H7于1975年被首次分离，为革兰氏阴性杆菌，对酸耐受性强，在pH3～5条件下，可长期生存，能产生致死性志贺毒素（Shiga toxin，Stx），1982年被确认为严重致病菌。其感染具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等特点，已经成为全球性的公共卫生问题，对人们的健康构成了巨大威胁。据报道，美国每年感染STEC约有10万例．其中O157：H7感染约有7．3万例。近年来，美国、日本、加拿大、英国等发达国家EHEC O157：H7发病呈上升趋势，许多国家已把它列为法定报告传染病。我国江苏、安徽省曾于1999年暴发流行大肠杆菌O157感染性腹泻，患者超过2万例，死亡177例，流行时间7个月。     

鲍曼不动杆菌耐药性与噬菌体的相关性

<正>关于Ab形态结构与耐药性关系鲜有报告,噬菌体是感染细菌的病毒,具有溶原性和裂解性两种生长方式〔1〕,根据与宿主菌的相互关系,分为温和噬菌体、毒性噬菌体两种类型。过去人们关注毒性噬菌体裂解宿主菌,期待发挥治疗性应用,但长期研究并未取得实质性进展〔2〕。鲍曼不动杆菌(Ab)为非发酵革兰阴性杆菌,广泛分布于外环境中,它黏附力极强,是引起医院内感染的重要条件致病菌之一,在住院病人尤其是重症监     

Stx1B基因克隆、表达及重组蛋白的纯化

目的构建志贺样毒素1B亚单位(Stx1B)的原核表达载体,获取高纯度的Stx1B重组蛋白。方法用PCR法扩增Stx1B,通过基因重组技术克隆入原核表达载体pGEX4T-2,将该重组质粒转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化重组蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析及Westernblot检测。结果重组质粒经诱导后表达分子量为34kD的重组蛋白,Western blot检测显示特异性条带,亲和层析柱纯化后得到重组蛋白的纯度在90%左右。结论成功构建了Stx1B重组质粒,表达并纯化出高纯度重组蛋白,为进一步的生物性质研究奠定了基础。     

肠出血性大肠杆菌(EHEC) O157∶H7志贺毒素研究进展

肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7于1975年被首次分离,为革兰氏阴性杆菌,对酸耐受性强,在pH3~5条件下,可长期生存,能产生致死性志贺毒素(Shiga toxin,Stx),1982年被确认为严重致病菌。其感染具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性和抗生素治疗可加剧病情的危险性等特点,已经成     

产志贺毒素大肠杆菌O138 stx2e基因的克隆与序列分析

目的构建产志贺毒素大肠杆菌O138stx2e基因重组质粒,并比较不同型Stx之间的区别。方法根据GenBank发表的stx2e序列设计了一对特异性引物,用PCR的方法扩增从临床分离到的产志贺毒素大肠杆菌O138的stx2e基因,将其克隆到pGEM-T载体中,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经酶切和PCR鉴定,而后进行测序。并利用DNASIS序列分析软件对GenBank报道的O22菌株和噬菌体P27的stx2e和O138菌株的stx2e基因序列进行了比较分析,并对O138的stx2e氨基酸残基序列与stx1、stx2和O22菌株stx2e序列进行比较。结果所克隆的O138的stx2e与O22菌株和噬菌体P27的stx2e在碱基序列上同源性达到996%,O138的Stx2e与O22的Stx2e在氨基酸水平上其序列完全相同。Stx2e与stx2的同源性在85%以上,而stx2e与stx1的同源性只有42%左右。结论克隆了stx2e基因,为研究stx2e的结构和功能奠定了基础。     

用鼠疫噬菌体诱导鼠疫菌L型的研究

用噬菌体成功的诱导成鼠疫菌L型。通过回复性试验可长出正常鼠疫菌。同时用噬菌体裂解试验、生化反应、细胞壁染色等方法验证,所获鼠疫菌L型无细胞壁或残缺不全。这对进一步研究鼠疫流行病学和鼠疫菌保存机理有一定意义。     

AP631炭疽噬菌体裂解蜡样芽胞杆菌的发现和鉴定

目的 AP631炭疽噬菌体裂解蜡样芽胞杆菌的发现和鉴定。方法通过革兰氏染色、菌落形态特征、噬菌体裂解试验、青霉素敏感试验、溶血试验、生化试验和蛋白质毒素结晶试验对炭疽疫点现场分离的5株菌进行蜡样芽胞杆菌的鉴定,通过PCR扩增、小白鼠毒力测定试验和MLST基因检测等方法对该5株菌和本实验室保存的3株被AP631炭疽噬菌体裂解的蜡样芽胞杆菌进行毒力和基因测定。结果确定了8株可被AP631炭疽噬菌体不完全裂解的蜡样芽胞杆菌。从疫点采集分离的5株菌青霉素敏感试验阴性,炭疽毒力基因PCR扩增阴性,排除了炭疽芽胞杆菌;蛋白质毒素结晶试验染色试验为阴性,排除了苏云金芽胞杆菌;根据溶血试验和生化反应等一系列鉴别实验鉴定为蜡样芽胞杆菌。8株菌的MLST基因检测发现5株菌有新的等位基因位点或ST型。结论本研究首次证明我国使用的炭疽芽胞杆菌诊断AP631噬菌体可以不完全裂解部分蜡样芽胞杆菌,存在非特异性裂解现象,提示在今后使用噬菌体鉴定炭疽杆菌时,对于外环境分离到的可疑芽胞杆菌,特别要注意关于噬菌体不完全裂解的问题,这将为炭疽诊断标准的正确制订提供新的认识并具有重要的指导意义。     

一株鼠疫噬菌体裂解特性的研究

目的测定分离自云南省澜沧县室外捕获黄胸鼠的1株野生型鼠疫噬菌体(命名为Lc-241)的生物特性,初步探讨其在家鼠鼠疫疫源地微生态的作用。方法用透射电镜观察Lc-241形态,双层平板法观察其噬菌斑大小、状态及效价,单层平板法观察鼠疫噬菌体Lc-241对130株菌在28℃、37℃及室温(18℃)条件下的裂解能力。结果 Lc-241为肌尾噬菌体在28℃时Lc-241较鼠疫诊断噬菌体裂解性低,而在37℃时较鼠疫诊断噬菌体裂解性高;在3种温度下,对6株鼠疫耶尔森菌、1株福氏志贺菌2a型、1株福氏志贺菌X变种完全裂解,对宋内志贺菌I相菌半裂解,对其余菌株均不裂解。结论 Lc-241鼠疫噬菌体为1株宽裂解谱噬菌体,其对鼠疫菌的裂解作用随温度升高而增强。     

致泻性大肠埃希氏菌的毒力因子

细菌的致病性不是取决于致病菌的某种单一的毒力因子，而是由多种毒力因于共同决定的。致泻性大肠埃希氏菌毒力因子的多样性决定了其致病机理的多样性。目前，根据致泻性大肠埃希氏菌的毒力因子，致病机理及其遗传控制．国际上将其分为五类”—一肠致病性大肠埃希氏菌（EPFC）．肠产毒性大肠埃希氏菌（ETEC），肠侵袭性大肠埃希氏菌（EIEC）．肠出血性大肠埃希氏菌（EHEC）。肠集聚性大肠埃希氏菌（EAggEC）。我们实验室近年新发现并命名了一种新的致泻性大肠埃希氏菌—一肠产志贺样毒素且具侵袭力的大肠埃希氏菌（ESIEC）’‘”…     

结核分支杆菌噬菌体分型在北京地区的应用

由于噬菌体裂解宿主菌有其特异性。因此,可利用噬菌体的这一特性对细菌进行分型。这对细菌性传染病流行病学研究具有重要意义。Froman等1954年首先分离到结核分支杆菌噬菌体,以后各国学者又对结核分支杆菌噬菌体型进行了研究。70年代初,WHO组成了结核分支杆菌噬菌     

1株粘质沙雷氏菌噬菌体的分离和鉴定

目的 以粘质沙雷氏菌为宿主菌,从河水中分离噬菌体,在体外和蚊虫肠道验证其裂解能力.方法 以粘质沙雷氏菌为宿主菌,在深圳周边河水中分离噬菌体,通过单、双层平板筛选单一的烈性噬菌体;利用噬斑形成实验验证噬菌体的裂解谱;通过饲喂实验验证噬菌体在埃及伊蚊肠道内的裂解作用.结果 从深圳河流污水中成功分离得到一株针对粘质沙雷氏菌的...     

野生型鼠疫噬菌体对温度的选择

噬菌体是以细菌为宿主的特殊病毒,具有宿主的特异性,每一种细菌都可以是多种噬菌体的宿主。噬菌过程可分为三个不同阶段即吸附阶段、复制阶段和裂解阶段。噬菌过程受噬菌体宿主的内外环境多方面因素的影响。根据有细菌的地方就有噬菌体存在理论,噬菌体广泛地用于鼠疫的细菌学诊断,对疫源地调查具有重要意义。我们作了西藏1987年从自然界分离的1株鼠疫噬菌体对温度的选择实验,结果如下。