针刺对大鼠脑出血神经细胞凋亡变性的影响及机制探究

摘要：目的：通过针刺干预观察大鼠脑出血后神经细胞形态结构,凋亡变性的动态变化,探讨针刺治疗大鼠脑出血后对miR-34a-5p的影响及作用机制。方法：自体血脑内注射建立大鼠脑出血模型,随机分为假手术组、模型组、模型+针刺治疗组、模型+ 针刺治疗+阴性对照组、模型+针刺治疗+miR-34a-5p激动剂干预组,每组12只。每组再随机分为1 d、7 d两个亚组。建模12 h后针刺治疗,于1 d、7 d时间点对处死大鼠收集脑组织,HE 染色观察脑组织病理学变化,TUNEL和NeuN 荧光双染,Fluoro-Jade B染色观察神经元细胞凋亡变性情况。结果：模型组大鼠在脑出血损伤后出现不同程度的炎性反应和神经细胞凋亡坏死。针刺后炎性反应减轻,神经细胞凋亡和变性坏死的数目明显减少（P < 0.05）,在给予针刺治疗7 d后,TUNEL和NeuN荧光双染实验和Fluoro-Jade B染色实验中阳性细胞数进一步减少。与模型+针刺治疗组相比,激动剂干预组的神经细胞凋亡和变性坏死数目明显增多（P < 0.05）。结论：针刺可能通过下调miR-34a-5p减轻神经炎症,促进ICH大鼠神经功能恢复,发挥神经保护作用。     

针刺百会透曲鬓对脑内出血大鼠脑组织CD32、CD206蛋白表达水平的影响

目的 观察针刺百会透曲鬓对脑内出血(intracerebral hemorrhage, ICH)大鼠CD32、CD206蛋白表达水平的影响,探讨其作用机制。方法 将60只雄性SD大鼠随机分为A组(假手术组)、B组(模型组)、C组(治疗1组)、D组(治疗2组)和E组(治疗3组),每组12只。每组再随机分造模后1 d和7 d两个亚组,每组6只。采用自体血注入尾壳核法制取ICH模型。造模12 h后,C组采用针刺百会透曲鬓治疗;D组在造模前3 d注射mi R-34a-5p agomir-NC,造模12 h后采用针刺百会透曲鬓治疗;E组在造模前3 d注射mi R-34a-5p agomir,造模12 h后采用针刺百会透曲鬓治疗。1 d亚组疗程为1 d,7 d亚组疗程为7 d。于相应时间点进行神经功能评分,处死大鼠后收集血肿周围脑组织,使用蛋白质印迹分析和免疫荧光双染检测血肿周围脑组织中CD32、CD206蛋白表达水平、CD32+/Iba-1+和CD206+/Iba-1+双阳性细胞计数变化。结果 造模后7 d时,与B组比较,C组ICH大鼠Longa评分降低(P<0.01);与C组比较,E组I...     

针刺“百会”透“曲鬓”对大鼠脑出血后小胶质细胞M1/M2型极化的影响

目的 探讨针刺“百会”透“曲鬓”对大鼠脑出血（ICH）后炎性反应程度影响的作用机制。方法 90只SD大鼠按随机数表法分为假手术组、模型组、针刺组、针刺+激动剂阴性对照组、针刺+mi R-34a-5p激动剂组，每组按1、3、7天3个时间点分为3个亚组，每组6只。针刺+激动剂阴性对照组、针刺+mi R-34a-5p激动剂组于建模前3天侧脑室注射mi R-34a-5p激动剂阴性对照物或mi R-34a-5p激动剂，造模时假手术组颅内注入生理盐水，其余4组采用自体血注入尾壳核制备ICH大鼠模型。建模12 h后针刺干预，针刺“百会”透“曲鬓”。分别采用Western Blot(1、7天)、Real-time PCR(1、3、7天)检测针刺对诱导型一氧化氮合酶（i NOS）、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)、精氨酸酶1(Arg-1)蛋白及m RNA表达的影响。结果 在1、7天时，与假手术组同期比较，模型组同期iNOS、IFN-γ、IL-4及Arg-1蛋白表达水平升高（P<0.01,P<0.05）；与模型组同期比较，针刺组iNOS、IFN-γ蛋白表达水平降低，Arg-1...     

针刺对实验性大鼠脑出血后灶周组织NF-kBp65表达和脑水含量的影响及其相关性分析

目的 探讨针刺对急性脑出血(Intracerebral hemorrage,ICH)后核转录因子-kB( NF-kBp65)动态表达及脑水含量变化的影响,并探讨两者的相关性.方法 实验选用Wistar健康雄性大鼠96只,随机将其中90只分为模型组、针刺组、西药组(茴拉西坦组).每组又分为6h、1天、2天、3天和7天5个时间点,每个时间点随机分配6只大鼠,另设6只大鼠做空白对照.制备ICH大鼠模型,采用蛋白免疫印迹技术观察针刺在不同时间点对ICH大鼠脑组织中NF-kBp65蛋白表达及脑水含量的影响,并对两者做相关性分析.结果 针刺组大鼠脑内NF-kBp65蛋白表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较有显著性差异(P＜0.05),相关性分析提示,脑水肿与NF-kBp65表达呈正相关.结论 ICH后NFkBp65阳性表达是加重脑水肿的一个重要因素,针刺可下调ICH后血肿周围脑组织内NF-kBp65蛋白表达,减轻脑水肿程度,防治ICH后继发性脑损伤.     

针刺“百会”透“曲鬓”通过miR-34a-5p/KLF4信号通路治疗脑出血大鼠的机制研究

针刺“百会”透“曲鬓”通过miR-34a-5p/KLF4信号通路治疗脑出血大鼠的机制研究     

针刺“百会”透“曲鬓”对实验性大鼠脑出血后灶周组织NF-κBp65表达的影响

目的：探讨针刺＂百会＂透＂曲鬓＂对急性脑出血（ICH）后核转录因子-κB（NF-κBp65）表达的影响。方法：选取96只健康雄性W istar大鼠,将其中90只随机分为模型组、针刺组、茴拉西坦组（简称西药组）3组。每组再分为6 h、1天、2天、3天和7天等5个时间点,每个时间点随机分配6只大鼠,另设空白对照组6只大鼠。制备ICH大鼠模型,采用W estern免疫印迹技术观察不同时间点头穴针刺治疗对ICH大鼠脑组织NF-κBp65蛋白表达的影响。结果：针刺组显示大鼠脑内NF-κBp65蛋白表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较均有显著性差异（P〈0.05）,具有统计学意义。结论：头穴透刺可抑制NF-κBp65表达及其转录作用,从而抑制ICH后炎症反应所致的继发性脑损伤。     

头针透刺对脑出血大鼠脑组织ICAM-1表达影响的研究

目的:通过对细胞间粘附因子( ICAM -1)的研究探讨头穴透刺对急性脑出血(ICH)炎症反应的干预作用.方法:按完全随机设计将96只健康雄性Wistar大鼠平均分为模型组、针刺组和西药组.每组观察6h、24 h、48 h、72 h和168 h共5个时间点,每个时间点6只大鼠,另设6只大鼠作为空白对照组.制备ICH大鼠模型,采用免疫组化技术观察不同时间点头穴透刺对ICH大鼠脑组织ICAM -1表达的影响.结果:针刺组大鼠脑内ICAM -1表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05).结论:针刺可抑制ICAM -1表达及其所致的继发性脑损伤.     

针刺“百会”透“曲鬓”穴对急性脑出血大鼠血肿及CD36、HO-1表达的影响

目的:探讨针刺“百会”透“曲鬓”穴对急性脑出血大鼠血肿及其周围组织CD36、HO-1表达的影响,阐明针刺治疗脑出血的相关机制。方法:将108只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和针刺组,每组按1 d、3 d和7 d时间点再分3个亚组,每组12只。自体血注入法建立脑出血大鼠模型。采用针刺“百会”透“曲鬓”穴对模型大鼠进行干预。术后各时间点进行mNSS评分、血肿体积及脑水肿含量评估大鼠神经功能损伤以及脑损伤程度;Western-blot法检测血肿周围组织HO-1、CD36蛋白表达。结果:术后各时间点,与模型组比较,针刺组大鼠神经功能缺损评分降低(P0.01);大鼠脑组织含水量降低(P0.01);血肿周围脑组织HO-1、CD36蛋白表达升高(P0.01)。术后3 d、7 d针刺组大鼠脑组织血肿体积缩小(P0.05)。结论:针刺“百会”透“曲鬓”穴能促进脑出血大鼠血肿周围组织HO-1、CD36蛋白表达,减小血肿体积,减轻脑水含量,改善神经功能缺损。     

针刺“人中”“内关”对脑出血大鼠血肿周围脑组织NGB、Cyt-C表达的影响

目的观察大鼠脑出血(ICH)急性期血肿周围脑组织脑红蛋白(NGB)、细胞色素C(Cyt-C)的表达随时间动态变化及针刺干预对其影响,探讨针刺“人中”“内关”对大鼠ICH急性期的神经保护及细胞凋亡的影响。方法健康雄性SD大鼠96只随机分为对照组、模型组、穴位组、非穴组,每组24只。采用自体非肝素抗凝动脉血二次注入大鼠尾状核制作动物模型,符合纳入标准的大鼠再按出血后6、24、48、72 h分为4个时间点亚组,每组6只大鼠。穴位组采取针刺“人中”“内关”干预;非穴组针刺非穴点干预;对照组及模型组捆绑束缚,干预后对应时间点取材。采用NSS评分法对术后大鼠神经功能缺损程度进行评分;运用免疫组化法定性测定血肿周围脑组织NGB、Cyt-C蛋白表达情况。结果与模型组相比,穴位组大鼠神经功能缺损体征明显降低,在72 h差异有统计学意义(P0.05)。与模型组相比,穴位组各时间点NGB表达均增高(P0.05)、Cyt-C表达均下降(P0.05);与穴位组相比,非穴组各时间点NGB表达低于穴位组(P0.05)、Cyt-C表达高于穴位组(P0.05)。结论针刺“人中”“内关”能改善ICH大鼠神经功能缺损体征,还可能通过提高出血后血肿周围脑组织NGB表达、降低Cyt-C表达,从而保护脑组织,抑制神经元凋亡,拮抗出血后继发的神经元损伤。     

针刺对实验性大鼠脑出血后灶周组织NF-κBp65表达和脑水含量的影响及其相关性分析

目的：探讨针刺对急性脑出血（Intracerebral hemorrage,ICH）后核转录因子-κB（NF-κBp65）动态表达及脑水含量变化的影响,并探讨两者的相关性。方法：实验选用Wistar健康雄性大鼠96只,随机将其中90只分为模型组、针刺组、西药组（茴拉西坦组）。每组又分为6h、1天、2天、3天和7天5个时间点,每个时间点随机分配6只大鼠,另设6只大鼠做空白对照。制备ICH大鼠模型,采用蛋白免疫印迹技术观察针刺在不同时间点对ICH大鼠脑组织中NF-κBp65蛋白表达及脑水含量的影响,并对两者做相关性分析。结果：针刺组大鼠脑内NF-κBp65蛋白表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较有显著性差异（P〈0.05）,相关性分析提示,脑水肿与NF-κBp65表达呈正相关。结论：ICH后NF-κBp65阳性表达是加重脑水肿的一个重要因素,针刺可下调ICH后血肿周围脑组织内NF-κBp65蛋白表达,减轻脑水肿程度,防治ICH后继发性脑损伤。     

三七总皂苷对脑出血大鼠脑含水量和凝血酶的影响

目的观察三七总皂苷对脑出血大鼠脑组织含水量及凝血酶的影响,探讨其对脑出血的作用机制。方法 SD雄性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、治疗组,分别观察6、24、48、72 h及7 d 5个时间点。采用尾壳核注入胶原酶肝素钠生理盐水溶液法建立大鼠脑出血模型,治疗组给予三七总皂苷腹腔注射,每日1次,采用干湿重法测量脑组织含水量,检测48 h纤维蛋白原含量(FIB)和凝血酶凝结时间(TT)。结果各时点模型组脑含水量与空白组、假手术组比较明显升高,差异有统计学意义(P0.05);除6 h时点外,治疗组各时点与模型组和治疗组比较,脑含水量明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,治疗组FIB明显降低,差异有统计学意义(P0.05);治疗组TT下降不明显,差异无统计学意义(P0.05)。结论三七总皂苷通过下调脑出血大鼠脑组织含水量、FIB含量及TT达到治疗脑出血的目的。     

针刺“百会”透“曲鬓”对实验性大鼠脑出血后灶周组织PAR-1和NF-κBp65表达的影响及其相关性分析

目的:探讨针刺对急性脑出血(Intracerebral hemorrage,ICH)后凝血酶受体-1(PAR-1)和核转录因子(NF-κBp65)动态表达的影响,并探讨两者的相关性。方法:选取健康雄性Wistar大鼠96只,将其中90只随机分为模型组、针刺组、茴拉西坦组(简称西药组)3组。每组又分为6h、1d、2d、3d和7d 5个时间点,每个时间点6只大鼠,另设空白对照组6只大鼠。制备ICH大鼠模型,采用Western-blot免疫印迹技术观察不同时间点头穴透刺治疗对ICH大鼠脑组织PAR-1、NF-κBp65蛋白表达的影响,并对两者进行相关性分析。结果:针刺组大鼠脑内PAR-1、NF-κBp65蛋白表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较PAR-1均有显著性差异(P<0.05),具有统计学意义。相关性分析两者呈正相关。结论:针刺百会透曲鬓穴可抑制ICH后凝血酶引起的毒性作用,进而下调NF-κBp65的表达,抑制了核转录因子-κB的炎症因子转录作用,达到减轻炎症级联反应程度,防治继发性脑损伤的作用。     

头针透刺对脑出血大鼠脑组织IL-6表达影响的研究

目的:通过对白介素-6(IL-6)蛋白表达变化的观察,探讨头穴透刺对急性脑出血(Intracere-bral hemorrage,ICH)炎症反应的干预作用。方法:将96只健康雄性Wistar大鼠按完全随机方法平均分为模型组、针刺组和西药组。每组再按照6h、24h、48h、72h和168h分为5个亚组,每个亚组6只大鼠,另设6只大鼠作为空白对照组。制备ICH大鼠模型,采用免疫组化技术观察不同时间点头穴透刺对ICH大鼠脑组织IL-6蛋白表达的影响。结果:针刺组大鼠脑内IL-6表达在不同时间点均有显著下调,与模型组比较具有显著性差异(P0.05)。结论:针刺可抑制IL-6蛋白表达,减轻脑出血后炎症反应所致的继发性脑损伤。     

头穴透刺对脑出血大鼠脑组织p-Akt影响的实验研究

目的:通过百会透曲鬓穴针刺治疗脑出血急性期大鼠,观察其脑组织中p-Akt蛋白表达的变化,探讨百会透曲鬓对脑出血后脑神经的保护作用。方法:选用雄性Wistar大鼠54只,随机分为3组,模型组、针刺组(模型+针刺组)、针刺组+抑制剂组(针刺组+LY294002),每组18只;按文献方法建立模型;针刺组采用百会穴向曲鬓穴透刺,头部顶区向颞叶、额叶透刺;造模,治疗后于1、3、7天3个时间点,取大鼠脑组织,免疫组化法检测脑组织中p-Akt蛋白表达。结果:p-Akt在大鼠脑出血后1天表达增多,3天达高峰后迅速减少,7天仍有表达。与模型组比较,针刺组各时间点p-Akt表达明显增多,(P0.01);与针刺+抑制剂组比较,有统计意义(P0.05)。结论:针刺百会透曲鬓穴能够增加脑出血急性期大鼠脑组织p-Akt蛋白的表达,而这一作用可被LY294002阻断,提示本针刺方法能够激活AKT通路,起到脑保护作用。     

针刺“百会”透“曲鬓”对急性脑出血大鼠血清中P选择素(CD62p)的表达影响的实验研究

目的:通过观察"百会"透"曲鬓"头针针刺法对急性脑出血大鼠脑组织中CD62p表达的影响,来揭示针刺头部腧穴对脑出血后炎症反应影响的相关机理方法:选取132只雄性Wistar大鼠随机分3组:空白对照组12只大鼠,脑出血模型组,针刺治疗组各60只大鼠。后两组又随机分为6 h,24 h,3 d,7 d四个亚组,每组大鼠数量均等。针刺组分别于相应的时间点进行针刺治疗,空白组,脑出血作为对照组不做处理。在完成治疗后,于相应的时间点对大鼠进行神经功能评分,然后处死大鼠提取血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆CD62p表达水平。结果:经针刺治疗后,针刺组大鼠的神经功能缺损体征较同时间点的脑出血对照组明显减轻,差异具有统计学意义(P0.01)。CD62p酶联免疫吸附法检测结果显示,脑出血组,针刺组CD62p水平较空白组明显增高,并有显著差异(P0.01);针刺组脑组织中CD62p水平较相应时间段的脑出血组低,并有显著差异(P0.01);脑出血组,针刺组在3d时脑组织中CD62p含量较其他时间段高,并有显著差异(P0.01)。结论:"百会透曲鬓"针刺法可明显改善大鼠的神经功能学评分,有利于脑出血后肢体运动功能的恢复;"百会"透"曲鬓"针刺疗法,可能通过抑制CD62p在血小板膜上的表达,从而在一定程度上抑制脑出血后炎症反应,及脑水肿的形成。     

针刺“百会”透“曲鬓”对JNK通路抑制后脑出血大鼠脑组织p38MAPK的影响

目的用针刺"百会"透"曲鬓"的方法治疗急性期脑出血模型大鼠,观察JNK通路被抑制后,p38MAPK的表达变化,探讨头针对出血后的脑组织是否起到保护作用。方法选用雄性SD大鼠120只随机分为假手术组、模型组、针刺组(模型+针刺组)、抑制剂组(模型+SP600125);选取自体血注入尾壳核方法造模,确定造模成功后给予针刺治疗,采取针刺方法为百会穴透曲鬓穴。在6 h、3 d、7 d 3个时间点取材,用TUNEL法检测各组大鼠脑出血半暗带区细胞凋亡情况;用Western blotting法观察脑组织内p38MAPK的蛋白表达。结果 TUNEL法:模型组,针刺组和抑制剂组与假手术组比较,差异有统计学意义(P 0.05)。针刺组与模型组比较在3、7 d有统计学意义(P 0.05)。针刺组与抑制剂组比较在3、7 d有统计学意义(P 0.05),抑制剂组与模型组比较各时间点均有显著差异(P 0.01)。Western blotting法:模型组,针刺组和抑制剂组与假手术组比较,差异有统计学意义(P 0.05)。针刺组与模型组比较,在3、7 d两个时间点表达比模型组降低明显,具有统计学意义(P 0.05)。针刺组与抑制剂组比较在3、7 d有统计学意义(P 0.05),抑制剂组与模型组比较在7 d有统计学意义(P 0.05)。结论针刺"百会"透"曲鬓"对大鼠脑出血后继发性脑损伤的神经细胞凋亡有抑制作用,并能降低p38MAPK的表达,起到了脑保护作用。     

头穴透刺对脑出血大鼠脑含水量及AQP-4表达研究

目的:探讨针刺对脑出血的调控机制。方法:96只大鼠随机分为3组(对照组、模型组、针刺组),每组分4个时间点(12 h、24 h、3天、7天),每个时间点8只大鼠,模型成功6 h后给予针刺百会透悬厘治疗,于12 h、24 h、3天、7天时间取材;然后测定脑含水量及评定AQP-4表达。结果:针刺有降低脑含水量作用,对AQP-4表达有抑制作用,针刺组优于其他两组(P0.05)。结论:百会透刺悬厘治疗能降低脑含水量,控制脑水肿,促进脑出血恢复;抑制AQP-4表达,进而保护脑受损的神经元。     

大黄三七散改善急性脑出血大鼠神经功能缺损的研究

研究中药大黄三七散对急性脑出血(ICH)大鼠的神经功能缺损改善的影响并探讨其分子机制。以肝素胶原酶Ⅳ法制作大鼠脑出血模型,考察了施药前后ICH大鼠神经功能评分、脑系数及脑含水量、脑匀浆中自由基释放量及抗氧化酶活力的变化及病理切片观察。结果表明,大黄三七散可明显改善ICH大鼠神经功能缺失症状,显著降低脑系数并减少脑含水量,施加大黄三七散后ICH大鼠脑组织自由基含量明显降低,而机体SOD及CAT抗氧化酶活力提高。改善效果明显呈剂量依赖效应。病理切片观察表明,与模型组相比,大黄三七治疗3个剂量治疗组ICH大鼠的脑组织病变、脑水肿及炎症细胞浸润情况均明显改观,神经细胞损伤亦显著减轻。大黄三七散的解毒、通络及抗氧化功效是改善急性ICH大鼠神经功能缺损的重要分子机制。     

活血化瘀中药对脑出血大鼠脑组织 含水量及AQP4表达的影响

目的:观察活血化瘀药对脑出血大鼠脑组织含水量及AQP4表达的影响,以期从分子水平探讨其治疗出血性脑水肿的机制。方法:将80只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,活血高、低剂量组(10.4,2.6 g.kg-1),采用自体不凝血注入尾状核法制作大鼠脑出血模型,组织干湿重法计算脑含水量,免疫组织化学法和real-timePCR法检测脑组织AQP4蛋白和基因的表达。结果:模型组大鼠各时间点病灶侧脑含水量、血肿周围组织AQP4蛋白和基因的表达均明显高于假手术组(P<0.01);活血高、低剂量组大鼠病灶侧脑含水量及血肿周围组织AQP4的表达与同一时间点模型组相比均明显降低,活血高、低剂量组间也有统计学意义。结论:活血化瘀药能够减轻脑出血后脑水肿,其机制可能与降低AQP4表达有关。     

七叶皂苷通过抑制TXNIP/MLXIPL信号通路改善脑出血大鼠神经性损伤

目的 七叶皂苷具有抗炎、消肿和改善血液循环的作用，但其在脑出血治疗中的作用及其机制尚未阐明。探究七叶皂苷对脑出血大鼠神经性功能的影响及潜在的作用机制。方法 选取250～280 g雄性Wistar大鼠，采用胶原酶注射法构建大鼠脑出血(Intracerebral haemorrhage, ICH)模型，将其随机分为假手术组(sham)、ICH组、5或10 mg/kg七叶皂苷治疗组。体外，大鼠小胶质细胞HAPI经血红素(Hemin)处理，分为Control组、Hemin组、5或10μM七叶皂苷处理组。脑组织图评估大鼠脑水肿程度，HE染色观察大鼠脑组织的病理学变化，ELISA测定用来评估大鼠氧化应激水平。RT-qPCR和Western blot法分别检测miR-128-3p表达量、硫氧还蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin-Interacting Protein, TXNIP)和MLX相互作用蛋白(MLX Interacting Protein-Like, MLXIPL)水平。荧光素报告基因实验验证miR-128-3p和TXNIP的靶定关系。Co-IP验证TXNIP和MLXIPL的相互作用...