丹参酚酸B量效相关性抑制大肠癌HCT-116细胞生长及其相关机制研究

目的 验证丹参酚酸B(Salvianolic acid B,SalB)浓度依赖性抑制人大肠癌HCT-116细胞增殖、促进其凋亡,并从活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)水平进一步探究SalB抑制大肠癌生长的作用机制。方法 以低、中、高剂量SalB干预HCT-116细胞48h,显微镜下观察细胞生长状态及形态学特征;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术分析细胞周期分布、细胞凋亡率以及细胞内ROS含量。结果 随着SalB作用HCT-116细胞浓度增加,镜下可见细胞数量逐渐减少,细胞折光率逐渐减弱,体积变小,核固缩,核颜色加深,出现大量细胞碎片及漂浮细胞;平板克隆实验显示,中剂量和高剂量SalB显著抑制HCT-116细胞克隆形成能力(P<0.05或P<0.01),且随着药物浓度增加,抑制作用更强(P<0.01);中剂量和高剂量SalB处理后,GO/G1期细胞数量显著升高(P<0.01),S期和G2/M期细胞数量均显著降低(P<0.05或P<0.01),该周期阻滞作用在一定浓度范围内与SalB浓度呈正性相关;低、中、高浓...     

大黄素通过ROS介导大肠癌细胞株LOVO凋亡的实验研究

目的 观察大黄素对人大肠癌细胞株LOVO凋亡的影响,并探讨活性氧(ROS)是否介导了大黄素诱导细胞凋亡的过程。方法 体外分组培养人大肠癌细胞株LOVO,设空白对照组和大黄素3个不同浓度干预组(40,80,120 μmol·L-1),大黄素干预时间分别为12,24,48 h。以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖率、Annexin Ⅴ-FITC和PI双染流式细胞术检测凋亡,激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内ROS水平,Western印迹法检测caspase-3表达。结果 与空白对照组比较,大黄素干预组呈浓度依赖性诱导大肠癌细胞株LOVO凋亡,细胞内ROS水平明显增加,caspase-3的表达明显上调,差异均有统计学意义(P ＜ 0.05)。结论 大黄素通过ROS介导线粒体凋亡信号通路诱导大肠癌细胞凋亡,可能是大肠癌细胞凋亡诱导途径之一。     

益气除痰方对缺氧人脐静脉内皮细胞迁移和侵袭能力的影响北大核心CSCD

目的探讨益气除痰方(YQCTF)对缺氧人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法采用氯化钴(Co Cl2)化学诱导建立细胞缺氧模型,加入不同浓度YQCTF干预,设HUVEC常氧(Norm)组,缺氧造模(Hyp)组,缺氧+YQCTF低、中、高剂量(L、M、H)组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测HUVE活力;流式细胞术检测细胞周期;划痕实验测定细胞修复迁移能力;Transwell小室实验测定细胞侵袭能力;Western Blot法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、粘着斑激酶(FAK)、p-ERK、p-FAK的蛋白水平;qPCR法检测HIF-1α、GRP78、ERK1、ERK2、FAK的mRNA表达水平。结果 Norm组与Hyp组比较,Hyp组HUVEC无明显细胞增殖(P>0.05),但细胞迁移和侵袭能力增强(P<0.05),上调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白表达(P<0.05,P<0.01)及基因mRNA表达(P<0.01),ERK、FAK磷酸化水平增强(P<0.01);与Hyp组比较,YQCTF可明显抑制缺氧HUVEC增殖(P<0.01,P<0.05),抑制细胞周期有丝分裂(P<0.05,P<0.01),降低细胞迁移和侵袭能力(P<0.01),并可下调HIF-1α、GRP78、ERK、FAK蛋白和基因mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),降低ERK、FAK磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性。结论 YQCTF可抑制缺氧诱导的HUVEC迁移和侵袭,可能与其调控HIF-1α、GRP78、ERK、FAK的蛋白和基因mRNA表达水平有关。     

石见穿多糖通过Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨石见穿多糖通过Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。方法不同浓度石见穿多糖(0、0.25、0.5、1 mg/mL)处理人OS MG63细胞24 h,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,RT-PCR检测人OS细胞β-catenin mRNA表达,Western blot检测人OS MG63细胞Vimentin、E-cadherin蛋白表达。结果石见穿多糖抑制细胞迁移、侵袭(P<0.01),降低β-catenin mRNA及Vimentin蛋白表达(P<0.05,P<0.01),促进E-cadherin蛋白表达(P<0.01),且上述作用呈现剂量依赖性。结论石见穿多糖能抑制人OS MG63细胞的迁移和侵袭能力,这种作用可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而阻断EMT过程而引起的。     

间断高浓度葡萄糖对雪旺细胞的损伤机制及丹参酚酸B的保护作用

目的:研究间断高浓度葡萄糖对体外培养大鼠雪旺细胞(SCs)损伤机制及丹参酚酸B(Sal B)干预作用。方法:原代培养大鼠SCs,将其分为正常组、稳定性高糖组、间断高浓度葡萄糖组、渗透压对照组及间断高浓度葡萄糖加不同浓度Sal B(25,50,100μmol·L-1)处理组。流式细胞仪检测细胞凋亡,DHE探针检测细胞内活性氧(ROS)含量,JC-1探针检测线粒体膜电位(MMP)变化,ELISA法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)含量。实时荧光定量PCR检测B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达;Western blot(蛋白印迹)法检测Bcl-2,Bax,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP)表达。结果:与正常组及稳定性高糖组相比,间断高浓度葡萄糖明显提高了SCs内ROS水平(P<0.01),增加了8-OHd G的生成(P<0.01),降低了MMP(P<0.05,P<0.01),下调SCs内Bcl-2蛋白及mRNA的表达(P<0.01),上调Bax蛋白及mRNA的表达(P<0.01),促进了Caspase-3及PARP的活化(P<0.01),并增加了SCs的凋亡(P<0.01)。不同浓度的Sal B可以降低间断高浓度葡萄糖所导致的SCs内ROS及8-OHd G浓度的增高(P<0.01),提高MMP(P<0.01),上调Bcl-2蛋白及mRNA的表达(P<0.05,P<0.01),下调Bax蛋白及其mRNA的表达(P<0.01),降低了PARP及caspase-3的活化(P<0.01),抑制了SCs凋亡(P<0.01)。结论:间断高浓度葡萄糖对SCs的损伤作用比稳定性高糖更为明显,Sal B可以抑制间断高浓度葡萄糖所致的SCs损伤。     

竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响

目的研究竹节香附素A(Raddeanin A,RA)对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用不同浓度的RA(0.125~50.0μmol·L~(-1))处理HCT-116细胞24,48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力。RA(1.0,2.0,4.0μmol·L~(-1))干预后,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;采用Western Blot法检测细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达。选择低于凋亡浓度的RA(0.25,0.5,1.0μmol·L~(-1))作用于HCT-116细胞,采用细胞划痕实验和Transwell穿膜实验观察不同浓度RA对HCT-116细胞迁移的影响;采用铺有Matrigel胶的Transwell实验检测RA对HCT-116细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR法和Western Blot法检测RA对HCT-116细胞中MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白表达的影响。结果 RA干预24,48 h后的IC50值分别为5.967μmol·L~(-1)和4.797μmol·L~(-1),且呈现浓度与时间依赖性。与空白对照组比较,RA1.0,2.0,4.0μmol·L~(-1)浓度组凋亡、坏死的HCT-116细胞明显增多(P0.05,P0.01);线粒体膜电位坍塌率分别为70.2%,74.4%和91.6%,差异均有统计学意义(P0.01);细胞内ROS含量均显著增加(P0.01),且呈现浓度依赖性;Cleaved caspase-3蛋白的表达水平随RA浓度的增加而显著提高(P0.01)。RA干预后与空白对照组比较,0.5,1.0μmol·L~(-1)浓度组的细胞愈合率显著降低(P0.01);RA 0.25,0.5,1.0μmol·L~(-1)浓度组均能显著抑制HCT-116细胞的迁徙能力(P0.01),均能显著抑制HCT-116细胞体外侵袭能力(P0.05,P0.01);RA 0.5,1.0μmol·L~(-1)浓度组MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白相对表达水平均显著降低(P0.05,P0.01)。结论 RA既能够有效抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,又能诱导该细胞的凋亡,可能与诱导细胞内ROS产生,导致线粒体膜电位坍塌,激活caspase信号通路有关。低于凋亡浓度的RA(0.25,0.5,1.0μmol·L~(-1))能明显抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭活性,可能与通过下调HCT-116细胞MMP-2、MMP-9m RNA及蛋白表达有关。     

竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

摘要：目的 研究竹节香附素A (Raddeanin A,RA) 对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭的活性影响,并初步探讨其作用机制。 方法 采用不同浓度的RA（0.125~50 μmol·L-1）处理?HCT-116细胞24,48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力。RA(1.0,2.0,4.0 μmol·L-1)干预后,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平;采用Western Blot法检测细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达。选择低于凋亡浓度的RA （0.25,0.5,1.0 μmol·L-1）作用HCT-116细胞,采用细胞划痕实验和Transwell穿膜实验观察不同浓度RA 对结肠癌细胞HCT-116细胞迁移的影响;采用铺有matrigel胶的Transwell实验检测RA对HCT-116细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR法和Western Blot法检测RA作用后各组细胞中MMP-2、MMP-9基因及蛋白表达。 结果 RA干预24,48 h后的IC50值分别为5.967 μmol·L-1和4.797 μmol·L-1,且呈现浓度与时间依赖性。与空白对照组比较,RA 1.0,2.0,4.0?μmol·L-1浓度组凋亡、坏死的HCT-116细胞明显增多（P < 0.05,P < 0.01）;线粒体膜电位坍塌率分别为70.2%,74.4%和91.6%,差异有统计学意义（P < 0.01）;细胞内ROS含量显著增加（P < 0.01）,且呈现浓度依赖性;Cleaved caspase-3蛋白的表达水平随RA浓度的增加而显著提高（P < 0.01）。RA干预后与空白对照组比较,0.5,1.0 μmol·L-1浓度组的细胞愈合率显著降低（P < 0.01）;RA 0.25,0.5,1.0 μmol·L-1浓度组均能显著抑制HCT-116 细胞的迁徙能力（P < 0.01）,均能显著抑制HCT-116 细胞体外侵袭能力（P < 0.05,P < 0.01）。与空白对照组比较,RA 0.5,1.0 μmol·L-1浓度组MMP-2、MMP-9 mRNA相对表达水平显著降低（P < 0.05,P < 0.01）;RA 0.5,1.0?μmol·L-1浓度组MMP-2、MMP-9 蛋白相对表达水平显著降低（P < 0.01）。结论 RA既能够有效抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,又能诱导该细胞的凋亡,可能与诱导细胞内ROS产生,导致线粒体膜电位坍塌,激活caspase信号通路有关。低于凋亡浓度的RA （0.25,0.5,1.0 μmol·L-1）能明显抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭活性,可能与通过下调HCT-116细胞MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白表达有关。     

香叶木素通过线粒体凋亡途径对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨香叶木素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将MCF-7细胞分为对照组(0μmol·L^-1)和香叶木素5、10、20、30、40、50、60、70μmol·L^-1浓度组。采用CCK-8法及2,4二硝基苯肼法检测MCF-7细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)泄露量;采用罗丹明123(Rh123)荧光染色法、流式细胞术及荧光显微镜检测MCF-7细胞线粒体膜电位(MMP);DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)含量;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western Blot法检测p53、Bax、Caspase 3及Bcl-2蛋白的表达。结果与对照组比较,香叶木素在5~70μmol·L^-1范围内能够浓度依赖性地抑制MCF-7的细胞活力及促进LDH的泄露(P<0.01,P<0.001),选取浓度10、30、50μmol·L^-1进行后续实验;香叶木素10、30、50μmol·L^-1浓度组能显著降低MCF-7细胞线粒体膜电位(P<0.05,P<0.01,P<0.001),促进细胞内ROS的积累(P<0.01,P<0.001),提高细胞凋亡率(P<0.001),显著上调p53(30、50μmol·L^-1)、Bax及Caspase 3蛋白的表达(P<0.001),下调Bcl-2蛋白的表达(P<0.01,P<0.001)。结论香叶木素可能通过ROS及p53介导的线粒体凋亡途径抑制MCF-7细胞的增殖及促进其凋亡。     

补骨脂复方对胃癌细胞SGC7901生物行为学的影响

目的:观察补骨脂复方对胃癌细胞株SGC7901增殖、黏附、侵袭、凋亡的影响。方法:①采用MTT法、细胞黏附人工重组基底膜实验、聚碳酸酯膜细胞培养小室(Transwell小室)法,观察不同浓度的补骨脂复方对胃癌细胞株SGC7901增殖、黏附和侵袭的影响;②TUNEL法研究不同浓度补骨脂复方对胃癌细胞株SGC7901早期凋亡的诱导作用。结果:①补骨脂复方有很强的抑瘤作用(P<0.05),并呈一定的浓度依赖性。②补骨脂复方高浓度组各时间段均有明显的抑制肿瘤黏附的作用(P<0.05),中浓度90min后有抑制肿瘤黏附的作用(P<0.05),低浓度组在120min时有抑制黏附作用(P<0.05)。③补骨脂复方高、中、低三种浓度药物对胃癌细胞株SGC7901细胞的侵袭抑制率分别为60.79%(P<0.01)、38.81%(P<0.01)、8.7%。④补骨脂复方高、中、低浓度组对胃癌细胞株SGC7901凋亡率分别为59.08%(P<0.01)、31.45%(P<0.01)、16.6%。结论:①补骨脂复方可明显降低胃癌细胞株SGC7901的增殖作用。②补骨脂复方可明显降低胃癌细胞株SGC7901的黏附能力和侵袭能力。③补骨脂复方有诱导人胃癌细胞株SGC7901凋亡的作用。     

丹酚酸B通过AKT/Bim/Bcl-2通路抑制肾细胞癌生长的机制研究

目的：研究丹酚酸B(SalB)对人肾透明细胞腺癌（ccRCC）细胞786-O生长、凋亡和蛋白激酶B(AKT)/细胞死亡调解子(Bim)/B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)通路表达的影响。方法：采用不同浓度SalB(40、80、120μmol/L)处理ccRCC细胞786-O 96h后,MTT比色法检测细胞生长活力;单克隆形成实验测定细胞增殖能力;膜联蛋白V(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)凋亡双染试剂盒测定细胞凋亡情况;活性氧检测试剂盒测定细胞内活性氧累计水平;荧光定量PCR检测细胞内AKT、Bim、Bcl-2、Bcl-2相关性X蛋白(Bax)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)的表达水平;Western blot检测细胞内AKT、磷酸化蛋白激酶B(p AKT)、Bim、Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达水平。结果：SalB处理组和对照组相比,786-O细胞生长明显受到抑制（P<0.05）。SalB可引起细胞内活性氧物种（ROS）的累计并促进细胞凋亡（P<0.05）,可抑制pAKT、Bcl-2及Caspase 3蛋白的表达（P&l...     

阿魏酸钠对Ang Ⅱ诱导内皮细胞凋亡的抑制作用

目的:研究AngⅡ诱导内皮细胞凋亡作用及阿魏酸钠(SF)的抗凋亡作用和可能机制。方法:将体外培养的猪髂动脉内皮细胞(PIECs)随机分为:对照组、AngⅡ组、SF组、SF+AngⅡ组。倒置显微镜下观察细胞生长状况,MTT法检测PIECs;存活率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡状况和细胞内活性氧(ROS)水平,比色法法测定上清中MDA含量。结果:与对照组比较,AngⅡ组细胞凋亡率、上清中MDA含量及细胞内ROS水平增加(P<0.01),细胞存活率降低(P<0.01)。SF则降低细胞凋亡率(P<0.05)、上清液MDA含量及细胞内ROS水平(P<0.01),增加细胞存活率(P<0.05),但高浓度的SF有一定的细胞毒性。结论:SF可以抑制Ang诱导的内皮细胞凋亡,该作用与SF降低上清中MDA含量和降低细胞内ROS生成有关。     

黄芪甲苷对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的：探究黄芪甲苷对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,并探讨其相关分子机制。方法：将结直肠癌HCT116细胞分为空白组(DMSO)和黄芪甲苷低、中、高质量浓度组(15.7、31.4、62.8 mg·L^-1)。通过倒置显微镜观察给药后结直肠癌HCT116细胞形态的改变;细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测黄芪甲苷处理后细胞活性的改变;细胞划痕实验和Transwell实验观察黄芪甲苷处理后结肠癌HCT116细胞迁移及侵袭能力的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结直肠癌HCT16细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂(p21)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平。结果：与空白组比较,黄芪甲苷低、中、高质量浓度组细胞生长速度慢,密度明显稀疏,细胞形态不一,细胞核逐渐缩小,细胞质逐渐降解,细胞死亡率高,细胞活力呈浓度依赖性下降,细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P<0.05,P<0.01),其抑制率与给药浓度呈正相关;与空白组比较,黄芪甲苷低、中、高质量浓度组...     

辣椒素对前列腺癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的：观察辣椒素对前列腺癌PC-3细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法：MTT法检测辣椒素对前列腺癌细胞活力的影响;显微镜下观察辣椒素干预对PC-3细胞数量及形态的影响;细胞划痕法观察不同浓度(1、5、10μmol/L)辣椒素在不同时间段(24、48 h)对前列腺癌PC-3细胞迁移的影响;Hoechst 33258荧光染色法检测前列腺癌细胞凋亡水平;Western Blot和实时荧光定量PCR法检测辣椒素干预对前列腺癌细胞增殖、凋亡及迁移相关mRNA及蛋白表达的影响。结果：MTT法检测结果显示,辣椒素可显著抑制前列腺癌细胞的活力(P<0.05或P<0.01);显微镜下观察到辣椒素干预可显著降低前列腺癌细胞的存活数量及细胞活力(P<0.05或P<0.01);细胞划痕实验结果显示,与对照组比较,1、5、10μmol/L辣椒素处理组细胞划痕愈合率显著降低(P<0.01);Hoechst染色实验结果显示,辣椒素各组前列腺癌细胞的细胞核染色质浓缩现象增加,细胞凋亡增多;Western Blot结果显示辣椒素可显著下调PC-3细胞CyclinD1、PCNA、Bcl-2、N...     

异甘草素对Hela细胞氧化还原状态的影响

目的 探讨异甘草素体外抗氧化作用及其对Hela细胞氧化还原状态的影响,考察异甘草素抑制宫颈癌Hela细胞增殖与活性氧的关系.方法 采用化学方法测定异甘草素对羟自由基,DPPH,超氧阴离子清除率和抑制脂质过氧化的抑制率,考察其抗氧化效果;SRB法测定细胞活力,以细胞内ROS荧光探针DCFH-DA,测定荧光强度以表征细胞内ROS水平,试剂盒测定细胞内SOD和CAT的活力,考察其对细胞内氧化还原状态的影响.结果 异甘草素具有强的体外抗氧化作用,并且呈浓度依赖性地抑制Hela细胞的增殖;随异甘草素浓度变化呈现1～7.5 mg/L抗氧化,高于7.5 mg/L浓度促氧化的变化.结论 异甘草素浓度依赖性地抑制宫颈癌Hela细胞的增殖;异甘草素低浓度时清除细胞内活性氧,高浓度时促进自由基的生成,促进Hela细胞凋亡.     

基于DGKα-PA信号轴探讨扶正祛邪方对人肺癌H292细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨扶正祛邪方调节DGKα-PA信号轴对人肺癌H292细胞增殖、迁移的影响及可能机制。方法 将H292细胞分为对照组和扶正祛邪方低、中、高浓度组，扶正祛邪方低、中、高浓度组分别予3、6、12 mg/mL扶正祛邪方干预48 h，对照组予等体积培养基常规培养。克隆形成实验观察H292细胞增殖情况，细胞划痕实验、Transwell实验观察细胞迁移和侵袭情况，ELISA检测细胞磷脂酸（PA）含量，Western blot检测细胞二酰甘油激酶α(DGKα)、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT和雷帕霉素机械靶蛋白（mTOR）表达。结果 与对照组比较，扶正祛邪方低、中、高浓度组细胞克隆形成数明显减少（P<0.05,P<0.01），细胞迁移率明显降低（P<0.01），侵袭细胞数明显减少（P<0.05,P<0.01），细胞PA含量明显减少（P<0.01）,DGKα、p-AKT、mTOR蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01），且以扶正祛邪方高浓度组抑制作用最明显（P<0.01）。结论 扶正祛邪方可能通过DGKα-PA信号轴抑制人肺癌H292...     

盐酸石蒜碱对脂肪酸诱导H9c2细胞炎性损伤的保护作用及其机制

目的：研究盐酸石蒜碱(lycorine hydrochloride)对脂肪酸诱导H9c2细胞炎性损伤的保护作用及机制。方法：脂肪酸(100μmol/L)诱导H9c2细胞炎性损伤,采用CCK-8法筛选盐酸石蒜碱最佳给药浓度;蛋白免疫印迹法检测TLR4、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达;荧光显微镜及流式细胞术检测H9c2细胞内活性氧(ROS)产生水平。结果：CCK-8筛选出盐酸石蒜碱的最佳给药浓度为5、10μmol/L。与正常对照组比较,模型组TLR4蛋白表达及p-PI3K/PI3K、ROS水平显著升高,p-Akt/Akt显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,盐酸石蒜碱组TLR4蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR、ROS水平显著降低,p-Akt/Akt水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论：盐酸石蒜碱对脂肪酸诱导H9c2细胞炎性损伤具有保护作用,其机制可能与抑制TLR4、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达,促进Akt蛋白磷酸化,抑制炎性损伤H9c2细胞内ROS的产生有关。     

柚皮素通过ROS/JNK/Bcl2通路抑制宫颈癌Hela细胞增殖和迁移

目的:探讨柚皮素对宫颈癌Hela细胞增殖和迁移影响及分子机制。方法:应用MTT法检测柚皮素对宫颈癌Hela细胞活力的影响,Transwell检测柚皮素对Hela细胞迁移的影响,DCFH染色检测柚皮素对宫颈癌Hela细胞活性氧(ROS)生成的影响,流式细胞仪检测柚皮素对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,Western blot法检测柚皮素对细胞内p-JNK和Blc2蛋白表达的影响。结果:12.5、25、50、100、200μg/ml柚皮素处理细胞24h,细胞活力呈浓度依赖性降低。ROS抑制剂(NAC)能显著抑制柚皮素对细胞活力的抑制作用。50μg/ml柚皮素处理细胞24h能抑制细胞迁移、促进细胞ROS生成和细胞凋亡,细胞凋亡率为(42.2±1.6)%;促进p-JNK的表达,抑制Bcl2的表达,p-JNK表达水平为(2.34±0.12)倍,Bcl2表达水平为(0.22±0.03)倍。结论:柚皮素可诱导宫颈癌Hela细胞ROS的产生,通过激活ROS/JNK/Bcl2通路诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖和迁移。     

蜜炙紫菀水煎剂对大肠癌LOVO细胞凋亡及迁移的影响

目的:探讨蜜炙紫菀水煎剂对大肠癌LOVO细胞凋亡及迁移的影响方法:应用荧光显微镜观察DAPI染色后蜜炙紫菀水煎剂作用前后对LOVO细胞凋亡情况的影响;流式细胞仪检测蜜炙紫菀水煎剂对LOVO细胞凋亡率的影响;划痕实验和Transwell小室法检测不同质量浓度的蜜炙紫菀水煎剂处理LOVO细胞后对大肠癌LOVO细胞的迁移情况的影响。结果:荧光显微镜下观察发现蜜炙紫菀水煎剂实验组和空白对照组均未见细胞核凝集、染色体碎裂等细胞凋亡改变;流式细胞术结果也发现,不同浓度蜜炙紫菀水煎剂处理LOVO细胞48 h后,在细胞周期图G0期均未出现二倍峰,且凋亡率未见明显改变;浓度为5~30 mg·m L-1的蜜炙紫菀水煎剂处理LOVO细胞24、48 h后,与对照组相比,划痕实验结果显示大肠癌LOVO细胞的划痕距离较大,划痕未见明显愈合,均可以抑制大肠癌LOVO细胞的迁移,在蜜炙紫菀水煎剂浓度为40 mg·m L-1和80 mg·m L-1时,会导致大肠癌LOVO细胞非凋亡性死亡,Transwell小室结果显示,药物实验组穿透Transwell小室上层膜到达下室的LOVO细胞数明显少于空白对照组,蜜炙紫菀水煎剂浓度为30 mg·m L-1的实验组迁移率最低,为50.7%。结论:不同浓度的蜜炙紫菀水煎剂对大肠癌LOVO细胞的凋亡没有影响,但在高浓度时可以导致非凋亡性细胞死亡。同时,确定一定浓度的蜜炙紫菀水煎剂可以有效抑制大肠癌LOVO细胞的迁移,为有效预防大肠癌复发提供实验基础。     

连翘苷经PI3K/Akt信号通路干预肾细胞癌的机制研究

目的探讨连翘苷抑制人肾细胞腺癌786-0细胞生长、迁移及侵袭的作用机制。方法体外培养786-0细胞,在其中加入不同浓度连翘苷进行干预。MTT法检测细胞生存活力,AO/EB法检测细胞凋亡,划痕实验与Transwell实验分别考察细胞迁移、侵袭能力。Western blotting法检测细胞内PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、FOXO3a、p-FOXO3a、p21、p27、Fasl、Bim、MMP-2及MMP-9蛋白表达情况。结果连翘苷可有效抑制肾癌细胞生长、促进凋亡,干扰细胞周期,上调p21、p27、Fasl及Bim表达水平,与对照组比较差异明显(P0.05、0.01);与对照组比较,不同浓度连翘苷可明显抑制肾癌细胞迁移与侵袭,减少MMP-2、MMP-9合成(P0.05、0.01);同时连翘苷能明显抑制PI3K、Akt、FOXO3a磷酸化(P0.05、0.01),且呈浓度依赖性。结论连翘苷可通过PI3K/Akt信号通路调控786-0细胞凋亡与细胞周期、抑制肾癌细胞生长;同时连翘苷经PI3K/Akt通路可有效削弱肾癌细胞迁移与侵袭能力。     

脑泰方对血红蛋白诱导的大鼠皮质神经元铁超载及过氧化损伤的多靶点干预作用

目的探讨脑泰方对体外血红蛋白(HGB)诱导的大鼠皮质神经元铁超载及过氧化损伤的多靶点干预作用及其机制。方法原代培养新生SD大鼠皮质神经元,采用HGB诱导神经元模拟建立脑出血后神经元铁超载及氧化应激损伤细胞模型;实验设正常组、模型组、空白血清对照组、铁离子螯合剂甲磺酸去铁胺(DFX)组、抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)组和脑泰方含药血清(NTF)组。采用CCK8法检测各组细胞活力;采用Calcein-AM染色法检测各组细胞内铁含量;采用ELISA法检测各组谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX-4)活性及各组上清液中脂质活性氧(lipid ROS)含量;采用高内涵细胞成像分析技术(HCA)检测各组神经元转铁蛋白受体(TfR)、铁调节蛋白2(IRP-2)、膜铁转运蛋白1(Fpn-1)表达。结果与正常组比较,模型组及空白血清对照组神经元细胞活力降低(P0.01),细胞内铁含量、细胞上清液中lipid ROS含量、TfR蛋白及Fpn-1蛋白表达升高(P0.01,P0.05),IRP-2、GSH含量、GPX-4活性降低(P0.01,P0.05)。与模型组比较,DFX组、NAC组和NTF组细胞活力、GSH含量、GPX-4活性升高(P0.01,P0.05),细胞内铁含量、细胞上清液lipid ROS含量降低(P0.05);DFX组及NTF组细胞TfR及IRP-2蛋白表达降低(P0.01,P0.05),Fpn-1蛋白表达升高(P0.01,P0.05)。结论脑泰方可通过减轻HGB诱导的大鼠皮质神经元细胞铁超载及lipid ROS累积,从而提高神经元细胞活力;其作用机制与铁死亡的生物学过程相吻合。脑泰方可能通过对神经细胞铁代谢及抗氧化信号分子的多靶点干预作用,抑制脑出血后神经细胞铁死亡而发挥神经保护作用。