2015─2017年新疆青河县山区动物鼠疫血清学和病原学调查

目的通过鼠疫病原学和血清学的实验检测结果,了解新疆青河县山区存在鼠疫自然疫源地的潜在状况。方法采用鼠疫"四步检验"法分离青河县山区捕获的长尾黄鼠及灰旱獭脏器、自毙动物脏器及骨骼和寄生蚤中的鼠疫菌;间接血凝试验(HA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测动物脏器和寄生蚤悬液中的鼠疫F1抗原;长尾黄鼠、灰旱獭以及牧犬血清中的鼠疫F1抗体。结果经鼠疫"四步检验"和反向间接血凝(RIHA)检验长尾黄鼠脏器552份、灰旱獭脏器4份、自毙长尾黄鼠和灰旱獭脏器及骨骼13份、长尾黄鼠体外寄生蚤583只,均未检出鼠疫菌及F1抗原;检测长尾黄鼠血清552份,IHA法检出阳性1份、滴度1∶2~9,ELISA法检出阳性3份、平均滴度1∶2~8;检测牧犬血清129份,IHA法检出阳性6份、平均滴度1∶2^(3.83),ELISA法检出阳性8份、平均滴度1:26.75;其中牧犬鼠疫F1抗体阳性标本中检出鼠疫IgM抗体阳性2份,平均滴度1∶2^(5.5)。结论新疆青河县山区啮齿类动物间有鼠疫流行迹象,流行区域为花海子地区,存在潜在鼠疫自然疫源地,建议对该区域开展进一步鼠疫疫源性调查。     

胶体金免疫层析法快速检测鼠疫耶尔森菌F1抗体

目的建立检测鼠疫耶尔森菌F1抗体的胶体金标记免疫层析方法。方法胶体金标记纯化鼠疫F1抗原,双抗原夹心法原理制成免疫层析检测试纸条,并对兔、羊、人和黄鼠血清进行检测评价。结果用80份不同动物种属的阴性血清进行检测,未出现非特异性反应,对5份恢复期病人血清、13份免疫兔血清和2份免疫羊血清检测也取得阳性结果,对于8份I HA临界阳性(滴度1∶20)的达乌尔黄鼠血清检出阳性6份。结论建立了可以用于现场快速检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析方法。     

酶标鼠疫F1McAb在酶免疫染色法快速鉴定鼠疫菌中的应用

目的观察酶标鼠疫F1McAb在酶免疫染色法快速鉴定鼠疫菌中的应用效果.方法实验感染鼠疫强毒菌的病死小鼠和处死健康小鼠尸体,20℃以上室温放置,用鼠疫F1McAb酶免疫染色法检测,同时用细菌学检验方法分离鼠疫菌和反向血凝试验(RIHA)检测鼠疫F1抗原.结果直接培养仅从5d内的鼠尸分离检出鼠疫菌,阳性率为53.3%;动物实验检出鼠疫菌的最长时间为8d,阳性率为71.6%.存放13d内,酶免疫染色阳性率为99.1%,RIHA阳性率98.2%,用酶免疫染色法和RIHA检测健康动物腐败脏器全部阴性.以上方法检查鼠疫疫区自毙动物标本12份,酶免疫染色法阳性7份,RIHA阳性6份,动物实验阳性5份,直接培养未获得阳性结果.结论酶免疫染色法检查动物腐败脏器中的鼠疫菌具有较高的敏感性和特异性.     

鼠疫菌F1抗原与假结核菌和钩端螺旋体抗原的交叉性研究

鼠疫菌F_1抗原作为特异性抗原已广泛应用于鼠疫诊断中,WHO推荐的F_1抗原IHA和RIP试验,已作为常规诊断方法,从1973年我们用IHA方法在雷州半岛历史鼠疫区反复从鼠类血清中检出阳性,RIP方法检出2份低滴度阳性血清,但始终没检出鼠疫菌,为了排除F_1抗原与其它细菌有无相关抗原与相应抗体存在交叉反应,我们从1984年～1992年用IHA、RIP、MAT做了多次研究,现将结果报告如下。     

2009—2013年甘肃省嘉峪关市鼠疫监测分析

目的分析2009—2013年甘肃省嘉峪关市鼠疫监测结果,为制定鼠疫防治措施提供科学依据。方法运用描述流行病学方法,对2009—2013年鼠疫监测数据进行统计学分析。结果 2009—2013年共捕获各种动物898只,旱獭密度为0.05只/hm2,染蚤率47.88%,蚤指数1.38;采集旱獭材料203份,分离鼠疫菌4株;采集媒介昆虫材料2 413只,分离鼠疫菌1株;采集旱獭血清189份,F1抗体阳性8份,抗体滴度1∶400~1∶12 800。结论嘉峪关市鼠疫防控形势依旧严峻,需加大宣传和监测力度,密切注意动物间疫情动态,严防人间疫情发生。     

胶体金免疫层析法与双单克隆抗体夹心ELISA检测鼠疫F1抗原的比较

目的比较胶体金免疫层析法（GICA）和双单克隆抗体夹心酶联免疫吸附试验（DMcAbS-ELISA）检测鼠疫F1抗原的敏感性和特异性。方法用GICA试纸条和DMcAbS-ELISA平行检测308份强毒鼠疫耶尔森菌感染鼠脏器标本和327份对照鼠标本,用RIHA微量法同时检测作为参照。结果327份对照鼠鼠疫细菌学检验及GICA,DMcAbS-ELISA和RIHA的F1抗原检测均为阴性,GICA,DMcAbS-ELISA和RIHA在108cfu/mL水平上未发现与近缘假结核耶尔森菌有交叉反应;308只感染鼠样本细菌培养阳性284只,24只样本未分离到鼠疫菌;F1抗原检测GICA阳性287份,DM-cAbS-ELISA阳性280份,RIHA阳性276份,GICA阳性检出率最高93.19%,与DMcAbS-ELISA和RIHA比较,差异均有统计学意义（χ^2=5.14,9.09;P=0.016,0.001）;GICA与DMcAbS-ELISA符合率97.73%（Kappa=0.845）;GICA和DMcAbS-ELISA与RIHA符合率分别是96.43%和98.70%（Kappa=0.774,0.926）;284份细菌培养阳性鼠标本F1抗原检测GICA阳性率是98.59%,高于DMcAbS-ELISA和RIHA,差异有统计学意义（χ^2=4.17,5.14;P=0.031,0.016）;24份细菌培养阴性实验鼠标本F1抗原检测：GICA检出7份阳性,阳性率29.17%,DMcAbS-ELISA检出6份阳性,阳性率25%,RIHA检出3份阳性,阳性率12.5%,GICA高于DMcAbS-ELISA和RIHA,但差异无统计学意义（χ^2=2.25,0;P=0.125,1.000）。结论GICA检测鼠疫F1抗原敏感特异,快速简便,优于DMcAbS-ELISA和RIHA,是鼠疫快速诊断中有应用价值的检测技术。     

马关县鼠疫F1抗体的发现及分析

云南省鼠疫流行历史悠久,据记载,马关县曾于1858～1904年多次发生过鼠疫大流行,属鼠疫远史流行县。在长期的鼠疫监测工作中,1984年从黄胸鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(SPA-血凝,1:40),1985年应用放射免疫沉淀试验(RIP),在同地区的黄胸鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(1:80),1996年从县城食品加工房捕获的2只褐家鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(1只 RIP1:5120,IHA1:40~(++),另1只RIP1:2560,IHA1:20~(++))。由此认为该县近年来曾发生过动物鼠疫流行,应加强鼠疫监测工作,密切监视疫情发展态势,检测结果如下。     

反向血凝抑制试验(RIHI)检测鼠疫F1抗体在疫情监测和疫源地调查中的应用

在鼠疫疫情监测和疫源地调查工作中,将鼠疫 Fl 单克隆抗体致敏红细胞 (FlM_cAb-RBC) 用于反向间接血凝抑制试验 (RIHI),以间接血凝试验为对照,检测鼠疫 Fl 抗体,检测结果用 ELISA 和 SPRIA 验证,非鼠疫疫区6种动物血清1375份,RIHI 全部阴性,IHA 出现假阳性反应89份。鼠疫疫区3种动物血清713份,RIHI 检出 Fl 抗体阳性反应72份,未出现假阳性反应,IHA 检出 F1 抗体阳性反应44份,出现假阳性反应21份,几何平均滴度 RlHl 比 IHA 高2~(1.45)。RIHI 的特异性和敏感性均高于 IHA ,且简便、稳定、快速,是取代 IHA 检测鼠疫 Fl 抗体的理想方法。     

一起炭疽疫情中鼠疫F1抗体胶体金检测阳性分析

目的通过对一起人间皮肤炭疽疫情中患者血清鼠疫F1抗体胶体金阳性分析,为鼠疫诊断提供借鉴。方法炭疽疫情处理过程中对患者血清鼠疫F1抗体进行鼠疫间接血凝试验(IHA)和胶体金检测。结果 2名皮肤炭疽患者2份血清鼠疫F1抗体胶体金检测阳性,鼠疫间接血凝检测试验复判结果显示阴性。结论在其他疫情处理过程中排除鼠疫时,应结合患者临床症状、流行病学调查结果及实验室检测结果综合诊断和分析。     

元江县一起鼠疫暴发流行的调查分析

1992年1～3月,云南省元江县鼠疫自然疫源地间歇69年后在县城爆发了人类鼠疫流行。经病原学和血清学调查,确诊腺鼠疫患者9人,从黄胸鼠体内分离到鼠疫菌4株,查出鼠类脏器、骨髓各1份为鼠疫F1抗原阳性,检出11只褐家鼠为F1抗体阳性。     

固相放射免疫试验检测鼠疫F1抗体

建立了固相放射免疫试验(SPRIA)检测鼠疫F1抗体的方法。被测抗体经F1抗原两次选择结合,提高了检测特异性。检测人和5种非鼠疫疫区动物血清205份,以及假结核菌等6株非鼠疫菌免疫动物血清,全部阴性。检测鼠疫康复人和接种鼠疫苗的7种动物血清8份,IHA和SPRIA全部阳性,放射免疫沉淀(SPA—RIP)有两种动物为阴性结果;阳性反应GMT、SPRIA比IHA高,比SPA—RIP低。试验表明SPRIA检测鼠疫F1抗体,具有良好的特异性和敏感性,操作简便、快速,可检测各种标本。     

土壤保存鼠疫菌F1抗原的试验研究

本文报告利用放射免疫沉淀试验的竞争抑制原理,成功地从实验室保存了五年鼠疫菌的土壤中,检出F1抗原。检出F1抗原量可达340ng/ml。结果表明,该项试验较反向血凝方法敏感。     

犬接种鼠疫菌后的血清鼠疫F1抗体及IgM动态

目的通过覌测犬接种鼠疫菌后鼠疫F1抗体及其IgM动态,推算发生动物鼠疫流行的时间和地点。方法应用ELISA夹心法检测犬鼠疫F1抗体,捕获法检测IgM,两种方法同步检测接种鼠疫菌EVparis株活菌的犬血清。结果犬接种鼠疫菌后第5d,抗鼠疫F1抗体和IgM都出现了阳性反应,IgM显色和滴度第7～9d达到高峰,第15～22d开始快速下降,第46d以后降到阳性标准以下;F1抗体在接种鼠疫菌后第38d显色和滴度达到高峰,第78d仍保持在OD450nm2.700以上和滴度1∶210左右。结论根据ELISA检测犬鼠疫F1抗体和IgM的结果,可推算动物间鼠疫流行的时间和范围,为及时实施防控措施提供参考资料。     

2010～2012年新疆生产建设兵团农六师鼠疫监测结果分析

目的调查分析新疆生产建设兵团农六师沿准噶尔盆地荒漠一带鼠疫疫情,为制定预防控制措施提供参考依据。方法 2010~2012年开展鼠密度、种群构成、鼠体蚤、洞干蚤和血清学监测。结果捕获大沙鼠566只,密度为5.3只/hm2,有效洞群平均鼠密度3.9只/洞群;捕获各类夜行鼠669只,捕获率11.3%;鼠体获蚤2 012只,染蚤率68.0%,蚤指数5.5;探洞64个获蚤73只,指数1.1;分离各类鼠血清材料1 156份,其中F1抗体阳性血清47份。结论大沙鼠和其他各类鼠血清学检出阳性血清,大沙鼠有效洞群平均鼠密度明显降低,提示区域内动物间鼠疫处于高流行状态,应引起各部门的高度重视;利用各种途径开展鼠疫防治工作,严防鼠间鼠疫向人间蔓延。     

胶体金免疫层析法检测鼠疫F1抗体技术的应用及效果评价

目的研究鼠疫胶体金免疫层析法(GICA)快速检测鼠疫F1抗体技术在鼠疫血清学诊断、监测及流行病学调查中的应用及效果评价。方法应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)对比检测190份啮齿动物血清和11份鼠疫免疫血清中鼠疫F1抗体。结果190份动物血清IHA检测结果均为阴性:GICA检测出1份阳性血清,滴度1:10;DAgS-ELISA检测出3份阳性血清,滴度1:4( ) 2份和1:16( )1份。3种方法检测11份鼠疫免疫血清均为9份阳性,但GICA敏感性低于IHA和DAgS-ELISA (GICA与IHA:t=3．257,P<0．05;GICA与ELISA:t=3．625,P<0．01;IHA与ELISA:t=1.437,P>0．05)。201份血清检测结果,GICA与IHA总符合率99．50％,与DAgS-ELISA总符合率99．00％,3种方法检测结果差异无统计学意义(x2=0．5,P>0．05)。结论GICA检测鼠疫F1抗体敏感特异、简便快速,与DAgS-ELISA同样为鼠疫血清学快速诊断和鼠疫监测中有应用价值的检测技术。     

聚合酶链反应在一起疑似人间鼠疫诊断中的应用

目的对青海省海南州同德县河北乡赛羊村一起疑似人间鼠疫材料进行鼠疫耶尔森氏菌F1抗原检测。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术。结果在这起疑似人间鼠疫尸体的淋巴结、肝及脾等脏器中均检测到鼠疫耶尔森氏菌F1抗原。结论本法可用于疑似鼠疫材料的诊断，为疫情的准确判定提供可靠的科学依据。     

滇西纵谷野鼠鼠疫疫源地人群鼠疫F1抗体调查

目的 了解云南野鼠VNUNUMC 疫源地人群鼠疫F1抗体的水平和分布情况.方法 采集野鼠疫源地剑川县石龙村、长乐村的高危人群血清279份,同时采集5个县的非疫区人群血清235份作为对照,采用间接血凝试验进行检测,阳性判定标准为血清滴度≥1:20.结果 剑川县疫区高危人群检出鼠疫F1抗体阳性血清34份,阳性率为12.19%,其中2份为隐性感染,1份鼠疫历史病人血清滴度高达1:640,鼠疫非疫区健康人群血清皆为阴性.结论 此次野鼠鼠疫疫源地人群鼠疫F1抗体调查所检出的血清阳性滴度,可认为是主要由反复接种疫苗形成,但是也发现了少数未接种疫苗的血清阳性者,所以不可忽视该疫源地对人类的威胁,应加大监测和防护力度.     

分泌抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体杂交瘤株的建立

目的应用杂交瘤技术,制备分泌抗鼠疫F1抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法用鼠疫菌F1抗原免疫雌性BALB/c小鼠,检测小鼠血清中的F1抗体,选抗体滴度最高的小鼠用于细胞融合,融合前3天F1抗原经腹腔注射加强免疫1次,然后取其脾脏细胞与处于对数生长期的SP2/0骨髓瘤细胞混合,50%的PEG作为细胞融合剂,HAT培养液选择培养融合后的细胞,间接ELISA法检测细胞培养上清中的F1抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法进行克隆及再克隆。结果获得共计100余株分泌F1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,3株进行了4次克隆化,经8个月保存后抗体分泌稳定。结论应用杂交瘤技术,在云南首次成功制备了3株能稳定分泌抗鼠疫杆菌F1抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,建立了杂交瘤技术的实验程序。     

云南省洱源县鼠疫阳性线索实验室检测分析

目的了解云南省洱源县三营镇永乐村驻地是否处于鼠疫流行期,为做好鼠疫防控工作提供依据。方法2014年5月采用现场调查和实验室检测相结合的方法开展鼠疫调查工作,采用间接血凝试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析(GICA)方法对采集的样本进行鼠疫F1抗原和F1抗体的实验室检测,对死鼠脏器进行鼠疫菌分离培养。结果 3份死鼠脏器未分离出鼠疫菌,F1抗原检测均阴性;128份犬血清、3份鼠血清进行F1抗体检测,IHA均阴性、ELISA阳性3份、GICA阳性5份,两种方法均阳性2份。结论洱源县可能存在鼠疫F1抗体阳性犬,需进一步加强该地区的鼠疫监测工作。     

利用复式PCR技术改进F1抗原基因探针的特异性

鼠疫耶尔森氏菌的F1抗原,是该菌具有高度特异性的抗原。长期以来,鼠疫细菌的鉴别以及鼠疫的诊断一直依靠检出该种抗原和针对该抗原的抗体。近年来,与F1抗原合成与调节有关的基因已被克隆和测序。 随着PCR与探针技术等分子生物学技术的推广,这些技术也被应用于鼠疫的监测与研究。最初,Mc Donaugh等在鼠疫菌pla基因的基础上,发展了一种特异性的探针。其后,国内外均以此基因为基础,发展了利用PCR诊断鼠疫的技术手段。 笔者根据已发表的F1抗原基因序列,用PCR技术扩增出一个249bp的片段。将此片段标记成为探针,并对这一方法的特异性进行了研究。进一步使用这种探针的结果表明,它总带有低度的非特异性。为此,利用复式PCR技术,对这一探针作了改进。