高良姜素对氢醌诱导的白癜风小鼠模型的影响

目的研究不同质量分数高良姜素对氢醌诱导白癜风小鼠模型的影响。方法采用2.5%氢醌涂抹小鼠背部剃毛后的区域以诱导白癜风动物模型,分光光度法测定血清中的酪氨酸酶(TYR)、丙二醛(MDA)水平及胆碱酯酶(CHE)活性,分别采用HE染色法、多巴特殊染色法、Lillie染色法观察不同质量分数高良姜素对小鼠皮肤含黑色素毛囊数、基底层黑素细胞数和含黑素细胞表皮细胞数的影响;采用免疫组化法检测小鼠皮肤中TYR蛋白表达。结果模型组小鼠背部毛发颜色明显较对照组小鼠白,2.5%氢醌诱导后,模型小鼠含黑色素的毛囊数、基底层黑素细胞和含黑素颗粒表皮细胞数量明显较对照组低。经过高良姜素治疗后,小鼠背部毛发颜色由白变黑;与模型组相比,高良姜素治疗组的小鼠皮肤含黑色素毛囊数量明显上升(P<0.01);4.250 mg/kg 90%高良姜素组基底层黑素细胞数和含黑素颗粒表皮细胞数显著上升(P<0.05、0.01),皮肤TYR蛋白表达也显著升高(P<0.05);0.425、4.250 mg/kg 90%高良姜素能够显著升高小鼠血清TYR水平,降低MDA水平及CHE活性(P<0.05、0.01);4.250、42.500 mg/kg 99%高良姜素显著提高基底层黑素细胞数(P<0.01);4.250 mg/kg99%高良姜素能够显著提高含黑素颗粒表皮细胞数(P<0.05),降低血清CHE活性(P<0.01)。99%高良姜素3个剂量均能够升高血清TYR水平(P<0.05、0.01),0.425、4.250 mg/kg 99%高良姜素降低血清MDA水平(P<0.01)。结论不同质量分数的高良姜素均能够改善氢醌诱导的小鼠白癜风症状,其作用机制可能是提高TYR活性,降低机体的MDA和CHE水平,但二者的治疗效果及作用机制存在一定的差异。     

紫草素对白癜风小鼠黑素细胞功能的影响

目的 探讨紫草素对白癜风小鼠黑素细胞功能的影响。方法 小鼠随机分为对照组、模型组、白癜风胶囊组(504 mg/kg)和紫草素低、中、高剂量组(20、40、80 mg/kg),除对照组外其余各组小鼠涂抹2.5%氢醌软膏60 d构建白癜风模型，各组灌胃给药21 d。观察毛发脱色情况，进行毛发脱色评分，HE染色观察小鼠皮肤病理组织学，计数黑色素毛囊及基底层黑素细胞数，ELISA法检测小鼠血清α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)、TYR、IL-23、IL-17水平，流式细胞术检测外周血Th17细胞比例，RT-PqCR法检测小鼠皮肤组织IL-23、IL-17 mRNA表达。结果 对照组小鼠皮肤组织表皮无增生，含有大量黑色素毛囊及基底层黑素细胞。与对照组比较，模型组小鼠皮肤组织表皮增生，涂药部位和非涂药部位毛发脱色评分、血清IL-23及IL-17水平、外周血Th17细胞比例、皮肤组织IL-23及IL-17 mRNA表达升高(P<0.05),黑色素毛囊及基底层黑素细胞数、血清α-MSH及TYR水平降低(P<0.05);与模型组比较，紫草素各剂量组小鼠皮肤组织表皮增生减轻，涂药部位和非涂药部...     

祛风宣痹方抑制气道上皮细胞凋亡的研究

目的：探究祛风宣痹方对气道上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法：体内研究采用OVA诱导哮喘小鼠模型，体外研究采用不同浓度的H₂O₂及祛风宣痹方干预人气道上皮细胞系16HBE 48 h。DCFH-DA活性氧探针检测细胞中活性氧(ROS)的生成水平；MTT(噻唑蓝)法检测细胞活力；Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平；Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平。结果：ROS结果显示，H₂O₂作用后细胞内ROS生成明显增加，祛风宣痹方提取物可降低ROS水平。MTT结果显示，H₂O₂作用后对气道上皮细胞的抑制率随浓度增加而增大(P<0.01),祛风宣痹方水提取物和祛风宣痹方醇提取物均可减少H₂O₂诱导的气道上皮细胞损伤(P<0.01)。Western blot结果提示，H₂O₂刺激后气道上皮细胞Bcl-2蛋白表达水平显著降...     

葡萄籽原花青素抑制小鼠B16-F0黑色素瘤细胞黑色素生成的影响

目的:研究葡萄籽原花青素对小鼠B16-F0黑色素瘤细胞黑色素生成的抑制作用,并对其机理进行初步探究。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测小鼠B16黑色素瘤细胞增值率;左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶活;Na OH裂解法测定黑色素合成;分别采用RT-PCR法和Western-blotting法检测B16-F0细胞中TYR、TRP-1、TRP-2mRNA和蛋白表达水平。结果:葡萄籽原花青素显著抑制B16黑色素瘤细胞的增殖,且与浓度和作用时间相关;12.5~200μg/ml浓度范围的葡萄籽原花青素显著抑制细胞酪氨酸酶活性及黑色素生成。当葡萄籽原花青素浓度为200μg/ml作用时间为48 h时,对B16-F0细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成抑制效果最佳。此外,与对照组相比,经浓度为100μg/ml和200μg/ml,作用时间为48 h的葡萄籽原花青素处理,B16-F0细胞内TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA和蛋白表达水平显著降低。结论:葡萄籽原花青素抑制B16黑色素瘤细胞的增殖及黑色素的合成,其机制可能是通过抑制TYR、TRP-1、TRP-2的表达,进而抑制酪氨酸酶活性实现的。     

补骨脂素对A375细胞黑素合成及ER/MAPK信号通路调控机制探讨

目的:探讨补骨脂素对A375细胞黑素含量、酪氨酸酶活性的影响及作用机制。方法:以密度2×105个/孔的细胞数接种于6孔板中,将细胞分为空白组、雌二醇组、补骨脂素组、补骨脂素+雌激素受体(ER)阻断剂组(ICI182780)(浓度分别为1×10-3,1,1μmol·L~(-1))。采用Na OH裂解法、多巴醌氧化法检测黑素含量及酪氨酸酶活性;蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法测定ER/丝裂原激活的蛋白激酶(ER/MAPK)通路中关键蛋白激酶p38,c-Jun氨基末端激酶(JNK),细胞外信号调节激酶2(ERK2)和小眼畸形相关转录因子(MITF),多巴氧化法检测酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)的蛋白含量及相应mRNA表达。结果:与空白组比较,补骨脂素组对A375细胞中的黑素合成及TYR活性具有显著抑制作用(P0.01),对A375细胞中雌激素受体β(ERβ)蛋白的表达具有明显的抑制作用(P0.05),对p38 MAPK,ERK2,JNK的蛋白表达极显著的抑制作用(P0.01),对MITF,TYR,TRP-1,TRP-2的蛋白表达极显著的抑制作用(P0.01),对ERK2,p38 MAPK,MITF,TRP-1 mRNA表达显著被抑制(P0.01);与补骨脂素组比较,ICI182780能够逆转ERβ,ERK,MITF,TYR,TRP-1的蛋白表达(P0.01)及p38MAPK,JNK,TRP-2的蛋白表达(P0.05),同时能显著阻断补骨脂素对ERK2,p38MAPK,MITF,TRP-1 mRNA表达作用(P0.01)。结论:补骨脂素通过ER/MAPK信号通路下调MITF和TYR,TRP-1,TRP-2的表达量,从而减少黑素合成。     

天然产物对毛发色素的调节作用研究进展

毛发的颜色不仅受年龄、环境因素的影响,还受到众多因子的调控,其中主要有阿黑皮素原(POMC)、黑色素细胞刺激素(α-MSH)、黑色素1受体(MCIR)、小眼畸形相关蛋白因子(MITF)、酪氨酸酶(TYR)、酪氨酸相关蛋白酶1(TRP-1)、酪氨酸相关蛋白酶2(TRP-2)、刺鼠信号蛋白(ASIP)等。毛发颜色的异常常被认为是衰老的特征,给患者带来巨大的心理压力,但相关的治疗药物目前尚属空白。总结了天然药物对毛发颜色的影响程度和作用方式,以期阐明天然药物在治疗须发早白方面可能的作用途径及靶点,为从天然产物中寻找发掘新的药物奠定基础。     

不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及相关基因表达的影响

目的研究不同质量分数高良姜素对人黑色素瘤A375细胞黑素合成及酪氨酸酶基因(TYR)、酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1)、酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT法测定细胞增殖,左旋多巴氧化法测定酪氨酸酶活性,NaOH裂解法测定黑素合成,采用RT-PCR法、Western-blotting法检测A375细胞中TYR、TRP-1、TRP-2mRNA和蛋白表达。结果 90%高良姜素浓度为1.0～10.0μmol/L对A375细胞具有显著的促增殖作用(P<0.01),而在浓度为20.0μmol/L时,无促A375细胞增殖作用(P>0.05),浓度为0.5～20.0μmol/L均能促进酪氨酸酶活性的升高(P<0.05、0.01),浓度为1.0～20μmol/L具有显著促进黑素升高的作用(P<0.05、0.01),且随着浓度的增加呈增强趋势;99%高良姜素浓度在0.5～20.0μmol/L具有显著促进A375细胞增殖和酪氨酸酶活性升高作用(P<0.01),而对黑素合成无促进作用(P>0.05)。90%高良姜素对TYR、TRP-1 mRNA表达基本无影响,1.0μmol/L时上调TRP-2 mRNA表达(P<0.05);99%高良姜素能上调TYR、TRP-1及TRP-2 mRNA表达;二者均促进TYR蛋白表达,但对TRP-1及TRP-2蛋白表达基本无影响。结论 99%高良姜素能够促进A375细胞增殖及酪氨酸酶活性升高,可能是通过上调TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达和TYR蛋白表达实现的;而90%高良姜素能够显著促进细胞增殖、酪氨酸酶活性升高及黑素增加,表明90%高良姜素能够促进黑素的合成,但不是通过调节TYR、TRP-1、TRP-2的mRNA表达,可能是通过促进TYR蛋白表达实现的。     

异鼠李素对H2O2诱导的肠上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:评价异鼠李素对H₂O₂诱导的大鼠肠上皮细胞IEC-6氧化应激损伤的保护作用及机制。方法:MTT实验筛选异鼠李素对IEC-6细胞的安全作用浓度用于评价抗H₂O₂诱导的氧化应激损伤功效。设正常对照组、H₂O₂组、N-乙酰半脱氨酸(NAC)组(10μmol/L)、异鼠李素低剂量组(20μmol/L)、异鼠李素中剂量组(40μmol/L)及异鼠李素高剂量组(100μmol/L)。正常对照组常规培养，H₂O₂组用500μmol/L H₂O₂处理，NAC及异鼠李素组分别用10μmol/L NAC,20、40、100μmol/L异鼠李素预处理细胞相应时间后，用500μmol/L H₂O₂继续培养。流式细胞术检测细胞凋亡及ROS水平，试剂盒检测细胞中MDA含量及SOD活性，Western blot检测细胞中Nrf2/HO-1、PI3K/...     

H2O2对北苍术次生代谢影响及机制分析

目的：探讨外源H₂O₂对北苍术次生代谢的影响及其机制。方法：采用5.0、1.0、0.2、0.04 mmol·L^-1 H₂O₂溶液和清水处理北苍术鲜根,比较北苍术内活性氧含量、抗氧化酶活性、次生代谢产物关键酶活性及次生代谢产物含量之间的关系。结果：在外源H₂O₂的作用下,北苍术鲜根中活性氧和丙二醛(MDA)的含量在第4天有显著升高,并在第6～8天恢复至正常水平。超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性均呈现先上升后下降的趋势,SOD、CAT和POD的活性分别在第4、4～6、2～4天达到高峰。北苍术次生代谢产物关键酶羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)活性均有显著提升,且在不同浓度H₂O₂处理中,0.2 mmol·L^-1 H₂O₂处理组次生代谢产物合成关键酶活性提高幅...     

外源H2O2处理对药用大麻中大麻素含量的影响

目的：通过外源活性氧调节大麻的次生代谢,提高大麻二酚(CBD)含量,为优质药用大麻生产提供新的技术。方法：在大麻始果期采摘大麻植株顶端苞片,分别采用清水和20、200、2000μmol·L^–1过氧化氢(H₂O₂)对大麻苞片进行喷洒处理,连续4 d分析大麻体内活性氧含量、抗氧化酶活性、大麻素生物合成途径关键基因表达量及大麻素类成分含量的变化规律。结果：外源H₂O₂使大麻苞片中的H₂O₂、O₂^·–及丙二醛(MDA)含量均有所提升。20μmol·L^–1 H₂O₂处理使大麻超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力提升最大,在处理第1～2天达到峰值。过氧化物酶(POD)在H₂O₂处理第3天达到峰值。外源H₂O₂能够明显提升聚酮合酶、四氢大麻...     

黄芪甲苷对H2O2诱导心肌细胞凋亡及相关调控蛋白表达的影响

目的：研究黄芪甲苷对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡及相关调控蛋白Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax的影响。方法：培养乳大鼠心肌细胞,随机分为6组,正常对照组、H₂O₂模型组、黄芪甲苷(20、40、80、100 mg/L)组,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力,检测黄芪甲苷预干预对H₂O₂诱导心肌细胞凋亡的影响;各组分别采用免疫组化法和Western-blotting法检测黄芪甲苷预处理对心肌细胞Hsp-70、Caspase-3、Bcl-2、Bax表达的影响。结果：与正常对照组相比较,模型组LDH活力明显提高(P<0.01),SOD活力明显降低(P<0.01);黄芪甲苷不同浓度组与H₂O₂模型组比较,LDH活力明显降低(P<0.05或P<0.01),SOD活力明显提高(P<0.01),且随药物浓度的增加,SOD活力也随着增高,LDH活力也随着降...     

马尾松树皮提取物对小鼠B16黑色素瘤细胞中黑色素生成抑制效果及其机制的初步研究

目的探讨马尾松树皮提取物(Pinus massoniana bark extract,PMBE)抑制小鼠B16黑色素瘤细胞中黑色素的生成效果及其分子机制。方法 10～50μg/ml的PMBE与小鼠B16黑色素瘤细胞共培养后进行各项细胞学研究:MTT法检测PMBE对细胞的毒性;以左旋多巴为底物测定PMBE对酪氨酸酶(TYR)活性的抑制作用;DCM法检测PMBE对细胞ROS的清除能力;比色法测定PMBE对细胞内黑色素生成的抑制效果以及对细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、GSH/GSSG的影响;RT-PCR检测酪氨酸酶及其相关蛋白1(TRP-1)和2(TRP-2)在mRNA水平表达量的影响。结果 PMBE对小鼠B16黑色素瘤细胞的增殖无明显影响,并可显著减少细胞内的黑色素含量。另外,PMBE对活性氧具有很强的清除能力,同时可上调细胞内GSH/GSSG比率,从而增强细胞的还原力。PMBE还对酪氨酸酶活性表现出了一定的抑制效果,但这种抑制却并不发生在mRNA水平。结论 PMBE对小鼠B16黑色素瘤细胞内黑色素生成具有显著抑制效果并主要通过降低酪氨酸酶活性和清除活性氧来实现。     

小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关基因表达的影响

目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(tyrosinase,TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1,TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(tyrosinase related protein-2,TRP-2)mRNA表达的影响。方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高质量浓度分别为0.1,1,2.5 g·L-1用于实验,逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)法检测B16细胞中TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达。结果:与正常组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1,TRP-2的基因表达、蛋白合成3方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现。     

白藜芦醇介导AMPK/mTOR信号通路调控线粒体自噬缓解小鼠精原细胞氧化应激损伤和凋亡

目的 观察白藜芦醇(resveratrol, RES)是否通过腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(amp-activatedproteinkinase/mammalian target of rapamycin, AMPK/mTOR)信号通路调控线粒体自噬缓解小鼠精原细胞(Gc-1 spg)氧化应激损伤。方法 设置空白对照组(Control)、过氧化氢组(H₂O₂)、H₂O₂+RES组、H₂O₂+RES+AMPK抑制剂(Compound C,CC)组,各组给予相应处理后。CCK-8检测细胞活力,试剂盒检测过氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽过氧化物(glutathione peroxidase, GSH-PX)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)SOD、M...     

如意黑白散对白癜风模型小鼠皮损组织PD-1/PD-L1信号通路的影响

目的 探讨如意黑白散治疗白癜风的可能作用机制。方法 将24只C57BL/6小鼠随机分为空白组,模型组及如意黑白散大、小剂量组,每组6只。除空白组外其余各组采用氢醌外涂构建白癜风动物模型。造模后如意黑白散大、小剂量组灌胃如意黑白散7.02、2.34 g/kg,空白组与模型组予10 ml/kg生理盐水灌胃,每日1次,各组均给药36天。给药结束后肉眼观察皮损情况,HE染色观察皮损组织黑色素含量,免疫组化测定皮损组织中CD3⁺、CD8⁺T细胞表达;免疫荧光染色测皮损组织中程序性死亡受体1(PD-1)表达;RT-PCR法检测皮损组织中细胞程序性死亡配体1 (PD-L1) mRNA表达;ELISA法检测血清超氧化物歧酶(SOD)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、酪氨酸酶(TYR)含量。结果 与空白组比较,模型组小鼠皮肤苍白,皮损组织HE染色后镜下可见黑色素含量明显减少,皮损优良率降低,表皮和毛囊周围细胞黑色素颗粒明显减少,皮肤组织中CD3⁺、CD8⁺T细胞表达显著增加,PD-L1 mRNA、PD-1表达下降,TYR...     

活血胶囊抑制H2O2诱导的小鼠主动脉平滑肌细胞衰老的研究

目的 研究活血胶囊对H₂O₂诱导的小鼠主动脉平滑肌细胞(mASMC)衰老的抑制作用及分子机制。方法 (1)实验分为对照组、活血胶囊150μg/mL组、活血胶囊300μg/mL组、活血胶囊750μg/mL组,WST-1法检测各组细胞活力。(2)实验分为对照组、H₂O₂组、活血胶囊+H₂O₂组,采用SA-β-gal染色法观察细胞衰老情况,采用qRT-PCR法检测细胞衰老相关基因p21和衰老相关分泌因子细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-6(IL-6)及沉默信息调节蛋白1(SIRT1)mRNA表达量,ELISA法检测细胞培养上清中ICAM-1、IL-8、IL-6水平,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果 活血胶囊150μg/mL组、活血胶囊300μg/mL组细胞活力与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),活血胶囊750μg/mL组明显高于对照组(P<0.05)。SA-β-gal染色显示,H₂     

人参皂苷Rg1对心肌细胞氧化应激损伤的抑制作用

目的 通过构建H₂O₂诱导的H9c2细胞氧化应激模型,观察人参皂苷Rg₁对氧化应激的抑制作用,并探讨mi R-499c是否参与人参皂苷Rg₁抑制氧化应激的作用机制。方法 采用600μmol/L的H₂O₂诱导H9c2细胞氧化应激模型,给予人参皂苷Rg₁预处理24 h,检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化;采用Western blotting检测凋亡相关蛋白表达。采用Lipofiter 3.0将miR-499c转染至H9c2细胞再制备H₂O₂诱导的氧化应激模型,给予人参皂苷Rg     

基于VEGF/p38MAPK研究羟基红花黄色素A对过氧化氢诱导人肝细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow A,HSYA)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的人肝细胞LO2氧化损伤的保护作用及其机制。方法 利用H₂O₂诱导并建立了LO2细胞氧化损伤模型。将细胞分为对照组(Control group, CG)、H₂O₂损伤模型组(Model group, MG)、HYSA(0.125,0.25,0.5,1mg·mL^-1)干预组(MG+0.125,0.25,0.5,1mg·mL^-1HYSA)。分别利用MTT法、流式细胞术测定了细胞活力和凋亡程度；利用ELISA测定细胞内ROS、LDH、SOD、GSH-Px、MDA和CAT的活性及含量；Hoechst染色进一步观察细胞核凋亡状态；通过qRT-PCR技术测定细胞内VEGF、p38MAPK和凋亡相关蛋白的mRNA表达量；采用Western blotting法检测凋亡相关因子及VEGF/p38MAPK通路的蛋白表达。结...     

补骨脂素对A375细胞黑素合成的影响及p38-MAPK信号通路调控机制的研究

目的:研究补骨脂素对黑素合成中关键限速酶、MAPK信号通路的调控作用机制。方法:通过NaOH裂解法、多巴醌氧化法测得黑素含量及酪氨酸酶活性,使用蛋白免疫印迹法(Western Blot)和实时荧光PCR法测MAPK通路中关键蛋白激酶和MITF、TYPE、TRP-1、TRP-2、p38、P-p38及加入p38信号通路阻断剂后上述蛋白及p38、MITF、TRP-1 mRNA的表达。结果:补骨脂素具有类雌激素样作用,其与空白对照组比较能抑制细胞黑色素含量和酪氨酸酶活性,显著降低MITF、TYRE、TRP-1、TRP-2、p38、P-p38蛋白表达及p38、MITF、TRP-1 mRNA的表达(P0.01)。而p38信号通路阻断剂(SB203580)的加入反转了补骨脂的抑制作用。结论:补骨脂素可通过p38-MAPK信号通路抑制A375细胞黑素生成。