血清长链非编码RNA生长阻滞特异性基因6反义RNA1与冠状动脉粥样硬化病变程度及稳定性的相关性

目的 检测冠状动脉粥样硬化（CAS）患者血清长链非编码RNA生长阻滞特异性基因6反义RNA1(lncRNA GAS6-AS1)的表达水平，分析其与CAS病变程度及稳定性的关系。方法选取2020年2月至2021年8月期间在武汉市汉口医院接收的124例CAS患者为CAS组，同期在我院体检的健康者124例为对照组；检测并比较各组血清中lncRNA GAS6-AS1和白介素-6(IL-6)的表达水平，分析CAS患者血清lncRNA GAS6-AS1与IL-6表达水平、Gensini积分的相关性。结果 与对照组相比，CAS组血清lncRNA GAS6-AS1的表达水平降低，IL-6表达水平升高（t=43.614、23.404,P <0.05）；稳定性、不稳定性心绞痛和急性心肌梗死患者中lncRNA GAS6-AS1表达水平依次降低，IL-6表达水平依次升高（F=6.821、7.495,P <0.05）；单支、双支、多支病变患者血清lncRNA GAS6-AS1表达水平依次降低，IL-6表达水平依次升高（F=12.946、13.023,P <0.05）；轻、中、重度病变组血清ln...     

miR-29b过表达对NIH/3T3细胞直接靶向作用及细胞功能的影响

目的:研究miR-29b过表达对NIH/3T3细胞直接靶向作用及其细胞功能变化的影响。方法:将活化的NIH/3T3细胞,分为空白对照(Control)组、miR-29b mimics组、miR-Negative Control(miR-NC)组、TGF-β1组、TGF-β1+miR-29b mimics组、TGF-β1+miR-NC组。采用免疫荧光技术、RT-PCR及Western Blot检测miR-29b、COL1α1、COL3α1、TIMP-1、MMP-9、HSP47、α-SMA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞增殖。结果:miR-29bmimics组与miR-NC组和Control组比较,miR-29b表达上调,COL1α1及COL3α1mRNA及蛋白表达下调(P0.05)。TGF-β1+miR-29b mimics组与TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组比较,miR-29b表达明显上调(P0.01),COL1α1、COL3α1、TIMP-1、HSP47、α-SMA mRNA及蛋白均明显下降,MMP-9 mRNA及蛋白均明显升高(P0.05)。TGF-β1+miR-29b mimics组与TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组比较早期凋亡明显增多,而细胞活力明显下降,与Control组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:COL1α1及COL3α1是miR-29b的直接靶向调控分子,体外上调miR-29b表达可抑制TGF-β1致纤维化相关因子表达及细胞活力,并可促进细胞凋亡,为进一步研究体内肝纤维化奠定了基础。     

3-甲基腺嘌呤对转化生长因子-β诱导大鼠肝脏星形细胞株HSC-T6活化及自噬的影响观察

目的 观察3-甲基腺嘌呤（3-MA）对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的大鼠肝星形细胞株HSC-T6活化及自噬的影响。方法 取对数生长期的HSC-T6细胞分为空白组、TGF-β+PBS组、TGF-β+3-MA组。TGF-β+3-MA组细胞加入浓度为2 ng/mL TGF-β培养72 h后加入3-MA(0.5 mg/mL)处理24 h,TGF-β+PBS组细胞加入浓度为2 ng/mL TGF-β培养72 h后加入等量PBS处理24 h,空白组加入等量PBS处理,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞活化标志物α-SMA、TGF-β mRNA和自噬标志物LC3、Beclin-1、Atg5 mRNA,采用Western blotting法检测各组细胞活化标志物α-SMA、TGF-β蛋白和自噬标志物LC3、Beclin-1、Atg5蛋白。结果 TGF-β+PBS组、TGF-β+3-MA组细胞活化标志物α-SMA、TGF-β mRNA和蛋白均高于空白组,且TGF-β+3-MA组均低于TGF-β+PBS组（P均<0.05）。TGF-β+PBS组、TGF-β+3-MA组细胞自噬标志物LC3、B...     

lncRNA DLX6-AS1靶向miR-195-5p调控前列腺癌细胞增殖、侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(lnc RNA)DLX6-AS1对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用机制。方法 qRT-聚合酶链反应(PCR)检测前列腺癌细胞PC3、正常前列腺上皮细胞RWPE-1中DLX6-AS1、miR-195-5p的表达;将si-NC组(转染si-NC)、si-DLX6-AS1组(转染si-DLX6-AS1)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-195-5p组(转染miR-195-5p mimics)、si-DLX6-AS1+anti-miR-NC组(共转染si-DLX6-AS1和anti-miR-NC)、si-DLX6-AS1+anti-miR-195-5p组(共转染si-DLX6-AS1+anti-miR-195-5p)用脂质体法转染至PC3细胞;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光活性。结果 与正常前列腺上皮细胞RWPE-1相比,前列腺癌细胞PC3中DLX6-AS1的表达显著上调,miR-195-5p的表达显著下调(P<0.05);抑制DLX6-AS1、过表达...     

TGF-β1对大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期和胶原分泌的影响

目的观察TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响。方法采用MTT法检测细胞增殖;使用流式细胞仪检测细胞周期;采用荧光定量RT-PCR法检测SMAD3、c-myc、cdk-2、cyclinE、EGF、HGF、Bcl-2、NF-κB、MMP1、MMP9、MMP14、TIMP-1、PAI-1、α-SMA、COLⅠ及COLⅢ等基因mRNA水平;采用ELISA法检测细胞培养液COLⅠ、COLⅢ和α-SMA含量。结果与对照组比,TGF-β1处理24h及36h时,细胞形态及生长状况均无明显变化;在24h和36h时,TGF-β1处理组细胞G0/G1期细胞比率均减少(24h:57.3±8.5%vs 60.6±9.7%;36h:53.0±2.2%vs 56.6±5.0%),S期细胞比例略高(24h:30.6±7.2%vs26.4±10.1%;36h:35.2±3.7%vs 30.8±2.5%),但差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β1处理组SMAD3、c-myc、cdk2、cyclin E、EGF、Bcl-2、NF-κB、TIMP1、PAI-1、α-SMA及COLⅠmRNA在24h和36h表达均上调,HGF、MMP1、MMP9、MMP14及COLⅢmRNA在24h时表达下调,36h时表达上调;TGF-β1处理组HSC-T6细胞分泌COLⅠ[24h:(63.0±7.4ng/ml vs 33.2±10.8 ng/ml,P<0.05;36h:58.5±6.0ng/ml vs 42.2±6.3ng/ml,P<0.05];α-SMA[24h:20.6±2.6ng/ml vs 4.2±0.7ng/ml,P<0.05;36h:59.7±14.6ng/ml vs 36.8±5.6ng/ml,P<0.05)均显著增加。结论 TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6显示了促增殖作用,并能促进肝纤维化相关胶原的分泌。     

间充质干细胞外泌体对体外肝星状细胞增殖和活化的影响

目的 探讨间充质干细胞来源的外泌体(MSCs-Exo)对人肝星状细胞系LX-2细胞增殖及活化的影响。方法 取MSCs-Exo,在透射电子显微镜下观察。取LX-2细胞,分为对照组、5 μg/L、10 μg/L和20 μg/L转化生长因子-β1(TGF-β1)处理组,采用RT-PCR和Western blot法检测细胞α-SMA和COL1A1 mRNA及其蛋白表达。取TGF-β1诱导活化的LX-2细胞,以50 μg/mL、100 μg/mL和200 μg/mL MSCs-Exo干预24 h,采用MTT法检测细胞增殖。结果 经电镜观察及粒径分析表明,实验所用MSCs-Exo符合外泌体的形态特征;实验所用MSCs-Exo阳性标志蛋白CD9和CD63阳性,而GM130蛋白阴性;经TGF-β1诱导活化的LX-2细胞α-SMA和COL1A1 mRNA水平及其蛋白表达均显著升高;当TGF-β1诱导浓度为20 μg/L时,细胞α-SMA和COL1A1 mRNA及其蛋白表达量最高;与对照组比,MSCs-Exo-100组和MSCs-Exo-200处理细胞增殖活力显著降低(均P<0.0001);50 μg/mL、100 μg/mL和200 μg/mL MSCs-Exo作用TGF-β1诱导活化的LX-2细胞α-SMA mRNA水平和COL1A1 mRNA水平较对照组显著降低(P<0.01),细胞α-SMA和COL1A1蛋白水平也较对照组显著降低(P<0.0001);MSCs-Exo-100和MSCs-Exo-200处理的LX-2细胞增殖活力较对照细胞显著降低(均P<0.0001)。结论 MSCs-Exo可以抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞增殖和活化,其应用研究值得期待。     

CCl4诱导的肝纤维化小鼠和HSC-T6细胞miR-122水平变化及其意义探讨*

目的 研究微小RNA(miR)-122在肝星状细胞活化/增殖及肝纤维化发生过程中的水平变化及其可能的作用机制。方法 建立CCl₄诱导的C57BL/6小鼠肝纤维化模型,以10 ng/ml转化生长因子-β1(TGF-β1)处理HSC-T6细胞,分别在小鼠体内和肝星状细胞转染miR-122 激动剂和miR-122模拟物以过表达miR-122。采用RT-PCR和Western-blot法检测组织和细胞miR-122、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)和血小板衍生生长因子(PDGF)表达,采用CCK-8法检测HSC-T6细胞增殖。结果 模型组小鼠肝组织α-SMA表达水平显著高于对照组(9.92±2.12对1.12±0.54,P＜0.01),而miR-122水平显著低于对照组(0.95±0.31对2.07±0.28,P＜0.01);在CCl₄诱导的肝纤维化小鼠,miR-122激动剂转染组肝组织miR-122水平显著高于miR-122激动剂对照组(6.27±1.73对2.78±0.21,P ＜ 0.01);miR-122 激动剂转染组肝组织α-SMA、I型胶原、TIMP-1和PDGF蛋白水平显著下降;在TGF-β1处理的HST-T6细胞,随着处理时间的延长,肝星状细胞α-SMA水平逐渐升高(0h:0.61±0.02,12 h:0.69±0.05, 24 h:0.75±0.01,48 h:1.01±0.03,P＜0.05),而miR-122水平随TGF-β1处理时间的延长而逐渐下降(0 h:0.72±0.05,12 h:0.45±0.01, 24 h:0.37±0.03,48 h:0.29±0.08, P＜0.05);与miR-122 阴性对照转染组比,miR-122模拟物转染组细胞miR-122水平显著增加(178.45±30.62对12.18±2.39,P ＜0.01);Western Blot检测发现miR-122模拟物转染组细胞α-SMA蛋白表达水平显著下调;采用TGF-β1处理HST-T6细胞,与miR-122 阴性对照转染组比,miR-122 模拟物转染组细胞增殖活力显著降低(P＜0.05)。结论 肝纤维化组织细胞miR-122水平下调,而过表达miR-122可抑制肝星状细胞的活化和增殖,从而可能抑制肝纤维化的发生和发展。     

AM 12质粒对体外肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的观察AM12质粒(含HBV3.2kb全基因组)对体外培养的人近端肾小管上皮细胞表型转化的作用。方法以体外培养的人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)为对象,以AM12质粒转染HK-2细胞为转染组,以正常HK-2细胞作为阴性对照组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的浓度。用免疫组织化学检测角蛋白(CK)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。结果转染组TGF-β1为(283.85±61.12)pg/ml,高于对照组(210.28±47.21pg/ml)(P0.05),肾小管上皮细胞免疫组化染色显示CK减弱,α-SMA增强。结论HBV-DNA质粒转染人肾小管上皮细胞可引起TGF-β1分泌增加,并导致肾小管上皮细胞转分化。     

LncRNA DLX6-AS1靶向miR-374a-3p调控糖尿病患者创面愈合的分子机制

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)DLX6-AS1靶向miR-374a-3p对糖尿病(DM)患者创面愈合的影响。方法 将人微血管内皮细胞(HMECs)分为对照(NC)组、高糖(HG)组,小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)+HG组(转染si-NC后用HG处理)、si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染si-LncRNADLX6-ASI后用HG处理)、miR-NC+HG组(转染miR-NC后用HG处理)、miR-374a-3p+HG组(转染miR-374a3p后用HG处理)、anti-miR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1+HG组((转染imR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1后用的HG处理)、anti-miR-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染anti-miR-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG后用HG处理)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测DM患者(DM组)和正常人(对照组)创面组织中miR-374a-3p和LncRNADLX6-AS1表达水平。CCK-8法检测细胞增...     

敲减lncRNA BAIAP2-AS1对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的 探讨敲减长链非编码RNA(lncRNA)BAIAP2反义RNA 1(BAIAP2-AS1)对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法 体外传代培养胶质瘤细胞系A172、LN229、U251及正常人星形胶质细胞系NHA。取传3代、对数生长期细胞,采用RT-qPCR法检测各细胞中微小RNA-491-5p(miR-491-5p)、BAIAP2-AS1、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）mRNA表达,选择lncRNA BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA相对表达量变化较显著的胶质瘤细胞进行后续实验。取上述胶质瘤细胞,随机分为空白对照组、BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1 shRNA+NC inhibitor组,BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA、NC shRNA,BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1shRN...     

MiR-125b对心肌梗死后成纤维细胞的调控机制研究

目的探讨微小核糖核酸125b(miR-125b)对成人心脏成纤维细胞(HCF-a)合成胶原、增殖、活化、迁移、凋亡的调控作用及对转化生长因子β1(TGF-β1)通路的影响。方法体外培养HCF-a细胞,分为空白对照组和miR-125b模拟物转染组。采用RT-PCR和Western blot法检测胶原-Ⅰ、胶原Ⅲ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3基因和蛋白表达情况;采用MTT法检测HCF-a细胞增殖情况;采用Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与空白对照组相比,miR-125b过表达可明显上调Col-Ⅰ和Col-Ⅲ、α-SMA m RNA和蛋白的表达,促进细胞增殖、迁移和凋亡(P0.05)。另外,经RT-PCR检测,与空白对照组比较,miR-125b过表达可明显促进TGF-β1 m RNA的表达水平(P0.05);经Western blot检测,与空白对照组比较,miR-125b过表达对HCF-a细胞Smad2/Smad3蛋白磷酸化水平均有明显上调作用(P0.05)。结论Mi R-125b可以通过调控TGF-β1/Smad通路参与心肌纤维化进程。     

AdIL-10对肝星状细胞α-SMA、TGF-β1及TNF-α表达的影响

目的应用携带大鼠白介素-10（IL-10）基因的重组缺陷型腺病毒（AdIL-10）感染原代培养的大鼠肝星状细胞（HSC），通过体外实验观察外源性大鼠IL-10基因对HSC中α-SMA、TGF-β1和TNF-α表达的影响。方法以胶原酶原位灌注、密度梯度离心法分离大鼠原代HSC，并用AdIL-10感染HSC（同时设AdGFP对照组及正常对照组），分别采用RT-PCR法和Western Blot法检测感染后HSC中IL-10 mRNA及蛋白水平的表达；Westem Blot法检测HSC中转化生长因子-β1（TGF-β1）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达；免疫组织化学法检测α-SMA在HSC中的表达。运用图像处理系统对结果加以分析。结果感染AdIL-10的HSC中IL-10的mRNA及蛋白水平均较对照组上调（P〈0．001）；而其表达的TGF-β1、TNF-α及α-SMA与对照组相比明显降低（P均〈0．001）；正常对照组和AdGFP对照组中上述指标的表达均无明显差异（P均〉0．05）。结论外源性大鼠IL-10基因导人大鼠HSC后可能通过影响TGF-β1及TNF-α的表达而抑制HSC的活化。     

PAI-1引起2型糖尿病合并NAFLD小鼠肝脏炎性反应和纤维化的机制研究

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)对2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝脏脂质沉积,炎性反应,纤维化等的影响。方法以C57BL/KSJ-Lepdb雄性小鼠作为T2DM合并NAFLD组(db/db组),同周龄C57BKS db/m雄性小鼠作为对照组(db/m组)。采用苏木素-伊红染色,油红О染色等方法检测小鼠肝组织切片脂质沉积;采用ELISA检测肝组织甘油三酯含量。以小鼠正常肝细胞NCTC1469作为研究对象,分为5组:对照组给予25 mmol/L葡萄糖(NG组)高渗对照组给予25 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇(HMA组)、高糖高脂组给予50mmol/L葡萄糖+0.75 mmol/L棕榈酸(HG+PA组)、高糖高脂+RNA干扰对照组(HG+PA+Si-NC组)用NC siRNA瞬时转染细胞并给予高糖高脂干预,高糖高脂+PAI-1沉默组(HG+PA+Si-PAI-1组)用PAI-1的siRNA瞬时转染细胞并给予高糖高脂干预。采用实时定量PCR和Western印迹方法检测炎性因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β),肝纤维化相关指标转化生长因子-B(TGF-3),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Col I)以及PAI-1的表达情况。结果与db/m组相比,db/db组小鼠肝组织中出现明显脂质聚集和纤维组织增生,甘油三酯含量增加,且MCP-1,IL-1β、TGF-β,a-SMA,ColⅠ和PAI-1的mRNA和蛋白水平均明显上调(均P<0.05)。与NC组细胞相比,HG+PA组MCP-1、IL-1β、TGF-β、α-SMA、Col Ⅰ、PAI-1表达量均明显上调(均P<0.05);与HG+PA组相比,HG+PA+si-PAI-1组PAI-1、MCP-1、IL-β、TGF-β、α-SMA和ColⅠ等表达量均明显下调(均P<0.05)。结论T2DM合并NAFLD小鼠模型肝组织中PAl-1表达明显增加,抑制PAI-1表达可明显改善肝组织炎性反应和纤维化水平。     

miR-133a-3p重组腺相关病毒的构建及抑制LX-2细胞α-SMA基因表达

目的构建miR-133a-3p重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus, rAAV)过表达载体并转染肝星状细胞,鉴定其转染及干预作用。方法体外培养肝星状细胞株LX-2细胞,试验分为DMEM对照组,AAV8-Scrambled对照组,AAV8-miR-133a-3p组,应用qRT-PCR法检测miR-133a-3p转染表达量,检测胶原蛋白(COL1A1)、-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)和TGF-β/Smad信号通路基因的表达量。结果重组腺相关病毒成功构建并转染LX-2细胞,AAV8-miR-133a-3p转染LX-2细胞组的miR-133a-3p相对表达量为11 000±343.10,与DMEM对照组比较差异有统计学意义(t=32.07,P0.01)。AAV8-miR-133a-3p转染组与DMEM组α-SMA mRNA的相对表达量分别为0.42±0.06 vs 1.00±0.09(t=5.72,P0.05),COL1A1 mRNA的相对表达量为0.34±0.03 vs 1.00±0.04(t=12.66,P0.01)。结论重组腺相关病毒成功转染LX-2细胞,且能抑制肝星状细胞纤维化标志物α-SMA的表达,为探讨miR-133a-3p在调控肝星状细胞所致纤维化中的作用奠定了理论基础。     

METTL14促进肝纤维化的机制研究

目的 研究RNA甲基化转移酶METTL14对肝星状细胞系增殖及活化的影响.方法 RT-qPCR检测TGF-β1处理后的肝星状细胞系中METTL14的表达量;在肝星状细胞系中过表达METTL14,采用MTT和Transwell的方法检测细胞的增殖及迁移,RT-qPCR和蛋白质印迹检测细胞中COL I和α-SMA的蛋白表达...     

慢病毒介导的脯氨酰寡肽酶过表达对大鼠肝星状细胞功能的影响

目的探讨携带脯氨酰寡肽酶(prolyloligopeptidase,POP)基因的慢病毒转染大鼠肝星状细胞系-T6(hepatic stellate cellsT6,HSC-T6)对其生物学功能的影响,以揭示其在肝脏炎症与纤维化发生、发展中的作用。方法采用大鼠HSC-T6作为研究对象,设计合成携带大鼠POP基因的慢病毒,转染HSC-T6;通过ELISA方法检测各组HSC内Ac-SDKP水平;Real-time-PCR法检测各组HSC内相关基因表达量变化(POP、TGF-β1、α-SMA、MCP-1、Col I);Western blotting方法检测各组HSC中相关蛋白表达变化(POP、TGF-β1、α-SMA、Smad7、p-Smad2/3、PPAR-γ);CCK-8和流式细胞术检测转染POP对HSC增殖和凋亡的影响。结果慢病毒能高效感染HSC-T6并表达有活性的POP蛋白,与正常对照组及空病毒组相比,POP慢病毒感染的细胞内Ac-SDKP明显升高,Smad7、PPAR-γ蛋白表达显著升高,而α-SMA表达显著下降;POP慢病毒感染的细胞内MCP-1及α-SMA mRNA表达显著下调;此外,POP可促进HSC-T6增殖生长,而对HSC-T6凋亡无影响。结论 POP在HSC内可能发挥抗炎、抗纤维化作用,其机制可能通过促进Smad7及PPAR-γ的表达,抑制MCP-1及α-SMA的表达而发挥作用。     

瘦素对乙醛诱导肝星状细胞活化过程中Ⅰ型胶原及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:观察瘦素对乙醛诱导肝星状细胞(HSC)活化过程中α-SMA和I型胶原表达的影响,旨在从体外探讨瘦素在酒精性肝病中的可能作用。方法:采用SD大鼠肝脏原位灌流消化的方法获得并原代及传代培养HSC,分乙醛(200μmol/L)处理组,瘦素(100nmol/L)处理组及联合处理组(乙醛200μmol/L加瘦素100nmol/L)。用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA(α-平滑肌肌动蛋白)mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞α-SMA表达量,ELISA法检测培养上清中TGF-β1及Ⅰ型胶原含量。结果:①乙醛处理组中TGF-β1和Ⅰ型胶原基因及蛋白表达量明显高于空白对照组(P<0.05),α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);②瘦素处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);③联合处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量明显高于对照组(P<0.05),但TGF-β1、Ⅰ型胶原表达量与乙醛处理组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:在乙醛诱导肝星状细胞活化过程中,瘦素能协同上调α-SMA的表达;但对TGF-β1及Ⅰ型胶原的表达无影响,Ⅰ型胶原和α-SMA的表达可能是依赖于不同的调控机制来实现。     

白屈菜红碱对肝纤维化大鼠肝脏TGF-β1和α-SMA表达的影响

目的:探讨白屈菜红碱对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠肝脏组织转化生长因β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法:用四氯化碳皮下注射, 同时联合营养控制和饮用100 mL/L乙醇复合法制备SD大鼠肝纤维化模型, 在实验第4周末, 肝纤维化模型建立(2期肝纤维化形成), 然后用低、中、高剂量白屈菜红碱(0.2、0.6、2.0 g/L)治疗, 同时实验设立病理模型组、空白对照和阳性对照(INF-γ)组. 给药8 wk后, 采用免疫组织化学检测各组大鼠肝脏组织TGF-β1和α-SMA的表达.结果:各剂量白屈菜红碱组肝脏TGF-β1和α-SMA表达明显低于病理模型组(TGF-β1:6.08±2.35, 4.31±2.10, 4.7±1.70 vs 9.33±3.08; α-SMA:3.75±1.76, 3.23±1.42, 3.20±1.17 vs 6.67±2.29, 均P <0.01), 而与INF-γ组比较无明显差异(4.23±2.24, 3.38±1.39, 均P >0.05).结论:白屈菜红碱能降低四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠模型肝脏组织TGF-β1和α-SMA.     

SDC-1调控TGF-β1/THBS1信号通路对肝纤维化进程的影响

目的 探究多配体蛋白聚糖-1(SDC-1)在肝纤维化进程中的作用机制。方法 选择2021年4月至2023年4月于三二〇一医院住院治疗并行肝穿刺活体组织病理检查的102例慢性乙型肝炎患者作为研究对象。采集患者的空腹静脉血,采用ELISA法检测患者血清SDC-1的表达水平,并比较不同肝纤维化分期患者血清SDC-1表达水平的差异。观察经转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导活化的LX-2细胞中SDC-1表达水平的变化,以及敲低SDC-1表达对活化的LX-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、血小板反应蛋白1(THBS1)表达水平及细胞增殖、细胞周期的影响。结果 随着肝纤维化程度逐渐加重,慢性乙型肝炎患者血清SDC-1的表达水平呈升高趋势（P<0.05）。与阴性对照（NC）组相比,TGF-β1组α-SMA、SDC-1蛋白及其m RNA的相对表达量均显著升高,细胞增殖活性显著增强,G1期细胞占比显著降低,S期和G2期细胞占比显著升高（P均<0.05）。与NC小干扰RNA(si RNA)组相比,SDC-1si RNA组α-SMA、TGF-β1、THBS1蛋白及其m RNA的相对表达...     

RNAi抑制类风湿关节炎成纤维细胞环氧合酶-2合成及对炎症因子的影响

目的体外合成和筛选特异性阻断人滑膜成纤维细胞（RASF）环氧合酶-2（hCOX-2）的小分子干扰RNA（siRNA），同时了解COX-2抑制对炎症因子表达水平的影响。方法设计4条针对人COX-2mRNA siRNA（1#-4#siRNA），1条随机序列作为对照。分成A～H组，A组为空白阴性对照，B～F组处理依次为随机siRNA、1#-4#siRNA。应用LipofectAMINE 2000将上述siRNA转染入RASF，各培养孔加入100nmol／L的佛波酯。转染48h后，分别应用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和Western Blot检测hCOX-2mRNA和蛋白表达水平。采用酶联免疫吸附（ELISA）方法检测各组上清液中前列腺素E2（PGE2）和白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α、血管内皮生长因子（VEGF）水平。结果4#siRNA转染的RASF表达hCOX-2mRNA和蛋白水平明显低于其他siRNA干预组和阴性对照，且其上清液PGE2和IL-1β、IL-6、TNF-α、VEGF水平较其他各组明显下降。结论4#siRNA能有效抑制COX-2mRNA表达和COX-2蛋白的合成，且上清液中PGE2和IL-1β、IL-6、TNF-α及VEGF水平最低。