eNOS/NO 信号通路与心血管疾病关系的研究进展

一氧化氮（nitric oxide,NO）作为一种信号分子,在生理活动中起着重要作用,包括血压调节、血管张力维持、免疫系统调控等,尤其在心血管系统中发挥重要作用。NO产生异常是多种心血管疾病的诱因。内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）作为诱导合成NO的限速酶,主要在血管壁的调节中发挥重要作用,因此,其与心血管的正常生理活动密切相关。本文综述了eNOS的基本结构与功能、NO的理化性质,以及eNOS/NO信号通路与心血管系统疾病的关系。     

罗格列酮对高胰岛素培养的内皮细胞一氧化氮的影响及其机制研究

目的观察罗格列酮（RGZ）对高胰岛素培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）NO浓度和内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、磷酯酰肌醇3激酶（P13K）和蛋白激酶B（PKB）表达的影响,探讨RGZ改善高胰岛素状态下内皮功能障碍的信号转导机制。方法高浓度胰岛素培养HUVEC72h,并用不同浓度的RGZ进行干预。检测NO浓度,PI3K mRNA的表达,PKB、eNOS总蛋白和PKB丝氨酸473（PKB-Ser473）、eNOS丝氨酸1177（eNOS-Ser1177）的磷酸化表达。结果高浓度胰岛素培养HUVEC能呈剂帚和时间依赖性地降低N0的浓度,抑制内皮细胞P13KmRNA表达和PKB-Ser473、eNOS-Ser1177的磷酸化。用RGZ干预能硅著升高高胰岛素培养的内皮细胞NO的浓度和PKB、eNOS的磷酸化,增强PI3KmRNA表达;eNOS和P13K阻断剂均能阻断RGZ对高胰岛素培养的内皮细胞中NO浓度的升高,PI3K阻断剂还能阻断RGZ对高胰岛素培养内皮细胞PKB、eNOS的磷酸化。结论高胰岛素能下调P13K／PKB／eNOs信号通路而抑制内皮细胞NO的产生,RGZ能通过上调PI3K／PKB通路而增强高胰岛素培养的内皮细胞eNOS的活性和NO的产生。     

雌激素膜受体与内皮型一氧化氮合酶

目前对雌激素膜受体的研究主要集中在其对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的快速调节方面，虽然对膜受体的结构还不完全清楚，但是对膜受体激活eNOS效应涉及的信号通路以及G蛋白偶联受体在信号转导通路中所起的作用已经有了较深的认识，本文就近年关于雌激素膜受体调节eNOS的研究进展作一综述。     

洛伐他汀增强人内皮型一氧化氮合酶mRNA稳定性的分子信号机制

他汀类药物通过抑制胆固醇生物合成而降低血浆胆固醇水平。除直接的降脂作用外,他汀类还具有多向性抗动脉粥样硬化效应,如抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移、改善内皮功能和抗炎症反应等。已知他汀类药物可上调内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达,并由Mevalonate途径介导,但具体机制并不完全清楚。本研究旨在探索洛伐他汀上调eNOS表达的分子信号机制并明确与eNOS表达相关的顺势作用元件的定位。结果表明,在人脐静脉内皮细胞来源的细胞....     

内皮型一氧化氮合酶在实验性血管痉挛中的作用

目的 :研究内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)与兔实验性血管痉挛的关系。方法 :2 8只新西兰白兔分成假手术对照组 (8只 )、手术加普通饮食组 (8只 )和手术加高胆固醇饮食组 (12只 )。血管造影观察球囊内皮剥脱前后和分别给予普通饮食和高胆固醇饮食喂养 8周后麦角新碱诱发血管痉挛情况。硝酸还原酶法测定各组血浆一氧化氮 (NO)水平 ,免疫组化检测各组血管eNOS含量。结果 :血管造影显示手术加高胆固醇饮食组可诱导出局限性血管痉挛。免疫组化显示eNOS定位在血管内皮细胞胞质、痉挛血管节段内皮细胞内表达减少。手术加高胆固醇饮食组血浆NO的含量也明显下降。结论 :高胆固醇和内皮剥脱使eNOS合成下调 ,血管eNOS含量降低可能与实验性血管痉挛的诱发高度相关     

二甲双胍抑制血管紧张素Ⅱ诱导的成年大鼠心脏成纤维细胞增殖

目的　观察二甲双胍对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的成年大鼠心脏成纤维细胞（CF）增殖的影响，并探讨其可能机制。方法　通过胰酶、胶原酶Ⅱ联合消化法获取成年大鼠CF，AngⅡ（100　nmol/L）刺激CF建立细胞增殖模型，并给予不同浓度（10、50及200　μmol/L）二甲双胍进行干预。采用噻唑蓝法观察CF的增殖情况，EdU掺入法测定CF的DNA合成能力。免疫印迹法检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、磷酸化内皮型一氧化氮合酶（p-eNOS）蛋白表达情况，硝酸还原酶法测定CF培养上清一氧化氮（NO）含量。结果　AngⅡ刺激48　h能够明显促进成年大鼠CF增殖（P<0.05），二甲双胍呈浓度依赖性抑制AngⅡ诱导的CF增殖，二甲双胍呈浓度依赖性增加CF内eNOS磷酸化水平和NO含量（P<0.05），eNOS抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）能阻断二甲双胍抑制AngⅡ诱导的CF增殖的作用（P<0.05）。结论　二甲双胍能抑制AngⅡ诱导的成年大鼠CF增殖，与二甲双胍激活CF内eNOS/NO通路有关。     

内皮型一氧化氮合酶基因突变与心血管疾病

内皮衍生的一氧化氮（NO）具有重要的生理功能，它由内皮型一氧化氮合酶（eNOS)合成。NO和动脉粥样硬化的形成和血压的调节有关。NO还可能参与冠状动脉痉挛的发生。本文就eNOS基因的突变与心血管疾病的关系进行综述。     

一氧化氮与动脉粥样硬化

内皮功能很大程度上依赖内皮型一氧化氮合酶的结构性表达.血管内皮这一亚型产生的一氧化氮有很多抗动脉粥样硬化作用,包括调节血管张力、减弱氧化应激、抑制血小板聚集、阻断单核细胞黏附、阻止血管平滑肌细胞增殖和迁移.维持内皮型一氧化氮合酶的功能是防止动脉粥样硬化发生和发展的关键.     

罗格列酮对2型糖尿病大鼠主动脉内皮依赖性血管舒张功能的影响

目的观察2型糖尿病（T2DM）大鼠胸主动脉内皮依赖性血管舒张功能和一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（eNOS）的变化及罗格列酮（RSG）治疗对其内皮功能的影响。方法SD大鼠经高糖高脂喂养6周后予小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立T2DM大鼠模型，糖尿病大鼠又分为对照（DM）组和RSG治疗组，RSG组用RSG干预8周，另选正常大鼠为正常对照（NC）组。实验终止时用正常葡萄糖高胰岛素钳夹技术的葡萄糖输注率（GIR）评价胰岛素抵抗，观察大鼠离体主动脉内皮依赖性血管舒张反应和主动脉NO、eNOS的变化。结果T2DM大鼠GIR、胸主动脉内皮依赖性血管舒张反应、主动脉NO含量及eNOS阳性表达较NC组显著降低（P〈0、01），RSG治疗后上述指标均显著升高（P〈0．05）。结论T2DM大鼠存在内皮依赖性血管舒张功能紊乱，RSG治疗可改善内皮功能，增强NO水平和eNOS的活性。     

肾素（前体）受体在高糖诱发的内皮细胞舒缩功能障碍中的作用及机制

目的　探讨高糖对内皮细胞舒缩功能障碍等损害过程中是否有肾素（前体）受体（（P）RR）的过度激活,并探讨其机制。方法　体外培养人脐静脉内皮细胞,分别以不同浓度的葡萄糖（15、30　mmol/L）干预细胞24　h、48　h后收取细胞,用分子生物学方法测定（P）RR以及反映血管舒缩功能的生物标记物蛋白和mRNA的表达,以siRNA的方法抑制（P）RR的表达后,观察葡萄糖对内皮细胞上述作用的改变,进一步分析其机制。结果　高糖显著上调内皮细胞（P）RR的蛋白和mRNA表达;同时上调内皮素1（ET-1）的表达,抑制一氧化氮（NO）的合成。（P）RR-siRNA虽能抑制高糖引起的ET-1　mRNA表达增高,但不抑制其蛋白表达。（P）RR-siRNA显著抑制高糖引起的NO降低。高糖抑制内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达,增加非对称性二甲基精氨酸（ADMA）的合成,（P）RR-siRNA能显著抑制高糖对eNOS和ADMA的影响。结论　高糖能够激活内皮细胞（P）RR的表达;（P）RR可能通过ADMA/eNOS通路介导了高糖诱发的血管内皮舒缩功能障碍。     

人内皮型一氧化氮合酶重组腺病毒在小鼠肺内表达

一氧化氮合酶（NOS）是合成一氧化氮（NO）的关键酶，主要包括3个亚型：神经型（nNOS）、诱导型（iNOS）、内皮型（eNOS）。eNOS主要分布于血管内皮，通过催化NO的生成而在调节血管壁张力及维持血管壁构型方面发挥重要作用。各种引起内皮功能受损的原因均可使NOS生成减少，导致NO生成不足，破坏体内内皮素1／一氧化氮（ET-1／NO）的平衡。本研究从人脐静脉血管内皮成功克隆出人eNOS（heNOS）eDNA全长基因的基础上，构建了复制能力缺陷型heNOS重组腺病毒转移载体，并对其功能和转移途径进行初步研究，旨在探讨从基因角度补充NOS以维持体内ET-1／NO平衡，治疗因NO不足而导致的血管损伤性疾病的可能性。     

内含子源性miRNA通过转录因子AP1调节内皮型一氧化氮合酶表达及血管内皮细胞增殖作用

目的　前期工作发现,内皮型一氧化氮合酶（eNOS）第4内含子的27碱基重复子产生相应27-nt　miRNA,并对eNOS的转录和表达有负反馈调节作用。进一步探讨该内含子源性27-nt　miRNA对内皮型一氧化氮合酶基因调节的分子机制及血管内皮细胞增殖相关转录因子AP1的作用机制。方法　应用MTT法检测人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖抑制率;细胞划痕实验检测HUVEC迁移能力;免疫组织化学方法检测内皮细胞中eNOS和AP1蛋白表达水平;进一步用Western　Blot检测27-nt　miRNA表达相关情况及细胞核转录因子eNOS表达情况。结果　27-nt　miRNA对HUVEC增殖具有强烈抑制作用　（P<0.05）;27-nt　miRNA对HUVEC迁移具有显著抑制作用（P<0.05）;27-nt　miRNA显著降低eNOS和AP1蛋白表达（P<0.05）;27-nt　miRNA通过负调控AP1降低eNOS蛋白表达（P<0.05）。结论　27-nt　miRNA显著抑制eNOS和AP1蛋白表达,AP1在27-nt　miRNA对eNOS表达调节中起重要作用。     

尿石素A改善高糖致血管内皮损伤的作用与机制

目的探讨尿石素A(urolithin A,UA)对高糖所致的内皮细胞损伤的保护作用及可能机制。方法将人脐静脉内皮细胞分为正常组(5.5 mmol葡萄糖)、高糖组(33.3 mmol葡萄糖)、高糖+UA处理组、高糖+UA+Compound C处理组。分别检测了细胞存活及细胞的一氧化氮(nitric oxide,NO)和内皮素(endothelin-1,ET-1)浓度。通过二氢乙锭荧光探针染色和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性分析细胞氧化应激水平。采用Western blot进一步分析了细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的磷酸化水平。结果与高糖对照组相比,UA干预使内皮细胞的存活升高(P<0.05);SOD活性升高(P<0.05),活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平降低(P<0.05);NO分泌增高及ET-1浓度降低(P<0.05);明显上调AMPK和eNOS磷酸化水平(P<0.05),差异有统计学意义。而在AMPK抑制剂Compound C处理后UA对内皮细胞的上述作用被逆转。结论 UA通过激活AMPK/eNOS通路,抑制高糖介导的血管内皮氧化应激,改善内皮功能障碍。     

罗格列酮对胰岛素抵抗大鼠主动脉内皮功能的影响及其机制的研究

目的:观察罗格列酮对胰岛素抵抗大鼠主动脉内皮依赖性血管舒张和一氧化氮(NO)含量、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷脂酰肌醇-3激酶及蛋白激酶B表达的影响。方法:4~6周龄雄性SD大鼠予高糖高脂喂养8周,建立胰岛素抵抗模型,分为对照组和治疗组,每组各15只,治疗组用罗格列酮[3mg/(kg.d)]干预8周,另取15只正常大鼠为正常组。实验终止时用葡萄糖输注率评价胰岛素抵抗,观察大鼠离体主动脉对乙酰胆碱依赖性血管舒张反应,Griess重氮化反应法检测主动脉NO含量,逆转录聚合酶链反应方法检测磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B和eNOS mRNA表达,电镜观察主动脉超微结构。结果:对照组葡萄糖输注率、主动脉内皮依赖性舒张功能、NO浓度、磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B、eNOS mRNA表达较正常组均显著降低(P<0.01),治疗组上述指标均显著升高(P<0.01)。透射电镜检查可见对照组主动脉内皮细胞和内皮下结构的病理改变,治疗组胸主动脉超微结构接近正常。结论:胰岛素抵抗大鼠存在内皮依赖性舒张功能紊乱和主动脉NO浓度、磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B、eNOS mRNA表达下降,用罗格列酮治疗可改善其内皮功能,增强NO产生和磷脂酰肌醇-3激酶、蛋白激酶B、eNOS mRNA表达。     

瑞舒伐他汀对冠心病患者内皮功能及eNOS基因表达的影响

目的通过观察瑞舒伐他汀对冠心病患者内皮功能的影响，探讨他汀类药物对内皮功能和一氧化氮合酶（eNOS）的作用机制。方法将30例冠心病患者随机分成A、B两组，另择20例非冠心病患者作为对照组。A组和对照组给予瑞舒伐他汀10mg，每晚1次，共4周；B组应用除瑞舒伐他汀以外的常规治疗。治疗前后应用彩超检测肱动脉流量介导的舒张功能（FMD），采用RT-PCR法测定eNOS mRNA表达，以评价血管内皮功能。结果A、B组治疗前FMD、eNOS mRNA表达均无统计学差异（P均〉0．05）；A组治疗后eNOS mRNA表达显著增强，FMD改善（P均〈0．05），B组治疗前后FMD、eNOS mRNA表达无统计学差异；A组、对照组治疗后总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇均明显降低（P〈0．05）。结论瑞舒伐他汀可通过增强eNOS基因表达改善冠心病患者的内皮功能。     

自噬干预对低剪切应力下血管内皮细胞eNOS和ET-1表达的影响

目的 探讨自噬干预对低剪切应力下血管内皮细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和内皮素1（ET-1）表达的影响。方法 ApoE^－/－小鼠高脂饮食喂饲12周,HE染色法观察主动脉病理改变,免疫组织化学法检测自噬标志物Beclin1、微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）和p62的表达。人脐静脉内皮细胞和新西兰大白兔颈总动脉置于体外灌流系统,分别以低剪切应力（5 dyne/cm²）和正常剪切应力（15 dyne/cm²）灌流1 h,Western blot检测Beclin1、LC3Ⅱ和p62的表达;在此基础上,自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）和自噬激动剂雷帕霉素（rapamycin）孵育低剪切应力处理后的血管内皮细胞和兔颈总动脉30 min,观察自噬干预对低剪切应力诱导的eNOS和ET-1表达的影响。结果 动脉粥样硬化斑块中Beclin1、LC3Ⅱ和p62的表达明显增加;与正常剪切应力组相比,低剪切应力组Beclin1、LC3Ⅱ及p62的表达明显增加;雷帕霉素上调低剪切应力下血管内皮细胞以及离体血管eNOS的表达,抑制ET-1的表达;3-MA则进一步抑制血管内皮细胞以及离体血管eNOS的表达,上调ET-1的表达。结论 低剪切应力抑制血管内皮细胞自噬从而抑制eNOS表达、上调ET-1表达,增强自噬能改善该过程。     

内皮型一氧化氮合酶重组腺病毒表达载体的构建及其在食管平滑肌细胞中的表达和调控

背景：一氧化氮(N0)是一种重要的抑制性神经递质，其合成障碍与多种胃肠道动力障碍性疾病的发生密切相关。目的：构建四环素调控的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)重组腺病毒表达载体，实现eNOS在食管平滑肌细胞(ESMC)中表达的精确调控。方法：可调控重组腺病毒表达载体的构建分为3个步骤：首先，将编码目的基因eNOS的全长cDNA定向克隆于穿梭质粒pTRE—Shuttle中，获得一个能被四环素或其类似物强力霉素调控的表达盒(Tet—responsive expression cassette)；然后，将表达盒与腺病毒DNA(Adeno—X^tm Viral DNA)体外连接，形成重组腺病毒质粒Ad—eNOS；最后，Ad—eNOS转染人胚肾293细胞后被包装成有感染能力的重组腺病毒颗粒Adeno-x—TRE—eNOS。用Adeno-x—TRE—eNOS和调控病毒Adeno—X—Tet-off共感染体外培养的ESMC，采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)和western blot评价eNOS在靶细胞中的表达以及强力霉素对表达强度的调控情况。结果：体外连接法成功构建了可调控重组腺病毒表达载体Adeno-x—TRE—eNOS，其与调控病毒共感染ESMC后，RT—PCR和western blot出现阳性结果。加入不同浓度的强力霉素可以抑制eNOS基因的转录强度，其抑制作用呈剂量-效应关系，强力霉素浓度达到0．01μg／m1时可以完全关闭目的基因的表达。结论：采用体外连接法成功构建了可调控的eNOS重组腺病毒表达载体，并介导了eNOS在体外培养的ESMC中的表达和调控，为进一步利用eNOS进行基因治疗奠定了基础。     

人参皂苷Rb1对白消安干预人脐静脉内皮细胞一氧化氮合成及转化生长因子-β1表达的影响

目的：研究白消安（BU）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）一氧化氮（NO）合成及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的干预,并进一步探讨人参皂苷Rb1对此干预作用的影响。方法：体外培养HUVEC,以硝酸还原酶法检测各组细胞培养上清液中NO的含量,ELISA方法检测上清液TGF-β1蛋白水平,实时荧光定量PCR（Real Time-PCR）法检测HUVEC中内皮源性一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达。结果：BU明显抑制HUVEC合成NO及eNOSmRNA表达,而刺激TGF-β1的表达;预先用人参皂苷Rb1干预再加BU作用,发现人参皂苷Rb1可以拮抗BU对HUVEC的这种影响,提高eNOSmRNA表达及NO合成,而降低TGF-β1的表达。结论：BU可抑制HUVEC合成NO而增强TGF-β1表达,人参皂苷Rb1可拮抗此作用,人参皂苷Rb1可能籍此机制保护血管内皮细胞免受化疗药物损伤。     

NO、NOS、NOS基因与糖尿病微血管并发症

体内一氧化氮（NO）主要通过激活可溶性鸟苷酸环化酶（GC），使细胞内cGMP水平升高而发挥生理作用。内皮型一氧化氮合酶（eNOS)产生的NO可扩张血管、调节血压、改变局部血流、抑制血小板聚集、抗平滑肌细胞增殖。神经型一氧化氮合酶（nNOS)产生的NO以递质形式参与神经信息传导和内分泌调节。诱导型一氧化氮合酶（iNOS)产生的NOD在炎症、免疫反应中起细胞毒与细胞抑制作用。NO参与糖尿病微血管并发症的发病机制。NOS基因尤其是eNOS基因的突变或多态性可能与糖尿病并发症相关。     

磷酸二酯酶抑制剂对乳鼠心肌细胞PI3K—Akt—eNOS信号通路的影响

目的：探讨西洛他唑（Cilostazol）对乳鼠心肌细胞PI3K-Akt-eNOS信号通路的影响。方法：观察西洛他唑对乳鼠心肌细胞NO影响的时效和量效关系，再用PI3K及eNOS抑制剂进行干预。检测NO的浓度，Western免疫印迹法检测总Akt、磷酸化Akt（p—Akt—ser473）及总eNOS、磷酸化eNOS（p-eNOS-Ser1177）表达水平。结果：西洛他唑升高心肌细胞NO浓度呈剂量和时间依赖性，不同浓度的西洛他唑均能升高Akt和eNOS磷酸化水平，但对Akt及eNOS总蛋白表达无明显影响。eNOS抑制剂L—NAME和P13K抑制剂Wortmannin均能抑制西洛他唑诱导的NO浓度升高，Wortmannin还能阻断西洛他唑诱导的Akt和eNOS的磷酸化。结论：西洛他唑可能激活乳鼠心肌细胞的PI3K—Akt—eNOS信号通路而促进NO的产生。