生长激素释放肽调控Akt信号通路对高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的影响

目的探讨生长激素释放肽对高糖诱导的胰岛β细胞凋亡的影响及机制。方法以NIT-1胰岛β细胞为研究对象,分为正常组(正常培养)、高糖组(高糖培养)、实验组(生长激素释放肽预处理后用高糖培养),用Akt信号通路抑制剂处理实验组细胞记为实验组+抑制剂,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化(p)-Akt表达。结果高糖组OD值、p-Akt/Akt明显低于正常组(P0.05),细胞凋亡率明显高于正常组(P0.05);实验组OD值、p-Akt/Akt明显高于高糖组(P0.05),细胞凋亡率明显低于高糖组(P0.05)。结论生长激素释放肽能够抑制高糖诱导的胰岛β细胞凋亡,其作用机制可能与Akt信号通路有关。     

ERK1／2信号通路对T淋巴细胞的影响

细胞外信号调节激酶1／2（extracellular regulated kinase1／2，ERK1／2）是将信号从细胞表面受体传导至细胞核的关键。磷酸化的ERKl／2由胞质转位到核内，进而介导NF-AT、AP-1、NF-KB等转录因子的活化，参与细胞多种生物学反应。近年来研究发现，ERK1／2信号通路的激活能促进T淋巴细胞的活化、增殖并抑制其凋亡，这可能为T淋巴细胞相关的免疫性疾病和肿瘤的治疗提供了新的策略。     

外源性硫化氢对早期糖尿病肾脏疾病大鼠丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路的影响

目的 研究外源性硫化氢(H₂S)通过丝裂原活化细胞外信号调节蛋白激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路对早期糖尿病肾脏疾病(DN)大鼠的保护作用。方法 随机选取SPF级健康雄性SD大鼠24只腹腔一次性注射1%链尿佐菌素(STZ)60 mg/kg制作DN模型,余下10只(正常对照组)腹腔一次性注射等量的柠檬酸缓冲液。3周后DN造模成功,再将24只DN大鼠随机分为DN组和DN+硫氢化钠(NaHS)组,每组各12只。DN+NaHS组予腹腔注射NaHS溶液56μmol·kg^-1·d^-1,正常对照组和DN组予等量生理盐水腹腔注射,3组大鼠均连续注射12周。检测各组血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)及24小时尿蛋白(24h Upro)水平,观察其肾脏组织病理变化。采用Katafuchi评分评估大鼠肾脏病变(包括肾小球、肾小管及肾血管)。采用免疫组化法检测ERK1/2、MEK1和MEK2蛋白阳性区域面积百分比。结果 DN组大鼠SCr、BUN及24h Upro水平、肾脏组织Katafuchi评分、MEK1、MEK2及ER...     

橄榄苦苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡及JNK/p38 MAPK信号通路的影响

目的研究橄榄苦苷对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡及c-Jun氨基末端激酶(JNK)/促分裂素原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组(0.5 mg/kg)及橄榄苦苷高、低剂量组(40、20 mg/kg),每组14只。连续灌胃给药14 d,末次给药结束后采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,进行2 h缺血后再灌注24 h,测定神经症状评分、脑梗死面积、脑组织含水量、半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关的x蛋白(Bax)mRNA表达及磷酸化的JNK(p-JNK)、磷酸化的p38 MAPK(p-p38)蛋白表达等指标。结果与模型组比较,橄榄苦苷高、低剂量组大鼠神经症状评分、脑梗死面积及橄榄苦苷高剂量组脑组织含水量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,橄榄苦苷高、低剂量组大鼠Caspase-3、Bax mRNA及p-JNK、p-p38蛋白表达均明显降低(P<0.05),而Bcl-2 mRNA表达明显增加(P<0.05)。结论橄榄苦苷对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,该作用与抑制JNK/p38 MAPK信号通路的活化进而减少神经元凋亡有关。     

磷脂酰肌醇3''-激酶通路活化对化疗药物诱导的胃癌细胞凋亡的影响

磷脂酰肌醇3＇-激酶（P13＇K）信息传导通路的激活已被认为是肿瘤细胞抗凋亡的主要机制之一，我们前阶段对胃癌化疗药物对蛋白激酶B（PKB）及其下游分子的影响进行了研究，但是P13＇K作为其上游信号分子在其中所起的作用尚不得而知。我们通过观察阿霉素、足叶乙甙对人胃癌细胞系SGC7901的作用，探讨P13＇K信号通路活化对体外胃癌细胞化疗效果的影响并探讨其可能的机制。     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与胰岛β细胞凋亡的关系

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路是真核细胞转导细胞外信号到细胞内的四大信号系统之一,包括细胞外信号调节激酶、c-Jun氨基末端激酶、p38MAPK和细胞外信号调节蛋白激酶5通路,参与了细胞增殖、分化、转化及凋亡.胰岛β细胞凋亡在糖尿病的病理生理机制中发挥重要作用,多种细胞因子及应激刺激都可通过一条或多条MAP...     

丝裂原活化蛋白激酶信号通路与肝细胞癌的关系

<正>肝细胞癌(HCC)侵袭性强、易复发、预后差,起病隐匿,出现典型临床表现时大多已属中晚期,失去手术机会,自然生存期不超过半年。研究表明,恶性肿瘤的增殖、分化、凋亡、侵袭及转移等过程有多条细胞内信号通路的参与和调控。针对这些通路的分子靶向治疗药物有些已经参与到肿瘤临床的治疗,它们可以单独应用或配合传统化疗发挥作用,在HCC的治疗中拥有巨大潜力~(〔1〕)。众所周知,索拉非尼已被美国食品药品监     

INPP4B调控Akt信号通路抑制胃癌HGC-27细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的 探讨磷脂酰肌醇4-磷酸酶Ⅱ型(INPP4B)调控蛋白激酶B(Akt)信号通路影响胃癌HGC-27细胞增殖和凋亡的机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和Western印迹分别测定胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中INPP4B表达变化.INPP4B过表达慢病毒感染HGC-27细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测...     

苦参碱诱导H466肺癌细胞凋亡及对Wnt信号通路的影响

目的探讨苦参碱诱导H466肺癌细胞凋亡及对Wnt信号通路的影响。方法将肺癌H466细胞分为三组,对照组为H466细胞,低处理组为H466细胞+0.5g的苦参碱;高处理组为H466细胞+2.0g的苦参碱,采用MTT、免疫双荧光、流式细胞仪、免疫印迹及qRT-PCR检测肺癌H466细胞的凋亡率、细胞周期及Wnt的蛋白表达及β-cateninmRNA表达。结果 MTT实验证明,低处理组的肺癌H466细胞活性低于对照组(P0.05),高处理组的肺癌H466细胞活性低于低处理组(P0.05),说明苦参碱对肺癌H466细胞具有抗肿瘤作用;对照组为正常的肺癌H466细胞呈蓝色荧光表达的活细胞,低处理组发现H466细胞呈现早期凋亡并细胞核破碎形成凋亡小体,凋亡程度高于对照组(P0.05),死亡的肺癌细胞呈现荧红色,在高处理组中的死亡率高于低处理组(P0.05);H466细胞在苦参碱作用下,在G0/G1期细胞比例升高,S期呈现下降趋势,对照组与低处理组相比差异较小(P0.05),高处理组与低处理组比较有差异(P0.05),但在G2/M无明显改变,G0/G1在高处理组凋亡率呈现增高的趋势;低处理组中的Wnt-2信号通路中的表达少于对照组(P0.05),与低处理组相比高处理组中表达最低(P0.05);qRT-PCR显示:低处理组的β-catenin mRNA表达少于对照组,在高处理组中β-catenin mRNA表达少于低处理组。结论苦参碱可以加快肺癌H466细胞凋亡,在这过程中可能与阻断Wnt信号通路传导有关,苦参碱可以阻断Wnt信号表达,抑制肺癌细胞分化。     

维生素D3通过Hedgehog信号通路对胰腺癌PANC1细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨维生素D3抗胰腺癌的作用机制.方法 应用不同浓度的维生素D3（25、50、75、100 μmol/L）干预胰腺癌PANC1细胞,以未干预细胞作为阴性对照组.MTT比色法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测细胞的早期凋亡率;RT-PCR法检测细胞PTCH、Gli-1 mRNA的表达.结果 维生素D3呈浓度依赖性抑制PANC1细胞的增殖,以48 h点的抑制作用最强,阴性对照组及25、50、75、100 μmol/L维生素D3组的生长抑制率分别为0、16.1％、18.8％、31.8％、39.4％,组间差异有统计学意义（P值均＜0.05）.阴性对照组及25、50、75、100 μmol/L维生素D3干预24 h时PANC1细胞的早期凋亡率分别为（5.89±0.57）％、（6.06±0.44）％、（16.21± 1.62）％、（16.94±0.91）％、（20.96±0.98）％,早期凋亡率随浓度的增加而增加,差异有统计学意义（P＜0.05）.维生素D3干预PANC1细胞24 h后,阴性对照组及25、50、75、100 μmol/L组细胞的PTCH mRNA表达量分别为0.117±0.009、0.104 ±0.011、0.069±0.011、0.052±0.009、0.056±0.007;Gli-1 mRNA表达量分别为0.323±0.007、0.312±0.015、0.299±0.015、0.233 ±0.007、0.175 ±0.014,均随浓度的增加而下调,差异有统计学意义（P值均＜0.05）.75 μmol/L维生素D3干预0、12、24、36、48 h后,PTCH mRNA表达量分别为0.142±0.008、0.127 ±0.009、0.111±0.010、0.115 ±0.003、0.102±0.007;Gli-1 mRNA分别为0.341±0.011、0.317 ±0.017、0.320±0.018、0.226 ±0.011、0.191±0.010,均随时间的延长而下调,差异有统计学意义（P值均＜0.05）.结论 维生素D3可以有效抑制胰腺癌PANC1细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与阻滞Hedgehog信号通路有关.     

甲异靛对Jurkat细胞AKT信号通路的影响及其在细胞凋亡中作用的研究

目的:探讨甲异靛对Jurkat细胞AKT信号通路的影响及其在甲异靛诱导Jurkat细胞凋亡中的作用.方法:采用XTT法检测甲异靛对Jurkat细胞的生长抑制作用,应用流式细胞术以及DNA片段分析检测甲异靛诱导Jurkat细胞凋亡的情况.应用Western Blot检测CASPASE家族成员及AKT信号通路相关蛋白在甲异靛作用前后的表达或磷酸化情况.通过电转染方法使Jurkat细胞高表达外源性活化AKT,并进一步分析其对甲异靛诱导细胞凋亡作用的影响.结果:甲异靛抑制Jurkat细胞增殖,随着药物浓度增加抑制作用增强,IC50为10.2 μmol/L;5～20 μmol/L甲异靛诱导Jurkat细胞凋亡且凋亡效应具有浓度依赖性;甲异靛诱导细胞凋亡过程中伴随CASPASE 2,3,8,9的活化,50 μmol/L CASPASE抑制剂z-VAD-fmk 可阻断甲异靛诱导的Jurkat细胞凋亡 .甲异靛降低Jurkat细胞AKT信号通路中AKT,RAF,PDK1,以及ERK1/2 的磷酸化水平;15 μmol/L LY294002)(PI3K-AKT抑制剂)可显著提高甲异靛诱导Jurkat细胞凋亡的作用.甲异靛同样诱导高表达外源性活化AKT的 Jurkat细胞凋亡,但LY294002不能增强甲异靛对高表达外源性活化AKT的 Jurkat细胞的凋亡诱导效应. 结论:甲异靛显著抑制Jurkat细胞增殖,通过活化CASPASE途径诱导Jurkat细胞的凋亡. 甲异靛诱导细胞凋亡过程中伴AKT磷酸化水平的降低,AKT活性的降低并非甲异靛诱导凋亡的惟一因素,但参与甲异靛与PI3K-AKT抑制剂协同诱导Jurkat细胞的凋亡的过程.     

复元胶囊对软骨细胞凋亡细胞外信号调节蛋白激酶1/2信号通路的作用研究

目的观察复元胶囊对体外原代培养软骨细胞凋亡的影响及对软骨细胞凋亡细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal regulated kinase，包括ERKI和ERK2）信号通路的作用，探讨其治疗骨关节炎的作用机制。方法建立体外原代培养软骨细胞体系，制备复元胶囊血清，采用硝普钠（SNP）诱导软骨细胞凋亡，并用复元胶囊血清以及ERK1／2的特异阻断剂U0126干预。透射电镜观察软骨细胞凋亡的超微结构，流式细胞仪检测其对软骨细胞凋亡的影响，免疫印迹技术（Western印迹法）检测磷酸化ERK1／2、p53蛋白表达水平，比色法观察caspase-3活性变化。结果复元胶囊血清能降低SNP诱导的软骨细胞凋亡率，促进磷酸化ERK1／2蛋白表达，降低凋亡基因p53蛋白表达，抑制凋亡执行因子caspase-3的活性；使用U0126阻断ERK1／2信号通路后，复元胶囊血清也能降低SNP诱导的软骨细胞凋亡率，减少凋亡基因p53蛋白表达，抑制凋亡执行因子caspase-3的活性，但是对促进磷酸化ERK1／2蛋白表达作用不明显。结论复元胶囊血清通过促进磷酸化ERK1／2表达、调节ERK1/2信号通路下游p53和caspase-3因子而抑制SNP诱导的软骨细胞凋亡。     

细胞外信号调节激酶调控乙醛对肝星状细胞的影响

目的 观察PD98059(特异性丝裂原细胞外信号反应激酶阻断剂)调控乙醛刺激大鼠肝星状细胞(HSC)周期，影响细胞增殖、Ⅰ型胶原蛋白分泌及转化生长因子(TGF)β1 mRNA表达。方法 不同浓度PD98059对乙醛刺激的HSC进行处理；流式细胞仪检测细胞周期，MTT法检测细胞增殖变化，ELISA法检测HSC内Ⅰ型胶原蛋白分泌，RT-PCR法检测HSC内TGFβ1 mRNA表达。结果 PD98059能剂量依赖性地影响乙醛刺激的HSC周期，使G0／G1期细胞百分比增高，S期细胞减少，从而抑制乙醛刺激的HSC增殖、HSC内Ⅰ型胶原蛋白分泌及TGFβ2mRNA表达。结论 细胞外信号调节激酶信号通路影响乙醛刺激的大鼠HSC增殖Ⅰ型胶原蛋白分泌及TGFβ1mRNA表达。     

丝裂原活化蛋白激酶信号通路及其在细胞凋亡中的作用

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)是细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,存在于真核生物的大多数细胞内。从酵母到人类该信号通路非常保守,它能响应各种胞外和胞内刺激从而被激活,在多种细胞过程中发     

P38丝裂原活化蛋白激酶信号通路与肝星状细胞

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinase, MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一, 是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶, 在细胞的生长、发育、分化等方面发挥重要作用,P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)是其中的一个亚类. 肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)是肝纤维化形成过程中主要的效应细胞, 本文主要讨论P38 MAPK信号通路及其在肝星状细胞中发挥的作用.     

Wnt信号通路对体外培养小鼠胰岛β细胞的影响

目的 研究Wnt信号通路对体外培养的小鼠NIT-1胰岛细胞增殖和凋亡的影响.方法 高糖或细胞因子诱导胰岛细胞损伤,给予Wnt3a蛋白孵育,激活Wnt通路.Tunnel及流式细胞术检测细胞凋亡,BrdU检测细胞增殖.实时定量PCR检测同源异型结构域蛋白转录因子2(Pitx2)、T细胞特异性转录因子7类似物2(TCF7L2)mRNA的表达.结果 Wnt蛋白干预组细胞的凋亡减少(P<0.01),增殖增加,促进增殖的相关基因表达上调.结论 激活Wnt通路能促进胰岛细胞的增殖及减少其凋亡.     

Rho激酶信号通路与大鼠心肌细胞凋亡的关系

目的探讨Rho激酶信号通路在心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡组织中的表达变化及对心肌细胞凋亡的影响作用。方法选取健康雄性Wistar大鼠,通过结扎左前降支建立大鼠心肌梗死模型,将24 h后仍然存活的大鼠选取30只,随机分为模型组和治疗组(法舒地尔5 mg/kg,2次/d)各15只,并另外选取健康雄性大鼠15只作为假手术组,假手术组和模型组给予等量生理盐水处理,比较4 w后3组心肌梗死面积及Rho激酶mRNA、蛋白等指标的表达差异。结果 3组左心室收缩压(LVSP)、左室舒张压(LVEDP)、左室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)差异均有统计学意义(P0.05),模型组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax显著低于治疗组和假手术组(P0.05),LVEDP显著高于治疗组和假手术组(P0.05),治疗组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax显著低于假手术组(P0.05),LVEDP显著高于假手术组(P0.05)。治疗组心肌缺血面积低于模型组但差异不显著(P0.05);治疗组心梗面积显著低于模型组(P0.05)。3组Rho激酶mRNA、Bax蛋白、Bcl-2蛋白表达差异有统计学意义(P0.05);组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论心肌梗死大鼠心肌组织中的Rho激酶mRNA、Bax蛋白达显著增加,同时Bcl-2蛋白表达降低,法舒地尔能够降低Rho激酶mRNA表达,减少心肌细胞凋亡,减轻心肌梗死面积。     

有丝分裂原活化蛋白激酶/细胞外调节信号激酶信号转导通路与肝纤维化逆转的相关性

近年发现，无论是消除致病因素或是应用有效抗纤维化药物，都可逆转患者及模型动物的肝纤维化。但具体机制尚不明确。南于有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）／细胞外调节信号激酶（ERK）信号通路在多种损伤修复过程中发挥重要作用，我们在建立肝纤维化自发逆转动物模型的基础上，检测MAPK／ERK信号通路的活性，以揭示该通路与肝纤维化逆转的相关性。     

细胞外调节蛋白激酶信号通路在乙型肝炎病毒X基因调控c-met基因启动子中的作用

目的 明确在乙型肝炎病毒X基因(HBx)对原癌蛋白质(c-met)基因启动子区的调控中所涉及的信号传导通路及其在肝癌侵袭和转移中的作用.方法 用Western blot比较可能涉及的信号通路特异性阻断剂对HBx调控c-met表达的影响,分析在该调控过程中所涉及的信号通路.体外侵袭试验验证信号传导通路在HBx调控c-met表达中的作用.对数据进行析因设计的方差分析.结果 HBx引起c-met表达水平的增加,细胞外调节蛋白激酶信号通路抑制剂U0126能够降低该作用,而p38MAPK信号通路抑制剂SB203580、PI-3K信号通路抑制剂wortmanin则未显示出该作用.体外细胞侵袭试验也证实了U0126能够降低HBx引起的HepG2细胞的强侵袭性[(74.3±6.2)个与(34.6±5.2)个,F=113.45,P＜0.01].结论 HBx引起肝癌细胞的侵袭转移可能与其通过细胞外调节蛋白激酶信号通路对c-met基因启动子区(-183 bp～-100 bp)的调控有关.