lncRNA PVT1对前列腺癌细胞增殖及侵袭、迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)对前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法 传代培养人前列腺癌细胞DU145、人正常前列腺上皮细胞RWPE-1(以下分别称DU145、RWPE-1细胞),采用RT-qPCR法检测DU145、RWPE-1细胞lncRNA PVT1 mRNA表达...     

LINC01615表达下调对膀胱癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 探讨下调LINC01615表达对膀胱癌细胞（T24细胞）增殖、侵袭、迁移的影响。方法 常规培养T24细胞,取对数生长期细胞随机分为si-LINC01615组、si-NC组,分别转染si-LINC01615、si-NC,继续培养48 h。用实时荧光定量PCR法检测细胞中LINC01615表达,用MTT实验检测细胞增殖能力（OD值）,用Transwell实验检测细胞侵袭能力,用划痕实验检测细胞迁移能力（24 h愈合度）。结果 转染后si-LINC01615组、si-NC组T24细胞LINC01615相对表达量分别为0.60±0.03、1.08±0.02,比较差异有统计学意义（P<0.05）,表明转染成功。培养0、24 h,两组细胞活力差异均无统计学意义（P均>0.05）;培养48、72 h,si-LINC01615组细胞活力均低于si-NC组（P均<0.05）。si-NC组侵袭细胞数为（148.30±1.76）个,si-LINC01615组为（74.33±3.18）个,比较差异有统计学意义（P<0.05）。si-NC组24 h愈合度为（98.33±0.88）%...     

RNA-linc00858和miR-3182在宫颈癌组织表达变化、对宫颈癌细胞株侵袭迁移调控作用及靶向关系

目的 观察长链非编码RNA-linc00858和微小RNA-3182(miR-3182)在宫颈癌组织表达变化、对宫颈癌细胞株侵袭迁移的调控作用,分析宫颈癌细胞中linc00858、miR-3182的靶向关系。方法 (1)40例宫颈癌患者,均行宫颈癌根治术,术中留取宫颈癌组织及癌旁组织,采用RT-qPCR法检测宫颈癌及癌旁组织中linc00858、miR-3182的表达,采用Spearman相关性分析法分析宫颈癌组织中linc00858和miR-3182相关性。(2)筛选人宫颈癌细胞株MS751为受试细胞,1～4组分别转染si-linc00858（小干扰linc00858,沉默linc00858表达）、OE-linc00858（过表达linc00858）、si-NC（小干扰阴性对照）、OE-NC（过表达阴性对照）,转染48 h时采用Transwell实验观察各组细胞侵袭、迁移情况。培养48 h时采用RT-qPCR法检测各组细胞linc00858、miR-3182的表达。(3)分别采用RNA免疫沉淀测定实验、双荧光素酶报告实验分析MS751细胞中linc00858与miR-3182的靶向关...     

尼古丁对人A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的 观察烟草烟雾中的主要有害成分尼古丁对人A549细胞增殖、迁移与侵袭能力的影响,探讨尼古丁致病的可能机制.方法 以一定浓度尼古丁刺激体外培养的人A549细胞,应用CCK-8法、Transwell法和细胞划痕实验分别检测A549细胞的增殖、侵袭及迁移能力.Western blot检测α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达.结果 与空白对照组比较,10-6 mol/L尼古丁处理A549细胞后,促进人A549细胞增殖(t=7.920,P<0.05);使穿过基质胶的细胞数增多,侵袭能力增强(t=5.298,P<0.05);使细胞迁移率增加,迁移能力增强(P<0.05).与空白对照组比较,10-6 M尼古丁处理A549细胞24 h后,α7 nAChR、VEGF和MMP-2蛋白表达上调,差异有统计学意义(t值分别为5.800、4.074、6.851,P值均<0.05).结论 尼古丁通过其特异性受体α7 nAChR可增强人A549细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能与VEGF和MMP-2蛋白表达上调有关.     

SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化的机制研究

［摘要］　目的　探究SNHG3调控miR-186-5p/E盒结合锌指蛋白1（ZEB1）促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化（EMT）的机制。方法　在HepG2细胞中转染siRNA干扰片段敲除SNHG3、转染pcDNA3.1(+)/SNHG3使SNHG3过表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）检测是否转染成功。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖,细胞划痕实验检测HepG2细胞迁移率,Transwell小室实验检测HepG2细胞侵袭数量,双荧光素酶活性检测验证SNHG3与miR-186-5p、miR-186-5p与ZEB1的靶向关系,FQ-PCR和Western blot法检测SNHG3、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9、Snail的表达水平。结果　肝癌组织中SNHG3表达量高于正常组织,SNHG3表达量低/中的肝癌患者的生存预后优于SNHG3表达量高的肝癌患者,差异有统计学意义（P<0.05）。克隆形成实验结果显示,与pcDNA3.1(+)组相比,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞增殖数量显著增加（P<0.05）。细胞划痕实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞迁移率显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。Transwell小室实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞侵袭数量显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。双荧光素酶活性检测结果显示,miR-186-5p mimic和pGL6-SNHG3-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,miR-186-5p mimic和pGL6-ZEB1-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,差异有统计学意义（P<0.05）。FQ-PCR和Western blot检测结果显示,当SNHG3过表达时,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著下调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著上调;当SNHG3敲除后,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著上调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著下调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论　SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1可促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,表明SNHG3是肝癌潜在的治疗靶点。     

肺癌细胞中PIK3AP1基因表达变化及其过表达对细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的观察肺癌细胞中PIK3AP1基因的表达情况,分析其表达与患者预后的关系,以及PIK3AP1基因过表达对肺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法体外培养正常支气管上皮细胞系HBEC,非小细胞肺癌细胞系A549、HCC827、H358,小细胞肺癌细胞系H69、H526、H82。采用RT-PCR法检测上述细胞中PIK3AP1 m RNA的表达。利用Kaplan-Meier plotter在线生存分析数据库,对肺癌组织中PIK3AP1 m RNA表达与患者预后的相关性进行分析。取不表达PIK3AP1的肺癌细胞,将其分为观察组和对照组,以慢病毒转染技术分别转染PIK3AP1过表达载体和空载体,采用Brd U法观察细胞增殖能力,Transwell实验观察细胞侵袭能力,细胞划痕实验观察细胞迁移能力,Western blotting法检测AKT、p-AKT蛋白表达。结果 PIK3AP1基因在小细胞肺癌细胞系H69、H526、H82中高表达,在非小细胞肺癌细胞系A549、HCC827、H358中低表达或不表达,在正常支气管上皮细胞中不表达。PIK3AP1基因高表达和低表达肺癌患者的中位生存期分别为6...     

miR-200a对宫颈癌细胞系HeLa增殖、迁移、侵袭调控作用观察及其靶向mRNA和lncRNA预测分析

目的 观察微小RNA-200a(miR-200a)对宫颈癌细胞系HeLa增殖、迁移和侵袭的调控作用,对miR-200a的靶向mRNA及靶向长链非编码RNA(lncRNA)进行预测分析。方法 取人宫颈癌细胞系HeLa分为1、2、3及4组,分别转染miRNA模拟物miR-200a mimics、miRNA抑制物miR-200a inhibitor、对照物mimics NC及inhibitor NC。培养48 h时采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-200a表达;采用CCK8法检测各组细胞增殖能力,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,采用Transwell迁移实验和细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。使用miRNA数据库在线预测miR-200a靶向mRNA和靶向lncRNA,采用基因本体论功能注释和京都基因和基因组百科全书富集分析法分析宫颈组织中miR-200a的靶向mRNA和靶向lncRNA的生物学功能。结果 与3组比较,1组细胞miR-200a相对表达量高;与4组比较,2组细胞miR-200a相对表达量低（P均<0.05）。与3组比较,培养72、96 h时1组细胞增殖...     

苦参碱调控JAK2/STAT3通路影响肝癌细胞迁移、侵袭和EMT的作用研究

目的 探究苦参碱通过介导Janus激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路对肝癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法 将体外培养人肝癌细胞MHCC97-H分为：对照组(不做处理),苦参碱组(0.125、0.25、0.5、1和2 mg/mL苦参碱),AG490组(10μmol/L JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490),抑制剂组(0.5 mg/mL苦参碱和10μmol/L AG490),干预24 h。MHCC97-H细胞活力采用细胞计数试剂盒法测定;细胞迁移和侵袭能力采用Transwell小室法测定;EMT相关因子mRNA表达采用RT-qPCR法测定;蛋白水平采用蛋白免疫印迹法测定。结果 与对照组相比,0.125、0.25和0.5 mg/mL苦参碱组细胞活力无显著影响(P>0.05),1和2 mg/mL苦参碱组和AG490组细胞活力显著降低(P<0.05),其中0.5 mg/mL苦参碱组MHCC97-H细胞迁移数、侵袭数和p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、N-钙粘蛋白、波形蛋白及纤连蛋白表达水平显著降低(P<...     

WSTF过表达的乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭、迁移能力变化及其机制

目的 观察威廉姆斯综合征转录因子(WSTF)通过调控白细胞介素6(IL-6)/信号传导子及转录激活子3(STAT3)信号通路对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法 体外培养乳腺癌MCF-7细胞株,分为WSTF高表达组(转染慢病毒表达载体pLVX-PRDX4)、WSTF低表达组(转染慢病毒干扰载体pLVX-shPRDX4)、空载组(转染空载体pLVX-NC)和对照组(不作特殊处理)。各组转染48 h,采用CCK-8法检测细胞存活率,改良Matrigel Boyden小室实验检测侵袭细胞数,划痕实验检测划痕愈合率,流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR法检测WSTF、IL-6和STAT3 mRNA表达,Western blotting法检测WSTF、IL-6和STAT3蛋白表达。结果 与对照组和空载组比较,WSTF低表达组细胞存活率、划痕愈合率和侵袭细胞数均降低,WSTF高表达组均升高(P均<0.05)。与对照组和空载组比较,WSTF低表达组细胞凋亡率升高,WSTF高表达组降低(P均<0.05)。与对照组和空载组比较,WSTF低表达组WSTF、IL-6和STA...     

miR-498过表达对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制

目的 探讨微小RNA-498(miR-498)过表达对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响及其机制。方法 体外传代培养人永生化鼻咽上皮细胞系NP69及人鼻咽癌细胞系CNE-2Z、CNE-1、HNE-1、SUNE-1,采用RT-qPCR法检测各细胞miR-498表达,选择miR-498表达最低的鼻咽癌细胞进行后续实验。取传3代、对数生长期、生长状态良好的鼻咽癌细胞,随机分为miR-498 mimics组和NC mimics组,分别转染miR-498 mimics、NC mimics。转染6 h更换新鲜培养基继续培养24 h,收集细胞。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,采用平板克隆形成实验检测集落形成能力,采用Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,采用Western blotting法检测EMT相关上皮型钙黏素（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、纤连蛋白（Fibronectin）以及高迁移率族蛋白A2(HMGA2)表达。结果 CNE-1、HNE-1、CNE-2Z、SUNE-1细胞miR-498相对表达量均低于NP69细胞（P均<0.0...     

lncR-HOXA-AS3靶向miR-29a对前列腺癌细胞凋亡和自噬的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncR)HOXA-AS3和微小RNA-29a(miR-29a)对前列腺癌（PCa）细胞凋亡、自噬的影响。方法 体外培养人PCa细胞（DU-145、LNCaP、C4-2B）和人正常前列腺细胞RWPE-1,采用RT-qPCR法检测细胞中lncR-HOXA-AS3和miR-29a表达。应用双荧光素酶报告基因实验验证lncR-HOXA-AS3和miR-29a之间的靶向调控关系。取对数生长期LNCaP细胞,分为si-NC组、si-HOXA-AS3组、si-HOXA-AS3+anti-miR-NC组和si-HOXA-AS3+anti-miR-29a组,利用脂质体转染法分别将si-NC、si-HOXA-AS3、si-HOXA-AS3+anti-miR-NC、si-HOXA-AS3+anti-miR-29a转染至各组LNCaP细胞,应用RT-qPCR法检测各组细胞中lncR-HOXA-AS3和miR-29a表达,应用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,应用Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3及自噬相关蛋白LC3II、LC3I、Becl...     

干扰FTO蛋白对人卵巢癌细胞系SKOV3增殖、迁移、侵袭的影响及其机制

目的 观察干扰脂肪量和肥胖相关蛋白（FTO）对人卵巢癌细胞系SKOV3增殖、迁移、侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法 取对数生长期SKOV3细胞,分为siFTO-1组、siFTO-2组、si-NC组,siFTO-1组转染第一条靶向FTO的小干扰RNA(siFTO-1),siFTO-2组转染第二条靶向FTO的小干扰RNA(siFTO-2),si-NC组转染无靶向作用的小干扰RNA(si-NC),CCK-8法检测细胞增殖能力（增殖率）,细胞划痕实验检测细胞迁移能力（相对迁移率）,Transwell实验检测细胞侵袭能力（穿膜细胞数）,Western blotting法检测细胞AKT、p-AKT/AKT、PI3K、p-PI3K/PI3K蛋白相对表达量。结果 与si-NC组比较,siFTO-1组和siFTO-2组细胞增殖率、相对迁移率、穿膜细胞数高（P均<0.05）;与si-NC组比较,siFTO-1组和siFTO-2组p-AKT/AKT和P-PI3K/PI3K蛋白相对表达量升高（P均<0.05）,PI3K、AKT蛋白相对表达量无显著变化（P均>0.05）。结论 干扰FTO可促...     

HVEM基因干扰后非小细胞肺癌细胞的迁移、侵袭能力变化及其机制

目的 观察疱疹病毒侵入介体(HVEM)基因干扰对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞迁移、侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 通过Western blotting法检测正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC`细胞系SKMES-1、H1299、H460、H226、H520中HVEM蛋白表达,筛选出HVEM蛋白表达升高最明显的H1299细胞进行后续实验。将H1299细胞分为si-NC组、si-HVEM-1组和si-HVEM-2组,分别用Lipofectamine 2000瞬时转染si-NC、siHVEM-1和si-HVEM-2干扰序列,转染48 h。采用Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力,采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测HVEM、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)mRNA和蛋白相对表达量。结果 与si-NC组比较,si-HVEM-1组和si-HVEM-2组迁移、侵袭细胞数及HVEM mRNA、蛋白相对表达量均减少,且si-HVEM-2...     

miR-138在肝细胞癌中的表达及其对MHCC97H细胞侵袭、迁移能力的影响

目的 观察miR-138在肝细胞癌(HCC)组织、细胞中的表达变化,并探讨miR-138对MHCC97H细胞侵袭、迁移能力及上皮间质转化(EMT)的影响.方法 采用qRT-PCR检测HCC组织及癌旁组织、MHCC97H、MHCC97L、HepG2及正常肝细胞系L02细胞中的miR-138.转染miR-138 mimic...