多重荧光PCR技术在诊断儿童急性呼吸道感染中的应用

目的评估多重荧光PCR技术在检测儿童急性呼吸道感染病原体中的临床应用价值。方法随机选择我院急性呼吸系统感染患儿502例,采集鼻咽拭子,分别采用多重荧光PCR技术和胶体金、免疫荧光等方法检测呼吸道病原体,对不同检测结果采用二代测序方法进行验证,评估多重PCR技术在检测呼吸道病原体中的价值。结果502份标本采用多重PCR技术检测出10种病原体,共计200株,阳性标本118份(阳性率23.50%),混合感染率11.4%,与测序结果一致,与其它免疫方法比较,除甲乙流病毒检测一致性好(kappa>0.8),其它病原体检测的检测一致性较差(kappa<0.4)。结论多重荧光PCR技术具有灵敏、特异、准确、快速高效等优点,而胶体金法、免疫荧光法灵敏度低、结果判读主观性强。多重荧光PCR技术对于诊断儿童呼吸系统感染具有良好的临床应用价值。     

2018年至2021年广州地区儿童急性呼吸道感染病原体的流行特征

目的了解广州地区呼吸道病原体在急性呼吸道感染(ARTI)患儿中的流行特征。方法纳入2018年1月至2021年12月广州市妇女儿童医疗中心住院的13 610例ARTI患儿。采集患儿咽拭子标本, 采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测11种呼吸道病原体, 包括呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒、副流感病毒(PIV)、人鼻病毒、人博卡病毒(HBoV)、人偏肺病毒(HMPV)、肠道病毒、甲型流行性感冒病毒(IFA)、乙型流行性感冒病毒(IFB)、肺炎支原体(MP)和肺炎衣原体(CP)。根据年龄(<1岁组、1～<3岁组、3～<6岁组、6～14岁组)和季节进行分组。统计学分析采用χ2检验。结果 13 610例患儿中, 6 331例检出至少1种病原体, 总检出率为46.52%。各病原体的检出率由高到低依次为RSV[13.75%(1 872/13 610)]、腺病毒[4.82%(656/13 610)]和PIV [4.82%(656/13 610)]、MP[4.54%(618/13 610)]、人鼻病毒[3.39%(462/13 610)]、HBoV[2.64%(359/13 610)...     

2015年至2019年上海地区单中心下呼吸道感染住院儿童常见病原体的流行病学分析

目的分析上海地区单中心下呼吸道感染住院患儿常见呼吸道病原体的流行特征, 为上海地区儿童下呼吸道感染的诊治提供数据和临床支持。方法纳入2015年1月1日至2019年12月31日于复旦大学附属儿科医院就诊并诊断为下呼吸道感染的患儿, 取呼吸道样本, 采用直接免疫荧光法和实时荧光定量聚合酶链反应检测呼吸道病原体, 对其流行病学特征进行分析。统计学分析采用χ2检验。结果共纳入18 716例患儿, 呼吸道病原体的总检出率为36.96%(6 918/18 716), 其中肺炎支原体的检出率最高, 为15.31%(2 866/18 716), 其次为呼吸道合胞病毒[10.40%(1 946/18 716)]和副流感病毒Ⅲ型[4.65%(871/18 716)]。女性患儿的病原体总检出率[38.48%(2 936/7 630)]高于男性患儿[35.92%(3 982/11 086)], 差异有统计学意义(χ2=12.72, P<0.001)。呼吸道合胞病毒、甲型流行性感冒病毒的检出高峰在冬季, 乙型流行性感冒病毒和偏肺病毒在冬春季检出率较高, 副流感病毒Ⅲ型在春夏季有较高检出率, 副流感病毒Ⅱ型...     

儿科重症监护室先天性心脏病合并呼吸道感染患儿的病毒性病原学研究

目的：总结儿科重症监护室中先天性心脏病合并呼吸道感染患儿的病毒性病原谱。方法收集2010年6月至2012年6月因呼吸道感染入住本院儿科重症监护室的患儿咽拭子标本622份,其中先天性心脏病合并呼吸道感染患儿咽拭子34份。应用多重聚合酶链反应(PCR)技术对呼吸道病毒进行检测,并对照分析合并先天性心脏病患儿的病毒性病原学特点。结果①34份先天性心脏病组咽拭子标本中,呼吸道病毒检测阳性20份(58.8%),588份非先天性心脏病组咽拭子标本中,呼吸道病毒检测阳性368份(62.6%)。②先天性心脏病组中,最常见的病毒分别为人鼻病毒(human rhinovirus,HRV)8份,呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)6份,人博卡病毒(human bocavirus,HBoV)4份,腺病毒(adenovirus,ADV)2份;非先天性心脏病组中,最常见的病毒分别为 HRV 160份,RSV 104份,ADV 72份,HBoV50份;其他病毒阳性率较低。③先天性心脏病组中,混合病毒感染有2份(2/20,10.0%),非先天性心脏病组中,混合病毒感染有110份(110/368,29.9%)。结论本地区儿科重症监护室中先天性心脏病合并呼吸道感染患儿的病原体中病毒性病原体检出率高,以鼻病毒、呼吸道合胞病毒、人博卡病毒和腺病毒最常见,病毒谱和非先天性心脏病组相似。     

儿童呼吸道病毒感染病原学特征分析北大核心CSCD

目的分析河南南阳地区儿童呼吸道病毒感染的病原学特征。方法回顾南阳市中心医院患儿的性别、年龄、入院时间、临床症状、病原学检测结果等病史,分析不同呼吸道疾病的病毒检出情况。采集患儿鼻咽抽吸物,进行标本处理、核酸提取、逆转录,采用巢式PCR检测呼吸道合胞病毒、副流感病毒、人博卡病毒、偏肺病毒,采用荧光定量PCR检测流感病毒、人鼻病毒、人肠道病毒,采用单轮PCR方法检测人腺病毒、人冠状病毒。结果1156例标本中,542例检出呼吸道病毒,阳性率为46.89%,32.79%为单一感染,14.10%为两种病毒混合感染。单一病毒感染患儿中,27.44%为呼吸道合胞病毒感染,占比最高。混合感染中,23.31%为呼吸道合胞病毒+副流感病毒混合感染,占比最高。对比每种病毒单一感染与混合感染的阳性率,副流感病毒在混合感染中的检出率高于单一感染,人腺病毒、人鼻病毒、人博卡病毒、人肠道病毒、偏肺病毒、人冠状病毒在单一感染中的检出率高于混合感染。1156例患儿中,肺炎565例,上呼吸道感染295例,哮喘158例,急性支气管炎72例,喘息性支气管炎35例,毛细支气管炎31例。其中肺炎患儿病毒检出率最高为66.55%(376/565),不同疾病分组病毒检出率差异有统计学意义(χ^(2)=202.132,P<0.05)。163例混合感染中,春季71例,夏季17例,秋季28例,冬季47例。新生儿组79例,婴儿组43例,幼儿组28例,儿童组13例。呼吸道合胞病毒单一感染患儿中,52.88%患儿为呼吸道合胞病毒A型阳性,47.12%患儿为呼吸道合胞病毒B型阳性,呼吸道合胞病毒A型阳性组主要以男性为主,两组对比差异具有统计学意义。结论本地区儿童呼吸道感染病毒主要为呼吸道合胞病毒,不同疾病分组病毒检出率不同,混合感染多发生于春季与新生儿组,呼吸道合胞病毒A型感染男性占比较高。     

郑州地区11299例急性呼吸道感染儿童病原体检查结果分析

目的 了解郑州地区急性呼吸道感染儿童病原体流行情况.方法 取11299名急性呼吸道感染住院患儿的咽分泌物、痰液或肺泡灌洗液,采用基于毛细管电泳的多重PCR法检测12种呼吸道病原体.结果 11299例样本中,检测结果为阳性的8742例,阳性率为77.37％,其中,单纯感染6943例(79.42％),混合感染1799例(2...     

下呼吸道感染患儿沙眼衣原体检测与初步基因分型

研究下呼吸道感染患儿沙眼衣原体（Ct）的检测情况、Ct分离株的初步基因分型及方法学评价。采用McCoy细胞培养、聚合酶链反应（PCR）对下呼吸道感染患儿248例鼻咽拭子（其中110例加下睑结刮取标本）进行检测；8份患儿Ct标本经双链DNA直接测序法以及裂解酶片段长度多态性（CFLP）基因分型，下呼吸道感染患儿鼻咽标本Ct检出率为25％（62／248），其中110例新生儿鼻咽和结膜标本Ct总检出率为40.9%（45／110），基因分型：E型4株，F、D和H型分别为2、1和1株，6株成人性病株中E型3株，F、D和H型各1株。取E型3份，F型2份作CFLP，呈两类CFLP谱，提示同时取患儿鼻咽和结膜标本可提高Ct检出率，下呼吸道感染婴儿的Ct型别与成人性病Ct型别关系密切，双链DNA直接测序法及CFLP均可用于Ct基因分型。     

贵阳地区儿童急性下呼吸道感染病原学研究

目的探讨贵阳地区儿童急性下呼吸道感染(ALRI)的病原学,为临床抗感染及病原体检测提供依据。方法收集440例ALRI患儿的血清,采用间接免疫荧光法检测11种常见病原体的IgM抗体。结果 440例患儿中,检出抗体阳性328例(74.5%),其中病毒感染242例(55.0%),以流感病毒B型为主,阳性检出率为16.8%,其次为腺病毒与呼吸道合胞病毒,阳性检出率分别为15.0%与9.3%;细菌感染61例(18.6%);在各年龄组中,<1、1～3、4～6、>6岁年龄组病原体阳性检出率分别为70.6%、56.4%、51.7%、49.0%,<1岁组与其他3组比较,差异有统计学意义(P均<0.05);不同季节病原体阳性检出率不同,以冬、春季为最高,各季节间差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论病毒是贵阳地区儿童急性下呼吸道疾病的主要病原体;以流感病毒B型为主,其次是腺病毒和呼吸道合胞病毒,并在冬春季好发,病原体感染在<1岁的儿童间更常见。     

2108例儿童呼吸道病原体感染的流行病学特征

目的 探讨呼吸道病原体感染住院儿童的病原谱特征,为相关感染性疾病的诊治和预防控制提供依据。方法 收集2022年6月至2023年3月深圳市龙岗区妇幼保健院采集住院儿童呼吸道病原体样本2108份,采用多重聚合酶链反应技术对样本进行甲型流行性感冒病毒(influenza A virus,FluA)、乙型流行性感冒病毒(influenza B virus,FluB)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)、腺病毒(respiratory adenovirus,ADV)、鼻病毒(respiratory rhinovirus,HRV)、肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)6种病原体检测,分析总体检出情况,并对不同年龄、性别、疾病、月份、时间段的病原体分布特点进行比较。结果 病原体的阳性总检出率为50.05%,单一感染中HRV(333例,15.80%)、RSV(237例,11.24%)、FluA(194例,9.20%)占比较高,混合感染中以HRV与RSV组合频次最高;住院患儿不同年龄组病原体单一感染、混合感染(3种病原体混合感染除外...     

多重实时荧光定量PCR对下呼吸道感染病原体检测分析

目的比较多重实时荧光定量PCR(multiplex real-time polymerase chain reaction, MRT-PCR)和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay, IFA)对成人呼吸道病毒及非典型病原体检测结果。 方法收集2014年1月至2017年12月间呼吸内科210例成人呼吸道感染的标本,采用MRT-PCR检测8种常见呼吸道病原体,同时应用IFA检测血清8种病原体IgM抗体,并全部进行PCR及测序分析,比较两种方法的特异性及敏感性,评估MRT-PCR的临床应用价值。 结果210例下呼吸道感染标本经MRT-PCR和IFA检测,阳性率分别为58.57%和38.10%,混合感染率分别为7.62%和4.76%。两种方法的灵敏度分别为94.74%和35.96%,特异度分别为84.38%和59.38%。灵敏度和特异度差异有统计学意义(P<0.05)。 结论与IFA相比,MRT-PCR灵敏度、特异度好,检测性能优于IFA。     

3965例儿童病例七项呼吸道病毒抗原检测结果分析

目的了解宿州地区住院患儿急性呼吸道感染病毒病原学特征及流行趋势,为临床治疗及疾病防控提供参考依据。方法选取皖北煤电集团总医院2017年3月至2018年2月儿科住院患者的鼻咽分泌物,用直接免疫荧光法检测呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、副流感病毒1、2、3型(PIV1、2、3)、流感病毒A、B型(IFVA、IFVB)等七种呼吸道病毒抗原。结果 3 965例患儿中检出592例病毒感染,阳性检出率为14.93%。各种呼吸道病毒检出情况,RSV阳性率最高占57.94%,其次是IFVA 15.03%、PIV3 13.34%。本地区呼吸道病毒感染有明显的季节性,冬季检出率最高27.73%,其次是秋季13.91%。结论儿童急性呼吸道感染的病毒病原体,以冬季检出率最高,呼吸道合胞病毒(RSV)是本地区儿童急性呼吸道感染的最主要病毒性病原,其次是甲型流感病毒。     

严重急性呼吸综合征病原体的检测方法探讨

目的 在实验室建立SARS病原学检测方法。方法 采集临床诊断为SARS患者、疑似病人漱口液、用细胞培养分离,荧光定量PCR方法检测。病原体用间接免疫荧光鉴定。结果 漱口液、咽拭子液样本57份作病原体分离,阳性数5份,阳性率8.8％尸解标本7份,其中肺部组织3份、气管黏液、淋巴液、肺积液、心包液各1份。结果细胞分离到7株病原体。阳性率100％。荧光定量PCR方法检测临床确诊SARS患者标本57份,检出阳性结果38份,阳性率为66.7％。密切接触者标本14份,检出阳性结果7份,阳性率为50.0％。疑似患者标本59份中检出阳性12份,阳性率为20.3％。两种方法的比较,统计学上有显著性差异(P<0.001)。结论用荧光定量PCR方法检测SARS患者病原体敏感性高,可靠性和重复性好,优于细胞病毒分离的方法,可以作为SARS临床早期诊断和流行病学调查的重要指标之一。     

粤东地区毛细支气管炎病毒病原谱的变迁探究

目的探讨近年来粤东地区毛细支气管炎病毒病原学的构成现状。方法收集粤东地区2007年7月至2010年6月3年间毛细支气管炎患儿的咽拭子共508份,采用多重PCR方法检测呼吸道合胞病毒、腺病毒、流感病毒A型、流感病毒B型、副流感病毒1型、副流感病毒3型、鼻病毒、人类博卡病毒、人类偏肺病毒、WU多瘤病毒,共8种lO型病毒。结果①508例患儿中男374例（73．6％）,女134例（26．4％）。②508例患儿中1岁以下年龄组393例（77．4％）,病毒检出率为77．2％;1岁以上年龄组115例（22．6％）,病毒检出率为22．8％。③2007年7至2008年6月病毒阳性率为47．5％（77／162）,病毒检出第1位为呼吸道合胞病毒（33．7％）,新发现呼吸道病毒（人类博卡病毒、人类偏肺病毒、wu多瘤病毒）占14．3％;2008年7月至2009年6月病毒阳性率为51．7％（124／240）,病毒检出第1位为流感病毒A型（38．4％）,新发现呼吸道病毒占6．4％;2009年7月至2010年6月病毒阳性率为45．3％（48／106）,病毒检出第1位为鼻病毒（22．4％）,新发现呼吸道病毒占20．9％。④3年间病毒混合感染率分别为20．8％、42．7％、27．1％。结论①毛细支气管炎患儿中男孩多见,1岁以下年龄组发病率及病毒检出率均高于1岁以上年龄组。②鼻病毒、流感病毒A型在不同年度是小儿毛细支气管炎首位病原体,既往研究中占首位的呼吸道合胞病毒有逐年下降趋势。③新发现呼吸道病毒在小儿毛细支气管炎病例中检出,并有逐年上升趋势。④毛细支气管炎病例中存在不同病毒混合感染的现象。     

丽水市十三项呼吸道病原体感染情况及特点分析北大核心CSCD

目的了解丽水市呼吸道病原体感染情况及流行病学特征,为呼吸道传染病诊疗与防控提供科学依据。方法回顾性分析2020年3月至2021年12月丽水市人民医院收治的4035例呼吸道感染患者13项呼吸道病原体PCR毛细电泳核酸检测结果,并分析病原体感染分布特征。结果呼吸道病原体感染患者阳性检出率为32.24%(1301/4035),检出率前5位分别是HRV(16.60%)、HRSV(7.09%)、HPIV(2.87%)、HMPV(2.21%)、HADV(1.96%)。混合感染阳性占比为7.61%(99/1301),Boca病毒(76.0%)与Ch(46.15%)易与其它病原体形成混合感染。不同性别呼吸道病原体感染率差异无统计学意义(P>0.05)。虽然不同季节呼吸道病原体整体感染率差异无统计学意义(P>0.05),但HRV好发于春秋两季,而HPIV在春秋两季感染率较低,春季HRSV感染率较低,HADV在夏秋两季感染率较低,HMPV在冬季较为流行。未成年人呼吸道病原体感染率较高,HRSV、HRV、HPIV、HADV和Boca主要发生于未成年人组,InfB和HMPV在未成年和青年人群感染率都较高。结论未成年人群是呼吸道病原体易感人群,应加强未成年人呼吸道传染病防控。     

兰州地区急性呼吸道感染住院患儿病原学分析

目的了解兰州地区急性呼吸道感染住院患儿病原体检出情况,分析呼吸道感染病原体流行病学特征,为预防和诊治提供依据。方法在兰州大学第一医院590例呼吸道感染住院患儿中541例在急性期采血检测呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)、埃可病毒(ECHOV)、柯萨奇病毒(Cox V)、腺病毒(ADV)、EB病毒(EBV)及肺炎支原体(MP) Ig M抗体。475例患儿进行痰/咽拭子细菌培养。结果各病毒Ig M抗体阳性检出率从高到低依次是RSV(23. 84%)、ADV(18. 30%)、ECHOV(17. 74%)、Cox V(11. 46%)、EBV(9. 98%)、PIV(3. 33%),MP阳性检出率为12. 94%。痰/咽拭子细菌培养阳性率为19. 79%,其中肺炎链球菌、肺炎克雷伯杆菌、金黄色葡萄球菌阳性率居前三位。结论兰州地区儿童急性呼吸道感染病原主要为RSV、ADV、MP以及肺炎链球菌、肺炎克雷伯菌。年龄越小细菌感染概率越大,而幼儿及学龄前儿童以病毒感染更多见。     

人类偏肺病毒与呼吸道合胞病毒呼吸道感染的临床研究

目的 了解福州地区人类偏肺病毒(HMPV)感染情况,比较HMPV与呼吸道合胞病毒(RSV)引起呼吸道感染的临床特征及流行特点.方法 采集2005年至2007年连续两个冬春季节153份福建省立医院就诊呼吸道感染患者痰标本或咽拭子标本,RT-PCR和套式RT-PCR分别检测RSV和HMPV,部分阳性PCR产物测序,DNAMAN软件分析;结合临床资料,比较两种病毒所引起的呼吸道感染临床症状、体征和流行特点.结果 153份鼻咽分泌物标本中,32份HMPV阳性,阳性率为20.9%;26份RSV阳性,阳性率为17.0%,8份HMPV和RSV均阳性.随机抽取3份标本,HMPV核苷酸序列一致,登载NCBI基因库(序列号DQ887758),基因进化树分析为单一基因型,属A基因型,但发生部分变异.2005年至2006年冬春HMPV阳性26份,阳性率为26.7%,2006年至2007年冬春HMPV阳性6份,阳性率为10.7%,而RSV检出情况与HMPV相反.儿童RSV感染平均年龄为(2.65±2.65)岁,HMPV为(4.58±3.35)岁.两种病毒引起呼吸道感染症状均以咳嗽、咽痛,发热为主.结论 HMPV与RSV均是福州地区冬春季节呼吸道病毒感染的主要病原体,两者可合并感染;HMPV主要感染年龄较大儿童,HMPV与RSV的临床特征相似.本研究期间福州地区发现的HMPV为单一基因型.     

成人重症肺炎患者EB病毒和人鼻病毒混合感染的病原学分子鉴定

目的对1例有禽类接触史的成人重症肺炎患者进行病原学研究,确定其病原体。方法采集患者的下呼吸道标本,应用荧光PCR方法检测禽流感H5N1和SARS病毒及甲型H1N1和季节性流感病毒;应用多重PCR方法检测12种常见呼吸道病毒;应用普通PCR方法检测EB病毒和巨细胞病毒,扩增阳性的病毒基因片段测序后,与GenBank数据库参考序列进行同源性分析。结果荧光PCR法检测禽流感病毒H5N1病毒和SARS病毒核酸阴性,甲型H1N1和季节性流感病毒核酸阴性;多重PCR检测人鼻病毒、EB病毒均阳性;普通PCR检测EB病毒核酸阳性。基因序列比对显示,EB病毒核苷酸序列与GenBank数据库中参考序列同源性为99.5%～100%;人鼻病毒的核苷酸序列与GenBank数据库中A组鼻病毒(73血清型)同源性最高,为94.7%。结论该例重症肺炎患者为EB病毒和A组(73血清型)人鼻病毒混合感染,排除禽流感H5N1和SARS感染。     

病原体特异性IgM抗体检测在儿童呼吸道急性感染病原快速诊断中的价值研究

目的:研究病原体特异性IgM抗体检测在儿童呼吸道急性感染病原快速诊断中的价值。方法:本研究为前瞻性研究。选取朝阳市第二医院2018年10月至2018年12月住院的急性呼吸道感染患儿482例作为研究对象,采用间接免疫荧光法检测呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒A(INFA)、流感病毒B(INFB)等11种病原体特异性Ig...     

呼吸道感染腺病毒基因分型研究

目的人腺病毒是引起急性呼吸道感染的常见病原体,采用PCR法对人腺病毒进行分型鉴别可为人腺病毒感染的防治提供可靠依据。方法采集急性呼吸道感染患者咽拭子标本,提取DNA,采用PCR法对其进行基因分型分析。结果以500bp作为DNA分子质量标准对待测标本PCR产物进行1.2%琼脂糖凝胶电泳,46份标本中21份鉴定为腺病毒通用型(扩增片段300bp),1、2、3、4、7、21型分别有3、8、1、15、2、2份(扩增片段分别为396、393、316、305、305和507bp)。结论本院急性呼吸道感染患者感染的腺病毒以通用基因型、基因4型和基因2型为主。及时检测流行腺病毒型别及其发展规律,可为呼吸道感染类疾病的临床治疗以及防控提供指导。     

梧州地区住院患者呼吸道病毒及非典型病原体的抗体检测分析

目的探讨梧州地区急性呼吸道感染住院患者呼吸道病毒和非典型病原体感染的情况。方法2014年7月至2015年6月在广西梧州市工人医院住院的急性呼吸道感染患者血清,应用间接免疫荧光法(IFA)定性检测九种呼吸道感染病毒及非典型病原体Ig M抗体,分别是流感病毒A/B、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体。结果呼吸道病原体血清抗体总阳性率为20.97%,其中肺炎支原体阳性率最高,其次B型流感病毒、副流感病,分别是15.80%、2.43%、1.97%。一年中,秋季血清阳性率最高(50.00%),其次冬季(20.13%),与春季、夏季比较差异有统计学意义(P0.05)。不同年龄段中,青年血清阳性率最高,老年组血清阳性率最低。18例B型流感病毒血清阳性中,合并支原体血清阳性9例(9/18=50.00%),12例副流感病毒中,合并支原体7例(7/12=58.33%)。结论 :梧州地区急性呼吸道感染住院患者吸道病毒和非典型呼吸道病原体感染率较高,并以肺炎支原体最高,其次B型流感病毒、副流感病毒;且青年组较老年组发病率高;以秋、冬季节高发;流感病毒、副流感病毒血清阳性混合感染肺炎支原体发生率较高。