miR-498过表达对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制

目的 探讨微小RNA-498(miR-498)过表达对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响及其机制。方法 体外传代培养人永生化鼻咽上皮细胞系NP69及人鼻咽癌细胞系CNE-2Z、CNE-1、HNE-1、SUNE-1,采用RT-qPCR法检测各细胞miR-498表达,选择miR-498表达最低的鼻咽癌细胞进行后续实验。取传3代、对数生长期、生长状态良好的鼻咽癌细胞,随机分为miR-498 mimics组和NC mimics组,分别转染miR-498 mimics、NC mimics。转染6 h更换新鲜培养基继续培养24 h,收集细胞。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,采用平板克隆形成实验检测集落形成能力,采用Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,采用Western blotting法检测EMT相关上皮型钙黏素（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、纤连蛋白（Fibronectin）以及高迁移率族蛋白A2(HMGA2)表达。结果 CNE-1、HNE-1、CNE-2Z、SUNE-1细胞miR-498相对表达量均低于NP69细胞（P均<0.0...     

鼻咽癌组织中miR-107、FoxM1的表达及与病理特征和上皮间质转化的关系

目的 研究鼻咽癌（NPC）组织中微小RNA(miR)-107、叉头盒蛋白M1(FoxM1)的表达,分析二者表达与上皮间质转化（EMT）基因表达的相关性及与患者临床病理特征的关系。方法 选取79例NPC患者,RT-qPCR法检测NPC组织及癌旁组织中miR-107、FoxM1 mRNA、EMT通路基因N钙黏素（N-cad）、E钙黏素（E-cad）及锌指转录因子（Snail） mRNA表达。采用t检验分析两者表达与患者临床病理特征的关系,Pearson线性相关分析miR-107与FoxM1 mRNA表达的相关性及miR-107、FoxM1 mRNA表达与EMT通路基因表达的相关性。结果 NPC组织中FoxM1、N-cad、Snail mRNA的相对表达量均高于癌旁组织,而miR-107、E-cad mRNA的相对表达量均低于癌旁组织（P均<0.05）。NPC组织中miR-107、FoxM1表达与TNM分期有关（P均<0.05）,而与性别、年龄、吸烟史、组织分化程度及是否伴有淋巴结转移无关（P均>0.05）。miR-107和FoxM1的表达呈负相关关系（r=-0.603,P...     

Cag A阳性幽门螺杆菌对胃癌细胞lncRNA DLEU2表达及上皮间质转化的影响

目的 探讨细胞毒素相关蛋白A(Cag A)阳性幽门螺杆菌（Hp）对胃癌细胞长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)表达及上皮间质转化的影响。方法 体外培养胃癌细胞系HGC-27、AGS、MGC-803、MKN-28以及正常胃黏膜上皮细胞系GES1,采用RT-qPCR法检测DLEU2表达,并选择DLEU2表达最高的胃癌细胞进行后续实验。将Hp NCTC标准菌株26695或11637分别与正常胃黏膜上皮细胞和胃癌细胞共培养0、3、9、12 h,采用RT-qPCR法检测DLEU2表达。采用Western blotting法检测与NCTC 26695或11637共培养3、9、12 h正常胃黏膜上皮细胞和胃癌细胞Cag A表达以及共培养3、9、12 h神经钙黏着蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达。同时,分析与NCTC 26695或NCTC 11637共培养的胃癌细胞DLEU2、Cag A表达与N-cadherin、Vimentin表达的关系。结果 HGC-27、AGS、MGC-803、MKN-28细胞DLEU2相对表达量均高于GES1细胞（P均<0...     

高血压脑出血患者血浆lncRNA FENDRR和miR-126表达变化及其临床意义

目的 探讨高血压脑出血（HICH）患者血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达变化及其临床意义。方法 选择HICH患者100例（观察组）,其中病情程度轻型32例、中型47例、重型21例,另选同期体检健康的志愿者52例（对照组）。采集所有研究对象空腹外周静脉血,离心留取血浆,采用RT-qPCR法检测血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达。HICH患者出院后定期随访3个月,预后良好52例、预后不良48例。比较两组血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达以及不同病情程度HICH患者血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达,分析HICH患者血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达与病情程度的关系,采用受试者工作特征（ROC）曲线评估血浆lncRNA FENDRR、miR-126表达对HICH患者预后不良的预测价值。结果 观察组血浆lncRNA FENDRR相对表达量显著高于对照组,miR-126相对表达量显著低于对照组（t分别为16.901、25.712,P均<0.05）。随着病情程度加重,HICH患者血浆lncRNA FENDRR表达...     

抑制miR-210的表达对鼻咽癌放射抵抗细胞敏感性的影响

目的探讨抑制miR-210的表达对鼻咽癌放射抵抗细胞(CNE-2R)敏感性的影响。方法对人鼻咽癌细胞株(CNE-2)进行不同梯度的X射线反复辐射诱导,建立CNE-2R细胞株;用双向凝胶电泳结合质谱分析法检测2种细胞株蛋白的表达;用miR-210抑制慢病毒载体LV-hsa-miR-210-inhibition感染CNE-2R细胞生成miR-210抑制细胞(I-210);RT-qPCR检测I-210中miR-210表达量;细胞计数试剂盒(CCK-8)技术检测I-210与CNE-2R细胞生长能力;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;对CNE-2R和I-210分别给予不同剂量的X射线照射,培养2 w后,利用克隆成体实验检测CNE-2R与I-210计算放射增敏比,检测细胞放射敏感性。结果 CNE-2与其诱导后生成的CNE-2R比较,有36个蛋白表达存在差异。I-200的miR-210表达显著降低,细胞存活率显著降低,细胞凋亡比例显著上升,G2/M期比例显著增加,而处于S期的细胞比例显著减少,放射增敏比上升(P0.05)。结论抑制miR-210表达,可增强鼻咽癌放抗细胞的敏感性。     

非编码RNA对肿瘤的调控机制

非编码RNA(ncRNA)是不参与蛋白质编码的RNA的总称,包括微小RNA(miRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)、转运RNA(tRNA)、核糖体RNA (rRNA)等.研究发现,ncRNA在调节组织细胞的发生、分化、增殖、凋亡等方面具有重要的作用.尤其在肿瘤细胞中,ncRNA的表达水平与正常细胞有明显差异,在功能上表现为致癌基因或抑癌基因,提示其在肿瘤的发生发展中可能起重要作用.此文对当前研究较为深入的几种ncRNA调控肿瘤的机制作一综述.     

SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化的机制研究

［摘要］　目的　探究SNHG3调控miR-186-5p/E盒结合锌指蛋白1（ZEB1）促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化（EMT）的机制。方法　在HepG2细胞中转染siRNA干扰片段敲除SNHG3、转染pcDNA3.1(+)/SNHG3使SNHG3过表达,通过实时荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）检测是否转染成功。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖,细胞划痕实验检测HepG2细胞迁移率,Transwell小室实验检测HepG2细胞侵袭数量,双荧光素酶活性检测验证SNHG3与miR-186-5p、miR-186-5p与ZEB1的靶向关系,FQ-PCR和Western blot法检测SNHG3、ZEB1、E-cadherin、N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9、Snail的表达水平。结果　肝癌组织中SNHG3表达量高于正常组织,SNHG3表达量低/中的肝癌患者的生存预后优于SNHG3表达量高的肝癌患者,差异有统计学意义（P<0.05）。克隆形成实验结果显示,与pcDNA3.1(+)组相比,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞增殖数量显著增加（P<0.05）。细胞划痕实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞迁移率显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。Transwell小室实验结果显示,pcDNA3.1(+)/SNHG3组HepG2细胞侵袭数量显著高于pcDNA3.1(+)组（P<0.05）。双荧光素酶活性检测结果显示,miR-186-5p mimic和pGL6-SNHG3-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,miR-186-5p mimic和pGL6-ZEB1-WT共转染后,荧光素酶活性低于其他组,差异有统计学意义（P<0.05）。FQ-PCR和Western blot检测结果显示,当SNHG3过表达时,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著下调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著上调;当SNHG3敲除后,E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量显著上调,N-cadherin、MMP-2、vimentin、MMP-9和Snail mRNA和蛋白相对表达量以及ZEB1蛋白相对表达量显著下调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论　SNHG3调控miR-186-5p/ZEB1可促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,表明SNHG3是肝癌潜在的治疗靶点。     

间充质干细胞对糖尿病肾病小鼠lncRNA的干预及肾脏保护的可能机制

目的 筛选糖尿病肾病(DN)小鼠模型中异常表达的长链非编码RNA(lncRNA),探索与间充质干细胞(MSC)干预可能的lncRNA是否对小鼠肾脏起保护作用及可能机制。方法 利用基因表达综合数据库(GEO)来源的转录组测序(RNAseq)数据,对DN小鼠RNAseq数据与正常小鼠进行筛选,得到与DN相关的lncRNA并进行验证,得到上调前3名的lncRNA,选取变化最显著的lncRNA进行下一步实验。分离培养小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)及骨髓间充质干细胞(BMSC),分组培养mRTECs[对照组、高糖(HG)组、HG+BMSC组],四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测各组mRTECs细胞增殖率,荧光定量PCR法检测各组mRTECs中胶原蛋白(collagen)Ⅰ、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(cadherin) mRNA表达。采用siRNA敲减mRTECs中lncRNA的表达,构建正确的pcDNA3.1(+)质粒扩大培养。分组培养mRTECs(对照组、NC组、lncRNA组;si-NC组、si-lncRNA组、HG组、HG+si-lncRNA组...     

上皮--间质转化及其在鼻咽癌中的作用研究进展

鼻咽癌（NPC）是一种与Epstein-Barr病毒（EBV）感染密切相关的鼻咽部黏膜上皮恶性肿瘤,对放疗较敏感,但大多数患者在初次确诊时已有局部淋巴结或远处转移,处于临床Ⅲ或Ⅳ期,晚期患者放疗后仍有30％～40％发生远距离转移和局部复发旧j,侵袭和转移仍是威胁患者生存的关键因素之一。上皮一间质转化（EMT）是肿瘤发生侵袭转移的重要机制,且与NPC原位侵袭和远处转移密切相关。现将EMT在NPC中的作用研究进展综述如下。     

lncRNA TUG1和miR-26a在子痫前期胎盘组织中的表达水平及其临床意义

目的 探讨子痫前期(PE)患者胎盘组织中长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)和微小RNA-26a(miR-26a)的表达水平,并分析两者在PE发生、发展中的作用。方法 选择2019年5月至2021年5月株洲市中心医院产科收治的新发PE患者100例(PE组),其中轻度PE 49例(轻度PE组),重度PE 51例(重度PE组)。以年龄、胎龄为匹配条件,纳入同期健康孕妇100名作为对照组。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测研究对象胎盘组织中lncRNA TUG1和miR-26a的表达水平。通过Pearson相关分析探讨lncRNA TUG1、miR-26a表达水平与PE患者临床指标的相关性。结果 轻度PE组、重度PE组胎盘组织的lncRNA TUG1表达水平低于对照组,miR-26a表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度PE组比较,重度PE组胎盘组织lncRNA TUG1表达水平更低,miR-26a表达水平更高,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,PE患者胎盘组织中lncRNA TUG1表达水平...     

miR-485-5p靶向CKS1B对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-485-5p对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-485-5p在人永生化鼻咽上皮细胞系NP69和人鼻咽癌细胞系CNE2中的表达情况;将体外培养的CNE2细胞分为Con组(正常培养)、NC组(转染mimics阴性对照)和mimics组(转染miR-485-5p mimics),实时荧光定量PCR测定miR-485-5p表达,噻唑蓝法、Transwell小室、流式细胞术分别检测细胞增殖活性、侵袭和迁移、凋亡,免疫印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和CDC28蛋白激酶调节亚基(CKS)1B蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-485-5p和CKS1B靶向关系。结果 与NP69细胞比较,miR-485-5p在CNE2细胞中的表达水平明显降低(P<0.05)。与Con组、NC组比较,mimics组细胞中miR-485-5p表达水平、细胞凋亡率和E-钙黏蛋白表达水平均明显升高,而增殖活力、侵袭与迁移能力和N-钙黏蛋白、波形蛋白、CKS1B蛋白表...     

Sox4在女性肺癌细胞上皮-间质转化中的作用及其机制

目的探讨Sox4在女性肺癌细胞上皮-间质转化(EMT)中的作用及其机制。方法 76例行肺癌根治术的女性肺癌组织标本为观察组,49例癌旁肺组织标本为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)和Western印迹法检测Sox4的表达水平;采用RNA干扰技术下调Sox4表达,利用脂质体2000向肺癌细胞系XWLC-05转染Sox4-si RNA,同时以未转染XWLC-05为对照,采用q PCR和Western印迹方法检测两组Sox4表达水平及内镜下黏膜切除术(EMR)上皮标记β-catenin、E-cadherin,间质标记Fibronectin、vimentin、N-cadherin的表达情况,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氯唑溴盐(MTT)、Transwell及细胞划痕实验检测转染组与未转染组细胞增殖、侵袭、迁移能力。结果观察组Sox4 m RNA水平及蛋白水平表达均明显高于对照组(P<0.05);转染组Sox4 m RNA水平及蛋白水平表达均明显低于未转染组(P<0.05);q PCR结果显示,转染组β-catenin、E-cadherin水平明显高于未转染组(P<0.05),转染组Fibronectin、vimentin、N-cadherin水平明显低于未转染组(P<0.05),Western印迹结果与q PCR检测结果相一致;MTT实验结果显示,转染Sox4-si RNA细胞后,XWLC-05细胞增殖能力与未转染组无明显差异(P>0.05),Transwell实验结果显示,转染Sox4-si RNA细胞后,XWLC-05细胞侵袭、迁移能力较未转染组明显降低。结论 Sox4可能是通过下调β-catenin、E-cadherin表达及上调Fibronectin、vimentin、N-cadherin表达促进EMT发生,诱导人肺癌细胞发生侵袭转移。     

上皮-间质转化的分子机制及其在肝病中的研究进展

上皮-间质转化（EMT）是一种哺乳动物胚胎发育过程中必需的生理现象。上皮-间质转化不仅参与胚胎的形成、发育、组织重建、创伤愈合、心瓣膜和颅面结构以及肌肉骨骼系统的形成,也参与器官的纤维化及肿瘤的侵袭转移。它以上皮细胞极性的丧失及其间质特性的获得为主要特征。多种生长因子如转化生长因子（TGF）-β、上皮细胞生长因子（EGF）、胰岛素样生长因子（IGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、肝细胞生长因子（HGF）、     

miRNA和lncRNA调控巨噬细胞极化在变应性疾病中的作用

巨噬细胞是免疫系统重要的吞噬细胞及抗原呈递细胞,广泛分布于人体各个组织。巨噬细胞的可塑性极强,组织微环境的变化可使其极化为不同的表型并表现出不同的生物学功能,如经典途径激活的M1促炎型和替代途径激活的M2抗炎型。其中,M2型巨噬细胞在变应性疾病中占主导地位,并与变应性疾病的发生发展密切相关。微小RNA(miRNA)和长链非编码RNA(lncRNA)是巨噬细胞极化及快速重编程中的关键调节因子,miRNA和lncRNA的差异表达可影响巨噬细胞的极化状态及免疫调节能力。本文对miRNA和lncRNA调控巨噬细胞极化在变应性疾病中的作用进行综述,以期为变应性疾病发病机制研究及临床诊治开辟全新的视角。     

RNA-linc00858和miR-3182在宫颈癌组织表达变化、对宫颈癌细胞株侵袭迁移调控作用及靶向关系

目的 观察长链非编码RNA-linc00858和微小RNA-3182(miR-3182)在宫颈癌组织表达变化、对宫颈癌细胞株侵袭迁移的调控作用,分析宫颈癌细胞中linc00858、miR-3182的靶向关系。方法 (1)40例宫颈癌患者,均行宫颈癌根治术,术中留取宫颈癌组织及癌旁组织,采用RT-qPCR法检测宫颈癌及癌旁组织中linc00858、miR-3182的表达,采用Spearman相关性分析法分析宫颈癌组织中linc00858和miR-3182相关性。(2)筛选人宫颈癌细胞株MS751为受试细胞,1～4组分别转染si-linc00858（小干扰linc00858,沉默linc00858表达）、OE-linc00858（过表达linc00858）、si-NC（小干扰阴性对照）、OE-NC（过表达阴性对照）,转染48 h时采用Transwell实验观察各组细胞侵袭、迁移情况。培养48 h时采用RT-qPCR法检测各组细胞linc00858、miR-3182的表达。(3)分别采用RNA免疫沉淀测定实验、双荧光素酶报告实验分析MS751细胞中linc00858与miR-3182的靶向关...     

沉默miR-107对乳腺癌细胞侵袭及上皮-间质转化的影响

目的 探究miR-107对乳腺癌细胞侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响和机制。方法 利用荧光定量PCR方法分析miR-107在正常乳腺细胞及乳腺癌细胞系中的表达差异;HS578T细胞分别转染对照miRNA和miR-107抑制剂,利用划痕实验分析细胞迁移能力,用Transwell实验分析细胞侵袭能力,用实时荧光定量PCR方法检测细胞EMT标志物的表达水平,用蛋白质免疫印迹实验检测细胞PTEN/AKT信号通路。结果 与正常乳腺细胞相比,miR-107在乳腺癌细胞株中高表达;沉默miR-107的表达抑制HS578T细胞的迁移、侵袭及EMT,促进PTEN/AKT信号通路。结论 miR-107在乳腺癌细胞中高表达,沉默miR-107表达通过PTEN/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞迁移、侵袭和EMT。