弓形虫亲环蛋白亚单位疫苗的免疫保护性研究

目的研究弓形虫亲环蛋白(Cyclophilin,CyP)亚单位疫苗的免疫保护性。方法 30只BALB/c小鼠随机分为3组:实验组、佐剂组和PBS对照组,分别肌注pET-28a-TgCyP重组蛋白100μg/只、佐剂100 ul/只和PBS 100 ul/只,共免疫3次,每次间隔2周。末次免疫后2周,各组分别取4只小鼠处死,取脾脏,检测CD4+、CD8+及细胞因子。同时,采用阿尔玛蓝细胞增殖与细胞毒性检测试剂测定小鼠脾淋巴细胞的增殖应答。其余小鼠腹腔攻击感染Rh株弓形虫速殖子500个,观察其存活情况。结果 pET-28a-TgCyP重组蛋白亚单位疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应,小鼠的CD4+T细胞(62.59±4.17)%、CD8+T细胞(8.53±0.46)%与PBS及佐剂对照组比较显著增殖(P<0.01),其脾细胞培养液白细胞介素-2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)显著升高,小鼠脾淋巴细胞增殖应答显著增强(P<0.01)。弓形虫攻击感染216 h后,实验组小鼠免疫保护率为33.3%,佐剂对照组及PBS对照组小鼠均全部死亡。结论 pET-28a-TgCyP重组蛋白亚单位疫苗具有较强的免疫原性,能...     

急性期骨关节型布鲁菌病患者外周血 CD4+T淋巴细胞亚群的表达水平及意义分析

目的 探讨急性期骨关节型布鲁菌病患者外周血CD4⁺T淋巴细胞亚群的表达水平及意义。方法 选取2014年1月至2021年5月期间本院收治的98例布鲁菌病患者为研究对象,分为骨关节型组(n=41)和非骨关节型组(n=57),并选取同期来本院体检的80例健康成人作为对照组。比较三组的外周血CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞、Th1、Th2等T淋巴细胞的各亚群水平,计算CD4⁺/CD8⁺、Th1/Th2比值。采用Pearson相关分析来探讨骨关节型组患者WOMAC评分与外周血T淋巴细胞亚群水平的相关性。结果 骨关节型组外周血CD4⁺T淋巴细胞、Th1细胞的比例、CD4⁺/CD8⁺比值、Th1/Th2比值显著高于非骨关节型组,骨关节型组外周血CD4⁺T淋巴细胞、Th1细胞的比例、CD4⁺/CD8⁺比值、Th1/Th2比值显著高于对照组,非骨关节型组外周血...     

CD4＋T淋巴细胞对肺结核患者血清白蛋白的影响

目的 探讨外周血CD4⁺ T淋巴细胞对肺结核患者血清白蛋白的影响。 方法 对119例初治肺结核患者进行淋巴细胞亚群和血清白蛋白测定,探讨细胞免疫功能与血清白蛋白相关性;同时,根据其CD4⁺ T淋巴细胞亚群水平,分为免疫低下组62例和正常组57例,探讨细胞免疫功能低下对低蛋白血症的影响。 结果 （1）所有纳入患者外周血CD4⁺ T淋巴细胞［（516.6±266.1）×10⁹/L］与CD3⁺ T淋巴细胞［（841.6±398.8）×10⁹/L］、CD8⁺ T淋巴细胞［（261.0±142.6）×10⁹/L］、CD4⁺/CD8⁺ T淋巴细胞比值（2.33±1.40）呈正相关（分别为r=0.883,P=0.000;r=0.579,P=0.000;r=0.365,P=0.000）。（2）外周血CD4⁺T淋巴细胞与血清白蛋白呈正相关（r=0.116,P=0.033）。（3）在免疫低下组中,肺部病灶范围达4个肺野以上者43例（占69.4%）,明显高于正常组的22例（占38.6%）,差异有统计学意义（χ²=11.335,P=0.001）;免疫低下组治疗前血清白蛋白［（33.9±5.5）g/L］明显低于正常组［（36.1±5.7）g/L］（t=2.187,P=0.031）。 结论 在肺结核患者中CD4⁺ T淋巴细胞与治疗前血清白蛋白水平呈正相关。CD4⁺ T淋巴细胞低下肺结核患者,其病灶范围较广,容易并发低蛋白血症。     

结核分枝杆菌Rv2941蛋白抗原表位集中区免疫原性研究

目的 分析结核分枝杆菌Rv2941抗原的T细胞表位集中区的免疫原性,探究其作为结核病疫苗候选抗原的潜力。方法 通过免疫表位数据库(Immune Epitope Database,IEDB)分析Rv2941抗原的T细胞表位区(命名为Rv2941p)并构建表达载体PET32a-Rv2941p,诱导表达并纯化Rv2941p。将其与免疫佐剂二甲基三十六烷基铵(DDA)和PolyI:C乳化后,皮下免疫BALB/c小鼠3次,每次免疫间隔10 d,末次免疫1周后处死小鼠,进行免疫效果评价。采用ELISA法检测免疫后小鼠血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体滴度以及免疫后小鼠脾脏淋巴细胞分泌IL-4、IL-2、IL-6和IFN-γ的水平。同时,利用流式细胞技术检测淋巴细胞内CD4⁺T、CD8⁺T细胞增殖情况以及胞内细胞因子(IFN-γ、TNF-α和IL-4)表达水平。结果 Rv2941p可溶性表达,并获得高纯度的蛋白。Rv2941p诱导产生了高水平的特异性抗体IgG,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001)。另外,Rv2941p提高了IgG2a/IgG1的比值。细胞因子检测结果显示,Rv2941p提高了IFN-γ和IL-6的分泌,与Ag85B组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。同时,Rv2941p可以促进CD4⁺和CD8⁺T细胞的增殖分化,以及提高胞内IFN-γ和TNF-α的表达。结论 Rv2941p可以刺激小鼠产生较高的体液和细胞免疫,尤其Th-1类细胞免疫,可以作为结核病疫苗候选抗原,为结核病新型疫苗的开发奠定了基础。     

Colgalt2敲除对刀豆蛋白A诱导的自身免疫性肝炎小鼠CD4 T细胞记忆和归巢的影响

目的 初步探索糖基转移酶Colgalt2基因敲除对刀豆蛋白A(concanavalin A,Con A)诱导的自身免疫性肝炎(autoimmunehepatitis,AIH)小鼠模型中CD4 T细胞记忆和归巢的影响。方法 随机抽取无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级6～8周的基因敲除(Colgalt2^-/-)小鼠与野生型Colgalt2^+/+小鼠各18只,建立Con A诱导的AIH小鼠模型。检测小鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平,采用HE染色观察肝组织病理变化,采用体外磁珠分选脾脏CD4⁺T细胞,采用流式细胞术检测小鼠外周血、脾脏及分选后CD4⁺T细胞亚型比例。结果 与Colgalt2^+/+小鼠相比,Con A刺激12 h Colgalt2^-/-小鼠血清ALT [(15610±286...     

基于O型口蹄疫病毒VP21-33肽段增强VP1141-160肽段免疫原性的新型纳米颗粒疫苗研究

目的 研究O型口蹄疫病毒中VP21-33肽段能否增强VP1141-160肽段的免疫原性及其可能的免疫机制。方法 分别构建两种新的含有VP1和VP2的重组质粒 (PcDNA3.1-VP1、PcDNA3.1-VP2),并将重组质粒制备成纳米颗粒,检测其体外转染效率。然后将上述纳米颗粒作为基因疫苗免疫Balb/c小鼠,PBS及空载质粒作为对照。液相阻断ELISA方法检测不同时间小鼠血清中抗体情况;流式细胞术和免疫组化染色的方法分析免疫小鼠外周血、脾脏和腹股沟淋巴结中CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞的差异;淋巴细胞增殖实验检测免疫28 d后小鼠外周血中淋巴细胞的增殖能力。结果 对重组质粒进行鉴定,结果显示重组质粒(PcDNA3.1-VP1、PcDNA3.1-VP2)构建成功;体外转染实验结果显示该纳米颗粒体外转染效率约为28%,具有较高的转染效率。ELISA检测显示VP1与VP2共同免疫小鼠血清中的抗体滴度均在初次免疫后的第21和28 d达到最高,并显著高于对照组(F=4.625,P<0.05);流式和免疫组化染色结果分析发现VP1与VP2共同免疫小鼠血液、淋巴结和脾脏中CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞数均显著高于对照组;淋巴细胞增殖实验结果显示VP1与VP2共同免疫小鼠淋巴细胞增殖能力均显著高于对照组(F=12.73, P<0.05)。结论 O型FMDV VP2的1-33肽段能增强VP1的141-160肽段的免疫原性,其可能通过激活细胞免疫和体液免疫实现。     

二甲基三十六烷基铵.卡介苗多糖核酸在结核亚单位疫苗中的佐剂效应

目的 探讨二甲基三十六烷基铵(DDA)、卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)作为结核病融合蛋白疫苗佐剂的免疫效应.方法 采用热酚法制备BCG-PSN,与DDA联合作为融合蛋白AMM(Ag85B-MPT64190-198-Mth8/4)佐剂免疫小鼠,设卡介苗、生理盐水、弗氏不完全佐剂(IFA)及单独应用DDA或BCG-PSN一种佐剂的各组作为对照.应用ELISA和酶联免疫斑点法检测免疫小鼠的体液与细胞免疫反应.结果 分离培养疫苗免疫小鼠的脾脏淋巴细胞,用特异性抗原AgSSB刺激后,AMM+DDA+BCG-PSN疫苗组、AMM+DDA组和卡介苗组小鼠每1×106个脾淋巴细胞分泌γ-干扰素的细胞数分别为222±79、259±85和230±64,均明显高于AMM+PBS组(40±4)、AMM+IFA组(10 ±3)、AMM+BCG-PSN组(132±18)和生理盐水组(8±4),差异有统计学意义(t值为2.923～7.118,均P<0.05);与单用DDA组比较,添加DDA和BCG-PSN两种佐剂的疫苗组小鼠血清抗体滴度Ig2a/IgG1较高(0.125和0.025),但γ-干扰素分泌水平没有增高.结论 AMM+DDA+BCG-PSN结核病亚单位疫苗能够引起较强的Th1细胞免疫为主的免疫反应,DDA+BCG-PSN(尤其是DDA)具有增强结核病亚单位疫苗Th1细胞免疫应答的佐剂效应.     

肺结核及肺外结核患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及其临床意义

目的 探讨肺外结核患者外周血CD3 ⁺、CD4 ⁺、CD8 ⁺T淋巴细胞亚群及CD4 ⁺/CD8 ⁺比值的变化及其临床意义方法 搜集2017年11月至2019年1月在成都市公共卫生临床医疗中心结核病区住院的147例患者(包括63例单纯肺结核、60例肺结核并发肺外结核和24例单纯肺外结核患者,分别为肺结核组、肺结核并发肺外结核组和肺外结核组)作为研究对象。采用流式细胞仪及四色淋巴细胞亚群检测试剂盒检测纳入的各组患者外周血CD3 ⁺、CD4 ⁺、CD8 ⁺T淋巴细胞的绝对计数及CD4 ⁺/CD8 ⁺比值,分析上述各组患者外周血T淋巴细胞亚群的差异。结果 肺结核并发肺外结核患者外周血CD3 ⁺和CD4 ⁺T淋巴细胞计数分别为596.000(377.500,823.250)个/μl和347.500(214.000,479.250)个/μl,均低于单纯肺结核患者的698.000(572.000,904.000)个/μl和409.000(311.000,545.000)个/μl,差异均有统计学意义(Z=-2.507,P=0.012;Z=-2.431,P=0.015)。肺结核并发肺外结核患者的CD8 ⁺T淋巴细胞计数与CD4 ⁺/CD8 ⁺比值分别为195.500(137.250,278.750)个/μl和1.670(1.258,2.273),较肺结核患者的244.000(154.000,317.000)个/μl和1.770(1.290,2.350)降低,但差异均无统计学意义(Z=-1.892,P=0.058;Z=-0.546,P=0.585)。单纯肺外结核患者外周血CD3 ⁺和CD4 ⁺ T淋巴细胞计数分别为551.500(283.750,949.000)个/μl和295.500(134.250,461.750)个/μl,低于单纯肺结核患者的698.000(572.000,904.000)个/μl和409.000(311.000,545.000)个/μl,差异均有统计学意义(Z=-2.089,P=0.037;Z=-2.460,P=0.014);单纯肺外结核患者外周血的CD8 ⁺T淋巴细胞计数[185.000(92.000,366.250)个/μl]及CD4 ⁺/CD8 ⁺比值[1.455(1.018,2.128)]与单纯肺结核患者[分别为244.000(154.000,317.000)个/μl和1.770(1.290,2.350)]相比,差异均无统计学意义(Z=-1.315,P=0.188;Z=-1.429,P=0.153)。结论 随着肺结核患者外周血CD3 ⁺、CD4 ⁺ T淋巴细胞计数的逐步降低,结核分枝杆菌可能更易播散至肺外;外周血CD8 ⁺T淋巴细胞计数及CD4 ⁺/CD8 ⁺比值在肺外结核发生机制中的作用尚需进一步探讨。     

持续低效血液透析滤过对重症急性胰腺炎患者肠黏膜屏障功能及免疫功能的影响

目的 评价持续低效血液透析滤过（SLEDF）对重症急性胰腺炎（SAP）患者肠黏膜屏障功能及免疫功能的影响。方法 将51例SAP患者随机分为持续静脉静脉血液滤过（CVVH）组25例和SLEDF组26例,在常规治疗基础上分别接受CVVH和SLEDF治疗。比较两组患者预后、血、尿淀粉酶恢复正常时间、治疗前和治疗第2、4、8、14d血D-乳酸、内毒素（ET）、二胺氧化酶(DAO)、CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞水平、CD4⁺/CD8⁺T淋巴细胞比值及血液净化相关并发症发生情况。结果 两组患者死亡率、血、尿淀粉酶恢复正常时间比较差异均无统计学意义,血D-乳酸、ET、DAO、CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞水平和CD4⁺/CD8⁺T淋巴细胞比值在治疗前和治疗第2、4、8、14d比较差异均无统计学意义（P>0.05）。两组患者治疗第4、8、14d D 乳酸、ET和DAO水平均较同组治疗前降低,第8、14d均较同组治疗第4d降低（P＜0.05）。两组患者治疗第4、8、14d的CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞水平和CD4⁺/CD8⁺T淋巴细胞比值均较同组治疗前升高,第8、14d均较同组治疗第4d升高（P＜0.05）;两组患者治疗第4、8d的CD8⁺T淋巴细胞水平较同组治疗前降低,第8、14d较第4d降低（P＜0.05）。结论 SLEDF和CVVH改善SAP患者肠道屏障功能障碍和免疫功能异常的作用相似,其中SLEDF操作方便,医疗费用低,值得临床推广。     

儿童危重型H1N1流感肺炎伴胸腔积液的临床特征及淋巴细胞亚型特征

目的分析危重症H1N1流感患儿合并胸腔积液的临床特征及自身免疫功能的变化。方法采用回顾性分析方法,收集2017年1月至2020年3月确诊为重症甲流的126例患儿的临床资料。根据有无胸腔积液分为胸腔积液阳性组(n=54)和胸腔积液阴性组(n=72);比较两组间基本临床资料,炎性指标和免疫功能。结果胸腔积液阳性组与阴性组性别、年龄、总住院时间、PICU住院时间、辅助通气时间、PCT、CRP均无统计学差异,但初始淋巴细胞数量胸腔积液阳性组(1.76×10⁹/L)低于阴性组(3.28×10⁹/L)(P=0.016)。淋巴细胞亚型比例方面,胸腔积液阳性组(CD3⁺T 35.94%,CD4⁺T 20.28%,CD8⁺T 10.78%)均明显低于胸腔积液阴性组(54.89%、34.80%、15.33%),但CD56⁺T阳性组(20.56%)高于阴性组(13.22%)(P<0.05)。而绝对数量上,胸水阳性组CD3⁺T,CD4⁺T和CD8⁺T细胞数分别为0.79×10⁹/L,0.48×10⁹/L,0.22×10⁹/L,显著少于阴性组1.65×10⁹/L,0.72×10⁹/L和0.48×10⁹/L(P<0.05),但CD56⁺T两组间没有差异。结论危重型甲流肺炎患儿合并胸腔积液者相比无胸腔积液者,具有更差的细胞免疫表现。     

布鲁氏菌17.3kDa蛋白的表达及其免疫学评价(英文)

目的获得布鲁氏菌保护性抗原17.3kDa重组蛋白并以此构建亚单位疫苗。方法用PET32a(+)原核表达载体表达17.3kDa蛋白纯化后加氟氏佐剂肌肉注射免疫小鼠,三免后测定免疫功能进行免疫效果的评价。结果ELISA、WesternBlot检测到免疫鼠体内有特异性抗体产生,蛋白苗所诱导产生的IgG1抗体远远高于IgG2a;通过细胞因子和CD分子测定表明重组蛋白以诱发ThⅡ型免疫为主。结论所表达的布鲁氏菌17.3kDa蛋白苗具有诱导特异性细胞和体液免疫应答的能力,可作为潜在的布鲁氏菌新型疫苗或诊断抗原,有进一步研究的意义。     

细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15免疫小鼠LncRNA 031520表达的研究

目的探讨长链非编码RNA031520(LncRNA 031520)分子在细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15诱导小鼠免疫保护的表达分析。方法 36只雌性BALB/c小鼠分为PBS对照组、弗氏佐剂组和ZW-15免疫组,12只/组。PBS对照组、弗氏佐剂组分别皮下多点注射PBS溶液和完全/不完全弗氏佐剂100μl/只,ZW-15免疫组注射重组抗原100μl/只(10μg/只)。弗氏佐剂组和ZW-15免疫组初次免疫使用完全弗氏佐剂,加强免疫使用不完全弗氏佐剂。共免疫3次,初次免疫后的2次加强免疫间隔时间为两周。免疫小鼠经麻醉取血,分离血清。采用ELISA法检测特异IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b抗体水平。无菌取脾脏,分离淋巴细胞采用流式细胞术分选CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞及B淋巴细胞群;利用qRT-PCR检测CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞、B淋巴细胞及总淋巴细胞中LncRNA 031520及内参GAPDH的表达;利用流式细胞术检测脾脏CD4~+T淋巴细胞中IFN-γ、IL-4的表达。使用SPSS 17.0统计软件和Graphpad Prism 8.0绘图软件对实验数据进行统计分析。结果小鼠经亲肌肉重组抗原ZW-15免疫后血清特异IgG、IgG1、IgG2a及IgG2b抗体水平均升高,且均显著高于PBS组、弗氏佐剂对照组,差异均有统计学意义(P0.001)。LncRNA 031520在ZW-15免疫组CD4~+T淋巴细胞、总淋巴细胞中相对表达量显著高于PBS对照组和弗氏佐剂对照组(P0.01),在ZW-15免疫组B淋巴细胞及CD8~+T淋巴细胞中相对表达量与PBS对照组及弗氏佐剂对照组相比差异均无统计学意义(均P0.05)。免疫组小鼠脾脏淋巴细胞Th1亚群标志分子IFN-γ表达量为(19.07±3.44)%,显著高于PBS对照组(8.03±2.67)%和弗氏佐剂对照组(9.37±1.25)%(P0.05),Th2亚群标志分子IL-4表达量为(0.79±0.02)%,显著高于PBS对照组(0.44±0.13)%和弗氏佐剂对照组(0.50±0.15)%(P0.05)。结论 LncRNA 031520在细粒棘球绦虫重组亲肌肉抗原ZW-15免疫小鼠淋巴细胞中表达上调,可能在亲肌肉抗原抵御细粒棘球蚴感染中发挥免疫保护作用。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血T细胞亚群变化

目的 探讨乙型肝炎肝硬化患者外周血T细胞亚群的变化。方法 2015年8月～2018年2月我院诊治的乙型肝炎肝硬化患者120例和同期健康体检者120例,使用流式细胞仪检测外周血T细胞亚群。结果 肝硬化组外周血CD4⁺T淋巴细胞百分比为(35.3±2.4)%,显著低于健康人组【(42.9±3.2)%,P<0.05】,CD8⁺T淋巴细胞百分比为(36.4±3.2)%,显著高于健康人组【(32.9±4.2)%,P<0.05】,CD4⁺/CD8⁺细胞比值为(0.9±0.1),显著低于健康人组【(1.3±0.2),P<0.05】。结论 乙型肝炎肝硬化患者存在T细胞亚群计数的显著变化,可能也存在相应的免疫功能紊乱,系肝功能受损后的结果抑或是诱因,值得研究。     

布鲁氏菌omp25重组BCG的构建及其疫苗作用检测

目的构建分泌性表达布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因重组卡介苗（rBCG-omp25），并免疫BALB／c小鼠，观察其免疫作用。方法利用分子生物学技术构建重组穿梭分泌载体pMV261-Ag85B-omp25．电穿孔技术导人卡介苗（BCG）。通过抗生素筛选、重组卡介苗基因组PCR扩增、测序，以及Western blot对重组卡介苗进行鉴定。分别用rBCG-omp25、BCG腹腔接种BALB／c小鼠，于免疫后第10、20、30、40和50d称重，尾部采血，用表达纯化的融合蛋白OMP25—32a检测免疫小鼠抗体的生成情况，用流式细胞仪（FCM）检测CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞百分率，并计算CD4^＋／CD8^＋T细胞比值。制作小鼠肝组织切片，HE染色观察病理学变化。结果重组卡介苗rBCG-omp25含有Ag85B-omp25序列，大小为745hp；Western blot表明rBCG-omp25可分泌表达布鲁氏菌OMP25。rBCG-omp25免疫小鼠后第20d，用Western blot检测到布鲁氏菌OMP25特异性抗体；rBCG—omp25免疫组和BCG免疫组的CD4^＋、CD8^＋T细胞百分率分别为38．68％、11．32％和、48．44％、14．01％，PBS组为33．24％、9．81％，差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫后50d内rBCG-omp25组、BCG组与PBS组小鼠体重差异无统计学意义（P〉0．05）；各实验组小鼠肝组织均未见明显病理改变。结论构建的rBCG-omp25能够表达特异性蛋白OMP25。该蛋白能刺激小鼠产生特异性抗体，能刺激小鼠外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞增殖。rBCG-omp25毒力弱，可作为预防布鲁氏菌病的疫苗候选株之一。     

HIV抗体阴性结核性脑膜炎患者治疗前后外周血CD细胞水平的变化情况

目的: 分析HIV抗体阴性结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)患者抗结核治疗前后外周血CD细胞水平的变化及临床意义。方法: 采用前瞻性研究的方法,选取2016年3月至2020年2月于新疆医科大学第八附属医院就诊且符合入组标准的102例TBM患者作为研究对象,其中,临床分期Ⅰ期22例、Ⅱ期37例、Ⅲ期43例。于研究对象抗结核治疗前及治疗2周后,检测其外周血CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞计数及CD4⁺/CD8⁺T细胞比值。分析研究对象治疗前后外周血CD细胞水平变化情况,及其与TBM临床分期和患者治疗转归的相关性。结果: 抗结核治疗2周后,研究对象CD3⁺、CD4⁺ T细胞计数和CD4⁺/CD8⁺ T细胞比值[分别为(808.27±183.25)×10⁶个/μl、(413.09±134.53)×10⁶个/μl和1.23±0.29]均明显高于治疗前[分别为(631.38±150.14)×10⁶个/μl、(366.78±98.03)×10⁶个/μl和0.99±0.23],差异均有统计学意义(t=7.541,P=0.000;t=2.809,P=0.005;t=6.548,P=0.000)。抗结核治疗2周后,Ⅲ期TBM患者的CD3⁺、CD4⁺T细胞计数与CD4⁺/CD8⁺T细胞比值[分别为(613.23±140.29)×10⁶个/μl、(342.53±98.36)×10⁶个/μl、0.95±0.18]明显低于Ⅱ期患者[分别为(753.33±153.47)×10⁶个/μl、(399.57±112.26)×10⁶个/μl、1.22±0.21]和Ⅰ期患者[分别为(989.23±194.35)×10⁶个/μl、(501.11±139.25)×10⁶个/μl、1.42±0.31],差异均有统计学意义(F值分别为40.875、13.372、32.151,P值均为0.000)。抗结核治疗2周后,病情好转患者的CD3⁺、CD4⁺ T细胞计数与CD4⁺/CD8⁺T细胞比值[分别为(941.25±204.17)×10⁶个/μl、(487.35±134.25)×10⁶个/μl、1.36±0.31]明显高于病情恶化者[分别为(683.43±155.76)×10⁶个/μl、(389.64±120.38)×10⁶个/μl、1.02±0.19],差异均有统计学意义(t=4.206,P=0.000;t=2.394,P=0.018;t=3.698,P=0.000)。结论: TBM患者抗结核治疗2周后,免疫功能明显改善,且病情好转患者免疫功能改善程度好于病情恶化者。TBM患者临床分期越高,免疫功能受损越严重,对调整治疗方案的需求越高。     

中试生产的结核DNA疫苗免疫效能研究

目的 以300 L发酵罐中试规模生产的冻干Mtb Ag85A质粒DNA疫苗为基础免疫小鼠,对该疫苗的免疫效能进行研究。 方法 将4~6周龄的BALB/c小鼠20只通过数字表法随机分为2组,一组免疫Mtb Ag85A质粒DNA疫苗（结核DNA疫苗免疫组）,另一组免疫PBS作为阴性对照（PBS对照组）;于免疫前采血,肌内注射免疫3次。在第3次免疫后3周摘眼球处死小鼠,收集血清,进行血清特异性抗体检测和细胞因子(IFN-γ、IL-4)检测;同时对每只小鼠取脾细胞进行特异性γ干扰素 (IFN-γ) 分泌检测和脾细胞CD4⁺、CD8⁺百分率检测。 结果 （1）免疫前后免疫组与对照组抗体水平吸光度A值均小于0.2。（2）结核DNA疫苗免疫组血清细胞因子IL-4水平［（146.2±34.3）pg/ml］低于PBS对照组［（177.7±28.1）pg/ml］,差异有统计学意义（t=2.244,P=0.038）,而IFN-γ水平［（129.6±159.0）pg/ml］虽然高于PBS对照组［（76.5±21.5）pg/ml］,但差异无统计学意义（t=－1.047,P=0.309）。（3）酶联免疫斑点检测结果表明结核DNA疫苗免疫组脾细胞特异性IFN-γ分泌水平（分泌IFN-γ细胞个数）（103.60±112.14）高于PBS对照组（5.78±5.83）,差异有统计学意义（t=36.538,P=0.018）。（4）结核DNA疫苗免疫组CD4⁺细胞百分率均值（21.57%）高于PBS对照组（12.17%）,差异有统计学意义（t=3.043,P=0.038）;CD8⁺细胞百分率均值（13.70%）与PBS对照组（10.57%）相比,差异无统计学意义（t=0.847,P=0.445）。 结论 Mtb Ag85A质粒DNA疫苗主要刺激机体Th1型细胞免疫,而对诱导机体产生Th2型细胞免疫应答没有显著的促进作用。     

结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧基酶诱导小鼠细胞和体液免疫应答

目的检测结核杆菌磷酸烯醇型丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)对BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法选清洁级BALB/c小鼠60只,随机分为两组,实验组和对照组。实验组每只小鼠用表达的PEPCK融合蛋白10μg加弗氏不完全佐剂进行腹腔免疫注射,对照组小鼠仅用弗氏不完全佐剂注射。每隔2w免疫1次,共免疫3次。末次免疫2w后,分别取小鼠脾脏、血清,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞,MTT法检测淋巴细胞对刺激的应答水平,ELISA检测血清各种细胞因子及抗PEPCK抗体。结果实验组小鼠的脾脏明显大于对照组小鼠的脾脏,且粘连严重,CD4+T细胞增殖明显(73.5±3.69),CD4+/CD8+比值显著升高(5.1±0.98)(P<0.01);且淋巴细胞的应答能力明显强于对照组小鼠;实验组小鼠血清中IFN-γ、IL-12和TNF-α明显高于对照组,血清抗体滴度随免疫次数逐步增高。结论结核杆菌PEPCK能够有效的刺激机体产生细胞免疫反应和体液免疫反应,尤以细胞免疫反应为主,是很好的抗结核候选疫苗分子之一。     

增龄对人体外周血CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞、CD4+T细胞及细胞因子表达的影响

目的探讨增龄对人体外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节T细胞(CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg)、CD4⁺T细胞及细胞因子表达的影响。方法选择青年人(20~45岁)、中老年人(50~75岁)及高龄老年人(≥80岁)各40例,分别检测3组外周血CD4⁺T、CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg的绝对计数,并计算后者占前者的百分比,同时检测并比较3组人群外周血IL-2、干扰素-γ(IFN-γ)、TNF-α、IL-10和IL-17水平。结果高龄老年组CD4⁺T细胞绝对计数较中老年组与青年组显著下降(P<0.05);高龄老年组和中老年组外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg绝对计数均明显高于青年组(P<0.05);中老年组CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg占CD4⁺T细胞百分比明显高于青年组,高龄老年组明显高于中老年组,差异均有统计学意义(P<0.05)。高龄老年组IL-2、IFN-γ和IL-17水平明显低于青年组和中老年组(P<0.05),中老年组IL-2明显低于青年组(P<0.05),高龄老年组IL-10水平明显高于青年组和中老年组(P<0.05),3组TNF-α水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论中老年以后人体外周血CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg绝对计数明显增高,随着增龄,其占CD4⁺T细胞百分比逐渐升高。高龄老年人外周血CD4⁺T细胞绝对计数、IL-2、IFN-γ和IL-17水平明显下降,IL-10水平明显增高,说明老年人免疫功能进一步下降,衰老的微环境发生了改变。     

Correlation analysis of HRCT image features and CD4 + T lymphocyte level in AIDS patients complicated with thoracic tuberculosis

目的 分析获得性免疫缺陷综合征(AIDS;即“艾滋病”)并发胸部结核患者的高分辨CT(HRCT)征象及其与CD4 ⁺T淋巴细胞计数的相关性。 方法 选取2013年1月至2017年12月于首都医科大学附属北京地坛医院就诊或住院治疗,并经病理及实验室检查证实或临床确诊的AIDS并发胸部结核患者作为研究对象,共计235例。收集研究对象HRCT征象及CD4 ⁺T淋巴细胞计数资料。将研究对象CD4 ⁺T淋巴细胞计数分为Ⅰ、Ⅱ级(Ⅰ级:CD4 ⁺T淋巴细胞计数<100×10 ⁶/L;Ⅱ级:CD4 ⁺T淋巴细胞计数≥100×10 ⁶/L),分析研究对象CT征象与不同免疫水平的相关性。 结果 研究对象继发性肺结核、血行播散性肺结核及纵隔淋巴结结核总的发生率分别为66.8%(157/235)、31.9%(75/235)、63.8%(150/235)。CD4 ⁺T淋巴细胞计数Ⅰ、Ⅱ级研究对象中,纵隔淋巴结结核发生率分别为51.9%(122/235)和11.9%(28/235),差异有统计学意义(χ ²=3.59,P=0.048)。CD4 ⁺T淋巴细胞计数Ⅰ级AIDS并发继发性肺结核患者,HRCT征象中实变影、实变伴空洞、多发空洞的发生率分别为55.4%(87/157)、17.2%(27/157)、10.2%(16/157),均高于CD4 ⁺T淋巴细胞计数Ⅱ级者[分别为13.4%(21/157)、3.8%(6/157)、1.9%(3/157)],差异均有统计学意义(χ ²值分别为6.47、8.22、7.47,P值分别为0.014、0.004、0.045);继发性肺结核发生于上叶前段、右中叶、左舌段的比率[分别为26.1%(41/157)、24.2%(38/157)、27.4%(43/157)] 均高于CD4 ⁺T淋巴细胞计数Ⅱ级者[分别为5.7%(9/157)、3.2%(5/157)、3.8%(6/157)],差异均有统计学意义(χ ²值分别为0.78、5.40、6.79,P值分别为0.037、0.045、0.039)。 结论 AIDS并发胸部结核以继发性肺结核和纵隔淋巴结结核为主,其HRCT征象与CD4 ⁺T淋巴细胞的免疫功能损坏程度有关,CD4 ⁺T淋巴细胞计数越低,胸部HRCT征象越复杂、越不典型。     

LCBDE与ERCP对老年胆囊结石合并胆总管结石患者的疗效对比及免疫炎症水平变化

目的 对比腹腔镜胆总管探查取石术(LCBDE)+腹腔镜胆囊切除术(LC)与逆行胰胆管造影术(ERCP)+LC对老年胆囊结石合并胆总管结石患者的疗效及免疫炎症水平变化。方法 老年胆囊结石合并胆总管结石患者108例根据接受手术治疗的方式分为ERCP+LC组(n=58)和LCBDE+LC组(n=50)。对比患者术前及术后CD4⁺T细胞比例、CD8⁺T细胞比例、CD4⁺T/CD8⁺T比例、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、5-羟色胺(HT)及P物质(SP)表达水平。对比患者手术相关指标及术后近期并发症发生率差异。结果 ERCP+LC组手术时间、术中出血量及术后住院天数显著高于LCBDE+LC组(P<0.01),两组取石成功率、单次净石率、30 d内再次入院率及再次手术治疗率均无显著差异(P>0.05)。手术后两组CD4⁺T比例、CD8⁺T比例、CD4⁺T/CD8⁺T比值...