针灸通过调控凋亡因子半胱氨酸蛋白酶家族改善小鼠顺铂致肝损伤的作用机制

目的:基于顺铂(DDP)致肝损伤模型小鼠,观察针灸后肝细胞凋亡相关的半胱氨酸蛋白酶(Caspase)的变化,探讨针灸改善肝损伤的作用机制。方法:KM小鼠随机分为空白组、模型组、针刺组和艾灸组,每组10只。采用腹腔注射DDP法复制肝损伤小鼠模型。针刺组和艾灸组分别给予针刺、艾灸“大椎”和双侧“肝俞”“肾俞”“足三里”治疗,每次6 min, 1次/d,连续5 d。观察每组小鼠一般状况;生化法检测每组小鼠血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、谷氨酸脱氢酶(GLDH)活性;ELISA法和Western blot法检测各组小鼠肝脏组织中Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9含量和蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠一般状况较差,肝脏组织中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9含量和蛋白表达及血清中AST、ALT、GLDH活性均升高(P<0.05);与模型组比较,针刺组、艾灸组小鼠一般状况改善,肝脏组织中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9含量和蛋白表达及血清中AST、ALT、GLDH活性均降低(P<0....     

基于Nrf2-HO-1信号通路的针灸改善顺铂肾损伤小鼠的作用机制研究

目的 从氧化应激方面阐释针灸改善顺铂所致小鼠肾损伤的作用机制。方法 选用清洁级雄性昆明种小鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、艾灸组。对空白组外的3组小鼠按体重腹腔注射顺铂10 mg/kg造模,空白组注射同等剂量的0.9%NaCl溶液,24 h后模型即成。针刺组与艾灸组均选取“大椎”“肝俞”“肾俞”“足三里”,分别进行针刺或艾灸,其余2组陪同固定不予干预。运用ELISA法检测各组小鼠血清中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、半胍氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)以及肾脏组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO1)的含量,运用Western Blot法及Real-time PCR法检测各组小鼠肾脏组织中Nrf2、HO-1及NQO1的蛋白表达以及基因转录情况。结果 与空白组比,模型组血清NGAL、CysC含量均增多(P<0.05);与模型组比,针刺组和艾灸组血清NGAL、CysC含量均减少(P<0.05);与空白组比,模型组肾脏组织Nrf2、HO-1、NQO1含量及蛋白表达均减少,mRNA相对表达量均升高(P<0.05...     

针灸调控TNF-α/TLR4/NF-κB改善顺铂小鼠肝损伤的作用机制

目的 通过观察针灸对顺铂(Cisplatin,DDP)所致肝损伤小鼠与肝细胞炎症反应相关的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)表达含量的变化,以及血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和谷氨酸脱氢酶(GLDH)活性变化,并结合小鼠肝脏病理变化,阐释针灸对DDP引起肝损伤小鼠的作用机制。方法 选用SPF雄性KM小鼠,随机分为4组,按照10 mL·kg^-1空白组腹腔注射0.9%NaCl溶液,其余3组按照体质量腹腔注射同剂量DDP溶液,24 h后模型成功。干预组采用“大椎”“肝俞”“肾俞”“足三里”,分别给予针刺和艾灸干预,其余两组陪同固定不干预,每天1次,持续5天。断食1天后取材,生化检测血清中ALT、AST、GLDH含量,Western blot测定肝脏中TNF-α、TLR4、NF-κB蛋白表达含量。结果 与空白组比,模型组血清中ALT、AST、GLDH活性增高,肝脏中TNF-α、TLR4、NF-κB蛋白表达升高,均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比,针刺组和艾灸组ALT、AST、GLDH活性...     

六君子汤调控STAT3/泛素蛋白酶体途径防治肺癌恶病质小鼠肌肉萎缩的机制

目的:基于信号传导及转录激活因子3(STAT3)/泛素蛋白酶体途径,体内探讨六君子汤防治肺癌恶病质小鼠肌肉萎缩的作用机制。方法:6周龄雄性C57BL/6J小鼠40只,随机分为空白组,模型组,六君子汤组,抑制剂组,六君子汤联合sttatic组(联合用药组),每组8只。除空白组外,其余各组采用小鼠肺癌细胞(Lewis细胞)右前腋下皮下接种的方法建立肺癌恶病质肌肉萎缩小鼠移植瘤模型,在造模第8天,六君子汤组给予六君子汤灌胃(9.56 g·kg^-1·d^-1)和抑制剂组腹腔注射抑制剂[25 mg·kg^-1·(2 d)^-1]治疗。药物干预3周后取材,称量小鼠体质量、腓肠肌质量;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠腓肠肌肌纤维病理变化及横截面积的改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠腓肠肌中磷酸化-STAT3(p-STAT3),STAT3,肌肉萎缩盒F基因(MAFbx),肌肉环状指基因1(MuRF1)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠腓肠肌中STAT3,MAF...     

大黄素对血管平滑肌细胞周期调控蛋白CyclinD1表达的影响

目的:观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和CyclinD1表达的影响.方法:取对数增长期的平滑肌细胞,采用MTT法观察大黄素对平滑肌细胞增殖抑制的有效浓度范围,求出IC50并干预细胞;然后分别用流式细胞仪和Westernblot法进行细胞周期时相和CyclinD1表达的测定.结果:与对照组比较,LC50时药物组G0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,CyclinD1表达高峰延迟,表达量下调,细胞周期受阻于G0/G1期.结论:大黄素在抑制平滑肌细胞增殖的过程中通过下调Cyclin D1表达,阻滞了细胞周期的进程;是一种有效的抗平滑肌细胞增殖的药物.     

JAK1/STAT1/p21通路在姜黄素诱导结肠癌细胞HCT116周期阻滞中的作用

目的 探讨姜黄素对人结肠癌HCT116细胞周期阻滞的影响及其可能的分子作用机制。方法 噻唑蓝（MTT）比色法检测姜黄素（0、12.5、25、50、75、100 μmol·L^-1）和5-氟尿嘧啶（5-FU）（600 μmol·L^-1）处理不同时间（24、48、72 h）对HCT116细胞增殖的影响;流式细胞术检测姜黄素（0、25、50、75 μmol·L^-1）和5-FU对HCT116细胞周期的影响;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HCT116细胞中Janus酪氨酸蛋白激酶1（JAK1）/信号传导及转录激活因子1（STAT1）/细胞周期依赖性激酶抑制因子1A（p21）通路相关蛋白表达的影响;染色质免疫沉淀法（ChIP）检测STAT1与p21启动子区的结合情况;采用小干扰核糖核酸（siRNA）,分别通过Western blot和细胞免疫荧光检测STAT1在调控p21表达中的作用及JAK1蛋白在调控STAT1活化中的作用。结果 与空白组比较,姜黄素各组和5-FU组HCT-116细胞活性明显降低（P<0.05）。与空白组比较,姜黄素组和5-FU组DNA合成前期（G₀/G₁）细胞比例明显升高（P<0.05）,DNA复制期（S）和DNA合成后期（G₂/M）细胞比例及磷酸化p21（p-p21）蛋白水平明显降低（P<0.05）,p21蛋白表达明显升高（P<0.05）。与姜黄素组比较,p21 siRNA+姜黄素组G₀/G₁期细胞明显降低（P<0.05）。与空白组比较,姜黄素处理后细胞中磷酸化STAT1（p-STAT1）水平明显升高（P<0.05）。与姜黄素组比较,姜黄素+STAT1 siRNA组HCT116细胞中p21蛋白表达水平升高（P<0.05）。机制研究表明,与空白组比较,姜黄素处理明显增强了STAT1蛋白在p21启动子区的富集（P<0.05）。与空白组比较,姜黄素处理后细胞中磷酸化JAK1（p-JAK1）水平明显升高（P<0.05）。与姜黄素组比较,姜黄素+STAT1 siRNA组HCT116细胞中的p-STAT1和p21蛋白水平明显升高（P<0.05）。结论 姜黄素诱导的人结肠癌HCT116细胞周期阻滞,其机制可能与激活JAK1/STAT1/p21信号通路有关。     

五虎汤抑制STAT3蛋白调控树突细胞自噬治疗RSV诱发哮喘小鼠

目的:探讨五虎汤对呼吸道合胞病毒(RSV)诱发哮喘小鼠模型的治疗作用机制、肺组织信号传导及转录激活因子3(STAT3)蛋白表达的影响.方法:100只SPF级雌性BALB/c小鼠,用RSV复合鸡卵清蛋白(OVA)雾化吸入激发哮喘,造模成功后随机分为正常组、模型组、阳性药组(地塞米松,1.82 mg· kg-1),STAT...     

地黄饮通过调控JAK1/STAT3信号通路治疗特应性皮炎小鼠的作用机制

目的：探讨地黄饮对2,4-二硝基氯苯（DNCB）诱导的特应性皮炎（AD）模型小鼠的作用及潜在机制。方法：通过DNCB反复刺激小鼠背部皮肤建立小鼠AD模型,造模成功后,随机分为模型组、润燥组（0.78 g·kg-1）、地黄饮高、中、低剂量组（40.30、20.15、10.08 g·kg-1）,每组12只,空白组12只,共72只。给药组按剂量灌胃给予相应药液,空白组和模型组灌胃给予同体积纯净水,1次/d,连续给药2周后观察小鼠皮损及搔抓次数;取小鼠背部皮损进行苏木素-伊红（HE）染色和甲苯胺蓝染色观察病理情况;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ(IFN-γ)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time-PCR）检测皮损组织中IFN-γ、IL-4、IL-6、Janus激酶1(JAK1)、转录激活因子3(STAT3)mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测皮损组织JAK1、磷酸化（p）-JAK1、STAT3、p-STAT3蛋白的表达。结果：与空白组比较,模型组小...     

柴胡疏肝颗粒调控Keap1-Nrf2/HO-1信号通路改善四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤

目的 探讨柴胡疏肝颗粒对小鼠急性肝损伤的保护作用及可能机制。方法 将柴胡疏肝颗粒按低、中、高(生药量：11.4、22.8、45.6 g·kg^-1)3个剂量连续给药7 d,末次给药2 h后,除正常对照组外,用体积分数0.2%四氯化碳(tetrachloromethane, CCl₄)溶液造模,12 h后,收集小鼠的血清和肝组织,制作肝组织病理切片。测定血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)和肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α),以及活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)含量;转录组学获得肝脏组织差异表达mRNA并富集与差异表达基因显著相关的通路;代谢组学研究肝...     

四君子汤提取物对人乳腺癌MDA-MB-468细胞生长的抑制作用

目的探究四君子汤提取物(Sijunzi Decoction extract,SDE)对人三阴性乳腺癌MDA-MB-468细胞生长的作用。方法采用不同质量浓度SDE作用于MDA-MB-468细胞,CCK-8实验和细胞划痕实验检测SDE对细胞增殖和迁移能力的影响;克隆形成实验检测SDE对细胞集落形成能力的影响;Hoechst33342染色技术和流式细胞术(FCM)检测SDE对细胞凋亡和周期的影响;Western blotting技术检测SDE对信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)表达的影响。结果与对照组比较,SDE对MDA-MB-468细胞有一定的抑制作用(P0.05),且呈质量浓度和时间依赖性。克隆形成实验结果表明SDE能够抑制细胞克隆形成。细胞迁移实验结果显示,SDE中、高质量浓度能够明显减弱细胞划痕愈合能力(P0.001)。FCM检测凋亡结果显示,SDE各质量浓度组细胞早期凋亡率和总凋亡率逐渐上升,呈质量浓度依赖性,且中、高质量浓度的SDE能显著诱导细胞凋亡(P0.01、0.001)。SDE能够影响细胞周期,使G2期细胞显著减少(P0.01)。Westernblotting结果显示,SDE处理细胞后,STAT3蛋白表达水平显著降低。结论 SDE能够抑制MDA-MB-468细胞的增殖和克隆形成,促进其凋亡,使G2期细胞减少。其机制可能与调控STAT3通路有关。     

人参皂苷Rb1改善拘束应激合并脂多糖诱导的小鼠免疫性肝损伤的作用机制研究

目的 研究人参皂苷Rb₁对拘束应激(restraint stress,RS)合并脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的免疫性肝损伤小鼠的保肝作用及其机制。方法 BALB/c小鼠预先给予人参皂苷Rb₁(15 mg/kg)共7 d,给予RS(18 h)合并15μg/kg LPS诱发免疫性肝损伤。取小鼠肝脏进行组织学观察、免疫组化和生化指标检测,基因和蛋白表达检测,利用网络药理学预测人参皂苷Rb₁的潜在信号通路并加以验证。结果 人参皂苷Rb₁改善RS合并LPS诱导肝损伤小鼠的肝脏炎性细胞浸润、脂肪空泡以及炎症坏死现象;显著抑制肝组织白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)表达(P<0.05、0.01);减少肝细胞凋亡;降低...     

制何首乌中大黄素对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中JAK2/STAT3通路的影响

目的:探讨制何首乌中大黄素抗动脉粥样硬化的作用机制并对两面神激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活因子3(STAT3)信号通路及相关因子细胞因子信号传导抑制蛋白3(SOCS3)的影响。方法:雄性Apo E基因敲除(Apo E-/-)小鼠80只,随机均分为8组,分别为大黄素高、中、低剂量组、模型组、阳性药组、阴性组、正常组和大黄素中剂量+AG490组(DA组)。除正常组,余7组用高脂饲料饲养,并皮下注射脂多糖,9周后停注。第10周开始小鼠给药,6周后处死。酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3及SOCS3的含量,苏木素-伊红(HE)染色检测胸主动脉病理变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测肝脏JAK2,STAT3,SOCS3 mRNA的表达。结果:与模型组比较,大黄素高、中剂量组SOCS3含量显著增加,p-JAK2,p-STAT3含量显著减少(P0.01),低剂量组SOCS3含量明显增加(P0.05);JAK2,STAT3无变化;各指标DA组效果不如中剂量组且两组间存在明显差异(P0.01),但STAT3相对表达量中剂量组与DA组有差异(P0.05);各组SOCS3 mRNA表达明显增加,JAK2,STAT3 mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01)。HE染色切片镜下观察,大黄素高、中剂量能有效延缓动脉粥样硬化斑块形成,而低剂量的效果不明显。结论:大黄素能明显作用于Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化病变的发生发展,该作用机制可能与其抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

基于STAT3/miRNA反馈环路探讨中医药促脑梗死后血管新生的调控机制

脑梗死是脑血流供应障碍引起脑组织缺血缺氧,出现相应神经功能症状的临床疾病,是最常见的脑血管病之一,严重威胁到人类健康,脑梗死的防治研究具有重要的社会意义。血管新生是脑梗死内科治疗的关键切入点,信号传导和转录激活子(STAT)/缺氧诱导因子-1(HIF-1)/血管内皮生长因子(VEGF)通路是介导脑梗死后血管新生的重要通路。本文以血管新生为切入点,以STAT/HIF-1/VEGF信号通路的上游分子STAT3,微小RNA(miRNA)为主要研究对象,综述芯片测序、实验研究、中医病机、中医治法的研究成果,结合"转录因子(TF)—miRNA"调控模式与"微观整体"思想,提出在中医基础理论指导下立方的中药复方和有效成分可能通过STAT3/miRNA反馈环路激活STAT/HIF-1/VEGF信号通路促脑梗死后血管新生,为中医药治疗脑梗死疾病提出了深层次的分子机制及新的方向。     

黄芪注射液对小鼠4T1乳腺癌细胞移植瘤CyclinD1、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响

目的:通过构建小鼠4T1乳腺癌细胞移植瘤Balb/c小鼠模型,探讨黄芪注射液对移植瘤Cyclin1、Bcl-2及Caspase-3蛋白表达的影响。方法:体外培养小鼠乳腺癌4T1细胞,注射接种于Balb/c小鼠右侧腹股沟皮下构建乳腺癌移植瘤模型。50只成瘤小鼠随机分为模型对照组、黄芪注射液2. 60 g/kg、5. 20 g/kg、10. 40 g/kg组和顺铂2. 5×10-3g/kg组。观察黄芪注射液对移植瘤生长的影响; HE染色观察移植瘤形态改变;流式细胞仪分析移植瘤细胞周期;免疫组织化学法检测移植瘤组织细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达; Western Blot法检测移植瘤组织Cyclin D1蛋白及凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3蛋白水平。结果:不同浓度黄芩注射液对小鼠乳腺癌移植瘤生长有显著抑制作用,黄芪注射液2. 6 g/kg、5. 2 g/kg、10. 4 g/kg抑瘤率分别为9. 1%、27. 3%、45. 5%。与模型对照组相比较,黄芪注射液5. 2 g/kg、10. 4 g/kg组及顺铂组移植瘤体积和体质量明显降低(P <0. 05或P <0. 01),G1期细胞比例明显增高,S期细胞比例显著降低(P <0. 05或P <0. 01)。黄芪注射液2. 6 g/kg、5. 2 g/kg、10. 4 g/kg组、顺铂组移植瘤组织Cyclin D1阳性区域吸光度值显著降低,Cyclin D1、Bcl-2蛋白水平明显下调,而Cleaved caspase-3蛋白水平显著上调(P <0. 05或P <0. 01)。结论:黄芪注射液对小鼠4T1乳腺癌细胞移植瘤生长有显著抑制作用,其机制与黄芪注射液下调Cyclin D1蛋白表达,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖有关。     

苗药白龙须对RA滑膜细胞STAT-3/IL-17炎症通路的影响

目的:观察苗药白龙须对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞(RA-FLS)增殖及STAT-3相关炎症通路的影响,揭示白龙须对RA滑膜炎症的调控机制。方法:培养3～5代RA-FLS细胞,分为空白组(胎牛血清)、正常组(正常兔血清)、雷公藤多苷(TG)组、来氟米特(LEF)组、白龙须低剂量组、白龙须中剂量组和白龙须高剂量组,按各组剂量加含药血清培养,用CCK8法检测各组RA-FLS增殖抑制率的差异,ELISA法检测RA-FLS与CD4⁺T细胞共培养上清液中炎症细胞因子IL-6、IL-17、IL-23和TNF-α浓度,蛋白印迹法(Wersten Blots)检测RA-FLS中pSTAT-3、SOCS-3的蛋白表达。结果:白龙须能够抑制RA-FLS的增殖,降低共培养体系细胞上清中IL-6、IL-17、IL-23、TNF-α等4种炎症细胞因子的浓度,降低RA-FLS中pSTAT-3的表达量,同时上调SOCS-3蛋白表达。结论:白龙须可能通过抑制STAT-3/IL-17炎症通路的活化发挥抗炎作用,抑制RA-FLS持续性增殖。