miR-1290靶向STK17A对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-1290(miR-1290)靶向调控丝氨酸苏氨酸激酶(STK)17A对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 采用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人宫颈癌细胞SiHa、HeLa、CaSki和人正常宫颈上皮细胞H8中miR-1290和STK17A表达情况,选取同时表达miR-1290和STK17A且miR-1290表达量最高的HeLa细胞进行实验;该细胞随机分为Control组(HeLa细胞未转染)、miR-1290 NC组(HeLa细胞转染miR-1290 NC)、miR-1290 inhibitor组(HeLa细胞转染miR-1290 inhibitor)。qRT-PCR检测miR-1290、STK17A mRNA表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞增殖率、Transwell小室法检测各组细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶法检测miR-1290和STK17A的靶向关系。结果 HeLa、SiHa、CaSki细胞miR-1290相对表达量均明显高于H8细胞(P<0.05),其中HeLa细胞miR-1290相对表达量最高,故选择HeL...     

沉默miR-135a-5p对宫颈癌细胞增殖、侵袭的影响及作用机制

目的 探究沉默微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响，重点分析miR-135a-5p在宫颈癌HeLa细胞中的作用机制。方法 将宫颈癌HeLa细胞经培育后分为对照组、过表达组、沉默组，对照组不做处理，过表达组转染miR-135a-5p mimics上调载体，沉默组转染miR-135a-5p inhibitor下调载体。使用实时荧光定量法检测每组宫颈癌HeLa细胞中miR-135a-5p表达量；四甲基偶氮唑盐法检测每组宫颈癌HeLa细胞增殖水平；Transwell小室法检测每组宫颈癌HeLa细胞侵袭水平。结果 与对照组比较，过表达组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、miR-135a-5p、宫颈癌HeLa细胞迁移数、侵袭数明显升高，宫颈癌HeLa细胞凋亡能力明显降低(P<0.05);与对照组比较，沉默组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、迁移数、侵袭数、miR-135a-5p明显降低，凋亡能力明显升高(P<0.05);与过表达组比较，沉默组(24 h、48 h、72 ...     

miR-520f-3p靶向LAMA3对结直肠癌细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨miR-520f-3p靶向层黏连蛋白(LAMA)3对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测病理组织样本、正常结直肠细胞FHC及CRC细胞SW480、LOVO、HCT116、HT29中miR-520f-3p表达;Western印迹检测病理组织样本中LAMA3蛋白表达。将对数生长期的LOVO细胞分为对照组、inhibitor NC组、miR-520f-3p inhibitor组、mimics NC组、miR-520f-3p mimics组、miR-520f-3p mimics+pcDNA组、miR-520f-3p mimics+pcDNA-LAMA3组;qRT-PCR检测各组细胞中miR-520f-3p表达;CCK-8法检测各组细胞增殖;划痕实验检测各组细胞迁移;Western印迹检测各组细胞中LAMA3、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达;荧光素酶报告基因实验检测miR-520f-3p与LAMA3的靶向关系;采用裸鼠皮下注射上述LOVO细胞以构建裸鼠体内...     

过表达miR-515-5p的视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力变化及其机制

目的 探讨过表达miR-515-5p对视网膜母细胞瘤细胞增殖、凋亡、侵袭能力的影响及其机制。方法 利用StarBase数据库进行生物信息学分析并预测miR-515-5p的靶基因为CBX4,并经双荧光素酶报告基因实验验证。选择视网膜母细胞瘤细胞系SO-RB50、Y79、HXO-RB-44细胞中miR-515-5p表达降低最明显的SO-RB50细胞进行实验,分为miR-515-5p NC组、miR-515-5p mimics组、miR-515-5p mimics+CBX4组、miR-515-5p mimics+CBX4-NC组,分别转染miR-515-5p阴性对照、miR-515-5p mimics、miR-515-5p mimics+CBX4过表达载体、miR-515-5p mimics+CBX4空载体。采用实时荧光定量PCR法检测各组miR-515-5p及CBX4 mRNA表达,Western blotting法检测CBX4蛋白表达,CCK-8法检测转染12、24、48、72 h的细胞增殖能力（OD值）,TUNEL法检测细胞凋亡率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果 mi...     

miR-498过表达对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制

目的 探讨微小RNA-498(miR-498)过表达对鼻咽癌细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响及其机制。方法 体外传代培养人永生化鼻咽上皮细胞系NP69及人鼻咽癌细胞系CNE-2Z、CNE-1、HNE-1、SUNE-1,采用RT-qPCR法检测各细胞miR-498表达,选择miR-498表达最低的鼻咽癌细胞进行后续实验。取传3代、对数生长期、生长状态良好的鼻咽癌细胞,随机分为miR-498 mimics组和NC mimics组,分别转染miR-498 mimics、NC mimics。转染6 h更换新鲜培养基继续培养24 h,收集细胞。采用CCK-8法检测细胞增殖活性,采用平板克隆形成实验检测集落形成能力,采用Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,采用Western blotting法检测EMT相关上皮型钙黏素（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、纤连蛋白（Fibronectin）以及高迁移率族蛋白A2(HMGA2)表达。结果 CNE-1、HNE-1、CNE-2Z、SUNE-1细胞miR-498相对表达量均低于NP69细胞（P均<0.0...     

lncRNA NKILA对鼻咽癌细胞放射抵抗和上皮间质转化的影响及其机制

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NKILA对鼻咽癌细胞放射抵抗和上皮间质转化的影响及其机制。方法 体外传代培养鼻咽癌细胞CNE2并构建放射抵抗细胞模型。将放射抵抗CNE2细胞随机分为空白组、NC组、转染组，转染组和NC组分别转染NKILA-mimic、NKILA-NC质粒，空白组不予转染。收集细胞，采用RT-qPCR法检测lncRNA NKILA、miR-21表达，采用MTT法检测细胞增殖能力，采用Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力，采用Western blotting法检测E-cadherin、N-cadherin表达；通过TargetScan预测lncRNA NKILA与miR-21的靶向调控关系，并通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA NKILA与miR-21的靶向调控关系。取SD裸鼠10只，随机分为观察组和对照组各5只，分别于右前肢腋下注射转染lncRNA NKILA的放射抵抗CNE2细胞、单纯放射抵抗CNE2细胞，常规饲养4周处死，分离并测量移植瘤体积。结果 转染组lncRNA NKILA表达、E-cadherin表达均高于空白组和NC组，miR...     

过/降表达miR-92a的食管鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及PTEN/PI3K/Akt通路蛋白表达变化

目的 观察过/降表达miR-92a的食管鳞癌（ESCC）细胞增殖、迁移、侵袭能力及磷酸酯酶与张力蛋白同源物（PTEN）/磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/Akt通路蛋白表达变化。方法 将人ESCC细胞系Eca-109随机分为miR-92a过表达组、miR-92a降表达组、过表达阴性对照组、降表达阴性对照组,分别转染miR-92a mimics、miR-92a inhibitor、mimic-NC、inhibitor-NC 24 h。采用CCK-8法检测各组培养24、48、72、96 h的的吸光度（A）值,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。采用Westen blotting法检测细胞PTEN/PI3K/Akt通路蛋白PTEN、PI3K、Akt、磷酸化PTEN(p-PTEN)、p-PI3K、p-Akt。结果 各时点细胞A值、细胞迁移距离、穿膜细胞数比较,miR-92a过表达组>过表达阴性对照组、降表达阴性对照组>miR-92a降表达组（P均<0.05）。p-PTEN蛋白miR-92a降表达组>过表达阴性对照组、降表达阴性对照组>...     

大黄酸通过miR-29c-3p调节FSCN1的表达影响胃癌细胞的生物学行为

目的探讨大黄酸(Rhein)对人胃癌细胞(SGC-7901)增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其机制。方法通过qRT-PCR检测大黄酸处理后细胞中miR-29c-3p的表达以及miR-29c-3p的转染效率;miR-29c-3p mimics组、NC mimics组、Rhein+miR-29c-3p inhibitor组、Rhein+NC mimics组均使用脂质体转染试剂转染至SGC-7901细胞中,再使用50μM的大黄酸处理48h;CCK-8法检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI和流式细胞术联合检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测细胞荧光活性;Western blot检测FSCN1蛋白表达。结果与NC组相比较,大黄酸处理后可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡;过表达miR-29c-3p可抑制细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡;抑制miR-29c-3p表达可逆转大黄酸对SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭的抑制和细胞凋亡促进作用。miR-29c-3p可靶向作用于FSCN1。结论大黄酸可抑制人胃癌细胞(SGC-7901)增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-29c-3p/FSCN1有关,为大黄酸用于治疗胃癌提供一定的科学依据。     

miR-485-5p靶向CKS1B对鼻咽癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-485-5p对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-485-5p在人永生化鼻咽上皮细胞系NP69和人鼻咽癌细胞系CNE2中的表达情况;将体外培养的CNE2细胞分为Con组(正常培养)、NC组(转染mimics阴性对照)和mimics组(转染miR-485-5p mimics),实时荧光定量PCR测定miR-485-5p表达,噻唑蓝法、Transwell小室、流式细胞术分别检测细胞增殖活性、侵袭和迁移、凋亡,免疫印迹法检测细胞中E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白和CDC28蛋白激酶调节亚基(CKS)1B蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验检测miR-485-5p和CKS1B靶向关系。结果 与NP69细胞比较,miR-485-5p在CNE2细胞中的表达水平明显降低(P<0.05)。与Con组、NC组比较,mimics组细胞中miR-485-5p表达水平、细胞凋亡率和E-钙黏蛋白表达水平均明显升高,而增殖活力、侵袭与迁移能力和N-钙黏蛋白、波形蛋白、CKS1B蛋白表...     

敲减lncRNA BAIAP2-AS1对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的 探讨敲减长链非编码RNA(lncRNA)BAIAP2反义RNA 1(BAIAP2-AS1)对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法 体外传代培养胶质瘤细胞系A172、LN229、U251及正常人星形胶质细胞系NHA。取传3代、对数生长期细胞,采用RT-qPCR法检测各细胞中微小RNA-491-5p(miR-491-5p)、BAIAP2-AS1、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）mRNA表达,选择lncRNA BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA相对表达量变化较显著的胶质瘤细胞进行后续实验。取上述胶质瘤细胞,随机分为空白对照组、BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1 shRNA+NC inhibitor组,BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA、NC shRNA,BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1shRN...     

miR-188-5p靶向Nek6对宫颈癌细胞的影响及机制

目的探究微小RNA-188-5p(miR-188-5p)对宫颈癌细胞增殖、侵袭、凋亡、迁移的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)对33例宫颈癌患者的癌组织及癌旁组织中的miR-188-5p的表达水平进行检测。常规培养宫颈癌HeLa细胞,利用脂质体分别将miR-188-5p模拟物(mimics)及阴性对照转染至HeLa细胞。采用甲基噻唑基四唑(MTT)与平板克隆形成实验检测细胞存活率及克隆数目。流式细胞仪分析细胞凋亡;Transwell小室法分析侵袭与迁移;利用Targetscan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-188-5p对NIMA相关激酶(Nek)6的靶向性作用;构建Nek6小干扰RNA(si-Nek6),观察抑制Nek6的表达对细胞生物学行为的影响。结果宫颈癌组织、癌旁组织中miR-188-5p的相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-188-5p mimics或转染si-Nek6可降低细胞增殖、克隆形成能力,减少迁移和侵袭细胞数,并增加细胞凋亡率;miR-188-5p与Nek6基因的3′UTR结合,抑制Nek6的蛋白表达(P<0.05);Nek6过表达可逆转miR-188-5p对HeLa细胞生物学行为的调控作用。结论miR-188-5p可能靶向下调Nek6抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡。     

重楼皂苷Ⅱ干预后肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力变化及其与miR-16-5p表达的关系

目的 探讨重楼皂苷Ⅱ对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及其可能的机制。方法 取对数生长期的肺癌A549细胞，分为高浓度组、中浓度组、低浓度组和对照组，分别加入3、2、1μmol/L重楼皂苷Ⅱ及等量二甲基亚砜溶液，干预24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖能力（以细胞增殖活力表示），细胞划痕实验检测细胞迁移能力（以细胞迁移率表示），Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力（以侵袭细胞数表示），Western blotting法检测凋亡相关蛋白[Cleave-Caspase-3、Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶2(MMP-2)]表达，实时荧光定量PCR法检测miR-16-5p表达。取对数生长期的A549细胞，分为miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组和阴性对照组，miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组分别转染含有绿色荧光标记的miR-16-5p inhibitor和miR-16-5p inhibitor NC，并加入2μmol/L重楼皂苷Ⅱ溶液，阴性对照组未进行细胞转染并加入等量二甲基亚砜溶液，干预24 h，参照上法检测...     

miR-204靶向GPRC5A对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-204(miR-204)对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 体外培养人正常结肠上皮细胞(FHC)和人结肠癌肿瘤细胞(HCT116);将HCT116细胞随机分为对照组、miR-204 mimic组和miR-204 NC组;利用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组HCT116细胞miR-204及G蛋白耦联受体C型家族(GPRC)5A表达情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组HCT116细胞的增殖情况;划痕实验检测各组HCT116细胞的迁移能力;Transwell法检测各组HCT116细胞的侵袭能力;Western检测各组HCT116细胞GPRC5A蛋白的表达情况;采用双荧光素酶报告实验验证miR-204与GPRC5A的靶向关系。结果 与正常组相比,各组HCT116细胞miR-204表达水平显著降低(P<0.05)。与对照组和miR-204 NC组相比,miR-204 mimic组HCT116细胞miR-204表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、GPRC5A mRNA及GPRC5A蛋白表达水平显...     

miR-7靶向调控KLF4对结肠癌干细胞生物学行为的影响

目的 探讨微小核糖核酸7(miR-7)靶向调控Krüppe样因子4(KLF4)对结肠癌干细胞生物学行为的影响。方法 体外传代培养结肠癌干细胞。取传15代、对数生长期、生长状态良好的结肠癌干细胞,随机分为对照组、NC mimics组、miR-7 mimics组,NC mimics组和miR-7 mimics组分别转染空载质粒、miR-7 mimics质粒,对照组不予转染。采用RT-qPCR法验证转染效率。收集各组转染48 h结肠癌干细胞,采用CCK-8法检测细胞活力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用改良Boyden小室法检测细胞侵袭能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。通过TargetScan在线网站预测miR-7与KLF4的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-7对KLF4的靶向调控作用。收集各组转染48 h结肠癌干细胞,分别采用RT-qPCR法、Western blotting法检测KLF4 mRNA和蛋白表达。结果 miR-7 mimics组miR-7相对表达量高于对照组和NC mimics组（P均<0.05）,而对照组与NC mimics组比较差异无统计学意...     

miR-199对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响及机制

目的 探讨微小RNA-199(miR-199)对结直肠癌细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制。方法 常规培养人正常结肠上皮细胞系（HCoEpiC细胞）、结直肠癌细胞系（LOVE、SW620、SW480、HT29、DLD-1细胞），用实时定量PCR法检测细胞中miR-199表达。将SW620细胞随机分为miR-199过表达组、阴性对照组及miR-199+转铁蛋白受体1(TFR1)共表达组（miR-199mimics+TFR1组），分别将miR-199mimics、mimic-NC、miR-199mimics+TFR1过表达质粒转染至细胞内；另取部分未转染细胞作为空白对照组。实时荧光定量PCR法检测TFR1 mRNA表达，MTT实验检测细胞增殖能力，Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力，Western blotting法检测TFR1蛋白表达，生物学软件TargetScan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-199的靶基因。结果 人结直肠癌细胞系中miR-199相对表达量均低于人结肠上皮细胞系（P均<0.05），且SW620细胞中miR-199相对表达量最低，故选SW620细胞为实验...     

RNA-linc00858和miR-3182在宫颈癌组织表达变化、对宫颈癌细胞株侵袭迁移调控作用及靶向关系

目的 观察长链非编码RNA-linc00858和微小RNA-3182(miR-3182)在宫颈癌组织表达变化、对宫颈癌细胞株侵袭迁移的调控作用，分析宫颈癌细胞中linc00858、miR-3182的靶向关系。方法 (1)40例宫颈癌患者，均行宫颈癌根治术，术中留取宫颈癌组织及癌旁组织，采用RT-qPCR法检测宫颈癌及癌旁组织中linc00858、miR-3182的表达，采用Spearman相关性分析法分析宫颈癌组织中linc00858和miR-3182相关性。(2)筛选人宫颈癌细胞株MS751为受试细胞，1～4组分别转染si-linc00858（小干扰linc00858，沉默linc00858表达）、OE-linc00858（过表达linc00858）、si-NC（小干扰阴性对照）、OE-NC（过表达阴性对照），转染48 h时采用Transwell实验观察各组细胞侵袭、迁移情况。培养48 h时采用RT-qPCR法检测各组细胞linc00858、miR-3182的表达。(3)分别采用RNA免疫沉淀测定实验、双荧光素酶报告实验分析MS751细胞中linc00858与miR-3182的靶向关...     

miR-9-5p通过靶向FOXO1基因调控食管癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨miR-9-5p通过靶向叉头框转录因子O1(FOXO1)对食管癌Eca-109细胞体外增殖、侵袭和迁移能力的调控作用。方法 在食管癌Eca-109细胞中分别转染miR-9-5p inhibitor和NC-inhibitor,分别设置为anti-miR-9-5p组和NC组,并设置未转染的细胞为Blank组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测各组细胞中miR-9-5p的表达水平,噻唑蓝(MTT)法、Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。通过生物信息学在线软件预测miR-9-5p与FOXO1互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证二者靶向关系。采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blotting)分析miR-9-5p对FOXO1的调控作用。结果 anti-miR-9-5p组Eca-109细胞中miR-9-5p的表达水平、OD值、侵袭和迁移细胞数均显著低于NC组和Blank组(P0.05)。miR-9-5p与FOXO1存在互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,miR-9-5p和FOXO1能够靶向结合。anti-miR-9-5p组Eca-109细胞中FOXO1 mRNA和蛋白表达水平明显高于NC组和Blank组(P0.05)。NC组和Blank组细胞中以上指标均无明显改变(P0.05)。结论 干扰miR-9-5p的表达可通过靶向FOXO1基因抑制食管癌Eca-109细胞的体外增殖、侵袭和迁移能力。     

miR-21靶向调控TET1促进结直肠癌HCT15和HT29细胞增殖、侵袭及迁移

目的探究miR-21对结直肠癌细胞生物学行为的影响以及潜在调控机制。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织中miR-21和TET1的表达水平并分析其相关性;利用生物信息学网站预测miR-21潜在靶基因TET1,利用双荧光素酶实验进行验证;利用细胞转染实验对两种结直肠癌细胞株进行miR-21 mimics、miR-21 inhibitor、si-TET1及相关对照的细胞转染,采用CCK-8分析、Transwell实验及细胞划痕实验检测转染后细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化;利用Western blotting实验检测转染后细胞中TET1蛋白的表达。结果 qRT-PCR结果显示,结直肠癌组织中miR-21呈高表达水平,TET1 mRNA呈低表达水平,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示TET1是miR-21的靶基因,miR-21表达引起结直肠癌细胞中TET1表达下调。细胞转染实验结果显示,miR-21促进细胞增殖、侵袭及迁移。Western blotting实验结果显示,转染miR-21 mimics抑制TET1蛋白表达,转染miR-21 inhibitor促进TET1蛋白表达。结论 miR-21通过靶向调控TET1促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移。     

miR-130a调控肿瘤抑制因子对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的通过检测miR-130a的表达情况及miR-130a与肿瘤抑制因子(CYLD)的靶向关系,探讨miR-130a是否可通过调控CYLD对结直肠癌SW480细胞生物学行为产生影响。方法将结直肠癌SW480细胞设置为对照组、阴性转染组、miR-130a inhibitor组,采用qRT-PCR检测各组miR-130a的表达; MTT法、Transwell法、流式细胞术分别检测各组SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况;双荧光素酶报告基因检测miR-130a与CYLD靶向关系; Western blot检测各组细胞CYLD、增殖、凋亡、侵袭迁移相关蛋白表达情况。结果与对照组相比,miR-130a inhibitor组的miR-130a表达水平显著降低(P 0.05)。与对照组相比,miR-130a inhibitor组SW480细胞凋亡率显著增加,而存活率、侵袭迁移数显著降低(P 0.05)。与对照组相比,miR-130a inhibitor组c-Myc、CyclinD1、MMP7、Bcl-2表达水平显著降低,Bax、Caspase-3、CYLD表达水平显著增加(P 0.05)。靶基因预测结果显示,CYLD是miR-130a的潜在目标基因,与pmirGLO-CYLD-wt+miR-NC组相比,pmirGLO-CYLD-wt+miR-130a mimics组荧光素酶活性显著降低。结论 miR-130a表达沉默可能通过促进CYLD表达抑制SW480细胞的增殖、侵袭、迁移,促进细胞凋亡。     

miR-200通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨miR-200对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与程序性死亡受体配体-1(Programmed death-ligand 1,PD-L1)的靶向关系。方法选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为NC组(未进行任何处理的A549细胞)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-200组(转染miR-200-mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-PD-L1组(转染si-PD-L1)、miR-200+pEGFP组(转染miR-200-mimic+pEGFP)及miR-200+pEGFP-PD-L1组(转染miR-200-mimic+pEGFP-PD-L1)。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-200表达水平;MTT检测细胞增殖能力;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞PD-L1表达水平;荧光素酶实验验证miR-200与PD-L1的靶向关系。结果与HLF-1相比,A549细胞胞miR-200表达水平降低,PD-L1基因、蛋白表达升高(P0.05)。48和72 h时,miR-200组细胞活力、迁移和侵袭数量明显低于NC组、miR-NC组(P0.05)。48和72 h时,si-PD-L1组细胞活力、迁移和侵袭数量明显低于NC组、si-NC组(P0.05)。miR-200+pcDNA-PD-L1组细胞48、72 h时细胞活力、细胞迁移和侵袭数量高于miR-200+pcDNA组、miR-200组(P0.05)。与对照组相比,A549细胞PD-L1野生型质粒组荧光素酶活性明显降低(P0.05),PD-L1突变型质粒组荧光素酶活性无明显变化(P0.05)。结论 miR-200可负性调控PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭。