嗅粘膜移植联合应用大剂量甲基强的松龙修复急性脊髓损伤

目的探讨嗅粘膜髓内移植联合应用大剂量甲基强的松龙修复脊髓损伤的可行性和疗效,观察甲基强的松龙与嗅鞘细胞的协同作用。方法将Wistar大鼠做成脊髓半切模型,随机分成髓内单独移植嗅粘膜组(OM)、嗅粘膜联合应用甲基强的松龙组(OM MP)、单独应用甲基强的松龙组(MP)和对照组(CG)共四组,分期进行联合行为学综合评分(CBS评分)及组织学检查,评价各组脊髓修复情况。结果CBS评分OM组及OM MP组较MP组及CG组在3周后各时段差别有显著意义(P<0.01);OM组和OM MP组没有明显差别(P>0.05);MP组与CG组有显著差别(P<0.05)。OM组及OM MP组组织学改变与MP组及CG组有显著差别,前两组间无显著差别。结论嗅粘膜髓内移植联合应用大剂量甲基强的松龙修复脊髓损伤具有很好的疗效,但未见MP与OM的明显协同作用。     

嗅鞘细胞移植联合甲基维生素B12修复髓鞘组织的研究

目的研究嗅鞘细胞（OECs）的培养及其对实验性变态反应性脑脊髓炎的治疗功用。方法用新生wistar大鼠嗅球培养OEC，移植组将OECs悬液注入实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠的侧脑室；联合移植组在侧脑室注入OECs的基础上，腹腔注入甲基维生素B12；假手术组按以上方法注入等量生理盐水；观察两组大鼠运动功能评分、组织病理学变化。结果运动功能评分：联合移植组优于OECs移植组，以上两组均显著优于假手术组，差别有显著意义（P〈0．05）；组织病理切观察：联合移植组髓鞘修复程度优于OECs移植组，以上两组髓鞘修复程度均显著优于假手术组。结论OECs移植可以促进自身免疫性脑脊髓炎的髓鞘修复，改善运动功能，OECs与甲基维生素B12对于髓鞘的修复有较好的协同作用。     

嗅粘膜源性嗅鞘细胞移植联合NGF对脊髓损伤的修复

目的：探讨大鼠嗅粘膜嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells, OECs）移植联合神经生长因子(nerve growth factor, NGF)修复脊髓急性损伤的可行性和疗效,并观察二者的协同作用。方法：自成年Wistar大鼠嗅粘膜取材,采用差速贴壁和阿糖胞苷抑制纯化相结合的方法培养纯化嗅鞘细胞。建立大鼠脊髓半切模型,并随机分成对照组（A组）,OECs组（B组）和OECs＋NGF组（C组）,在不同时段进行肢体活动的BBB评分。8周后取脊髓标本进行组织学检查,评价对脊髓损伤的修复作用。结果：B组和C组2周后BBB评分高于A组（P＜0.05）,C组自4周后明显优于A组和B组（P＜0.01）。组织学检查表明,C组可明显促进轴突再生。结论:OECs联合NGF具有良好的脊髓损伤修复作用,且二者具有明显的协同作用。     

联合应用指数曲线电刺激和嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的基础研究

目的观察联合应用硬膜外指数曲线电刺激和嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的疗效。方法制备脊髓损伤模型,随机分成4组,A组:嗅鞘细胞移植组;B组:硬膜外电刺激组;C组:联合电刺激和嗅鞘细胞移植组;D组:对照组。评定功能恢复情况,采用荧光技术对标记后的脊髓进行示踪。结果各治疗组大鼠脊髓功能均有改善。其中A、B组较D组优,且差异具有统计学意义(P<0.05),A组与B组间差异无统计学意义(P>0.05)。C组较A、B两组优,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论硬膜外电刺激可以提高嗅鞘细胞移植后的生存率;联合应用指数曲线电刺激和嗅鞘细胞移植,可以相互促进,更有利于脊髓功能的恢复。     

嗅神经鞘细胞移植联合应用GDNF促进大鼠脊髓损伤后功能恢复

目的 嗅神经鞘细胞（OECs）移植联合应用胶质源性神经营养因子（GDNF）恢复大鼠脊髓损伤的功能。方法 将成年大鼠分为脊髓半切洞损伤组（A组），脊髓半切洞损伤＋嗅神经鞘细胞移植组（B）和脊髓半切洞＋嗅神经鞘细胞移植＋胶质源性神经营养因子（C组）。手术后应用联合行为评分（CBS），感觉诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）检查，测定脊髓功能恢复情况。结果 3组CBS得分A组＞B组＞C组，SEP和MEP潜峰时，均A组＞B组＞C组，统计分析均差异显著性（P＜0．05）。结论 移植嗅神经鞘细胞＋胶质源性神经营养因子能促进损伤脊髓功能的恢复。     

神经营养因子-3基因修饰的嗅鞘细胞移植治疗自身免疫性脑脊髓炎的实验研究

目的 研究神经营养因子-3(NT-3)基因修饰的嗅鞘细胞移植对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的髓鞘及轴突的修复作用.方法 用逆转录病毒介导神经营养因子-3(NT-3)基因转染嗅鞘细胞(OEC),将其移植入EAE侧脑室,荧光标记后观察其在体内的迁徙、分布特点;运用皮质体感诱发电位监测(CSEP)、超微结构观察、功能评分;RT-PCR方法检测NT-3mRNA转录水平,并与对照组、OEC移植组相比较等方法对髓鞘及轴突修复进行评价.结果 (1)OEC-NT-3在EAE体内存活,可广泛迁徙至病灶远端且至少可以持续存活4周.(2)超微结构发现转基因治疗组4周后,轴索结构完整,周围髓鞘板层结构清楚,明显优于另外二组.(3)4周后,转基因组CSEP潜伏期明显缩短,波幅增加,明显优于其他二组,差异有统计学意义(P<0.05).(4)转基因组NT-3mRNA转录水平为(212.32±16.14)×10-2,明显高于OEC组(1.23±0.13)×10-2及对照组(1.98±0.19)×10-2,差异有统计学意义(P<0.01).结论 NT-3基因修饰的OEC在持续表达神经营养因子,且可促进EAE的神经修复.     

嗅鞘细胞移植后脊髓半横断大鼠睫状神经营养因子和FGF-2表达的变化

目的:研究嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)移植到损伤的脊髓后,能否分泌睫状神经营养因子(CNTF)和碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2),以及能否引起脊髓组织内CNTF和FGF-2表达的变化及脊髓的细胞有何数量改变.方法:体外分离培养大鼠嗅球嗅鞘细胞,通过免疫荧光细胞化学染色检测其CNTF和FGF.2的表达.将嗅鞘细胞移植入脊髓半横断SD大鼠,观察术后7天和21天嗅鞘细胞在脊髓内的存活情况,并对脊髓组织切片进行CNTF和FGF-2免疫荧光组织化学染色,计数阳性细胞并计算阳性面积百分比.结果:嗅鞘细胞在体外培养和移植后都能表达CNTF和FGF-2.同未移植组对比,移植组脊髓CNTF和FGF-2表达明显增强(P<0.05),神经元和少突胶质细胞数量增加(P<0.05),星型胶质细胞数量无明显改变.结论:嗅鞘细胞移植入损伤的脊髓后能分泌CNTF和FGF-2,并使脊髓组织内CNTF和FGF-2的表达增加,引起神经元和少突胶质细胞数量增加.     

大剂量甲基强的松龙治疗急性脊髓损伤的临床观察

目的:研究大剂量甲基强的松龙(MP)治疗急性脊髓损伤的临床效果.方法:对23例急性脊髓损伤患者应用甲基强的松龙的疗效进行研究,根据病人自愿选择原则分为应用M治疗组(MP组13例)和未应用MP治疗组(对照组10例),术前、术后分别对患者进行评分(以ASIA分级标准进行分级),并对治疗组和对照组疗效和并发症进行对比.结果:两组患者在治疗后感觉及运动功能均获得明显改善(P<0.05).MP组的感觉及运动功能恢复均优于对照组(P<0.05).两组并发症发生率比较无显著性差异(P>0.05),结论:早期应用MP大剂量冲击治疗急性脊髓损伤是一项有效措施,可明显提高感觉及运动功能的恢复.     

嗅神经鞘细胞移植治疗实验性脊髓损伤的研究

目的:观察移植体外培养的嗅神经鞘细胞(OEC)对大鼠脊髓左半侧横断伤的治疗作用。方法:将应用改良Nash法培养的OECs移植到成年大鼠T10脊髓左半侧横断处,8周后分别采用改良Tarlov法运动学功能评分、辣根过氧化物酶(HRP)顺行示踪、透射电镜观察、P75免疫组织化学染色及HE染色等方法,观察动物的运动功能、脊髓再生的轴突和髓鞘、OEC的存活和脊髓损伤程度。结果:8周时治疗组运动学功能评分高于对照组(P<0.05);治疗组再生轴突穿越损伤区,对照组则无再生轴突穿越;超微结构显示治疗组轴突数量多于对照组,且髓鞘的完整性强于对照组,OEC表现为星形胶质细胞样和雪旺氏细胞样两种,包绕轴突髓鞘;免疫组化染色显示移植后8周OECs仍然存活,在损伤区均匀、散在分布;损伤后8周脊髓损伤区有胶质瘢痕及空洞形成。结论:移植的嗅神经鞘细胞可促进大鼠运动功能的恢复、脊髓轴突的再生和髓鞘的重塑。     

嗅鞘细胞移植联合应用GDNF对大鼠脊髓损伤的治疗作用

目的：研究嗅鞘细胞（OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因了（GDNF）对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法；建立成年SD大鼠脊髓T8半横断损伤模型，将体外培养纯化的OECs植入脊髓损伤处，同时局部应用GDNF，采用斜板试验和BBB联合功能评分观察大鼠运动功能恢复情况，并通过辣根过氧化物酶逆行示踪技术评价OECs和GDNF对神经元存活和纤维再生的影响。结果：（1）OECs和GDNF联合应用时对皮质和红核神经元有逆行性保护作用；可促进脊髓下行传导束再生，肢体运动功能恢复，（2）OECs和GDNF联合应用组对脊髓损伤的修复作用最强，高于GDNF或OECs单用组。结论：联合应用GDNF和OECs在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。     

MP对大鼠脊髓损伤后HSP27表达的影响

目的 研究脊髓损伤后热休克蛋白27(HSP 27)的表达及甲基强的松龙(M P )对其表达的影响.方法 采用改良Allen's打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型.随机将90只大鼠分成正常组、对照组及甲基强的松龙组.分别在脊髓损伤6 h、24 h、7 d后行脊髓病理形态学观察,用免疫组织化学染色的方法观察脊髓细胞中HSP 2...     

体感诱发电位测定甲强龙对大鼠慢性颈脊髓损伤的疗效及病理观察

目的 :探讨甲泼尼龙琥珀酸钠（MP）对大鼠慢性脊髓压迫模型相应时间点的SEP变化与病理变化的相关性。方法:将40只大鼠随机分为实验组与对照组（n=20）,两组均建立慢性脊髓压迫模型,实验组大鼠尾静脉行MP静滴治疗,对照组未行任何治疗;记录实验组治疗后第1、2、3天的BBB评分、SEP信号及脊髓损伤病理变化,且记录对照组同时间段的BBB评分、SEP信号及脊髓损伤病理变化。将SEP信号进行处理分析得出数据, 通过HE染色观察受压脊髓组织病理变化情况,用统计学方法分析其相关性。结果: BBB评分:实验组MP治疗后第3天评分明显升高,证实MP对于慢性脊髓损伤大剂量治疗在行为学上是有效的。SEP信号:MP给药后第3天P波峰值及潜伏期缩短的百分比恢复情况远远高于对照组(P＜0.05) 。HE染色:在建立模型后至第3天药物治疗过程中,脊髓组织细胞形态有所恢复。结论: 慢性脊髓压迫模型大鼠经MP治疗后神经功能明显恢复,且在治疗后第3天效果最为明显。     

甲泼尼龙和神经节苷脂对大鼠损伤脊髓CD95表达的影响

目的：研究甲泼尼龙（MP）加神经节苷脂（GM1）对大鼠脊髓损伤（SCI）的疗效.方法：采用Allen＇s法制备SCI大鼠模型.将模型大鼠随机分为4组,A组为生理盐水对照组,B组为MP治疗组,C组为GM1治疗组,D组为MP加GM1联合治疗组.大鼠存活不同时间后分别行行为学观察再处死,取伤段脊髓作石蜡切片,行HE染色和CD95单克隆抗体免疫组化检测.结果：HE染色显示脊髓组织病理学改变B、C、D组明显轻于A组,而D组较B、C组轻.伤后2周行为学指标优差依次为D-C-B-A（P＜0.05）.免疫组化检测表明,A组脊髓灰质CD95免疫染色阳性细胞数在8 h达到高峰,在白质中48 h时达到高峰,而D组虽有高峰,但明显少于A组（P＜0.01）,D组也少于B、C组（P＜0.01）.结论：MP与GM1联合应用可阻断神经细胞的凋亡,对损伤的脊髓组织有良好的保护作用并可促进神经功能的恢复.     

嗅球成鞘细胞移植促进皮质脊髓束再生修复的研究

目的 利用辣根过氧化物酶（HRP）逆行追踪皮质脊髓束（eorticospinal tract，CST）投射神经元的方法研究嗅球成鞘细胞移植对损伤的皮质脊髓束再生修复的影响。方法 将体外培养的OEC制成细胞悬浮液移植至大鼠C1—C2节段右侧皮质脊髓束电损毁的部位。实验分为三组：对照组、损伤组和移植组。移植第12天，三个实验组分别在右侧L2-3节段相应CST的位置注入HRP。2d后，观察计数双侧额顶叶皮质标记的CST投射神经元。结果 移植组与损伤组比较，标记的锥体细胞数量多，细胞形态清晰，排列较规则，可见模糊柱状结构。结论 移植组标记的HRP逆行追踪CST投射神经元数目明显多于损伤组，由此可认为损伤的CST得到了一定程度的修复，进而确信OEC的移植能够促进皮质脊髓束的再生修复。     

大鼠脊髓缺血再灌注损伤后甲基强的松龙对肿瘤坏死因子－α表达的影响

目的研究大鼠脊髓缺血再灌注损伤（SCⅡ）后肿瘤坏死因子－α（TNF—d）的表达及甲基强的松龙（MP）预干预对TNF－α【表达的影响。方法健康雄性SD大鼠150只随机分成3组：对照组（n=50）仅手术暴露腹主动脉,不做进一步处理;脊髓缺血再灌注损伤纽（SCⅡ组）（n=50）建立SCⅡ模型,夹闭腹主动脉30min后松开,再灌注3h;甲基强的松龙组（MP组）（n=50）于建立SCⅡ模型前30min尾部静脉注射MP（30mg／kg）,而A组和B组于术前30min分别注入等量的生理盐水。3组均取腰段脊髓标本,观察损伤节段脊髓病理形态学变化,用免疫组织化学染色方法观察脊髓组织TNF－α的表达,并对大鼠后肢运动功能进行评分。采用SPSS10．0软件对数据进行统计学处理。结果①SCⅡ组脊髓组织内TNF—d呈高表达,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。②MP组脊髓细胞内TNF－α表达明显降低,与SCⅡ组对比差异有统计学意义（P〈0．05）。③大鼠脊髓缺血再灌注损伤后后肢功能评分降低,MP组后肢运动功能评分提高。结论①SCⅡ后脊髓细胞TNF－α呈高表达。②预防应用MP可降低TNF－α的表达,也即预防应用MP能减轻脊髓缺血再灌注损伤,保护脊髓神经功能。     

陈旧性脊髓损伤患者嗅鞘细胞移植术后的疗效与康复护理

目的探讨嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤患者的术后疗效及护理。方法回顾性分析200例脊髓损伤患者嗅鞘细胞移植术后的疗效与护理经验。结果除4例完全性脊髓断裂的患者无效外,其余196例患者的观察指标均有不同程度改善,其中8例脊髓损伤患者重新站立。结论做好脊髓损伤患者的心理护理,严密观察病情变化,预防各种并发症的发生,加强康复锻炼,是提高嗅鞘细胞移植术效果的有效措施。