阿魏酸通过调控线粒体凋亡抑制宫颈癌HeLa细胞侵袭迁移功能

目的：探讨阿魏酸（FA）对宫颈癌HeLa细胞株凋亡调控作用及其可能机制。方法：体外培养HeLa细胞,将其分为control组和FA处理组（1、2 和4 mmol/L）。细胞计数试剂盒8（CCK-8）和划痕实验检测细胞增殖和迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测不同浓度FA处理后HeLa细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及Cleaved-caspase-3的表达,免疫荧光检测HeLa细胞中线粒体的表达数量及状态。结果：RT-qPCR结果显示,与control组相比,随着FA浓度增高,HeLa细胞中Bcl-2基因表达逐渐降低,而Bax和Cleaved-caspase-3 基因表达逐渐增强（P ＜0.05）。免疫荧光示,与control组相比,HeLa细胞中的线粒体含量逐渐减少且功能逐渐减弱（P ＜0.05）。Transwell以及划痕实验结果显示,与control组相比,不同浓度FA可使HeLa细胞的侵袭细胞数以及迁移细胞数减少且呈剂量依赖性（P ＜0.05）。结论：FA通过Bcl-2家族蛋白途径抑制HeLa细胞的增殖、侵袭及迁移,诱导线粒体介导的细胞凋亡。     

Rab1A siRNA对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制

目的观察Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖和凋亡的影响并探讨其分子机制。方法应用siRNA干扰Rab1A基因表达,将He La细胞分为空白对照组、阴性对照组和Rab1A siRNA组,空白对照组不做处理,阴性对照组转染阴性对照siRNA。Rab1A siRNA组转染Rab1A特异性siRNA。MTT比色法分析Rab1A对宫颈癌He La细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析对细胞周期和细胞凋亡的影响;Western blot观察Rab1A siRNA对Cyclin D1、GRP78、Bcl-2和Bax表达的影响。结果与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的Rab1A mRNA和蛋白的表达均显著下调;Rab1A siRNA抑制宫颈癌He La细胞增殖;与阴性对照组相比,Rab1A siRNA组He La细胞的S期细胞数量显著减少(P<0.05),G1/G0期细胞数量显著增加(P<0.05),Rab1A siRNA组He La细胞的早期凋亡和晚期凋亡显著增加(P<0.01);Rab1A siRNA组与阴性对照组相比,Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P<0.01),GRP78和Bax在蛋白水平的表达显著上调(P<0.01)。结论 Rab1A通过调控Cyclin D1的表达促进宫颈癌He La细胞增殖,通过调控GRP78、Bcl-2和Bax表达抑制细胞凋亡。     

越橘提取物抑制宫颈癌 HeLa 细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的 探讨越橘提取物抑制 HeLa 细胞增殖和诱导凋亡作用及其可能机制。方法 用浓度为 0、0.025、0.25、2.5、25 μg/mL 的越橘提取物处理 HeLa 细胞 24 h 后,采用四甲基偶氮唑盐 (MTT) 方法检测越橘提取物对 HeLa 细胞增殖的抑制作用,采用 Hoechst 33342/PI 染色和 DNA ladder 方法观察越橘提取物对 HeLa 细胞凋亡的诱导作用,并采用 Western blotting 法检测 caspase-3 和 caspase-8 蛋白表达。结果 0.025、0.25、2.5 和 25 μg/L 的越橘提取物对 HeLa 细胞增殖的抑制率分别为 22.81%、36.75%、42.62% 和 45.22%;0.25～25 μg/L 的越橘提取物处理组细胞呈现明显的凋亡改变;Western blotting 结果显示越橘提取物处理组细胞中 caspase-8 和 caspase-3 酶原蛋白激活,出现裂解片断。结论 越橘提取物可通过诱导 HeLa 细胞凋亡而抑制其增殖。     

紫杉醇诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇抑制ＨｅＬａ细胞生长的机制。方法；经荧光染色，电镜观察细胞形态，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ及流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：紫杉醇作用２４ｈ经荧光染色细胞呈不均一亮蓝色，作用４８ｈ细胞被染色红色，电镜观察可见细胞变小，染色质浓缩并产生凋亡小体，ＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒ未见明显的梯形条带，流式细胞仪检测紫杉醇作用２４ｈ细胞凋亡。结论；紫杉醇可诱导细胞凋亡，也可直接杀伤ＨｅＬａ细胞，而且以后者为主     

中草药诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及其分子机制

本文综述中草药或其有效成分诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究进展，指出中草药诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的机制主要是细胞周期阻滞作用，提高细胞内游离钙离子水平，调控凋亡相关基因表达并激活相关信号转导通路，下调端粒酶活性和降低线粒体膜电位等。     

紫花牡荆素通过线粒体凋亡途径诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:研究紫花牡荆素诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,并探讨其诱导凋亡机制.方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞.细胞凋亡ELISA试剂盒检测HeLa细胞组蛋白/DNA碎片;碘化丙啶染色流式细胞术定量分析Sub-G1细胞百分率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带.caspase比色试剂盒检测caspase-3/-9活性;Rh123探针染色FCM检测线粒体膜电位;Western blot检测细胞色素c、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和XIAP蛋白的表达.结果:不同浓度的CAS处理48h后,HeLa细胞组蛋白/DNA碎片增加、Sub-G1细胞百分率显著增高、DNA琼脂糖凝胶电泳法观察到典型的DNA梯形条带;CAS处理组caspase-3/-9活性明显升高、线粒体膜电位降低、细胞色素c、Bax显著升高,而Bcl-xL和XIAP蛋白表达水平降低.结论:CAS通过线粒体凋亡途径诱导HeLa细胞凋亡.     

三氧化二砷诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡的初步研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)诱导子宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡,探讨As2O3 对子宫颈癌的临床应用意义。方法:采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测浓度分别为1.0、2.0、5.0、10.0μmol/L的As2O3 作用1、2、3、4 d后HeLa细胞的存活率,并进行形态学观察;采用细胞凋亡原位检测(TUNEL)法进行细胞凋亡的检测。结果:2.0μmol/L As2O3 处理HeLa细胞48 h后,可见细胞的存活率明显降低(P<0.05),处理96 h后,细胞的存活率进一步降低(P<0.01),经5.0μmol/L As2O3 处理的HeLa细胞24 h后就明显可见细胞的存活率降低;As2O3 作用后,HeLa细胞具有明显的凋亡特征性改变;TUNEL法检测可发现HeLa细胞有DNA的断裂。结论:As2O3 可以诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡,抑制细胞增殖,随着As2O3 浓度增加,作用时间延长,效果越明显,其作用具有浓度和时间依赖性。     

天花粉蛋白诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及APC基因去甲基化

目的:研究天花粉蛋白(TCS)抗宫颈癌作用机制。方法:MTT还原法检测TCS对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用,流式细胞仪检测TCS对HeLa细胞周期及凋亡率的影响,MSP检测TCS作用前后APC基因启动子甲基化状态。结果:TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用,呈剂量依赖性;TCS可以将HeLa细胞阻滞于S期;TCS诱导HeLa细胞发生凋亡,有剂量依赖性;80 mg/LTCS处理HeLa细胞48 h后,APC基因启动子出现去甲基化。结论:TCS对HeLa细胞有明显抑制作用,抑制机理与将HeLa细胞阻滞于S期、诱导细胞凋亡及APC基因启动子出现去甲基化有关,TCS有良好的抗宫颈癌临床应用前景。     

南赤瓟提取物诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及作用机制研究

目的 观察南赤瓟提取物对宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用,并探讨其可能的作用机制.方法 用不同浓度的南赤瓟提取物(0.10、0.25、0.50、1.00、2.00 mg/ml)于不同作用时间(24、48、72 h)处理宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法检测不同浓度的南赤瓟提取物在不同作用时间下对HeLa细胞增殖率的影响;用0.50和1.00 mg/ml的南赤瓟提取物处理宫颈癌HeLa细胞48 h后Hoechst33258染色观察细胞形态变化,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HeLa细胞中Caspase-9和Caspase-3的活性,荧光定量PCR测定Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值.结果 南赤瓟提取物对HeLa细胞的生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性;南赤瓟提取物(0.50和1.00 mg/ml)处理能显著降低HeLa细胞线粒体膜电位,促进HeLa细胞凋亡(P＜0.05,P＜0.01);上调Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达和Bcl-2与Bax的比值以及增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P＜0.05,P＜0.01).结论 南赤瓟提取物可诱导HeLa细胞凋亡,其作用机制与降低HeLa细胞线粒体膜电位及调节凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-9、Caspase-3的表达有关.     

姜黄素通过内质网应激途径诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的:观察姜黄素诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡并探讨其相关机制。方法:在以不同浓度姜黄素处理HeLa细胞后,采用MTT法观察细胞活性并选择姜黄素的最适干预浓度。将等量HeLa细胞分为4组:对照组(Ctrl)不加任何药物干预;对照组+4-苯基丁酸钠组(Ctrl+PBA)采用4-PBA(3mmol/L)对HeLa细胞进行干预;姜黄素组(Cur)采用姜黄素(25μM)对HeLa细胞进行干预;姜黄素+4-苯基丁酸钠组(Cur+PBA)则在姜黄素干预后48h采用4-PBA(3mmol/L)对HeLa细胞进行干预。流式细胞术检测各组HeLa细胞凋亡情况;采用Real-time PCR和Western Blotting检测各组HeLa细胞中内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)以及C/EBP同源蛋白质(CHOP)mRNA及蛋白表达情况。结果:不同浓度姜黄素干预HeLa细胞后,细胞生长均受到不同程度的抑制,并呈现出浓度依赖性;与Ctrl及Ctrl+PBA组相比,Cur组HeLa细胞凋亡率显著升高;与Cur组相比,Cur+PBA组HeLa细胞凋亡率显著降低;与Ctrl组及Ctrl+PBA组相比,Cur组GRP78及CHOP mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与Cur组相比,Cur+PBA组GRP78及CHOP mRNA及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论:内质网应激途径是姜黄素诱导HeLa细胞凋亡的重要机制之一。     

氯化镧经Caspase-3途径诱导子宫颈癌细胞凋亡

目的探讨氯化镧体外诱导人子宫颈癌细胞凋亡的作用和分子机制,为探索稀土化合物的药用价值提供理论依据。方法采用形态学观察、四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定氯化镧对HeLa细胞的抑制率;流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率,蛋白质印迹技术分析Caspase-3蛋白表达的改变,并以分光光度法测定其活性。结果形态学分析和MTT法显示氯化镧能够抑制HeLa细胞生长并诱导其凋亡(P<0.05),其作用呈明显的量效关系。细胞周期实验结果说明,氯化镧可令细胞大多阻滞于G1期,并呈一定的浓度依赖性;氯化镧诱导细胞凋亡亦有剂量依赖性,在5μmol/L剂量下,细胞开始凋亡,随着药物浓度的增加,凋亡率不断增高,各浓度与对照组相比差异都具有统计学意义(P<0.01)。蛋白质印迹实验显示氯化镧亦可上调活化的Caspase-3蛋白表达水平及活性且呈浓度依赖性。结论一定浓度的氯化镧可抑制人子宫颈癌HeLa细胞的增殖并通过激活Caspase途径诱导HeLa细胞凋亡。     

人截短型凋亡诱导因子AIF△1-480的表达对HeLa细胞的促凋亡作用

目的: 观察人截短型AIF(AIF△1-480)基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用. 方法: 在人截短型AIF(AIF△1-120)基因克隆成功的基础上,进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号、FAD结合结构域和NADH结合结构域(1-480位氨基酸)编码序列的人截短型AIF(AIF△1-480)基因.将其克隆入pIRES2-EGFP绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察、电镜观察等方法,检测目的基因在转染细胞中的表达以及对转染细胞形态的影响.结果: 成功构建了人截短型AIF(AIF△1-480)基因的真核表达载体.转染细胞后,可检测到人截短型AIF(AIF△1-480)分子的表达.转染后48 h,可观察到表达人截短型AIF(AIF△1-480)分子的细胞呈现典型的凋亡特征.结论: 人截短型AIF(AIF△1-480)基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡.     

姜黄素诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:研究姜黄素在体外诱导宫颈癌H eL a细胞凋亡及其作用机制。方法:3H-脱氧胸苷掺入法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测HPV E 6的mRNA水平表达;W estern b lot检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax、P 53和P 21ras的蛋白水平表达。结果:姜黄素对H eL a细胞生长有抑制作用,并呈剂量依赖性;流式细胞仪和荧光双染法结果提示姜黄素可诱导H eL a细胞凋亡;RT-PCR提示姜黄素作用H eL a细胞后HPV E 6的mRNA水平表达逐渐降低;W estern b lot结果提示姜黄素能上调B ax、P 53和P 21ras的蛋白水平表达,而B cl-2的表达无明显影响。结论:姜黄素通过抑制HPV E 6的表达,恢复P 53的功能,引起细胞凋亡,起到杀伤肿瘤的作用。     

芍药苷诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡的相关性分析

目的 探讨芍药苷对人子宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度芍药苷作用于人宫颈癌HeLa细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同时间HeLa细胞的生长抑制效应,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)双染色流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率及细胞周期变化,透射电镜观察HeLa细胞形态变化,免疫细胞化学法检测芍药苷作用后HeLa细胞Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的变化.结果 不同浓度的芍药苷作用不同时间后,对子宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率呈明显的浓度-时间依赖关系,在24、48、72 h的IC50值分别为5054、2965、2459 μg/ml(P＜0.05);应用不同浓度芍药苷后HeLa细胞凋亡率逐渐增高,对照组及1000、2000μg/ml组凋亡率分别为0.94%、10.94%、13.95%(P＜0.05),细胞周期S期比例呈增多趋势;芍药苷作用48 h后透射电镜下可见HeLa细胞出现典型凋亡改变;芍药苷作用于HeLa细胞48 h后,与对照组相比Bcl-2表达减少、Bax及Caspase-3表达增多(P＜0.05).结论 芍药苷能够诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡,其作用机制可能与抗凋亡基因Bcl-2表达减弱及促凋亡基因Bax、Caspase-3表达增强有关.     

银杏叶提取物对LPS诱导HeLa细胞凋亡的影响

目的研究银杏叶提取物(Ginkgo biloba leaf extract,GbE)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人宫颈癌细胞HeLa细胞凋亡的影响。结论将HeLa细胞分成LPS组、GbE+LPS干预组和对照组,各组细胞加入相应药物干预8～72h。采用MTT法检测GbE对细胞的毒性作用;计算各组细胞不同时间段细胞数,测定各组细胞的增殖情况;通过细胞形态学检测(AO/EB染色)测定细胞凋亡发生情况。结果在72h内不同浓度GbE对HeLa细胞无明显细胞毒性作用,细胞存活率在90%～100%之间,差异无统计学意义(P>0.05);LPS组经LPS诱导8h后细胞在各时间段增殖均较其他两组活跃,细胞数明显高于其他两组(tGbE+LPS=6.423,P<0.001;t对照组=3.976,P<0.005);GbE+LPS组培养48h后细胞凋亡数明显高于LPS组和对照组。结论 GbE具有抑制LPS诱导的HeLa细胞增殖及促进细胞凋亡的作用。     

樟脑磺哑嗪对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨樟脑磺哑嗪对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法：人宫颈癌HeLa细胞分为对照组和不浓度樟脑哑嗪组,分别以浓度为0、0.5、1.0、5.0和10.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪处理,24 h后MTT法检测各组HeLa细胞存活率和增殖抑制率。人宫颈癌HeLa细胞分为0、0.5、1.0和5.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组,12 h后倒置显微镜下观察各组HeLa细胞形态表现,Hoechst 33258染色检测各组HeLa细胞凋亡形态表现,Western blotting法检测HeLa细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2相对表达水平。结果：MTT法检测,与对照组（0 μmol·L^-1）比较,0.5,1.0,5.0和10.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组HeLa细胞存活率降低（P<0.05或P<0.01）,增殖抑制率升高（P<0.05或P<0.01）;樟脑磺哑嗪对HeLa细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为2.6 μmol·L^-1。对照组（0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组）细胞生长状态良好,0.5、1.0和5.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组HeLa细胞的体积明显缩小,细胞间连接消失;Hoechst 33258染色,樟脑磺哑嗪处理的细胞出现明显的染色增加。Western blotting法检测,与对照组（0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组）比较,0.5、1.0和5.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组HeLa细胞中Bcl-2蛋白相对表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,Bax蛋白相对表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：樟脑磺哑嗪可有效抑制体外培养的宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导HeLa细胞凋亡。     

人截短型凋亡诱导因子对HeLa细胞的促凋亡作用

目的:观察人截短型凋亡诱导因子(AIF△1-400)对HeLa细胞的促凋亡作用.方法:在AIF△1-120基因克隆成功的基础上进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号,FAD结合结构域和NADH结合结构域(1-400位氨基酸)编码序列的AIF△1-400基因,将其克隆入pcDNA3和pIRES2-EGFP真核表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过荧光显微镜观察,MTT检测等方法检测该基因在转染细胞中的表达及其对肿瘤细胞的促凋亡活性.结果:经酶切鉴定与测序证实,带有AIF△1-400的真核表达载体构建成功.瞬时转染后出现细胞形态变化,随转染时间的延长转染细胞数减少,荧光变弱.经间接免疫荧光检测可观察到截短型AIF蛋白位于细胞质中,部分已位于细胞核内.MTT法检测发现AIF△1-400转染后对细胞生长有明显的抑制作用.结论:AIF△1-400仍然具有诱导HeLa细胞凋亡的作用.     

ERK2-siRNA质粒的构建及其诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验研究

目的:合成、克隆、筛选ERK2-siRNA干扰片段,构建含有ERK2-siRNA的骨架质粒。明确其抑制基因ERK2在HeLa细胞中表达及诱导HeLa细胞凋亡。方法:利用RNA干扰方法构建真核表达载体pGenesil1.1-ERK2-siRNA。体外培养人宫颈癌HeLa细胞,利用脂质体法将该质粒转染HeLa细胞。利用western blot法检测该质粒转染后ERK2基因的表达,筛选最佳干扰质粒。通过TUNEL法HeLa细胞凋亡染色及HeLa细胞Caspase-3表达的免疫组化染色检测其诱导HeLa细胞的凋亡。结果:成功构建及筛选出ERK2-siRNA质粒。该质粒在体外能够有效诱导HeLa细胞凋亡。结论:干扰ERK2基因的表达能够诱导HeLa细胞的凋亡,应用该方法可以为宫颈癌的治疗提供新思路。     

雷帕霉素在顺铂诱导HeLa细胞凋亡中的协同作用

目的评价雷帕霉素联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞的协同作用。方法HeLa细胞经雷帕霉素和（或）顺铂处理后,以MTT法检测细胞的增殖情况。以流式细胞仪检测细胞凋亡。Westernblot检测p-4E-BP1和p-S6K1的表达情况。结果雷帕霉素联合顺铂抑制HeLa细胞的增殖,且随时间延长抑制作用越显著,与单独用药组相比差异有显著性。雷帕霉素可增强顺铂诱导的HeLa细胞凋亡。经雷帕霉素作用后的HeLa细胞表达p-4E-BP1和p-S6K1较对照组下降,两者联用明显下降。结论雷帕霉素和顺铂联用在抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡上具有协同作用。这预示着雷帕霉素和顺铂联用可能是一种合理的靶向治疗宫颈癌的方法。