99Tcm直接法标记Angiostatin及其在荷瘤小鼠体内研究

目的:99Tcm直接法标记血管抑素(angiostatin,AS),观察其在荷瘤小鼠体内的生物分布并进行显像,以探讨其在监测肿瘤对抗血管生成治疗的应答中的价值. 方法:氯化亚锡还原法进行AS的99Tcm标记,纸层析法测标记率;用人脐静脉内皮细胞系(ECV304)观察其生物活性;为了明确99Tcm-AS与肿瘤的结合,是否存在受体特异性,我们进行了封闭实验. 在给药前2 h用未标记AS预处理荷乳腺癌EMT6瘤株的BALB/c小鼠,尾静脉注射99Tcm-AS,观察其体内分布并进行显像. 结果:氯化亚锡还原法标记AS可获得较高的标记率(>95%),其抑制内皮细胞生长的生物活性与AS相似. 在荷瘤小鼠体内分布结果显示:肿瘤的摄取率随着时间延长而增加,在注射99Tcm-AS后2～12 h,肿瘤可清晰显像,同时,用未标记AS预先封闭肿瘤可使肿瘤对99Tcm-AS摄取率下降. 结论:99Tcm-AS在荷瘤小鼠体内可浓聚于肿瘤,肿瘤对显像剂的摄取存在一定的特异性;99Tcm-AS有可能在肿瘤抗血管生成治疗疗效评价中发挥作用.     

99Tcm-RGD-4CK在健康家兔体内的示踪动力学研究

目的 探讨99Tcm-RGD-4CK在健康日本大耳兔体内的示踪动力学.方法 采用预锡化法99Tcm直接标记RGD-4CK.静脉注射99Tcm-RGD-4CK 37 MBq(0.5 ml),在注射后1.5～240 min时间内分10个时相点采血并称重,测定血样品放射性计数,结果经参考源衰减校正,最后换算为kBq/ml血液.血样放射性活度数据应用DAS软件处理,结合αvβ3受体在正常体内实际表达情况进行室模型判断,并得出相应的示踪动力学参数.结果 99Tcm-RGD-4CK的标记率为(96.86±1.24)%,比活度为(13.01±0.17)TBq/mmol.99Tcm-RGD-4CK在正常家兔体内符合二室模型示踪动力学过程(权重数为1/C).分布相半衰期(T1/2α)为(4.19±2.17)min,消除相半衰期(T1/2β)为(69.32±0.00)min,转运速率常数K10、K12与K21分别为(0.013±0.002)、(0.138±0.139)、(0.095±0.063)/min,清除率(CL)为(2.00±1.00)ml/min.结论 99Tcm-RGD-4CK制备方法简便,标记率高,无需分离纯化而直接应用;99Tcm-RGD-4CK在正常家兔体内的示踪动力学符合权重数为1/C的二室模型.     

99Tcm-TP1093的制备及其在健康动物体内的生物分布及动力学特点

目的 制备标记率符合显像要求的99Tcm-TP1093,探讨其在健康动物体内的生物分布及动力学特点.方法 化学合成G(D) AGG-Aba-ATAQSAYG-NH2(TP1093);氯化亚锡还原法99Tcm标记TP1093,纸层析测定标记率,计算比活度;体外稳定性实验、血清蛋白结合实验及脂/水分配实验鉴定99Tcm-TP1093的理化性质;研究标记多肽在健康家兔体内的示踪动力学和正常小鼠体内生物分布;健康家兔99Tcm-TP1093显像,观察体内放射性动态分布变化,利用感兴趣区(region of interest,ROI)技术分析重要组织器官的时间-放射曲线(time-activity curve,TAC).结果 99Tcm-TP1093的标记率为(97.23±0.87)％,比活度为(15.91±0.62) TBq/mmol.标记多肽室温放置4h,其放射化学纯度为(93.34±0.91)％.标记多肽与血清蛋白无明显结合,脂/水分配系数lgP=-(1.68±0.09).标记多肽在健康家兔体内的动力学过程符合权重为1/c的二室模型,t1/2α为(2.689 ±0.541) min,t1/2β为(69.156±20.342) min,总清除率(CL)为(5.029±4.381)mL/kg.小鼠体内分布和健康家兔显像示:血液放射性清除迅速,软组织放射性消退快;胃区呈放射性缺损,甲状腺区未见异常放射性浓聚,脑呈低放射性分布;体内放射性主要经泌尿系统排泄,少量通过肝胆系统分泌.结论 99Tcm-TP1093标记方法简便,标记率与比活度高,可制备成一步法冻干药盒,具有良好的稳定性、体内生物分布及动力学性质.     

125I-VIP与小鼠肝癌H22细胞受体结合特性研究

目的探讨放射性碘标记血管活性肠肽(VIP)与肝癌细胞的体内、外结合特性.方法氯胺-T法标记、Sephadex G-50柱层析分离纯化制备 125I-VIP.通过饱和结合实验与竞争结合实验,评价 125I-VIP与鼠H22肝癌细胞受体的体外介导结合特性;进行体内动态生物分布及非标记VIP竞争分布实验,观察 125I-VIP在荷H22小鼠体内尤其在移植瘤中的分布变化规律,评价其体内受体结合特性.结果 125I标记率为73.8%, 125I-VIP比活度18.2 TBq/mmol,放射化学纯度(RCP)98%. 125I-VIP与H22细胞受体的结合具有饱和性,Scatchard作图显示为双位点系统,高、低亲和力结合位点的解离常数(Kd)分别为1.74 nmol/L与28.63 nmol/L,最大结合容量(Bmax)分别为0.27 pmol/106细胞与5.75 pmol/106细胞,非标记VIP以剂量依赖方式抑制 125I-VIP与H22细胞结合.各时相肿瘤组织放射性均高于肌肉(P<0.05, P<0.001),20 min T/NT比值达最大为2.68,肺放射性高于血液与肝脏(P<0.05, P<0.01),体内放射性主要经肾脏排泄;10 μg和40 μg 非标记VIP对T/NT比值的抑制率分别为26.87%与35.82%.结论 125I-VIP在体内、外与鼠H22肝癌细胞的结合由受体介导.此结果为进一步应用放射性核素标记VIP靶向诊治肝细胞癌研究提供了理论依据.     

IgG三羰基锝[99mTc(CO)3(H20)3+]标记方法及其在动物体内的生物学分布

目的 探索利用fac[99mTC(CO)3(H20)3]+中间体标记IgG的方法,了解99mTc(CO)3(H20)3-IgG在体内外的稳定性,并研究其在小鼠体内的生物分布情况.方法 自行合成fac-(99mTc(CO)3(H20)3]+中间体,并采用聚酰胺薄膜层析法测定其放化产率,利用放化中间体fac-[99mTc(CO)3(H20)3]+直接进行IgG的放射性标记,用纸层析法测定标记率及放化纯度.并分别观察99mTc标记IgG在人血清白蛋白(HSA)及生理盐水(NS)中的稳定性.取9只小白鼠,分别经尾静脉注人99mTc 标记IgG(3.7x104 Bq/100μl),于注药后2,4和12h分别先进行SPECT显像,然后处死小鼠分离各脏器,称重后测定放射性计数,计算各脏器每克组织百分注射剂量(%ID/g),结果fac-[99mTc(CO)3(H2O)3]+中间体的放化产率为82.48%,室温放置4h保持稳定.99mTc(CO)3(H20)3-IgG的标记率为57.04%,放化纯度均大于90%,在HSA中温育24h放化纯度保持稳定,而在NS中温育24h放化纯度则降为20%.体内生物分布显示99mTc(CO)3(H20)3-IgG在体内主要分布于肝、脾、肾,可较长时间存留于血池中.结论 利用放化中间体fac-[99mTc(CO)3(H20)3]+直接进行IgG放射性标记,具有良好的体内、外稳定性,在小鼠组织中分布特点符合IgG体内的放射性分布规律,可满足进一步的单抗及多肽标记的实验要求.     

~（99）Tc~m-REG的制备及其在正常小鼠体内分布和药代动力学研究

目的研究99Tc^m-精氨酸-符氨酸-片氨酸（99Tc^m-REG）与肺癌细胞结合及其在正常小鼠体内分布和约代动力学。方法采用99Tc^m直接法标记REG,行99Tc^m-REG与非小细胞肺癌细胞A549和H1299的结合实验。正常小鼠尾静脉注射99Tc^m-REG后不同时间处死,取主要脏器或组织,测定其每克组织百分注射剂照牢（％ID／g）。另取尾静脉注射99Tc^m-REG后不同时间小鼠血液,测量放射性计数并计算药代动力学参数。尾静脉注射99Tc^m-REG后,测定不同时间荷H1299细胞肿瘤裸鼠肿瘤％ID／g及肿瘤／肌肉比值。结果 99Tc^m直接标记REG的标记率为（92．90±2．86）％。99Tc^m-REG与非小细胞肺癌细胞A549和H1299的最高结合率分别为（1．29±0．16）％和（2．324-0．31）％。体内分布提示99Tc^m-REG在小鼠血液中清除迅速,2h时放射性仪为注射5min时的20．26％,肝脏内放射性浓聚较多,且旱缓慢下降．肾脏、心、肺放射性摄取随时间逐渐下降,其余组织放射性警低水平。2h肿瘤％ID／g为2．02±0．67,肿瘤／肌肉比值为3．50±1．27。结论99Tc^m-REG具有亲肺癌细胞的特性,有可能成为一种亲肺癌肿瘤显像剂。     

~(125)I-血管活性肠肽在正常动物体内药动学研究

为探讨放射性碘标记血管活性肠肽（ＶＩＰ）在正常大鼠体内的药物动力学，经大鼠尾静脉注射１２５ＩＶＩＰ（３７ｋＢｑ）后０５～２４０分钟，连续采集血液测定其放射性（ｃｐｍ）。结果显示，１２５ＩＶＩＰ在大鼠体内的转运符合三室开放模型（Ｗｉ＝１）的动力学方程；１２５ＩＶＩＰ在血液中平均分布半衰期为１３６分钟，体内消除半衰期Ｔ１／２β为６７３分钟；Ｋ１２（３５８９ｍｉｎ－１）明显高于Ｋ２１（００４５ｍｉｎ－１），而Ｋ２１∶Ｋ１２（００１２７）明显低于Ｋ３１∶Ｋ１３（０２１５）。提示１２５ＩＶＩＰ在含高亲和力、高密度ＶＩＰ受体组织中摄取迅速，且消除缓慢。     

~(99)Tc~m标记VEGFR-3高亲和融合多肽在荷人卵巢癌裸鼠体内的分布和显像研究

目的 研究~(99)Tc~m标记VEGFR-3高亲和融合肽(phage-SHSWHWLPNLRHYAS)在荷人卵巢癌裸鼠体内分布和放射免疫定位显像.方法 用NHS-MAG3为双功能鳌合剂,固相法合成多肽.~(99)Tc~m预亚锡直接标记法进行标记,纸层析法测定标记率.经尾静脉注射于荷瘤鼠体内,取不同时相进行SPECT显像,测定标记物在体内的分布情况并进行分析.结果 融合多肽的~(99)Tc~m标记率为95.27%,放射化学纯度为96%,放射性浓度24.6 MBq/ml.经鼠尾静脉注射后1 h,植瘤部位开始出现放射性浓集,肾脏、肝脏及膀胱组织也可见显像;注射后3 h肿瘤显像最清晰,每克组织注射百分剂量率(%ID/g)为(30.20±6.89).其余大部分脏器的T/NT值均达最高,最高为肌肉(13.13);注射后4 h肿瘤部位显像逐渐消退.对照组裸鼠的肿瘤部位始终未见显像.结论 筛选获得的VEGFR-3高亲和融合肽能够靶向荷瘤鼠体内肿瘤组织,实现肿瘤的靶向受体显像.     

基于肿瘤基因组图谱数据库分析血管活性肠肽受体1基因在肺腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 基于肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析血管活性肠肽受体1(VIPR1)基因在肺腺癌组织中的表达及临床意义.方法 下载TCGA数据库中肺腺癌组织和正常肺组织的转录组数据及临床数据,分析VIPR1在肺腺癌组织和正常肺组织中的表达差异以及高、低表达水平对患者预后、临床病理特征的影响.采用基因集富集分析(GSEA)软件...     

~(99)Tc~m-MAG_3-K237的制备及其在健康动物体内的药代动力学和分布研究

目的探讨99Tcm标记血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2,KDR)小分子拮抗肽K237的方法,研究标记物在健康动物体内的药代动力学特性及体内分布特点。方法化学方法合成制备MAG3-K237,并用99Tcm标记;鉴定标记物的理化性质;测定标记物经新西兰大白兔静脉注射后不同时相血液放射性浓度,得出最佳房室模型与药代动力学参数;分别测定经尾静脉注射7.4MBq标记物后的昆明小鼠各器官质量和放射性计数,经参考源校正后计算各脏器每克组织百分注射剂量率(%ID/g);经耳缘静脉注射37MBq标记物,在SPECT下观察其在兔体内的动态分布。结果99Tcm-MAG3-K237的放化纯度为(97.98±0.76)%,比活度为(3.54±0.03)TBq/mmol;室温(25℃)下保存8h后放化纯度为(96.15±0.37)%;半胱氨酸置换率为0.2%～0.37%;不与血清蛋白结合;兔体内动力学过程符合权重为1/c2的三室模型,快分布相半衰期(t1/2α)、慢分布相半衰期(t1/2β)及消除相半衰期(t1/2γ)分别为(4.00±3....     

肠易激综合患者结肠黏膜VIP、CGRP和肥大细胞变化及相关性研究

目的 探讨肠易激综合征(IBS)患者结肠黏膜血管活性肠肽(VIP)、降钙素基因相关肽(CGRP)和肥大细胞(MC)的变化,以及它们在IBS中的可能作用和临床意义.方法 参照罗马Ⅲ标准,选择腹泻型IBS(D-IBS)、便秘型IBS(C-IBS)和正常对照组各20例,每例各取回盲部、乙状结肠黏膜4块,应用免疫组织化学染色法分别检测VIP和CGRP;MC检测采用甲苯胺蓝染色法.结果 IBS患者结肠黏膜VIP、CGRP免疫反应阳性神经纤维及MC较正常对照组明显增多、增粗、阳性增强(P<0.01);而C-IBS患者回盲部CGRP、MC与乙状结肠部比较差异无显著性(P>0.05).结论 VIP、MC可能参与IBS的病理生理过程.     

肠易激综合征肠黏膜SP、VIP、CGRP变化的研究

目的：探讨肠易激综合征（IBS）患者结肠黏膜P物质（SP）、血管活性肠肽（VIP）和降低素基因相关肽（CGRP）的变化，以及它们在IBS中的可能作用和临床意义。方法：黏膜标本取自17例正常人、16例腹泻型IBS（D－IBS）患者和12例便秘型IBS（C－IBS）患者的回盲部、乙状结肠，应用免疫组织化学染色法和放射免疫测定法分别检测SP、VIP、CGRP。结果：IBS患者结肠黏膜SP、VIP含量均较正常对照组显著升高（P＜0．01）；IBS患者结肠黏膜SP、VIP免疫反应阳性神经纤维较正常对照组增多、增粗、阳性增强（P＜0．01）；IBS患者与正常对照组结肠黏膜的CGRP含量和CGPR免疫反应阳性神经纤维的强度、面积、密度差异无统计学意义（P＞0．050。结论：SP、VIP可能参与了IBS的病理生理过程。     

血管活性肠态受体2(VIPR2)基因多态性与精神分裂症临床症状的关联研究

目的：探讨血管活性肠态受体2(VIPR2)基因rs3812311多态性位点与精神分裂症临床症状的遗传关联。方法：233例中国汉族精神分裂症患者在入院1周内采用阳性和阴性症状量表(PANSS)评估临床症状,利用连接酶检测-聚合酶链反应(LDR?鄄PCR)方法对VIPR2基因多态性位点rs3812311进行基因分型,分析PANSS因子分与VIPR2基因rs3812311多态性位点的关联。结果：在PANSS量表的5因子分中,携带VIPR2基因rs3812311多态性位点CC基因型患者和携带(CT+TT)基因型患者的阳性因子分［(28.91±5.77)分vs.(26.44±6.32)分］、阴性因子分［(22.35±3.98)分vs.(23.16±4.06)分］、兴奋因子分［(12.13±2.90)分vs.(12.12±2.78)分］和抑郁因子分［(5.04±1.69)分vs.(4.88±1.83)分］并无显著差异(P＞0.05),但携带CC基因型患者认知损害因子分显著高于携带(CT+TT)基因型患者［(13.96±2.85)分vs.(12.44±3.38)分,P=0.040］。此外,分层分析结果显示各因子分在男性和女性患者间并无显著差异(P＞0.05)。结论：在中国汉族人群中,VIPR2基因多态位点rs3812311可能与精神分裂症的认知功能关联。     

血管活性肠肽及其受体在嗜酸性粒细胞性胃肠炎儿童胃黏膜中的表达及其临床意义

目的 研究血管活性肠肽（VIP）及其受体在嗜酸性粒细胞性胃肠炎（EG）儿童胃黏膜中的表达，并探讨其临床意义。方法 选取2008年11月—2018年12月天津市儿童医院消化科收治的50例EG儿童作为研究对象（EG组）；同时选取胃镜下病理活检嗜酸性粒细胞（EOS）<10个/高倍视野（HPF），总免疫球蛋白E（IgE）正常的同年龄段急性肠胃炎儿童50例作为对照组。比较两组患儿外周血EOS计数、总IgE水平，胃镜检查其黏膜变化。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PRC）检测两组患儿VIP及VPAC1、VPAC2 mRNA的相对表达水平并进行比较。利用Logistic回归模型分析EG的相关因素。结果 EG组外周血EOS、EOS%、IgE水平高于对照组（P?<0.05）；EG组胃镜检查黏膜充血水肿、糜烂、溃疡、结节样隆起或增生例数多于对照组（P?<0.05）。EG组儿VIP及VPAC1、VPAC2 mRNA的表达水平低于对照组（P?<0.05）。Logistic回归分析结果表明，VIP及VPAC1、VPAC2 mRNA是EG的独立影响因素（P?<0.05）。结论 VIP、VPAC1及VPAC2是EG发生的独立影响因素，可能与儿童胃黏膜EG的发生、发展相关，有助于早期诊断。     

叶酸受体肿瘤显像剂99mTc-肼基烟酰胺基酰肼基-叶酸的合成与动物显像

目的研究叶酸受体肿瘤显像剂99mTc-肼基烟酰胺基酰肼基-叶酸(99mTc-HYNIC-叶酸)的合成、生物分布及其动物显像。方法以叶酸为原料经过多步反应合成叶酸衍生物HYNIC-叶酸,以该衍生物为配体,并以三(羟甲基)甲基甘氨酸和三苯甲基膦三磺酸钠为共配体进行99mTc标记,对其放化纯度、稳定性进行分析,对正常小鼠及荷瘤小鼠的体内生物分布和荷瘤小鼠的γ相机显像进行研究。结果配体HYNIC-叶酸的结构经核磁共振氢谱和质谱进行确认,经99mTc标记后,放化纯度为96%,体外稳定性好。在荷瘤小鼠中的生物分布和显像结果表明,99mTc-HYNIC-叶酸在肿瘤中有较高的浓集,单位质量摄取率αm为5·620±0·753。除在肾中摄取较高(单位质量摄取率为41·959±6·759)外,其他非靶组织中摄取均较低。结论99mTc-HYNIC-叶酸有望成为性能良好的叶酸受体肿瘤显像剂。     

血管活性肠肽对人脐血CD34+细胞增殖分化的影响

目的 探索血管活性肠肽(vasoactive intestinal polypeptide,VIP)对造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)增殖分化的影响及其可能机制.方法 采用免疫磁珠分选技术纯化人脐血CD34 细胞;VIP孵育人CD34 细胞后,通过体外集落形成、扩增培养了解细胞增殖;ELISA测定细胞内外TNF-α、TGF-β水平;流式细胞术检测细胞表面CD13、CD14、CD71、CD41、CD19、CD4/CD8、CD33、CD34等抗原;生物分子相互作用系统检测人CD34 细胞VIP受体;RT-PCR分析其受体亚型.结果 在1×10-7～1×10-12mol/L浓度范围内,VIP抑制人CD34 细胞集落形成及扩增倍数,其细胞集落形成抑制与VIP浓度呈正相关(r=0.925,P＜0.01).VIP(1×10-8mol/L)作用于人CD34 细胞14 d后,粒系(CD13 蓝色)及单核系(CD14 )细胞百分比均明显下降(P＜0.05).VIP增加人CD34 细胞的CD34抗原表达(P＜0.05).VIP作用后CD34 细胞内、外TNF-α及TGF-β1浓度显著增加(P＜0.05);人脐血CD34 细胞表达VIPⅠ型受体.结论 VIP通过人脐血CD34 细胞上VIPⅠ型受体介导,提高造血抑制因子TNF-α、TGF-β水平,抑制人CD34 细胞的增殖、维持其干细胞特性,阻止其向粒、单系细胞分化.     

血管活性肠肽对便秘大鼠排便及结肠组织中#br# VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路的影响

目的：观察血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)对便秘大鼠肠道水液代谢、环磷酸腺苷-蛋白激酶A信号通路(cyclic AMP protein kinase A signaling pathway,cAMP-PKA)和水通道蛋白3(water channel protein 3,AQP3)的影响,探讨VIP治疗便秘的作用及机制。方法：45只健康成年Sprague-Dawley大鼠随机分为空白对照组、模型组、模型+ VIP组。给药4周后,墨汁灌胃法检测大鼠首粒黑便排出时间;根据大鼠粪便干湿重计算粪便含水率;HE染色观察各组大鼠结肠组织形态学变化;Western 印迹检测各组大鼠结肠组织中 VIP和AQP3蛋白表达水平;定量即时聚合酶链锁反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qPCR)检测各组大鼠结肠组织中cAMP,PKA和AQP3 mRNA的表达水平。结果：与空白对照组比较,模型组大鼠首粒黑便出现时间延长,粪便含水率明显减少(均P<0.01);结肠黏膜上皮部分破坏,杯状细胞体积减小,数量明显减少;结肠组织中VIP和AQP3蛋白含量明显减少,AQP3,cAMP和PKA mRNA相对表达水平均有所降低(均P<0.05)。与模型组比较,模型+VIP组大鼠首粒黑便出现时间缩短,粪便含水率明显增加(均P<0.05);结肠黏膜上皮完整性明显改善,杯状细胞体积增大,数量增多;结肠组织中VIP和 AQP3蛋白含量增多,CAMP,PKA和AQP3 mRNA相对表达水平升高(均P<0.05)。结论：VIP静脉注射能够调节肠道水液代谢,改善大鼠便秘症状,其机制可能与调节VIP-cAMP-PKA-AQP3信号通路有关。     

重型颅脑损伤后大鼠胃肠动力障碍与血浆MTL、VIP变化的实验研究

目的 研究重型颅脑损伤大鼠胃肠动力和血浆胃动素(MTL)和血管活性肠肽(VIP)的改变,探讨重型颅脑损伤后胃肠动力障碍发生的相关因素.方法 雄性Wistar大鼠64只,随机分为假手术组、重型颅脑损伤组,每组分为伤后6、24、48、72h组,每组8只.每组测定胃排空、肠道传输速率及MTL和VIP含量.结果 大鼠重型颅脑损伤后6、24、48、72h胃排空和肠道传输速率显著减弱,血浆MTL含量显著升高,血浆VIP含量在伤后6h变化差异无统计学意义,24、48h显著下降,至伤后72h逐渐恢复.结论 大鼠重型颅脑损伤后在伤后6h已出现胃肠动力障碍,可持续72h以上,与血浆中MLT和VIP变化相关.