VEGF单克隆抗体对胰腺缺血再灌注损伤中细胞凋亡的影响

目的:从胰腺腺泡细胞凋亡的角度探讨血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体在胰腺缺血再灌注损伤中保护作用.方法:采用钳闭大鼠腹腔干、肠系膜上动脉制备胰腺缺血再灌注损伤模型,并应用细胞凋亡原位标记法(TUNEL)、免疫组化技术等检测VEGF单克隆抗体干预后对胰腺细胞凋亡及Bax,Bcl-2蛋白表达的影响.结果:干预组15,30,60 min胰腺细胞凋亡指数显著低于缺血再灌注组(P<0.01).正常胰腺组织未见凋亡调控基因Bcl-2的表达,VEGF单克隆抗体干预后15,30,60 min胰腺细胞Bcl-2染色阳性率明显高于缺血冉灌注组(P<0.01);正常胰腺组织见较弱的凋亡调控基因Bax的表达,而VEGF单克隆抗体干预后15,30,60 min胰腺细胞Bax染色阳性率明显低于缺血再灌注组(P<0.01).结论:VEGF单克隆抗体能够通过抑制胰腺腺泡细胞的过度凋亡减轻胰腺炎的严重程度,该作用可能是通过促进抗凋亡Bcl-2基因表达,抑制促进凋亡基因Bax表达来实现的.     

VEGF在胰腺缺血再灌注损伤中的作用

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）在缺血再灌注损伤（IRI）胰腺组织中的表达及其意义。方法：将雄性SD大鼠32只随机分为4组（n=8）。A组为对照组;B组、C组和D组分别通过钳闭大鼠腹腔干和肠系膜上动脉15、30和60min造成胰腺缺血,然后再灌注6h建立缺血再灌注损伤模型。对各组胰腺组织进行湿干质量比（W/D）检测、病理损伤评估及VEGF免疫组化染色。结果：经缺血再灌注后,胰腺组织的VEGF蛋白表达增强,VEGF蛋白表达在胰腺的胰岛细胞、间质血管内皮细胞、腺泡及导管上皮细胞之间差异有显著性（P＆lt;0.01）。胰腺病理评分和W/D比值与胰岛细胞的VEGF免疫组化染色评分呈正相关（P＆lt;0.01）,与间质血管内皮细胞的VEGF免疫组化染色评分呈高度正相关（P＆lt;0.01）。结论：胰腺IRI引起的胰腺水肿可能与VEGF表达增强有关。     

灯盏花素对大鼠胰腺缺血再灌注损伤的保护作用的实验研究

目的：探讨灯盏花素对大鼠胰腺缺血再灌注（ischemia—reperfusion,I／R）损伤有无保护作用及其可能机制。方法：制作大鼠胰腺I／R模型,45只SD大鼠随机分为假手术组（A组）、I／R组（B组）、灯盏花素组（C组）,各组15只。采用ELISA和免疫组化方法分别检测各组大鼠胰腺缺血30min再灌注0、6、12h时血清中肿瘤坏死因子α（tumornecrosisfactorα,TNF-α）、白细胞介素lB（interleukim1β,IL-1β）的含量和胰腺组织中Survivin蛋白表达的变化;同时观察胰腺组织病理学变化。结果：B组胰腺组织病理学改变较其他组明显;在再灌注0、6、12h时B、c组血清中TNF-α、IL-1β含量均较A组显著升高（P〈0．05）,但c组增高水平明显低于B组（P〈0．05）;C组在再灌注6、12h时Survivin蛋白表达明显高于A、B组（P〈0．05）,A、B组比较差异无显著性（P〉0．05）。结论：灯盏花素能降低大鼠胰腺I／R损伤时血清TNF-α、IL-1β水平和上调凋亡抑制基因Survivin蛋白表达,对大鼠胰腺L／R损伤有明显保护作用。     

人参总皂甙对心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用

利用体外培养的心肌细胞缺血再灌注损伤的模型。检测其中的细胞损伤及细胞凋亡。并加入不同浓度的人参总皂甙干预。以探讨缺血再灌注损伤与细胞凋亡的关系及不同浓度的人参总皂甙对其保护作用。结果：（1）人参总皂甙对正常培养的心肌细胞无明显影响;（2）单纯缺血损伤中无明显心肌细胞凋亡,而缺血再灌注损伤中有细胞浓度范围（0-160ng/L)内与其浓度呈正相关。     

ICAM-1在大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨ICAM-1在大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤中的作用。方法 将大鼠随机分为假手术组（对照组）和全胰十二指肠移植组。于再灌注后1h、3h、6h取血测定血清淀粉酶水平，并切取胰腺标本进行组织病理学观察及ICAM-1免疫组化染色。结果 （1）移植组胰腺组织损伤随再灌注时间的延长而加重，血淀粉酶升高，与中性粒细胞浸润直接相关；而对照组胰腺组织损伤不明显．血淀粉酶不升高。（2）移植组各时段ICAM-1均表达，且随再灌注时间的延长表达逐渐增加，对照组ICAM-1不表达。结论 中性粒细胞的活化以及释放出各种蛋白酶和活性因子．是导致胰腺移植缺血再灌注损伤的直接原因。ICAM-1参与胰腺移植缺血再灌注损伤的病理过程。     

黄连素对缺血再灌注心肌细胞损伤的保护作用

目的　研究黄连素对新生大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法　取体外培养的新生大鼠心肌细胞于缺氧 2 4h复氧 1h造成缺血再灌注 ( I/ R)模型 ,观察细胞损伤情况 ;并将黄连素以 1.5× 10 - 6 m ol/ L、1.5× 10 - 5m ol/ L、1.5× 10 - 4 mol/ L 三种浓度分别加入培养基中 ,预处理 2 4h后 ,再置于上述缺氧复氧环境中培养 ,检测以上不同条件下细胞上清液中的乳酸脱氢酶 ( L DH)、丙二醛 ( MDA)、超氧化物歧化酶 ( SOD)含量 ,并检测各组细胞的凋亡率。结果　与正常对照组相比 ,缺血及再灌组细胞上清液中 L DH、MDA含量明显升高 ( P<0 .0 1) ,SOD活力则显著降低 ( P<0 .0 1) ,缺血组和再灌组凋亡率均升高明显 ( P<0 .0 1)。而用黄连素预处理后缺血及再灌组的 L DH、MDA显著低于用药前 ( P<0 .0 1) ,SOD则高于单纯缺血和再灌组 ( P<0 .0 1) ,上述作用在本实验黄连素浓度为 1.5× 10 - 6 m ol/ L～ 1.5× 10 - 4 mol/ L 范围内 ,随浓度升高而更加明显。特别是用黄连素 1.5× 10 - 5mol/ L 浓度预处理后 ,缺血组和再灌组的细胞凋亡率分别是 14.4%和 2 0 % ,分别与用药前 ( 17.4%和 41% )比较有显著性差异 ( P<0 .0 1)。结论　黄连素对缺血再灌心肌细胞有保护作用 ,其作用与浓度有一定依赖关系     

PUMA在大鼠胰腺移植缺血-再灌注损伤中的意义

目的：探讨PUMA在移植胰腺缺血再灌注损伤（I／RI）中的早期促凋亡作用。方法：对封闭群大鼠建立大鼠腔静脉内分泌引流、肠道外分泌引流的动物模型．再灌注后第0、1、2、3、4、6、9、12h等时点,每时点处死5只大鼠,切取移植胰腺,石蜡包埋切片,原位DNA缺口末端标记（TUNEL）法测定胰腺组织细胞凋亡．Western、blot方法测定移植胰腺组织PUMA,bcl-2、bax、caspase-3蛋白表达。结果：再灌注术后第0、1、2、3、4、6、9、12h,胰腺细胞凋亡数分别为（29．42±4．93）、（47．65±6．43）、（74．80±9．73）、（106．35±16．80）、（148．71±19．50）、（123．96±15．54）、（97．32±10．60）和（57．42±9．56）个／高倍视野。各时点均显著高于正常胰腺（23．48±4．26）。第4小时细胞凋亡数明显增高,12h降低到最低值,不同组细胞凋亡数的差异有统计学意义（P〈0．01）;PUMA以及其下游的bax和caspase-8蛋白表达在第4小时达到最高峰,12h降低到最高值,bcl-2在第4小时达到最低值,蛋白表达差异均有统计学意义（P〈0．05）,以后逐渐升高,12h降低到最低值,PUMA表达与各时点的细胞凋亡数有明显的正相关（r=1．00,P〈0．05）。结论：I／RI后细胞早期凋亡与PUMA活化有关,PUMA是通过调节下游bax、caspase．8、bcl-2基因发挥凋亡促进作用。     

褪黑素对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的利用大鼠肝脏热缺血再灌注(I/R)损伤模型,研究褪黑素(MT)对再灌注损伤肝脏的保护作用。方法用无损伤血管夹阻断部分肝脏血流,建立大鼠肝热缺血再灌注损伤模型;用缺口末端标记法(TUNEL法)检测肝细胞凋亡指数(AI);心脏采血,测定血浆ALT和AST的变化。结果模型组肝细胞AI升高,血浆ALT和AST升高(P<0.05),用褪黑素干预组肝细胞AI和血浆ALT和AST较模型组下降(P<0.05)。结论褪黑素可以抑制缺血再灌注损伤后肝细胞的凋亡,减轻肝脏的损伤。     

胰腺缺血再灌注损伤大鼠胰腺腺泡细胞超微结构的观察

目的　探讨胰腺缺血再灌注 (ischemia -reperfusion ,IR)损伤时胰腺腺泡细胞超微结构的改变及可能机制。方法　 2 4只大鼠随机分为 3组 :假手术组、IR 1h组、IR 6h组。测定血淀粉酶、脂肪酶 ,了解胰腺外分泌功能 ;光镜、电镜观察胰腺组织结构改变。结果　各手术组淀粉酶和脂肪酶含量均较假手术组明显增加 ,6h时增加更显著 (P <0 .0 1)。胰腺组织光镜下IR 1h组呈现急性水肿性胰腺炎表现 ,IR 6h组损伤加重 ,出现出血、坏死 ;电镜下IR 1h组内质网、线粒体、高尔基复合体肿胀 ,IR 6h组细胞器损伤进一步加重 ,可见自噬体和自噬空泡显著增多。结论　胰腺IR 1h时表现为急性水肿性胰腺炎 ,再灌注 6h发展为出血坏死性胰腺炎。胰腺IR 1h电镜下主要表现为细胞器肿胀 ,再灌注 6h特征性改变为自噬小体显著增多。     

T淋巴细胞在缺血再灌注损伤中的双面作用

缺血再灌注损伤(IRI)在许多不同的器官系统,包括心、肝、脑、肺、肾和肠中均可发生,是一种常见的和重要的临床病理过程。IRI是一个非常复杂的级联事件,包括细胞间质、循环细胞、血管内皮细胞和许多生化物质之间的相互作用。众所周知,先天免疫系统,如补体、细胞因子、趋化因子、中性粒细胞和巨噬细胞均参与了IRI。而最近的数据表明淋巴细胞,特别是T细胞在IRI中也发挥了重要作用,T淋巴细胞不仅参与了IRI后的损伤反应,还可以取决于细胞类型和损伤的阶段发挥保护作用,此外,淋巴细胞还参与了IRI的愈合过程。这些新的研究结果使淋巴细胞定向治疗IRI,以改善其短期和长期疗效成为可能。     

纳洛酮对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及Fas?FasL表达的影响

目的:观察纳洛酮(naloxone,Nal)对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡及Fas、FasL蛋白表达的影响并探讨其机制。方法:SD大鼠24只,随机分成假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)和纳洛酮处理组(Nal组)。原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测Fas、FasL蛋白表达;光镜下观察心肌组织病理学的改变。结果:与Sham组相比,IR组可见大量心肌细胞凋亡,Fas、FasL蛋白表达显著增加(P<0.01)。与IR组相比,Nal组心肌细胞凋亡显著减少,Fas、FasL蛋白表达明显降低(P<0.01)。IR组见心肌组织呈大小不等的灶性坏死,Nal组心肌坏死不明显。结论:心肌缺血再灌注时Fas、FasL表达介导心肌细胞凋亡,纳洛酮通过抑制Fas、FasL蛋白的表达而减少细胞凋亡从而起到保护心肌的作用。     

Fas/FasL系统在邻苯二甲酸二丁酯睾丸毒性机制中的作用

目的 探讨细胞凋亡Fas／FasL系统在邻苯二甲酸二丁酯（DBP）的雄性生殖毒性机制中的作用。方法 在大鼠多代繁殖实验的基础上,运用免疫组织化学染色的方法,通过对睾丸组织损伤的观察和细胞凋亡相关蛋白（Fas／FasL）的检测和分析,探讨不同剂量DBP对成年F;代大鼠（PND70天）睾丸损害的情况及可能的作用机制。结果 与对照组相比较,随着DBP染毒剂量的增高,PND70天F1代雄性大鼠睾丸曲细精管生精上皮退化变性,生精细胞脱落至曲细精管管腔面,甚至有部分曲细精管内的生精细胞耗竭;免疫组织化学染色结果表明,与对照组相比,中、高剂量组（每天250和500mg／kg）大鼠睾丸组织Fas／FasL染色范围扩大,着色细胞数量增多,且存在剂量-反应关系。结论 DBP对大鼠睾丸生精细胞损伤可能是由于DBP启动了睾丸支持细胞Fas／FasL系统,阻抑生精过程造成的,Fas／FasL系统在DBP的雄性生殖毒性中起一定作用。     

细胞凋亡和Fas/FasL系统在兔肺缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨细胞凋亡在兔肺缺血再灌注损伤中的作用及其基因调控机制.方法:健康日本大耳白兔48只,随机分为对照组与肺缺血再灌注损伤1 h、3 h和5 h组.复制肺缺血再灌注损伤模型.采用TUNEL法观测肺组织细胞凋亡指数,以免疫组化及原位杂交技术检测肺组织细胞Fas/FasL系统蛋白和基因表达的变化.结果:兔肺缺血再灌注损伤后,肺组织细胞凋亡明显高于对照组(P均＜0.01),尤其是肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞;Fas及FasL在肺缺血再灌注损伤后表达明显上调(P均＜0.01).肺组织细胞凋亡指数分别与Fas、FasL蛋白和Fas及FasL mRNA之间均呈显著正相关(r分别为0.659,0.747,0.731,0.759;p均＜0.01).结论:肺组织细胞凋亡和Fas/FasL系统活化可能参与了肺缺血再灌注损伤的发生.     

雷公藤多甙对非肥胖糖尿病小鼠胰腺和脾脏Fas及其配体表达的影响

目的 观察雷公藤多甙(TWP)对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠1型糖尿病的早期干预作用及探讨可能的机制.方法 用环磷酰胺加速发病的NOD小鼠1型糖尿病动物模型,TWP组(30只)小鼠于实验第0～3天和第13～16天每日2次、第4～12天和第17～26天每日1次腹腔注射TWP,每次5 mg/kg;对照组(33只)腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液.监测血糖,记录糖尿病发病率,采用末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测胰岛细胞凋亡,免疫组织化学法检测B细胞胰岛素含量,半定量逆转录聚合酶链反应检测胰腺和脾脏Fas及其配体(FasL)mRNA的表达.结果 TWP组实验结束时的糖尿病发病率为43.3%,显著低于对照组的69.7%(P<0.05).TWP组的凋亡指数为(5.06±0.85)%,显著低于对照组的(9.04±1.02)%(P<0.01).TWP组胰岛素表达阳性细胞所占百分比为(57.25±11.69)%,略高于对照组的(46.50±11.25)%(P>0.05).TWP组的胰腺组织Fas mRNA半定量值为0.30±0.11,略低于对照组的0.35±0.05(P>0.05);TWP组的胰腺组织FasL mRNA半定量值为0.80±0.11,显著低于对照组的1.33±0.17(P<0.05).TWP组的脾脏组织Fas和FasL mRNA半定量值分别为0.40±0.,9和1.29±0.17,均显著高于对照组的0.27±0.06和1.06±0.10(P值均<0.05).结论 TWP可预防NOD鼠糖尿病的发生,其机制可能与增加脾脏T淋巴细胞Fas和FasL表达及凋亡,降低胰腺Fas和FasL表达,减少胰岛B细胞凋亡有关.     

清热化瘀方提取物预处理对大鼠脑缺血耐受作用及Fas/FasL表达的影响

目的：探讨脑缺血耐受机制及清热化瘀方作为预处理药物对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：采用线栓法制备大鼠大脑中动脉脑缺血预处理模型和再灌注模型。取健康雄性SD大鼠40只，随机分为假手术组、单纯脑缺血再灌注组、脑缺血预处理组、药物预处理组。再灌注后以免疫组化法测定Fas／FasL蛋白表达。TUNEL法检测细胞凋亡。结果：药物预处理能够抑制梗死后Fas／FasL表达（P〈0．05），其作用程度与缺血预处理接近；药物预处理能抑制缺血半暗区神经元凋亡（P〈0．05）。其作用程度与缺血预处理相当。结论：脑缺血预处理可能通过抑制促凋亡蛋白Fas／FasL的合成发挥其神经保护作用，Fas／FasL是脑缺血耐受机制之一；清热化瘀方通过下调脑缺血后Fas／FasL的表达而减轻再缺血后神经元凋亡。     

p38／Fas／FasL对心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的调控作用

目的探讨p38／Fas／FasL对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的调控作用。方法SD大鼠20只随机分成2组（假手术组、模型组）,每组10只。结扎冠状动脉左前降支,30min后剪断结扎线制作心肌缺血再灌注模型。对心肌组织进行苏木精一伊红（H—E）染色,观察心肌组织病理变化;免疫印迹（WesternBlotting）检测Fas、Fas配体（FasL）、p38促分裂素原活化蛋白激酶（p38MAPK）以及磷酸化p38MAPK（P—p38MAPK）在缺血再灌注心肌组织中的表达;TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡模型。结果H—E染色结果显示,模型组心肌纤维变性;Western Blotting结果显示模型组大鼠心肌组织中Fas、FasL、p38MAPK及P—p38MAPK蛋白的表达明显增高;TUNEL结果显示模型组的心肌组织中细胞凋亡明显增多。结论心肌缺血再灌注时Fas、FasL、p38MAPK和P—p3SMAPK表达明显增多,且与细胞凋亡率呈正相关,提示心肌缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡可能是通过激活Fas／FasL／p38MAPK途径实现的。     

雷帕霉素对缺血再灌注大鼠肾小管上皮细胞凋亡的抑制作用

目的 探讨雷帕霉素(RPM)对肾缺血再灌注不同时间Fas、Bcl-2蛋白表达的影响.方法 将54只Wistar大鼠随机分为3组:假手术组、手术组和药物组.采用HE染色分析肾组织病理损伤程度,电镜观察再灌注24 h的肾组织超微结构,免疫组化SABC法检测Bcl-2、Fas蛋白表达的变化.结果 Fas蛋白在假手术组呈阴性表...     

Fas及FasL基因在大鼠实验肝癌形成中的动态表达

目的动态观察Fas／FasL在大鼠实验肝癌发生过程中的表达及其意义。方法选用4周龄雄性SD大鼠,腹腔内注射黄曲霉毒素B1（AFB1）共32周。对照组大鼠不给AFB1。定期给大鼠肝活检,直至肝癌发生。用RT—PCR方法,检测24只用黄曲霉毒素B．诱发的大鼠肝癌组织、6只未诱发出肝癌大鼠及11只对照大鼠不同时期活检肝组织中的FasmRNA及FasLmRNA表达水平。结果肝癌组织及不同时期肝活检肝组织均有FasmRNA及FasLmRNA的表达。实验组出癌大鼠58周肝癌组织中的FasmRNA表达水平显著下调,而FasLmRNA表达水平显著上调,FasL／FasmRNA比值〉1;而发生肝癌前各时期、无癌大鼠和对照大鼠各时期活检肝组织中这两种基因的mRNA水平变化不显著,FasL／FasmRNA比值〈1。结论Fas的低表达、FasL高表达在大鼠肝癌的形成中起着重要的作用;FasL／FasmRNA比值可作为肝细胞癌的早期诊断参考指标。     

重度子痫前期胎盘滋养细胞中Fas/FasL及血管内皮生长因子的表达

目的:检测重度子痫前期患者胎盘滋养细胞中单克隆抗体Fas、Fas的配体(FasL)及胎盘血管内皮生长因子(VEGF)的表达.方法:采用免疫组织化学,过氧化物酶标记的链霉素抗生物素-过氧化酶连接法(SP法)检测24例正常晚期妊娠妇女(对照组)及24例重度子痫前期患者(重度子痫前期组)胎盘组织中Fas、FasL及VEGF表达强度.结果:Fas、FasL及VEGF主要表达于胎盘绒毛合体滋养细胞及细胞滋养细胞的胞质及胞膜内.与对照组比较,FasL、VEGF在重度子痫前期组中的表达显著降低(t=71.84,t=130.23,P＜0.01);而Fas在重度子痫前期组中的表达水平显著增加(t=118.8,P＜0.01).Fas、FasL及VEGF在重度子痫前期组胎盘的表达与新生儿出生体质量、胎盘质量均有明显相关性.结论:Fas、FasL及VEGF在重度子痫前期组胎盘滋养细胞表达失衡,使母-胎免疫耐受机制遭到破坏,引发胎盘绒毛发育不全、功能下降等一系列免疫病理改变,可能与重度子痫前期的病因及病理过程有关.     

茶多酚对ACC-M细胞Fas/FasL、PCNA表达的影响

目的 体外观察不同浓度茶多酚对腺样囊性癌肺高转移细胞株(ACC-M)生长、Fas/FasL和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.方法 (1)不同浓度茶多酚(0.05、0.1、0.15、0.2 g/L)组处理对数期生长ACC-M细胞;(2)用MTT法观察不同浓度茶多酚对ACC-M细胞生长的影响;(3)用免疫细胞化学法检测不同浓度茶多酚对ACC-M细胞中Fas/FasL和PCNA表达的影响.结果 (1)茶多酚对ACC-M细胞生长抑制作用明显(P<0.05);(2)细胞免疫组化结果显示:与未加茶多酚相比,加入茶多酚后,在ACC-M细胞中Fas蛋白表达增高(P<0.05)、FasL和PCNA蛋白表达降低(P<0.05),且随着浓度的增加更为明显.结论 茶多酚可抑制ACC-M细胞生长,这种抑制作用可能与茶多酚促进ACC-M细胞中Fas表达和抑制FasL、PCNA表达有关.