糖基化终产物增加人肾系膜细胞单核细胞趋化蛋白1的表达

单核细胞趋化蛋白(MCP)-1在介导糖尿病肾病(DN)发生中起重要作用[1]。蛋白质糖基化终产物(AGEs)是引起糖尿病(DM)慢性并发症发生因素之一。我们探讨AGEs对培养的人肾系膜细胞(HRMC)表达MCP-1的影响,为阐明DN的发病机制提供理论依据。一、材料和方法1.材料:RPMI1640(美国Gibco),Trizol(上海Sangon),M-MLV逆转录酶(美国Promega),TaqDNA聚合酶(Promega),RNasin(SABC),DNAladder(上海Sangon),人肾系膜细胞(HRMC,阮雄中博士惠赠,RenalUnit,RoyalFreeHospitalLondon),人MCP-196孔ELISA试剂盒(美国Endogen),基因扩增仪…     

脂联素拮抗血管紧张素Ⅱ诱导系膜细胞细胞外基质产生

Objective To investigate the effects of adiponectin on angiotensinⅡ-induced extracellular matrix production of mesangial cells (MCs) and its possible signaling pathway. Methods RT-PCR and indirect immunofluorescence examination were performed to detect the adiponectin receptors in MCs. Quantitative real-time PCR and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were used to observe the effects of adiponectin on angiotensinⅡ-induced transforming growth factor β1 (TGF-β1) and fibronectin production of MCs. Western blotting was used to measure the ratio of p-AMPK to total AMPK. Results (1)Adiponectin receptors 1 and 2 were found in MCs. (2)The up-regulated mRNA and protein expression of TGF-?茁1 and fibronectin in MCs induced with 10-7 mol/L angiotensinⅡ (AngⅡ) was significantly inhibited by 10 mg/L adiponectin (P<0.05). (3)The p-AMPK/AMPK ratio was significantly increased after incubation with adiponectin for 15 min and 30 min (vs 0 min, P<0.05), which suggested that adiponectin could activate the AMPK signaling pathway in MCs. The activation of AMPK signaling pathway was blocked by 40 ?滋mol/L compound C, a specific inhibitor of AMPK. (4)The inhibitory effects of adiponectin on angiotensinⅡ-upregulated TGF-β1 and fibronectin expression in MCs were significantly relieved by 40 ?滋mol/L compound C (P<0.05). Conclusions There are adiponectin receptors 1 and 2 in MCs. Adiponectin has inhibitory effects on the angiotensinⅡ-upregulated TGF-β1 and fibronectin expression in MCs. AMPK signaling pathway may play an important role in the effects of adiponectin above-mentioned.     

细胞因子信号传导抑制蛋白1抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1的表达

目的 探讨细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对高糖状态下肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）表达的影响。 方法 体外培养人肾小球系膜细胞,应用脂质体2000分别转染pCR3.1-SOCS-1表达质粒和pCR3.1 空质粒载体,G418筛选阳性克隆。分别采用低糖（5.5 mmol/L）、高糖（30 mmol/L）、低糖+甘露醇（24.5 mmol/L甘露醇）和JAK-STAT信号通路抑制剂AG490 （10 μmol/L）进行刺激。Western印迹检测系膜细胞SOCS-1、信号转导和转录活化因子1、3（STAT1、STAT3）及其磷酸化蛋白（p-STAT1、p-STAT3）的表达。ELISA法和放免法测定细胞上清液中MCP-1、FN和Ⅳ型胶原的含量。RT-PCR法检测SOCS-1和MCP-1 mRNA的表达。 结果 高糖刺激系膜细胞SOCS-1蛋白和mRNA表达呈时间依赖性变化, 4 h表达达到峰值,然后逐渐减低,24 h达基线水平。与低糖组相比,高糖组系膜细胞STAT1和STAT3磷酸化水平显著上调（P < 0.01）; MCP-1 mRNA水平表达显著上调[（0.39±0.05）比（0.16±0.02）,P < 0.01];上清液中MCP-1[（459±67）比（241±19） ng/L]、FN[（5.84±0.61）比（3.41±0.31） mg/L]和Ⅳ型胶原[（16.45±2.30）比（9.56±1.52） μg/L] 含量均显著增加（均P < 0.01）。与空载体对照组相比,SOCS-1过表达组系膜细胞STAT1和STAT3的磷酸化水平显著下降（P < 0.05）;MCP-1 mRNA表达下调[（0.34±0.04）比（0.42±0.05）,P < 0.05]; 上清液中MCP-1[(387±47）比（463±56） ng/L]、 FN[（4.61±0.57）比（5.76±0.74） mg/L]和Ⅳ型胶原[(13.4±2.32)比（17.1±2.57） μg/L] 含量显著减少（均P < 0.05）。与高糖组相比,AG490组系膜细胞MCP-1 mRNA（0.31±0.04）表达显著下调;上清液中MCP-1[（361±53） ng/L]、FN[（5.46±0.71）mg/L]和Ⅳ型胶原[（15.2±1.97） μg/L]含量均减少。 结论 SOCS-1过表达抑制高糖状态下肾小球系膜细胞MCP-1及细胞外基质的分泌可能部分是通过影响STAT1和STAT3的激活而实现。     

p38丝裂素活化蛋白激酶信号通路在单核细胞趋化蛋白1介导系膜细胞增殖及细胞外基质表达中的作用

目的探讨p38丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）介导大鼠系膜细胞（MCs）增殖及纤连蛋白（FN）和Ⅰ型胶原（ColⅠ）表达中的调控作用。方法用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）评估不同浓度的MCP-1（12．5、25、50、100ng／ml）及p38MAPK阻断剂SB203580（1、5、10μmol／L）于不同时间对体外培养的大鼠MCs的增殖作用。采用逆转录多聚酶链反应（RT—PCR）检测细胞内FN、ColⅠmRNA的表达。用ELISA法检测上清液FN、ColⅠ蛋白含量。结果MCP-1能刺激MCs的增殖，呈剂量和时间依赖性（P〈0．05），而p38MAPK阻断剂明显抑制上述MCP-1的作用（P〈0.01）。MCP-1能使细胞FN、ColⅠ的表达上调，而p38MAPK阻断剂能抑制其上调表达的作用。结论p38MAPK信号转导通路在MCP-1介导大鼠MCs增殖及FN和ColⅠ表达中起调控作用。MCP-1在系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）的发病中起一定的作用。     

反义单核细胞趋化蛋白1对大鼠系膜细胞增生的影响

目的研究反义单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）对系膜细胞MCP—1分泌及增生的影响。方法用逆转录病毒感染体外培养的系膜细胞，得到转染反义MCP—1的系膜细胞，经PCR及Southern印迹鉴定外源基因在系膜细胞基因组DNA上的整合。脂多糖（LPS）刺激反义MCP-1系膜细胞，以正常系膜细胞及转染空白载体的系膜细胞为对照，观察其增生情况。用RT-PCR法检测MCP-1、CC趋化因子受体2（CCR2）的mRNA表达。ELISA法检测细胞上清中MCP-1蛋白的分泌。结果经逆转录病毒转染得到的反义MCP-1的系膜细胞，其基因组DNA中有外源基因的整合。在正常的培养条件下，反义组与对照组系膜细胞的增生差异无统计学意义；MCP-1、CCR2的mRNA均有少量表达；MCP-1的蛋白也有微弱表达。在LPS的刺激下，反义组与对照组MCP-1的mRNA的表达均增高；MCP-1蛋白的分泌均增多。与对照组比较，反义组系膜细胞的增生受抑制[（16．83±1．16）×10^4／ml比（19．63±1．85）×10^4／ml]，MCP—1的mRNA的表达较少（0．424比0．866，P〈0．01），MCP—1蛋白的分泌减少。CCR2的mRNA表达与MCP-1的变化一致。结论（1）逆转录病毒载体pLXSN可有效地介导MCP-1 cDNA在系膜细胞的转染。（2）反义MCP-1可降低系膜细胞MCP—1的转录和翻译。（3）反义MCP—1的转染可降低系膜细胞在炎症状态时的增生。（4）大鼠系膜细胞具有CCR2的表达，在炎症状态时形成MCP-1、CCR2的自分泌环路。     

蛋白酪氨酸磷酸酶2/核因子-κB途径介导脂氧素A4拮抗系膜细胞白介素6的合成

目的探讨脂氧素A4(LXA4)拮抗白介素(IL)1β促进肾小球系膜细胞IL-6合成的作用，及其信号转导机制。方法LXA4预处理培养的大鼠肾小球系膜细胞，加入IL-1β共同孵育，或单用IL-1β刺激肾小球系膜细胞。应用酶联免疫吸附(EIASA)法检测上清液中IL-6蛋白表达量。用RT—PCR法检测IL-6中mRNA表达量。用免疫印迹法检测含Sre同源区2(SH2)蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP-2)的磷酸化水平。用凝胶电泳迁移率试验(EMSA)检测核因子-κB(NF—κB)DNA结合活性。结果LXA4呈剂量依赖性抑制IL-1β诱导的系膜细胞IL-6蛋白分泌及mRNA表达，拮抗IL-1β诱导的SHP-2磷酸化与NF—κB的活化。应用NF—κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)可抑制IL-1β诱导的系膜细胞IL-6蛋白分泌与NF—κB活化。结论LXA4能够拮抗IL-1β促进肾小球系膜细胞IL-6合成，其机制涉及SHP-2／NF—κB信号转导途径。     

脂蛋白脂酶过表达促进极低密度脂蛋白诱导人系膜细胞的胞内脂质积聚和单核细胞趋化蛋白1表达

目的 通过在人肾小球系膜细胞转染脂蛋白脂酶（LPL）基因，观察LPL在系膜细胞摄取极低密度脂蛋白（VLDL）中的作用并对其介导肾损害的可能机制进行探讨。 方法 以携带野生型人LPL基因（LPLwt）、无活性的突变型人LPL基因（LPL194)和对照人碱性磷酸酶基因（AP）的重组腺病毒转染人肾小球系膜细胞（HMCL）[Ad-LPLwt（活性型）、Ad-LPL194（无活性型）和Ad-AP（对照病毒）]，RT-PCR检测细胞LPL mRNA表达；细胞免疫化学染色检测细胞LPL蛋白表达；放射性核素标记的脂质体底物法检测LPL活性。分别以油红“O”染色和酶法定性和定量检测VLDL诱导的细胞内脂质沉积；MTT法检测VLDL刺激的HMCL增殖；实时荧光定量RT-PCR和ELISA法检测HMCL单核细胞趋化蛋白1（ MCP-1）mRNA和蛋白的表达水平；HMCL与T-H蛋白1(THP-1)单核细胞的共孵育，检测单核细胞向系膜细胞的趋化。 结果 细胞内脂质沉积分析显示，与Ad-AP组相比，Ad-LPLwt组和Ad-LPL194组细胞内三酰甘油的积聚分别增加3.55倍（P ＜ 0.01）和0.52倍（P ＜ 0.05）。细胞增殖实验表明，在40 mg/L VLDL刺激下，Ad-LPLwt组细胞上清较Ad-AP组对HMCL有更强的促增殖作用(0.2282±0.0168比0.1805±0.0254，P ＜ 0.05）。与Ad-AP组相比，Ad-LPLwt组细胞MCP-1 mRNA表达增加0.39倍（P ＜ 0.05），蛋白表达上调1.18倍（P ＜ 0.01）。Ad-LPLwt组THP-1单核细胞向系膜细胞的趋化能力也最强，为Ad-AP组的1.69倍（P ＜ 0.05）。 结论 活性型和非活性型LPL均能促进VLDL诱导的系膜细胞内三酰甘油的积聚，且活性型LPL起主要作用。在高VLDL条件下，LPL促进人系膜细胞转变为泡沫细胞，扩大VLDL对系膜细胞的促增殖效应，上调系膜细胞MCP-1的分泌及增加对THP-1细胞的趋化。LPL可能作为一个重要的因素参与富含三酰甘油的脂蛋白介导的肾损害的发生和发展。     

脂氧素A4抑制过度激活状态中性粒细胞分泌促炎细胞因子的研究

作用,且呈剂量依赖性,LXA4峰值浓度为100 μg/L;其中TNF-α 的抑制似乎早于IL-1 β.     

脂氧素A4改善肺微血管内皮细胞炎症损伤的体外实验研究

目的 观察脂氧素A4（lipoxin A4,LXA4）对肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs）炎症损伤的治疗作用。方法 体外培养人PMVECs,第一阶段：分为空白对照组（完全培养基培养）和TNF-α组（分别以5、10、20 ng/mL共培养24 h）,采用MTT法检测各组PMVECs存活率,用针头式滤器检测TNF-α损伤前后PMVECs的单层通透性。第二阶段：分为TNF-α组（20 ng/mL处理24 h）和LXA4干预组（1、10、100 μg/L处理24 h）,检测PMVECs存活率和单层通透性,RT-PCR检测PMVECs IL-1β、VCAM-1、NF-κB p65 mRNA的表达。结果 （1）5、10、20 ng/mL TNF-α组的PMVECs存活率分别是（76.39±9.3）%、（61.87±11.7）%、（49.54±12.6）%,与空白对照组比较,均显著降低（P< 0.05）,而经1、10、100 μg/L三种浓度LXA4干预后,20 ng/mL TNF-α组的PMVECs存活率均得到提高,其中100 μg/LLXA4干预后的PMVECs存活率为（82.32±8.7）%,有统计学差异（P < 0.01）;（2）与损伤前[（0.021±0.011）mL/min·cm2·kPa]比较,TNF-α处理60、90 min后PMVECs单层通透系数（Kf值）显著增高[（0.067±0.007）和（0.096±0.007）mL/min·cm2·kPa,P< 0.05）],而LXA4干预60、90 min时Kf值则显著降低[（0.039±0.008）和（0.058±0.011） mL/min·cm2·kPa,P< 0.05）];（3）与对照组比较,TNF-α组的IL-1β、VCAM-1、NF-κB p65 mRNA的表达水平均有显著升高（P < 0.01或P < 0.05）,而LXA4干预组显著改善（P< 0.01或P< 0.05）。结论 TNF-α能引起PMVECs的急性炎症损伤,LXA4对TNF-α引起的PMVECs急性炎症损伤有改善作用。     

腺病毒介导NK4基因和单核细胞趋化蛋白1基因共表达对胰腺癌细胞的影响

目的探讨腺病毒介导NK4基因联合单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）基因在胰腺癌中的共表达及对胰腺癌细胞的影响。方法利用重组腺病毒AD-MCP-1、AD-NK4分别单独和联合感染胰腺癌细胞株SW1990,荧光定量RT-PCR和酶联免疫吸附剂测定（ELISA）法检测NK4和MCP-1的表达情况并观察其对胰腺癌细胞和血管内皮细胞生长的影响。结果当感染复数（MOI）为60efu/细胞时,SW1990细胞的感染效率接近100%,相应基因mRNA表达在AD-MCP-1组、AD-NK4组和联合组中感染后第5天达到最高,但是联合组中的MCP-1和NK4的表达水平要低于单一感染（P〈0.05）。相对于其他各组,联合感染后胰腺癌细胞的相对生长率没有明显的改变。AD-NK4组和联合组的上清均有抑制血管内皮细胞生长的作用,但两组比较差异无统计学意义。结论腺病毒介导NK4联合MCP-1基因感染胰腺癌SW1990细胞没有抑制作用,但NK4能够抑制血管内皮细胞的生长从而发挥抑癌作用。     

Lipoxin A4 inhibits connective tissue growth factor-induced production of chemokines in rat mesangial cells

Connective tissue growth factor (CTGF) is involved in mitogenesis, matrix production, and chemotaxis in mesenchymal cells. The effects of CTGF on the production of chemokines remain unclear. The present studies investigate the regulatory role of CTGF in the production of fractalkine, monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1), and RANTES (regulated upon activation, normal T cell expressed and secreted) in cultured mesangial cells of rats, and the modulatory effects of lipoxin A(4) (LXA(4)) on actions of CTGF. CTGF enhanced the mRNA expression and protein release of fractalkine, MCP-1, and RANTES, the expression of phospho (P)-p42/44 mitogen-activated protein kinase (MAPK), P-phosphoinositide 3-kinase (PI3-K), P-Akt, and activity of nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) in mesangial cells. P-p42/44 MAPK blockade inhibited the CTGF-induced expression of P-p42/44 MAPK but not NF-kappaB, and partially decreased the levels of the above chemokines in supernatants. P-PI3-K blockade downregulated the CTGF-stimulated expression of P-PI3-K, P-Akt, and NF-kappaB but not P-p42/44 MAPK, and partially decreased the release of the above chemokines. NF-kappaB blockade abrogated the CTGF-activated NF-kappaB and partially decreased the secretion of the above chemokines. LXA(4) dose-dependently inhibited the CTGF-stimulated mRNA expression and protein release of the above chemokines, and the expression of P-p42/44MAPK, P-PI3-K, P-Akt, and NF-kappaB. In conclusion, these results demonstrate that CTGF induces production of fractalkine, MCP-1, and RANTES via the p42/44 MAPK-, PI3-K/Akt-, and NF-kappaB-dependent signal pathway, and LXA(4) downregulates the above effects of CTGF on rat mesangial cells.     

脂氧素A4抑制结缔组织生长因子诱导的人肾小管上皮细胞转分化

结缔组织生长因子(CTGF)介导转化生长因子β(TGF-β)所致的肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞转分化(EMT)[1,2].脂氧素A4(lipoxin A4,LxA4)是花生四烯酸的代谢产物,有强大的抗炎作用[3].近来发现LXA4有抗增殖作用[4],其机制是否与拈抗EMT有关尚不清楚.本研究观察LXA4对CTCF所致的人肾小管上皮细胞(HK-2)EMT的调节作用,为肾脏纤维化的防治提供依据.     

Adrenomedullin inhibits pressure-induced mesangial MCP-1 expression through activation of protein kinase A

BACKGROUND: In glomerular hypertension, monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) has been implicated in glomerulosclerosis progression. High-pressure load and stretch on mesangial cells (MC) are two major effects of increased glomerular pressure. We previously reported that pressure per se could induce MCP-1 expression in cultured MC, suggesting the involvement of glomerular hypertension in renal disease progression through MCP-1 expression in MC. We also showed that adrenomedullin (AM) inhibited pressure-induced MC proliferation; however, it is not clear whether AM alters pressure-induced mesangial MCP-1 expression. In this study, we examined the effect of AM on pressure-induced MCP-1 expression in cultured rat MC and the mechanism of such action. Using compressed helium, pressure was applied to MC placed in a sealed chamber. AM inhibited pressure-induced MCP-1 mRNA expression, measured by reverse transcribed-polymerase chain reaction (RT-PCR), in a dose-dependent manner. This inhibition was in parallel to an increase in cellular cyclic AMP (cAMP) levels evoked by AM. The effects of forskolin and dibutyryl cAMP mimicked those of AM. Protein kinase A (PKA) inhibitor H-89 significantly weakened the effects of AM. AM significantly reduced the pressure-induced increase in MCP-1 protein in supernatants of cultured MC, measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Our results suggested that AM inhibits pressure-induced mesangial MCP-1 expression through PKA activation.     

氧化低密度脂蛋白刺激人肾小球系膜细胞产生单核细胞趋化蛋白-1由核因子-κB活化调控

目的 研究核因子ＫＢ（ＮＦ－ＫＢ）在氧化低密度脂蛋白（Ｏｘ- ＬＤＬ）诱导的体外培养的人肾小球系膜细胞表达单核／巨噬细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）中的作用。方法 采用凝胶迁移率变动分析检测ＮＦ－ＫＢ的ＤＮＡ结合活性变化，以免疫组织化学观测细胞内ｐ６５的核转位，用细胞ＥＬＩＳＡ法检测细胞内 ＭＣＰ－１及ＩＫＢα蛋白含量变化。结果 不同浓度（１０、２５、５０、１００μｇ／ｍｌ）Ｏｘ－ＬＤＬ刺激肾小球系膜细胞均可引起细胞ＮＦ-ＫＢ的ＤＮＡ结合活性增强、ＩＫＢα蛋白表达下降以及ＭＣＰ－１蛋白表达增强，以５０μｇ／ｍｌ刺激１ｈ ＮＦ－ＫＢ活化及ＩＫＢα表达减弱最明显，作用２４ｈＭＣＰ-１表达水平最高。ＮＦ－ＫＢ俯活化的同时伴有ｐ６５核转位。上述效应可被ＮＦ－ＫＢ特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯（ＰＤＴＣ）所抑制。结论Ｏｘ－ＬＤＬ刺激人肾小球系膜细胞产生ＭＣＰ－１是由ＮＦ－ＫＢ调控，ＮＦ－ＫＢ参与了脂质肾损害的发病过程。     

氧化低密度脂蛋白刺激人肾小球系膜细胞产生单核细胞趋化蛋白-1由核因子-кB活化调控

目的 研究核因子-кB（NF-кB）在氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL)诱导的体外培养的人肾小球系膜细胞表达单核/巨噬细胞趋化蛋白-1（MCP-1）中的作用。方法 采用凝胶迁移率变动分析检测NF-кB的DNA结合活性变化。以免疫组织化学观测细胞内p65的核转位，用细胞ELISA法检测细胞内MCP-1及IкBα蛋白含量变化。结果 不同浓度（10、25、50、100μg/ml)Ox-LDL刺激肾小球系膜细胞均可引起细胞NF-кB的DNA结合活性增强，IкBα蛋白表达下降以及MCP-1蛋白表达增强，以50μg/ml刺激1hNF-кB活化及IкBα表达减弱最明显，作用24hMCP-1表达水平最高，NF-кB活化的同时伴有p65核转位，上述效应可被NF-к特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸酯（PDTC）所抑制。结论 Ox-LDL刺激人肾小球系膜细胞产生MCP-1是由NF-кB调控，NF-кB参与了脂质肾损害的发病过程。     

钠氢交换子1短发夹RNA抑制醛固酮引起的系膜细胞纤连蛋白增生

目的构建钠氢交换子1（NHE1）的短发夹RNA（shRNA）,用来抑制NHE1表达,进一步明确NHE1是否直接介导醛固酮引起的细胞外基质增生。方法构建靶向NHE1的短发夹状双链RNA的真核表达质粒（shRNA-NHE1）,并将该质粒转染体外培养的大鼠肾小球系膜细胞。分别于转染后1、3、4 d用荧光定量PCR（real-time PCR）和Western印迹观察NHE1 mRNA和蛋白的表达。选择shRNA-NHE1质粒转染后第4天,给予醛固酮（10^-7mol/L）干预24 h,用ELISA法检测培养上清液中细胞外基质成分纤连蛋白（FN）的表达。结果PCR结果显示转染后24 h,shRNA-NHE1组NHE1 mRNA表达下降36.9%;转染第3、4天NHE1 mRNA表达降低69.2%和77.9%。Western印迹显示转染后24 h NHE1的蛋白表达无明显变化;3 d后蛋白水平显著下降,4 d后抑制作用更明显。ELISA结果显示,在未转染的系膜细胞中,醛固酮刺激后上清液中FN水平比对照组明显升高[（51.78±1.15）比（17.74±1.38）μg/L,P〈0.05],而当细胞转染shRNA-NHE1质粒后,醛固酮的上述作用被明显抑制[（28.07±1.73）μg/L,P〈0.05]。结论靶向NHE1的shRNA真核表达载体导入可以特异性抑制大鼠肾小球系膜细胞NHE1的表达,同时显著抑制醛固酮引起的FN增生,提示NHE1在醛固酮诱导的肾小球硬化中起重要作用。     

Aldosterone induces CTGF in mesangial cells by activation of the glucocorticoid receptor.

BACKGROUND: Aldosterone contributes substantially to cardiac and renal injury by acting on target cells not involved in the regulation of salt and water balance. The profibrotic protein connective tissue growth factor (CTGF) has been identified as one of the target proteins of aldosterone. However, the molecular mechanisms of aldosterone-mediated CTGF induction have not been characterized. METHODS: Mesangial cells were treated with aldosterone or dexamethasone. CTGF expression was characterized at the mRNA and protein level. Translocation of the glucocorticoid receptor (GR) was detected by immunocytochemistry and by Western blotting. RESULTS: Aldosterone and dexamethasone induced CTGF at the mRNA and protein level in a time- and concentration-dependent manner. Specific antagonists of the mineralocorticoid receptor, spironolactone, canrenoate or eplerenone, did not inhibit CTGF induction. However, inhibition of the GR by RU486 prevented dexamethasone-as well as aldosterone-induced CTGF expression, indicating the importance of the GR in aldosterone-mediated regulation of CTGF. This notion was confirmed by translocation of the GR to the nucleus upon stimulation with aldosterone. CONCLUSIONS: CTGF is a functional target of aldosterone in mesangial cells, but aldosterone-induced CTGF gene expression is not directly mediated by the mineralocorticoid receptor.