Six1基因在肺癌组织表达水平及RNA干扰抑制其表达后对肺癌细胞生物学特性的影响

目的探讨Six1基因在肺癌组织表达及抑制其表达后对肺癌细胞增殖凋亡的影响。方法提取肺癌及癌旁组织蛋白,Western印迹检测Six1的表达; Six1-siRNA转染人肺癌A549细胞,分为空白组和阴性对照组(NC组)、Six1-siRNA组,转染48 h后通过Western印迹检测各组细胞Six1的表达; CCK8检测Six1-siRNA转染A549细胞24～72 h的细胞增殖;流式细胞术检测转染48 h的细胞凋亡率; Western印迹检测增殖相关蛋白细胞增殖核抗原(PCNA)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)家族Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch1信号通路Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 Six1在肺癌组织中的表达显著高于癌旁组织(P<0. 05); Six1-siRNA转染能明显降低A549细胞Six1的表达;与空白组比较,Six1-siRNA组细胞24～72 h的细胞增殖均显著降低,在48 h的细胞凋亡率显著升高,PCNA、Notch1和Hes1蛋白表达均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论 Six1在肺癌组织中高表达,通过RNA干扰抑制其表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,对细胞增殖凋亡的影响方式是下调PCNA和上调Bax蛋白表达。     

RNA干扰TRAF4表达下调Notch1信号通路增强肺癌替莫唑胺化疗敏感性

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF) 4表达对肺癌替莫唑胺化疗敏感性的影响。方法 RT-PCR检测SPC-A-1、A549、H322、H1299肺癌细胞相对于人胚肺成纤维细胞MRC5中TRAF4的表达量;TRAF4的siRNA转染和替莫唑胺处理A549细胞,细胞被分为空白对照组、阴性对照组、TRAF4-siRNA组、替莫唑胺组和TRAF4-siRNA+替莫唑胺组,细胞培养48 h,RT-PCR及Western印迹检测各组A549细胞TRAF4的表达; CCK8法及流式细胞术分别检测各组细胞活力(OD值)及凋亡率; Western印迹检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Notch神经同源蛋白(Notch) 1前体信号中Notch1和下游重要靶基因发状分裂相关增强子(Hes) 1的蛋白表达。结果 TRAF4在4个肺癌细胞中的表达水平均显著高于其在MRC5细胞中的表达(P<0. 05); TRAF4-siRNA转染A549细胞后,TRAF4的表达显著低于空白对照组(P<0. 05); TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组细胞凋亡率及Caspase-3和Bax的表达均显著高于空白对照组,OD值及Notch1和Hes1表达显著低于空白对照组,TRAF4-siRNA+替莫唑胺组凋亡率及Caspase-3和Bax的表达显著高于TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组,OD值及Notch1和Hes1表达显著低于TRAF4-siRNA组和替莫唑胺组(P<0. 05)。结论抑制肺癌细胞TRAF4表达可通过下调Notch1信号通路降低肺癌细胞活力及诱导细胞凋亡,并可增强替莫唑胺化疗敏感性。     

hnRNP H与子宫内膜癌化疗敏感性的相关性

目的探讨敲低核不均一核糖核蛋白H(hnRNP H)对子宫内膜癌细胞Ishikawa细胞紫杉醇化疗敏感性的影响。方法利用hnRNP H siRNA转染子宫内膜癌细胞Ishikawa,敲低目的基因表达,通过实时PCR和Western印迹检测(对照组、阴性对照组、siRNA组)hnRNP H mRNA、蛋白表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)实验检测紫杉醇对Ishikawa细胞存活率的影响,流式细胞仪检测对照组、紫杉醇组、siRNA组及紫杉醇+siRNA组各组细胞凋亡率的变化,Western印迹检测对照组、紫杉醇组、siRNA组及紫杉醇+siRNA组各组细胞凋亡蛋白(Caspase 3/9 Bcl-2、Bax)的表达变化。结果 Real-time PCR和Western印迹检测证实hnRNP H siRNA可有效降低hnRNP H在mRNA及蛋白水平表达。紫杉醇对细胞存活率的影响呈时间及剂量依赖性,流式细胞仪检测:对照组凋亡率3.07%,应用紫杉醇组凋亡率29.16%、沉默hnRNP H组凋亡率34.72%、应用紫杉醇+沉默hnRNP H组凋亡率45.03%;Western印迹检测凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bax在紫杉醇+siRNA组表达显著升高,与对照组、紫杉醇组、siRNA组相比有统计学差异(P<0.05),Bcl-2在紫杉醇+siRNA组表达显著下调,与对照组、紫杉醇组、siRNA组相比较差异显著(P<0.05)。结论应用siRNA沉默子宫内膜癌Ishikawa细胞中hnRNP H的表达,使Ishikawa对紫杉醇化疗敏感性明显增加,促使肿瘤细胞凋亡。HnRNP H可作为子宫内膜癌基因治疗新靶点。     

Fgl2基因对H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的探讨纤维蛋白原样蛋白(Fgl)2基因对H9C2心肌细胞凋亡的影响及机制。方法空白试剂、阴性病毒和Fgl2 siRNA慢病毒感染H9C2心肌细胞,分别为空白对照组、阴性对照组、Fgl2-siRNA组,48 h后收集细胞,Western印迹检测各组细胞中Fgl2的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western印迹检测酶切caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达。结果空白对照组和阴性对照组Fgl2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),Fgl2-siRNA组Fgl2蛋白表达显著低于空白对照组(P<0.01);与空白对照组及阴性对照组比较,Fgl2-siRNA组H9C2细胞凋亡明显降低,酶切caspase3蛋白表达显著下调,Notch1、Hes1蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论沉默Fgl2基因的表达可有效抑制H9C2心肌细胞凋亡,其机制与下调酶切caspase3蛋白表达、激活Notch1信号通路有关。     

LATS2基因通过Wnt信号通路对H9C2心肌细胞保护的作用机制研究

目的探讨大肿瘤抑制因子2(LATS2)基因对缺氧复氧(H/R)诱导的H9C2心肌细胞凋亡及Wnt信号通路的影响。方法 LATS2 siRNA或LATS2过表达质粒转染H9C2心肌细胞,并分别转染阴性对照siRNA及空载体(vector),转染48 h后,通过Western blotting检测转染后的各组细胞中LATS2的蛋白表达;建立H/R模型,细胞分为正常对照组(Control组)、单纯缺氧复氧组(H/R组)、H/R+LATS2-siRNA组和H/R+pcDNA3.1-LATS2组,流式细胞术检测各组细胞凋亡率及活性氧(ROS)含量;Western blotting检测凋亡蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-myc的蛋白表达。结果 siRNA组和PcDNA3.1组的LATS2蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P0.05),而LATS2-siRNA组LATS2的蛋白表达显著低于Control组(P0.05),pcDNA3.1-LATS2组LATS2的蛋白表达显著高于Control组(P0.05);与Control组比较,H/R组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著升高(P0.05),与H/R组比较,H/R+LATS2-siRNA组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著升高,H/R+pcDNA3.1-LATS2组细胞凋亡率、ROS含量及cleaved caspase3、β-catenin和c-myc的蛋白表达均显著降低(P0.05)。结论抑制LATS2基因表达可诱导心肌细胞凋亡及上调Wnt信号通路,而抑制LATS2基因表达反之。     

PBX3基因调控p38MAPK信号对肝癌细胞生长及5-氟尿嘧啶化疗敏感性的影响

目的探讨前B细胞白血病同源盒基因(PBX)3基因对肝癌细胞活力、凋亡及5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响及机制。方法以人正常肝细胞HL-7702为对照细胞,Western印迹法检测肝癌Huh7、HepG2、MHCC97H和SMMC7721细胞中PBX3的蛋白表达。以LipofectamineTM2000为载体,参照其转染说明将设计合成的PBX3的特异性siRNA(si-PBX3组)及阴性对照siRNA(NC组)转染SMMC7721细胞,仅加入脂质体的为空白对照组,Western印迹检测转染后的细胞PBX3的蛋白表达。SMMC7721细胞分为NC组、si-PBX3组、5-FU组和si-PBX3+5-FU组,细胞处理48 h,噻唑蓝(MTT)及流式细胞术分别检测4组细胞活力和凋亡率。Western印迹检测细胞增殖核抗原(PCNA)、Bax、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和p-p38MAPK的蛋白表达。结果 PBX3在肝癌细胞中的蛋白表达均显著高于在HL-7702细胞(P0.05)。与空白对照组相比,si-PBX3组细胞中PBX3蛋白表达显著降低(P0.05)。与NC组相比,si-PBX3组和5-FU组细胞活力及p-p38MAPK、PCNA蛋白表达水平均显著降低,而细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平均显著升高(P0.05);si-PBX3+5-FU组细胞活力及PCNA和p-p38MAPK蛋白表达均显著低于si-PBX3组和5-FU组,细胞凋亡率及Bax的蛋白表达均显著高于si-PBX3组和5-FU组(P0.05)。结论抑制PBX3基因表达可降低肝癌细胞活力,诱导细胞凋亡,增强肝癌5-FU化疗敏感性,机制可能与下调p38MAPK信号通路有关。     

Galectin-3基因调控Wnt/β-catenin信号通路对肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨半乳糖凝集素(Galectin)-3基因对肺癌细胞凋亡的影响及机制。方法将NC-siRNA、Galectin-3-siRNA1和Galectin-3-siRNA2转染人肺癌A549细胞,未转染任何的siRNA作为对照组,转染48 h后提取细胞中的蛋白,Western印迹检测各组细胞中Galectin-3蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹检测酶切含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved caspase)3、β-链蛋白(catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白表达。结果 NC-siRNA组Galectin-3蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),Galectin-3-siRNA1、Galectin-3-siRNA2组Galectin-3蛋白表达均显著低于对照组(P<0.01),Galectin-3-siRNA1组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;与对照组及NC-siRNA组比较,Galectin-3-siRNA组β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著降低,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论抑制Galectin-3在肺癌细胞中的表达可诱导细胞凋亡,其机制与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

PIAS1基因沉默对雨蛙肽诱导胰腺腺泡细胞凋亡的影响

活化STAT蛋白抑制物(PIAS)1基因沉默可增强雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞炎症反应。目的:探讨PIAS1基因沉默对雨蛙肽刺激胰腺腺泡细胞凋亡的影响。方法:AR42J胰腺腺泡细胞在Lipofectamine~(TM)2000介导下转染PIAS1-siRNA和阴性siRNA。将细胞分为PIAS1-siRNA+雨蛙肽组、阴性siRNA+雨蛙肽组、脂质体+雨蛙肽组、PBS+雨蛙肽组和对照组。以DNA Ladder、Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR和蛋白质印迹法检测1353、Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果:与其余各组相比,PIAS1-siRNA+雨蛙肽组DNA梯度裂解条带明显增加,荧光着色阳性细胞数增多;G1期细胞数增多,S期细胞数减少,细胞凋亡率增加;p53、Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调(P均0.05)。结论:PIAS1基因沉默可增强雨蛙肽活化的caspase-3凋亡途径诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,为通过调控PIAS1表达治疗急性胰腺炎提供新的理论依据。     

SRCIN1基因表达对肺癌细胞生长及替莫唑胺化疗敏感性的影响

目的探讨SRC激酶信号抑制剂(SRCIN) 1基因过表达对肺癌细胞活力、侵袭能力、凋亡率及替莫唑胺化疗敏感性的影响。方法人肺癌A549细胞分为4个处理组(空白对照组、pc DNA3. 1-SRCIN1组、替莫唑胺组和pc DNA3. 1-SR-CIN1+替莫唑胺组),其中噻唑蓝(MTT)法、Transwell小室和流式细胞术分别检测细胞活力、侵袭能力及凋亡率。Western印迹法检测SRCIN1、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、B细胞淋巴瘤(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)和β-catenin的蛋白表达。结果 pc DNA3. 1-SRCIN1组和替莫唑胺组均可抑制A549细胞活力、侵袭能力及PCNA、MMP-2和β-catenin的蛋白表达,诱导细胞凋亡及上调Bax表达,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0. 05),pc DNA3. 1-SRCIN1+替莫唑胺组对细胞活力、侵袭能力及PCNA、MMP-2和β-catenin的表达抑制、细胞凋亡、Bax表达诱导作用更明显,且与pc DNA3. 1-SRCIN1组和替莫唑胺组比较差异均有统计学意义(P<0. 05)。结论 SRCIN1基因过表达可抑制肺癌细胞活力和侵袭能力,诱导细胞凋亡,增加替莫唑胺化疗敏感性,机制可能与Wnt信号下调有关。     

沉默EZH2基因对胃癌细胞增殖及凋亡的影响

[目的]探讨沉默胃癌细胞株MGC803中的EZH2基因对细胞增殖及凋亡的影响。[方法]采用siRNA沉默胃癌细胞中的EZH2基因并用qRT-PCR及western blot验证沉默效率;MTT法评估细胞增殖情况,运用western blot分析凋亡蛋白相关蛋白Bcl-2及Bax的表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡变化。[结果]胃癌细胞中的EZH2基因被成功沉默;沉默组细胞的增殖情况较正常组和阴性对照组明显降低(P0.05),而凋亡率相对于其他2组明显升高(P0.05);沉默组中Bcl-2蛋白的表达量降低而Bax蛋白表达显著升高(P0.05)。[结论]沉默胃癌细胞中的EZH2基因能抑制该肿瘤细胞的增殖并促进其凋亡。     

Twf1基因对心肌细胞凋亡及NF-κB信号通路的影响研究

目的探讨抑制Twf1基因表达对高糖诱导的心肌细胞增殖、凋亡及NF-κB信号的影响。方法高糖刺激H9c2细胞,将H9c2细胞分为对照组(5.5 mmol/L的葡萄糖处理细胞)、NC组(瞬时转染无干扰作用的si RNA后用5.5 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)、高糖组(瞬时转染无干扰作用的siRNA后用25 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)和Twf1-siRNA组(瞬时转染干扰Twf1表达的siRNA后用25 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)。Western blotting检测蛋白表达,CCK8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率及ROS含量。结果高糖可引起H9c2细胞Twf1表达升高,转染Twf1-siRNA后H9c2细胞Twf1的表达明显降低;高糖组细胞活力低于NC组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα、Bax和TNF-α的表达均高于NC组,差异均有统计学意义(P0.05);Twf1-siRNA组的细胞活力高于高糖组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα、Bax和TNF-α的表达均低于高糖组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论抑制H9c2细胞Twf1基因表达可逆转高糖诱导的细胞活力降低及凋亡的增加,其机制可能与细胞内ROS含量降低及NF-κB信号下调有关。     

补体应答基因32基因对心肌梗死心肌细胞凋亡及免疫机制的影响

目的探讨补体应答基因(RGC)32基因对心肌梗死心肌细胞凋亡及免疫机制的影响。方法建立心肌梗死模型,Western印迹检测心肌组织中RGC32的蛋白表达;从大鼠乳鼠获得原代心肌细胞,分为正常对照组、阴性对照组(转染不具有干扰作用的siRNA并进行缺血缺氧处理)、缺血缺氧组、缺血缺氧+RGC32-siRNA组(转染干扰RGC32表达的siRNA并进行缺血缺氧处理),细胞培养48 h后,通过Western印迹检测各组细胞中RGC32、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Notch1、Hes1的蛋白表达;TUNEL法检测各组细胞凋亡率;RT-PCR检测各组细胞炎症因子白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达。结果心肌梗死心肌组织中RGC32的蛋白表达显著高于正常心肌组织(P0.05);阴性对照组和缺血缺氧组RGC32、Caspase3、Bax、Notch1、Hes1、IL-6和TNF-α表达及细胞凋亡率差异无统计学意义(P0.05),缺血缺氧组RGC32、Caspase3、Bax、IL-6和TNF-α表达及细胞凋亡率均显著高于正常对照组和缺血缺氧+RGC32-siRNA组,Notch1和Hes1表达均显著低于正常对照组和缺血缺氧+RGC32-siRNA组(P0.05)。结论 RGC32基因在心肌梗死心肌组织表达升高,抑制心肌细胞RGC32基因表达可降低细胞凋亡,提高免疫及激活Notch1通路。     

siRNA肌细胞特异性增强因子2D对人肺癌细胞株A549和H460增殖及凋亡的影响

目的探讨siRNA肌细胞特异性增强因子(MEF)2D对人肺癌A549和H460细胞增殖的影响及可能的机制。方法 RT-PCR检测正常组织和肺癌组织内MEF2D mRNA的表达水平,siRNA MEF2D转染A549和H460细胞,MTT和流式细胞仪分别检测不同处理组的细胞存活率和凋亡率,Western印迹检测MEF2D和cleaved caspase-3蛋白的表达水平。结果 MEF2D mRNA在肺癌组织中的含量比在正常组织内高,细胞转染siRNA MEF2D后,细胞的存活率和MEF2D表达水平下降,而细胞的凋亡率和cleaved caspase-3的表达水平增加。结论 siRNA MEF2D抑制了A549和H460细胞的增殖并促进了其凋亡。     

过表达miR-150通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨过表达miR-150通过磷脂酰肌醇-3-羟激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinase/seronine kinase,PI3K/AKT)信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制。方法将体外培养HT-29细胞分为空白对照组(转染空脂质体) NC组(转染mimic)和miR-150(转染miR-150 mimic);采用RT-PCR检测转染后细胞中miR-150 mRNA水平; CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡; WB法检测Cleaved caspase3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。将对数生长期HT-29分为阴性对照组、miR-150组、LY294002组和LY294002+miR-150组,采用PI3K抑制剂验证LY294002在HT-29细胞凋亡中的作用。结果与空白对照组和NC组相比,miR-150组细胞中miR-150 mRNA水平明显升高(P 0. 05),24 h、48 h、72 h和96h的细胞抑制率明显升高(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白的表达明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白的表达明显升高(P 0. 05);与阴性对照组相比,miR-150组和LY294002组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P 0. 05);与miR-150组相比,LY294002+miR-150组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P 0. 05)。结论 miR-150过表达可能通过负调控PI3K/AKT信号通路抑制人结直肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

prohibitin基因在胃癌中的表达及诱导胃癌细胞凋亡的机制研究

[目的]探讨siRNA介导抗增殖蛋白prohibitin(PHB)基因沉默对胃癌细胞增殖凋亡的影响及机制。[方法]Western blot法检测胃癌组织及相应的癌旁组织中prohibitin的蛋白表达;NC-siRNA和prohibitin-siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞,未转染任何的siRNA作为空白对照组,48h后检测各组细胞中prohibitin的蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、PCNA、Cleaved caspase3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。[结果]prohibitin在胃癌组织中的蛋白表达显著高于癌旁组织(P0.01),转染prohibitin-siRNA后能显著降低prohibitin的蛋白表达;与对照组及NC-siRNA组比较,prohibitin-siRNA组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3蛋白表达显著上调,ki67、PCNA、PI3K、p-AKT蛋白表达显著下调(P0.01)。[结论]靶向prohibitin-siRNA干扰可有效的降低胃癌SGC-7901细胞中prohibitin的表达,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

沙培林联合SOX9基因siRNA对胃癌细胞生长抑制的机制研究

目的探讨沙培林或SOX9 siRNA对胃癌细胞活力、凋亡的影响及机制。方法人胃癌BGC803细胞分为空白对照组、沙培林组、siSOX9组和沙培林+siSOX9 4个处理组,其中siRNA的转染参照Lipofectamine~(TM) 2000说明,MTT、流式细胞术、Western blotting分别检测细胞活力、凋亡率及SOX9、β-catenin、cyclinD1和Bax的蛋白表达。结果转染SOX9 siRNA的BGC803细胞SOX9蛋白表达显著低于空白对照组(P0.05)。沙培林组和siSOX9组细胞活力降低,凋亡率升高,β-catenin和cyclinD1蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05),而沙培林和siSOX9联合使用对细胞活力、凋亡率及β-catenin、cyclinD1和Bax的蛋白表达影响更显著,且与沙培林组和siSOX9组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论沙培林或SOX9 siRNA均可抑制胃癌细胞活力,诱导细胞凋亡,联合对细胞活力抑制及凋亡促进作用更明显,机制可能与Wnt/β-catenin信号的下调有关。     

白细胞介素1β基因沉默对烟草烟雾提取物诱发血管平滑肌细胞凋亡和炎性反应的影响

目的 探讨白细胞介素(IL)-1β基因沉默和过表达对烟草烟雾提取物(CSE)诱导血管平滑肌细胞凋亡和炎性反应的影响。方法 根据IL-1βmRNA编码序列设计并合成小干扰RNA(siRNA)和过表达质粒,分别转染大鼠胸主动脉平滑肌细胞A7r5,实验分为对照组、模型组(CSE干预)、沉默组(siRNA-IL-1β)、沉默空载组(siRNA-EV)、过表达组(OvExp-IL-1β)、过表达空载组(OvExp-EV)。采用CSE干预除对照组的其他5组细胞。qRT-PCR检测细胞中IL-1βmRNA表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、Bax、TNF-α、IL-6和IL-8表达。结果 与对照组比较,模型组细胞凋亡率、Bax、IL-1βmRNA、TNF-α、IL-6和IL-8表达明显升高,Bcl-2表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,沉默组细胞凋亡率、Bax、IL-1βmRNA、TNF-α、IL-6和IL-8表达明显降低,Bcl-2表达明显升高(P<0.01);过表达组细胞凋亡率、Bax、IL-1βmRNA、TNF...     

长非编码RNA H19在结直肠癌化疗敏感性中的作用研究

目的研究长非编码RNA H19在结直肠癌化疗药物敏感性中作用。 方法分别构建lncRNA H19稳定过表达及表达沉默的结肠癌细胞株,分别加入5-FU培养,RT-qPCR检测H19表达,MTT法检测各组细胞增殖率,通过划痕实验检测各组迁移能力;Western blot检测各组细胞凋亡蛋白、耐药蛋白MDR1、MRP1和BCRP表达。 结果与正常细胞比较,lncRNA H19在结直肠癌细胞中表达升高,lncRNA H19稳定过表达组细胞增殖率明显高于H19表达沉默组,lncRNA H19稳定过表达组细胞48 h迁移距离明显大于H19表达沉默组,lncRNA H19稳定过表达组Bax蛋白表达下调,BCL-2、MDR1、MRP1和BCRP表达上调,H19表达沉默组Bax蛋白表达上调,BCL-2、MDR1、MRP1和BCRP表达下调。 结论lncRNA H19高表达的结直肠癌降低结直肠癌对化疗药物的敏感性,下调lncRNA H19表达可提高化疗药物的疗效。     

和厚朴酚对肺癌细胞紫杉醇耐药的逆转作用及对Notch信号通路的影响

目的 探究和厚朴酚对肺癌细胞紫杉醇耐药的逆转作用及对Notch信号通路的影响。方法 以不同浓度和厚朴酚(0、10、20、30、40、50μmol/L)联合5 nmol/L紫杉醇处理紫杉醇耐药的肺癌细胞(A549/Taxol),采用MTT检测细胞存活率,筛选试验浓度。再将A450/Taxol细胞分为对照组、紫杉醇组、和厚朴酚+紫杉醇组和Notch信号通路激活剂(Jagged1/FC)组,检测各组细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,并采用Western Blotting法检测细胞增殖、凋亡、迁移相关蛋白及Notch信号通路蛋白表达。结果 5 nmol/L紫杉醇与20、30、40、50μmol/L和厚朴酚联用时,细胞存活率明显降低,其中30μmol/L和厚朴酚抑制效果最佳,选用此浓度进行后续实验;与紫杉醇组比较,和厚朴酚+紫杉醇组细胞存活率、细胞迁移能力降低,细胞凋亡率升高,c-Myc、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Notch1、Jagged1和Hes1表达下调,cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9和E-c...     

靶向抑制乳腺癌细胞GLS1基因表达对癌细胞凋亡的影响

目的探讨抑制乳腺癌细胞谷氨酰胺酶(GLS) 1基因表达对癌细胞凋亡的影响。方法参照Lipofectamine~(TM) 2000说明将合成的GLS1 siRNA及无干扰作用的siRNA转染MCF-7细胞,分别为GLS1-siRNA组和阴性对照组,并设置空白对照组,转染48 h后,Western印迹检测GLS1、凋亡相关蛋白survivin、p53及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)信号通路PI3K和磷酸化(p-AKT)的蛋白表达; 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测GLS1-siR-NA转染24、48和72 h的细胞活力;流式细胞仪检测GLS1-siRNA转染48 h的细胞凋亡率。结果转染GLS1-siRNA的MCF-7细胞GLS1蛋白表达显著低于空白对照组(P<0. 05);与空白对照组比较,GLS1-siRNA组细胞在转染24、48和72 h的细胞活力均显著降低,细胞凋亡率显著升高,survivin、PI3K和p-AKT蛋白表达均显著降低,p53蛋白表达显著升高(P<0. 05)。结论抑制GLS1基因在乳腺癌中的表达可降低细胞活力,促进细胞凋亡及下调PI3K/AKT信号通路,其中诱导细胞凋亡的方式是下调survivin表达和上调p53表达。