大鼠心脏自噬昼夜节律的老年化改变研究

目的探讨大鼠心脏自噬昼夜节律的老年化改变及可能机制。方法随机选取健康雄性SD大鼠48只,其中6月龄大鼠24只(青年组)和26月龄大鼠24只(老年组)。观察大鼠昼夜活动习性,分别在03:00,06:00,09:00,12:00,15:00,18:00,21:00,24:00各时间点收集心脏样本,运用冷冻切片免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦成像技术、亚细胞结构细胞核-细胞质分离技术和免疫印迹技术检测心脏自噬规律及可能调控机制。结果青年组大鼠昼伏夜出,自噬昼夜节律曲线明显,其中18:00 LC3-Ⅰ转化LC3-Ⅱ明显高于12:00,而在15:00细胞核C/EBPβ表达明显高于18:00(P<0.05);而老年组大鼠夜间及昼间均嗜睡,LC3-Ⅰ转化LC3-Ⅱ和细胞核C/EBPβ昼夜无节律性变化。结论衰老改变心脏自噬的昼夜节律,核转录因子C/EBPβ参与其调控。     

肠道嗜铬细胞数量和5-羟色胺受体3表达在大鼠衰老过程中的变化及意义

目的 检测不同鼠龄SD大鼠肠道推进率、肠道黏膜嗜铬细胞数量和肠肌间神经丛5-羟色胺受体3(5-HT3R)的表达,探讨生理性衰老过程中肠道运动功能变化的规律及其机制. 方法 80只健康SD大鼠分为3月龄、9月龄、18月龄、24月龄及30月龄5组,每组各16只.以印度墨汁为标记物,检测大鼠的肠道推进率;采用免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)法染色,检测大鼠空肠、回肠和结肠黏膜及黏膜下嗜铬细胞的数量以及肠肌间神经丛5-HT3R的表达.结果肠道推进率30月龄组大鼠为(52.1±9.8)%,明显低于3月龄组(67.2±13.5)%(t=7.013,P=0.001);30月龄组大鼠空肠、回肠及结肠黏膜和黏膜下嗜铬细胞数量分别为(11.1±3.0)个、(10.6±1.9)个和(10.2±4.3)个,较3月龄组(22.9±6.2)个、(25.8±7.1)个和(23.0±5.7)个减少(t=3.640,t=3.384,t=4.154,均为P<0.01);大鼠空肠和结肠的5-HT3R表达30月龄组分别为4.8±1.4和9.3±4.2,较9月龄组的8.9±1.5和14.5±5.3减少(t=3.464,t=3.003,均为P<0.01),回肠5-HT3R 30月龄组和3月龄组分别为5.0±1.3和9.0±1.7(t=4.549,P<0.001). 结论 老年大鼠肠道推进率、肠道嗜铬细胞数量及肠肌间神经丛5-HT3R表达均显著降低,并随年龄增长而逐渐明显;老年大鼠肠道运动功能的明显下降与肠嗜铬细胞数量以及肌间神经丛5-HT3R的表达显著降低有一定的相关性.     

谷氨酸诱导大鼠结肠 Cajal 间质细胞构建自噬模型

目的通过谷氨酸诱导离体大鼠结肠Cajal间质细胞(ICC)构建细胞自噬模型。方法使用不同浓度的谷氨酸不同时间点作用于原代培养的大鼠结肠ICC,免疫荧光鉴定大鼠结肠ICC细胞;CCK-8法检测谷氨酸对ICCs活力的影响;Western印迹检测不同浓度谷氨酸在不同作用时点对大鼠结肠ICC自噬蛋白微管相关蛋白轻链(LC)3表达水平的影响;透射电镜观察谷氨酸干预后细胞内自噬体和超微结构的变化。结果与空白组相比,谷氨酸(5 mmol/L)24 h显著降低大鼠结肠ICC活力(P<0.01)。谷氨酸(5 mmol/L)作用6 h、24 h均可显著提高自噬蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值(P<0.05),其中以5 mmol/L谷氨酸作用24 h的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值最高(P<0.01)。透射电镜检测5 mmol/L谷氨酸干预大鼠结肠ICC 24 h发现,细胞内自噬空泡和自噬体数量明显增加。结论谷氨酸诱导大鼠结肠ICC自噬模型的最佳浓度和时间为5 mmol/L和24 h。     

线粒体自噬对术前睡眠剥夺老龄大鼠术后认知功能的影响

目的 评价线粒体自噬对术前睡眠剥夺老龄大鼠术后认知功能的影响。方法 健康雄性SD大鼠64只，20～22月龄，体重550～700 g,采用随机数字表法，将其随机分为对照组(C)组、睡眠剥夺(SD)组、手术(S)组和睡眠剥夺+手术组(SS)组各16只。SD组和SS组采用改良多平台水环境睡眠剥夺法建立睡眠剥夺模型，S组和SS组大鼠行胫骨骨折加髓内固定术。分别于术后1、3、7 d(T1～T3)时采用条件性恐惧记忆实验测定大鼠认知功能，第7天行为学测定结束后立即处死取海马组织，采用TUNEL检测海马神经元凋亡情况，透射电镜观察大鼠海马神经元自噬情况，JC-1探针法测定线粒体膜电位，Western印迹检测大鼠海马组织LC3、Beclin1、Parkin及p62蛋白表达。结果 与C组比较，其余3组术后条件诱导僵立时间百分比明显降低，海马神经元凋亡指数明显升高，线粒体膜电位明显下降，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin 1及Parkin蛋白表达明显增加，p62蛋白表达明显减少(P<0.05);与SD组和S组比较，SS组术后条件诱导僵立时间百分比明显降低，海马神经元凋亡指数显著升高，线粒体膜电...     

不同年龄大鼠消化道Cajal细胞c-kit受体表达的变化及意义

目的通过检测不同年龄组SD大鼠的肠道推进率及胃肠肌间Cajal间质细胞(ICC)的c-kit受体表达,探讨生理性衰老过程中大鼠胃肠运动、感觉和分泌等生理功能变化的规律与机制。方法 90只健康成年SD大鼠按不同年龄分为3、9、18、24及30月龄5组,每组各16只。以印度墨汁为标记物,检测并计算每组8只大鼠的肠道推进率。采用免疫组化SABC法染色,检测每组各8只大鼠胃体、空肠、回肠、结肠和乙状结肠与直肠交界的肌间ICC的c-kit受体表达,比较这些指标在不同年龄组的变化规律。结果①大鼠肠道推进率从3月龄的(67.2±13.5)%逐渐减少到30月龄的(52.1±9.8)%(P<0.01);②与3月龄组、9月龄组和18月龄组大鼠相比,老年大鼠(24月龄和30月龄)肌间ICC c-kit受体表达显著下调,其中以乙状结肠与直肠交界处变化最为显著(P<0.05)。结论在大鼠生理性衰老过程中,胃肠运动功能及肌间ICC的功能均随之显著下调,并且随年龄的增加这种变化更为明显。在生理性衰老过程中,这些变化可能参与了老年人胃肠功能紊乱性疾病的发病。     

老龄化自发性高血压模型大鼠SHR与SD大鼠大脑中动脉力学特性

目的研究6月龄SD雄性大鼠和老龄(12月龄)自发性高血压模型大鼠(SHR)雄性大鼠大脑中动脉的拉伸力学性质。方法对6月龄正常SD雄性大鼠大脑动脉和老龄SHR大脑中动脉各20个试样,分别装夹于电子万能试验机的上、下夹头内,对试样预调处理后以5 mm/min的实验速度对试样施加拉伸载荷,直到试样破坏,打印机打印出试样的拉伸弹性限度应变、最大应变、最大应力数据和应力-应变曲线。结果两组拉伸力学性质各项指标比较差异显著(P0.05)。结论正常SD大鼠大脑中动脉和老龄SHR大鼠大脑中动脉具有不同的拉伸力学性质,老龄SHR大鼠由于高血压,拉伸力学性质发生改变。     

衰老诱导大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BK_(Ca)通道β1亚基功能下调

目的探讨衰老对大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BKCa)生物物理特性的影响。方法选用老年组(22²4月龄)和青年组(424月龄)和青年组(4⁵月龄)雄性Wistar大鼠,采用膜片钳内面向外模式进行肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa单通道记录。结果衰老组BKCa通道平均开放概率(Po)和平均开放时间显著低于青年组;电压依赖性和钙敏感性亦显著下降;Tamoxifen(1μmol/L)可诱导两组Po增加,但青年组增加百分比显著高于老年组。结论衰老诱导大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞BKCa通道功能下调,以β1亚基功能下调更为显著。     

新生期注射谷氨酸单钠对老年雄性大鼠骨丢失的影响

目的 探讨新生期注射谷氨酸单钠损毁下丘脑弓状核对老年雄性大鼠骨丢失的影响.方法 新生期雄性SD大鼠随机分成损毁弓状核老龄大鼠(MSG)组和自然衰老大鼠(对照)组,饲养至700日龄后处死,收集血清行雌二醇(E 2)和睾酮(T)放免检测,取左侧胫骨干骺端行组织形态计量学分析.结果 MSG组大鼠弓状核神经元数量、血清E 2和T水平明显降低;股骨体积骨密度显著降低,胫骨干骺端松质骨的骨小梁面积百分数(%Tb Ar)、骨小梁宽度(Tb,Th)、骨小梁数量(Tb.N)显著减少.结论 新生期注射谷氨酸单钠损毁下丘脑弓状核加重老年雄性大鼠骨量丢失,下丘脑弓状核-垂体-性腺轴参与此调控过程,提示下丘脑弓状核参与骨质疏松形成的调控.     

依达拉奉联合雷帕霉素对蛛网膜下腔出血大鼠神经细胞自噬及学习记忆的影响

目的探讨依达拉奉联合雷帕霉素(RAP)对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠神经细胞自噬及学习记忆的影响。方法80只雄性SD大鼠随机分成假手术组、SAH组、RAP组、依达拉奉联合RAP组(联合组)。采用枕大池二次注血法制作SAH大鼠模型;光镜观察海马区神经细胞形态结构,免疫组织化学法检测自噬标志蛋白(Beclin-1、LC3-Ⅱ)表达水平;水迷宫测动物学习记忆。结果与假手术组比较,SAH组存活神经细胞数量明显减少、Beclin-1和LC3-Ⅱ表达水平明显增加、动物学习记忆功能指标显著降低(P0. 05);与SAH组比较,RAP组存活神经细胞数量增多、Beclin-1和LC3-Ⅱ表达水平明显增加、动物学习记忆功能指标明显改善(P0. 05);与RAP组比较,联合组存活神经细胞数量明显增多、Beclin-1和LC3-Ⅱ表达水平明显增加、动物学习记忆功能指标明显改善(P0. 05)。结论依达拉奉联合RAP可提高SAH大鼠神经细胞自噬程度和神经细胞存活,提高学习记忆功能。     

外源性睾酮通过诱导自噬致大鼠肾脏损伤

目的 探索外源性睾酮(TP)致大鼠肾脏损伤的作用及可能机制.方法 SD雄性大鼠48只,随机分为6组(每组8只):control组、TP组、TP+氯喹(CQ)组、TP+甘草甜素(Gly)组、CQ(自噬抑制剂)组、Gly〔高迁移率族蛋白(HMG)B1抑制剂〕组.各组大鼠处理21 d后,测量其体重、肾脏湿重、计算肾脏指数;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理形态学变化;免疫组化法和Western印迹印迹法分析大鼠肾脏组织自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、Beclin1、P62、HMGB1的定位和表达情况.结果 与control组比较,TP组大鼠肾脏湿重、肾脏指数无明显变化(P>0.05);肾小球毛细血管襻多呈分叶状改变,肾小囊间隙变窄,肾小管上皮细胞水肿,管腔变窄;肾脏组织LC3B-Ⅱ、Beclin1和HMGB1蛋白表达水平上调(P<0.05),联合给予TP与CQ后,仅见少数肾小体血管球呈分叶状改变,肾小管水肿明显减轻;Beclin1、LC3B-Ⅱ和HMGB1蛋白表达水平均下调(P<0.05);TP+Gly组大鼠肾脏组织病理学改变及自噬相关蛋白表达水平结果 与TP+CQ组类似.结论 外源性TP可能通过上调细胞自噬致大鼠肾脏组织损伤的发生,HMGB1可能参与此过程自噬水平的调节.