TO901317对海马神经元β-分泌酶表达及β-淀粉样肽生成的影响

目的研究肝X受体(LXR)配体TO901317对海马神经元淀粉样前体蛋白(APP)、α-分泌酶(ADAM10)和β-分泌酶(BACE1)mRNA表达的影响及与β-淀粉样肽(Aβ)生成的关系。方法大鼠海马神经元培养至第7天,在饲养液中加入2.0μmol/LTO901317,继续培养48h。应用RT-PCR方法研究海马神经元APP、ADAM10和BACE1等基因的mRNA的表达,放免法检测培养液Aβ含量的变化。结果TO901317降低海马神经元APP和BACE1 mRNA表达(P<0.01),减少培养液Aβ含量(P<0.01),但不影响ADAM10 mRNA表达(P>0.05)。结论TO901317激活LXR,能通过降低APP和BACE1的表达来减少海马神经元Aβ分泌。     

参乌胶囊抑制阿尔茨海默病模型小鼠脑内β-淀粉样肽生成的机制研究

目的 观察中药新复方参乌胶囊对β-淀粉样肽前体蛋白（APP）转基因小鼠脑内β-淀粉样肽（A11）代谢及β-和γ-分泌酶的影响。方法 APP转基因小鼠从4～10月龄灌胃给予参乌胶囊。用免疫组织化学法观察APP、Aβ、β位点剪切酶（BACE）和早老蛋白1（PS-1）的表达，并进行图像分析。结果 10月龄APP转基因小鼠模型组与同月龄正常对照组相比，脑内海马区APP、Aβ和PS-1（为γ-分泌酶的催化部位）的表达明显增多，而BACE（即β-分泌酶）的变化不明显。参乌胶囊能明显减少APP转基因小鼠脑内海马区APP的表达，减少脑内All的产生，抑制BACE和PS-1的表达。结论 参乌胶囊抑制脑内All的产生可能是通过减少APP含量及抑制β-和1-分泌酶而起作用的。     

二十烷酸对大鼠皮质神经元Aβ生成的影响及激活过氧化物酶体增殖剂激活受体α的干预作用

目的 观察二十烷酸(EA)对神经元Aβ生成途径的影响及激活过氧化物酶体增殖剂激活受体α(PPARα)的干预作用.方法 将原代培养的大鼠皮质神经元分为3组:对照组、EA组、EA+ Wy14 643组.EHSA法检测培养液中Aβ含量,Western印迹法检测神经元β-淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶(BACE1)蛋白表达,RT-PCR法分析脂酰辅酶A氧化酶(ACOX1)mRNA表达.结果 EA组细胞APP、BACE1蛋白表达及Aβ生成增多(P ＜0.01,P＜0.05),ACOX1 mRNA表达加强(P＜0.05);应用PPARα激活剂Wy14 643干预后,ACOX1 mRNA表达进一步加强(P＜0.05),细胞APP、BACE1蛋白表达及Aβ生成减少(P＜0.01,P＜0.05).结论 饱和脂肪酸可能通过促进Aβ生成在AD发病机制中起重要作用,激活PPARα有效降低了饱和脂肪酸所致的Aβ生成.     

D-半乳糖、氯化铝中毒阿尔茨海默病模型小鼠脑组织Aβ蓄积原因探讨

目的 探讨D-半乳糖及氯化铝中毒阿尔茨海默病模型小鼠脑组织β淀粉样蛋白(Aβ)蓄积的原因.方法 取42只小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖(90 mg/kg)和三氯化铝制做模拟Aβ代谢异常的阿尔茨海默病小鼠模型(模型组),另取42只小鼠颈背部皮下注射生理盐水,于用药后0、15,30,45、60、75、90d两组分别取6只大鼠行行迷宫试验,观察两组逃避潜伏期;然后处死大鼠取海马组织,采用定量PCR法检测淀粉样前体蛋白(APP)、β分泌酶(BACE1)、胰岛素降解酶(IDE) mRNA表达;Westernblot法检测Aβ、BACE1和IDE蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组逃避潜伏期明显延长;APPmRNA水平无明显变化,Aβ蛋白水平明显升高;BACE1mRNA及蛋白水平均显著升高;IDE mRNA及蛋白水平无明显变化.结论 D-半乳糖及氯化铝中毒阿尔茨海默病模型小鼠脑组织Aβ蓄积的可能为BACE1表达增加所致,而非IDE降解减少或APP表达增加所引起.     

淀粉样前体蛋白酶与β-淀粉样蛋白在衰老痴呆大鼠脑组织中的表达

目的 观察衰老痴呆大鼠脑组织淀粉样前体蛋白酶(APP)、β-淀粉样蛋白(Aβ)表达,探讨APP及Aβ在痴呆衰老中的作用机制.方法 Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、4、6、8 w模型组.穿梭箱实验、Morris水迷宫实验检测认知行为学改变,蛋白质免疫印迹法和酶联免疫吸附法检测APP,酶联免疫吸附法检测Aβ在衰老痴呆大鼠脑组织中的表达,用图象分析仪测定光密度值.结果 4、6及8 w模型组APP、Aβ表达较正常组及假手术组明显增高(P＜0.01),3个模型组间比较无显著差异(P＞0.05),APP和Aβ表达时间上无相关性,APP蛋白表达水平与学习、记忆正相关,Aβ蛋白表达水平与学习、记忆负相关.结论 APP及Aβ在衰老痴呆大鼠脑组织表达增高,推测APP具有脑保护作用,Aβ参与了衰老痴呆的发病机制但不具有病理意义.     

APP17肽对APP转基因小鼠Aβ相关蛋白表达的影响

目的研究淀粉样前体蛋白（APP）17肽对APP转基因小鼠（APPV717I）海马神经元β淀粉样肽（Aβ）相关蛋白表达的影响。方法将3月龄的APP转基因小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组（隔日皮下注射0.16mg&#183;kg^-1,3次/w）,并以相同年龄未经转基因处理的C57BL/6J小鼠做正常对照组。8个月后行Morris水迷宫测定,小鼠脑组织灌注固定后进行Aβ1～42、Aβ1～16、APP-N端（52～80）、早老蛋白-1（PS-1）C端、APP的β位点剪切酶（BACE）等蛋白的免疫组化染色。结果模型组小鼠水迷宫实验的逃避潜伏期明显长于APP17肽治疗组和正常对照组（P〈0.05）,且模型组小鼠海马中Aβ1～42、Aβ1～16、APP-N端（52～80）、PS-1C端、BACE阳性反应神经元明显增加,染色深（P〈0.05）;APP17肽治疗组与正常对照组相近。结论APP转基因小鼠大脑中存在Aβ相关蛋白的高表达,由此引起记忆、学习能力的改变;而APP17肽能通过抑制β-分泌酶和PS-1的表达而减少Aβ生成,使之接近正常,并能改善小鼠的记忆、学习能力。     

APP17肽对半乳糖老化小鼠海马神经元Aβ及其相关蛋白表达的影响

目的　观察 D-半乳糖老化小鼠海马神经元 β-淀粉样肽 (Aβ)及其相关蛋白表达水平的变化以及 APP1 7肽对其改变的影响。方法　采用免疫组织化学染色和免疫印迹方法 ,检测 D-半乳糖老化小鼠模型海马神经元 Aβ、β-分泌酶、内质网 Aβ结合蛋白和早老蛋白 - 1的表达水平 ,并观察应用 APP1 7肽的保护作用。结果　对照组小鼠海马神经元 Aβ及其相关蛋白表达量少 ,而 D-半乳糖老化小鼠海马神经元 Aβ及其相关蛋白表达水平明显增加 ,与对照组比较差异有高度显著性 (P<0 .0 1 ) ,APP1 7肽组上述各种蛋白的表达结果与对照组接近。结论　 D-半乳糖老化小鼠海马神经元存在着 Aβ及其相关蛋白表达的上调 ,APP1 7肽可使之恢复正常水平 ,对神经元具有营养和保护作用     

SH-SY5Y神经细胞中α3尼古丁受体基因表达沉默对β分泌酶蛋白表达的影响

目的 研究α3神经型尼古丁受体(nAChR)基因沉默对β分泌酶(BACE)蛋白表达的影响.方法 稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒及空质粒的SH-SY5Y神经细胞与正常对照组细胞用Real time-PCR和Western印迹法检测α3 nAChR mRNA表达和蛋白水平表达,以评价RNA的干扰效率;用蛋白质印迹方法 分别检测细胞中β分泌酶两个亚型(BACE1和BACE2)蛋白表达水平的变化.结果 稳定转染α3 nAChR siRNA表达质粒的细胞克隆株,与空质粒和正常对照组相比BACE1蛋白表达水平增加,BACE2蛋白表达水平减少.结论 α3 nAChR可以通过增加BACE2蛋白表达水平及减少BACE1蛋白表达水平,影响Aβ生成从而减少Aβ的神经毒性作用,发挥神经保护作用.     

虾青素对大鼠海马神经元细胞的保护作用

目的探讨虾青素对大鼠海马神经元细胞的保护机制。方法取SD大鼠10只,采用0.125%的胰酶分离其海马神经元细胞并进行原代培养。对照组在海马神经元细胞中加入5 mmol/Lβ样淀粉蛋白(Aβ)25-35诱导24h,建立AD模型;治疗组在海马神经元细胞中分别加入虾青素5、10、20μg/μL,然后均加入5 mmol/L的Aβ25-35诱导24 h。采用噻唑蓝比色法检测各组海马神经元细胞的存活情况,RT-PCR、Western blot法分别检测细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、淀粉样前体蛋白(APP)、β-分泌酶、γ-分泌酶的基因及蛋白表达,半自动生化仪检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)及脂质过氧化物(MDA)。结果随着虾青素浓度升高,海马神经元细胞的存活率、SOD活性明显升高(P<0.05或<0.01),MDA降低(P<0.05),HIF-1α、APP、β-分泌酶、γ-分泌酶mRNA表达及蛋白表达明显降低(P<0.01或<0.05)。结论虾青素通过抑制大鼠海马神经元细胞HIF-1α、β-分泌酶、γ-分泌酶、APP表达,减少Aβ合成,从而对其细胞起到保护作用。     

β淀粉样蛋白清除的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是常见的痴呆形式,占老年痴呆病人的60%~80%[1],主要表现为进行性记忆力和认知功能下降,死亡常常发生在诊断后几年内,AD的不可逆神经元功能障碍和致残将会造成巨大的社会经济负担,将成为全球最大的公共卫生挑战之一,迫切需要新的治疗方法。针对β淀粉样蛋白(Aβ)产生,聚集或其从脑中清除已成为预防或治疗AD的活跃研究领域。Aβ是由淀粉样前体蛋白(APP)代谢产生,APP可被α-分泌酶的神经外蛋白酶切割,产生可溶性细胞外片段(sAPPα),被β-分泌酶(BACE1)切割,产生可溶性细胞外片段(sAPP+)和细胞膜结合片段(C99),细胞膜结合片段在细胞内被γ-分泌酶裂解,释放淀粉样蛋白细胞内结构域和Aβ,Aβ聚集形成寡聚体,原纤维和斑块。在AD中,Aβ浓度的变化出现在脑脊液(CSF)中,依次是脑Aβ积聚,CSF增加,海马和灰质体积减少,葡萄糖代谢减少,记忆障碍和痴呆[2,3]。Aβ不仅在脑细胞中表达,也在神经元,星形胶质细胞和小胶质细胞中表达,还在外周器官和组织,例如肝肾胰脾等脏器及各种血液和内皮细胞中表达。本文对近年有关Aβ清除及针对该机制的治疗策略进展进行综述。     

ERCP and MRCP--when and why

Since the introduction of endoscopic retrograde cholangiopancreatography (ERCP) in the 1970s, gastroenterologists have a wide spectrum of diagnostic and therapeutic options in the biliopancreatic ductal system at their disposal. With its arrival in the 1990s, magnetic resonance cholangiopancreatography (MRCP) developed as a potent diagnostic tool in biliopancreatic pathology. Currently, MRCP is widely replacing diagnostic ERCP and thereby avoiding complications related to endoscopic technique.We summarize evidence-based data and demonstrate indications and differential indications for MRCP and ERCP in pancreatic disease. Complications related to the procedures and possible medical prevention are discussed. The feasibility of interventional endoscopy in pancreatic disease is reported in detail. The role of gastroenterologists in performing MRCP is outlined on the basis of practical examples.     

Convection and permeation and albumin between plasma and interstitium.

Nonequilibrium thermodynamics is combined with compartmental analysis to interpret albumin sieving and tracer experiments in terms of a permeability-surface product PS (permeation) and a solvent drag reflection coefficient σ_f (convection) for various blood-tissue barriers. The human whole-body albumin data of Lassen, Parving, and Rossing (Lassen, Parving, and Rossing, Microvasc. Res.7, i–iv (1974)), modified for nonliver tissues by Johnson and Levitt (Johnson &; Levitt, Microvasc. Res.9, 141 (1975)) lead to P ～ 1.8 × 10^?8 cm sec^?1 (based on a surface area per unit plasma volume of 700 cm^?1) and to σ_f ～ 0.9, which imply, in agreement with Johnson and Levitt, that permeation is the dominant nonliver blood-tissue transport mechanism for albumin in the normal resting human. Similar values are derived from the dog paw muscle data of Garlick and Renkin (Garlick and Renkin, Amer. J. Physiol.219, 1595–1605 (1970)). The Casley-Smith (Casley-Smith, Microvasc. Res.9, 43–48 (1975)) mechanism of uphill albumin transport is verified as possible. It is tentatively inferred that lymph formation in resting tissue does not result from a small difference between a large fluid (volumetric) filtration and an almost equally large fluid reabsorption, either in the same capillary (Starling) or between different capillaries (Zweifach) (Zweifach, Circ. Res.34, 858–866 (1974)). Rather, reabsorption is negligibly small relative to filtration, and lymph flow is comparable to volumetric filtration.