吉马酮对人非小细胞肺癌NCI-H1770 细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调节作用

目的:探索吉马酮对人非小细胞肺癌NCI-H1770细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:非小细胞肺癌细胞分为4组:对照组(NCI-H1770)、吉马酮(5、10、20μmol/L)组。CCK-8检测细胞增殖。流式细胞术检测细胞凋亡。Transwell检测细胞侵袭。划痕实验检测细胞迁移。蛋白印迹检测细胞增殖核抗原-67(Ki67),Cleaved Caspase-3和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的蛋白水平。结果:低浓度(20μmol/L)的吉马酮不会对非小细胞肺癌细胞产生毒性,高浓度(≥20μmol/L)的吉马酮会急剧减弱非小细胞肺癌细胞活力。与对照组相比,吉马酮(10、20μmol/L)组细胞增殖倍数下降(P 0. 01)。吉马酮(5、10、20μmol/L)组细胞凋亡率高于对照组(P 0. 01)。吉马酮(5、10、20μmol/L)组每个视野下的侵袭细胞数目低于对照组(P 0. 01)。与对照组相比,吉马酮(5、10、20μmol/L)组划痕愈合率降低(P 0. 01)。吉马酮(5、10、20μmol/L)组Ki67和VEGF的相对蛋白水平低于对照组(P 0. 01)。与对照组相比,吉马酮(5、10、20μmol/L)组Cleaved Caspase-3的相对蛋白水平上升(P 0. 01)。结论:吉马酮可降低人非小细胞肺癌NCI-H1770细胞增殖、侵袭及迁移,促进细胞凋亡。     

杜仲绿原酸对LPS 诱导的视网膜内皮细胞凋亡和免疫反应的调控作用

目的:糖尿病性视网膜病变是糖尿病最常见的并发症之一。本文旨在研究杜仲绿原酸(CA)对脂多糖(LPS)诱导的视网膜内皮细胞(HRECs)凋亡和炎症反应的影响。方法:CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术分析细胞凋亡; ELISA检测炎症因子IL-6、TNF-α和IL-10水平。蛋白印迹检测Ki67、Bcl-2、Caspase-3、Bax、NF-κB P65和P-NF-κB P65蛋白水平。结果:低浓度(50μmol/L)的杜仲绿原酸对HRECs细胞活力无明显影响,高浓度(50μmol/L)的杜仲绿原酸会减低HRECs细胞活力。与对照组相比,LPS组细胞增殖明显降低,细胞凋亡明显上升(P0. 05)。与LPS组相比,20和50μmol/L的杜仲绿原酸组细胞增殖升高,细胞凋亡下降(P0. 05)。LPS组Ki67和Bcl-2表达明显低于对照组,Caspase-3和Bax表达明显高于对照组(P0. 05)。与LPS组相比,20和50μmol/L的杜仲绿原酸组Ki67和Bcl-2表达明显升高; Caspase-3和Bax表达明显降低(P0. 05)。而且,LPS组IL-6和TNF-α水平高于对照组,IL-10水平低于对照组(P0. 05)。与LPS组相比,20和50μmol/L的杜仲绿原酸组IL-6和TNF-α水平下降,IL-10水平上升(P0. 05)。另外,LPS组p-P65/P65比值高于对照组(P0. 05)。杜仲绿原酸(10,20,50μmol/L)组p-P65/P65比值低于LPS组(P0. 05)。结论:杜仲绿原酸通过抑制NF-κB P65活化减弱LPS诱导的HRECs细胞凋亡和炎症反应的增强。     

蛇床子素通过上调抑癌基因PTEN 抑制肝癌细胞HepG2 增殖并促进细胞凋亡

目的:探究蛇床子素对肝癌细胞Hep G2增殖及凋亡的作用及作用机制。方法:用不同浓度蛇床子素处理肝癌细胞,CCK8检测细胞活性,流式检测细胞凋亡,Western blot检测细胞增殖、凋亡标记蛋白及PTEN的表达;同时用PTEN抑制剂bp V(HOpic)处理细胞,CCK8和流式再次检测细胞增殖及凋亡情况。结果:100μmol/L蛇床子素作用4 d和5 d能明显降低细胞增殖倍数(P0. 05),150μmol/L蛇床子素作用3 d、4 d和5 d也可显著降低细胞增殖倍数(P0. 05,P0. 01),并且蛇床子素(100μmol/L,150μmol/L)还能显著抑制细胞增殖标记蛋白Ki67和PCNA的表达,并体现量效关系(P0. 05,P0. 01);同时,蛇床子素(100μmol/L,150μmol/L)能明显促进肝癌细胞凋亡及凋亡标记蛋白Bax表达,降低Bcl-2蛋白表达水平(P0. 05,P0. 01);此外,蛇床子素(100μmol/L,150μmol/L)还能显著促进抑癌基因PTEN的表达(P0. 05,P0. 01);bp V(HOpic)能明显减弱蛇床子素对肝癌细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用(P0. 05)。结论:蛇床子素能通过上调PTEN表达抑制肝癌细胞Hep G2增殖、促进肝癌细胞凋亡。     

抗菌肽merecidin诱导人肺腺癌细胞系A549凋亡

目的探讨抗菌肽merecidin对人肺癌细胞系A549的作用及其机制。方法实验分为对照组(Ctrl)、顺铂干预组(cisplatin 40μmol/L)、merecidin干预组(merecidin 25/35μmol/L)、caspase抑制剂组(z-VAD-fmk)、caspase抑制剂+merecidin干预组(z-VAD-fmk+merecidin 25/35μmol/L)。MTT法检测细胞增殖,annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-3、8、9、激活型caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果抗菌肽merecidin明显抑制A549细胞增殖(P0.05),merecidin处理24 h后的IC_(50)值为34.8μmol/L。与Ctrl组相比,merecidin干预组的凋亡率显著升高(P0.05);与merecidin干预组相比,caspase抑制剂+merecidin干预组的凋亡率并没有下降。caspase-3、8、9蛋白表达无显著变化且未检测到激活型caspase-3蛋白表达。Bcl-2蛋白表达下调(P0.05)及Bax蛋白表达增多(P0.05)。结论抗菌肽merecidin可以抑制人肺腺癌细胞A549的增殖并诱导其凋亡。     

甘草查尔酮A 调控人结肠癌细胞增殖与凋亡的分子机制研究

目的:探讨甘草查尔酮A(LCA)对人结肠癌细胞增殖与凋亡的影响,并分析相关分子机制。方法:通过体外培养人结肠癌HCT116和SW480细胞,MTT实验检测不同浓度(0、1、2. 5、5、10、25、50μmol/L)的LCA对细胞增殖的影响,测定12 h,24 h和48 h的细胞增殖抑制率,并计算两组细胞的IC50。随后选择HCT116细胞为研究对象,并将细胞分为4组:对照组,50μmol/L的LCA组,5 mmol/L的ROS抑制剂(NAC)组以及50μmol/L LCA+5 mmol/L NAC组。流式细胞仪检测各组细胞的ROS水平及凋亡状况; Western blot检测内质网应激(ERS)相关蛋白ATF6、XBP-1、ATF4和CHOP以及凋亡相关蛋白Bcl2、Bax和Cleaved-caspase3的表达。结果:随着LCA作用浓度的增大和时间的延长,人结肠癌HCT116和SW480细胞的增殖抑制率增大,具有显著的浓度和时间依赖性; LCA对HCT116和SW480细胞作用48 h的IC50分别为21. 94μmol/L和29. 38μmol/L。与对照组比较,NAC能显著降低细胞ROS及凋亡水平(均P0. 01),而LCA能显著促进细胞ROS的释放及凋亡(均P0. 01)。与对照组比较,NAC组细胞内质网应激相关蛋白ATF6、XBP-1、ATF4、CHOP和促凋亡蛋白Bax、Cleavedcaspase3的表达水平均显著降低(P0. 05,P0. 01),抗凋亡蛋白Bcl2的表达水平显著增加(P0. 01);而LCA组细胞ATF6、XBP-1、ATF4、CHOP、Bax和Cleaved-caspase3蛋白表达水平均显著增加(均P0. 01),Bcl2的表达水平显著降低(P0. 01)。结论:甘草查尔酮A能显著抑制人结肠癌HCT116细胞增殖,促进细胞的凋亡,其作用机制可能与激活氧化应激及调控Bcl2/Bax/Cleaved-caspase3信号通路相关。     

白茅苷抑制AKT 的活化对宫颈癌细胞增殖、凋亡和线粒体膜电位的影响

目的:本文旨在研究白茅苷对宫颈癌细胞增殖、凋亡和线粒体膜电位的影响。方法:采用CCK-8法检测不同剂量白茅苷对宫颈癌SiHa细胞活力的影响,选用无显著毒性的0、25、50、100μmol/L剂量白茅苷将细胞随机分为四组,克隆形成法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应检测Ki67、PCNA、Bcl-2/Bax mRNA水平;流式分选检测细胞线粒体膜电位的变化;蛋白免疫印迹检测AKT磷酸化情况;免疫荧光检测AKT的细胞定位情况。结果:与Imperatorin 0μmol/L组相比较,Imperatorin 50、100μmol/L组细胞增殖率显著降低(P0.05),凋亡率显著升高(P0.05),Ki67、PCNA、Bcl-2/Bax mRNA水平显著降低(P0.05),线粒体膜电位明显降低,p-AKT/AKT比值显著降低(P0.05),荧光表达显著降低(P0.05)。结论:白茅苷通过抑制AKT的活化抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,促进细胞凋亡,降低线粒体膜电位。     

Shp2在肺腺癌细胞A549中的抑癌作用及机制研究

目的:探索Shp2在肺腺癌细胞A549中的抑癌作用及机制。方法:应用CCK-8及Ed U实验检测Shp2特异性抑制剂Phps-1抑制Shp2活性对A549细胞活力、增殖及对顺铂(DDP)耐药情况的影响,Annexin VFITC/PI双染法检测细胞凋亡率,Western blot法检测caspase-3的17 kD片段(caspase-3-17p)、Bcl-2、Bax、p-STAT3/STAT3及p-ERK/ERK的蛋白水平。结果:Phps-1浓度为20μmol/L、作用24 h对A549细胞活力的促进作用显著,与对照组比较具有显著性统计学差异(P0.05)。Phps-1 20μmol/L组的细胞增殖率为0.455±0.085,对照组为0.307±0.012。DDP 8 mg/L组及Phps-1 20μmol/L联合DDP 8 mg/L组的细胞凋亡率分别为13.01%±2.62%和3.67%±0.93%(P0.05)。抑制Shp2活性能够下调DDP诱导的促凋亡蛋白caspase-3-17p及Bax的蛋白水平,并上调p-STAT3及下调p-ERK蛋白水平。结论:Shp2在肺腺癌细胞A549中具有抑癌作用,抑制STAT3信号通路激活可能是Shp2发挥抑癌作用的重要分子机制。     

汉黄芩素对胶质瘤U87细胞增殖和侵袭的抑制作用及机制

目的探讨汉黄芩素对胶质瘤U87细胞增殖、侵袭的影响及其相关机制。方法 U87细胞随机分为对照组(加入20μL的培养液)、(0、50、100)μmol/L汉黄芩素处理组;细胞培养48h,应用MTT法检测细胞增殖情况,通过TranswellTM侵袭实验检测细胞侵袭能力,荧光实时定量PCR测定ezrin mRNA表达,Western blot法检测ezrin、Bcl-2、Bax蛋白表达及ezrin蛋白磷酸化水平,用末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL)测定肿瘤细胞凋亡指数(AI)。结果与0μmol/L汉黄芩素组以及对照组相比,(50、100)μmol/L汉黄芩素组细胞增殖抑制率增加,且100μmol/L汉黄芩素组细胞增殖抑制率明显高于50μmol/L汉黄芩素组。随着汉黄芩素浓度的增加,平均穿膜细胞数以及ezrin mRNA、ezrin蛋白、ezrin蛋白磷酸化水平、Bcl-2蛋白表达水平逐渐降低,而Bax蛋白表达水平、AI逐渐增加;0μmol/L汉黄芩素组与对照组相比,无显著性差异。结论汉黄芩素能够减少胶质瘤U87细胞增殖、侵袭,下调ezrin蛋白表达和磷酸化活性,并诱导细胞凋亡。     

胡桃醌抑制宫颈鳞癌SiHa细胞增殖并诱导其凋亡

目的探讨胡桃醌对宫颈鳞癌Si Ha细胞增殖及凋亡的影响。方法选取对数生长期的Si Ha细胞将其分为空白对照组和(10、20、50、80、100)μmol/L胡桃醌组。采用MTT法观察胡桃醌对Si Ha细胞增殖的抑制作用,并计算出半数抑制浓度(IC50),依据IC50确定胡桃醌的有效浓度;annexin V-FITC/PI双染色结合流式细胞术测定20μmol/L胡桃醌对Si Ha细胞凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax的表达。结果 MTT试验显示,与对照组比较,各胡桃醌浓度对细胞增殖均有明显抑制作用,IC50为20.4μmol/L;流式细胞术检测表明,正常生长的Si Ha细胞早期凋亡率为(2.46±0.37)%,经20μmol/L的胡桃醌处理细胞12 h,早期凋亡率增加至(18.47±2.26)%;与正常对照组相比,Western blot法检测显示20μmol/L胡桃醌使细胞中Bcl-2表达明显降低而Bax表达明显增加。结论胡桃醌可以抑制Si Ha细胞的增殖,并诱导细胞凋亡。     

五味子乙素对肝癌细胞凋亡、侵袭及血管新生的调节作用

目的:本文旨在研究五味子乙素对肝癌细胞HCCLM3凋亡、侵袭及血管新生的影响。方法:MTT检测细胞存活力。流式细胞术分析细胞凋亡。Transwell检测细胞侵袭。蛋白印迹检测Bcl 2相关蛋白X(Bax)、B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、血管内皮细胞生长因子X(VEGF-A)、表皮生长因子(EGF)和成纤维细胞生长因子(b FGF)表达。结果:低浓度(20μmol/L)五味子乙素对HCCLM3细胞存活力无明显影响。高浓度(20μmol/L)五味子乙素会降低细胞存活力。与DMSO组相比,五味子乙素(10和20μmol/L)组细胞凋亡率明显升高,Bax表达增强,Bcl-2表达降低(P0. 05)。而且,五味子乙素(5、10、20μmol/L)组细胞侵袭及MMP-2和MMP-9表达明显低于DMSO组(P0. 05)。与DMSO组相比,五味子乙素(5、10、20μmol/L)组VEGF-A,EGF和b FGF表达明显下降(P0. 05)。结论:五味子乙素可诱导肝癌细胞HCCLM3凋亡,降低细胞侵袭及血管新生。     

杜鹃素通过增强Kv1.5和Kv2.1表达抑制尼古丁所致的肺动脉平滑肌细胞增殖

目的:研究杜鹃素(farrerol,Far)对尼古丁所致的大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery vascular smooth muscle cells,PASMCs)增殖的作用,并进一步探讨其与电压依赖性钾通道(voltage-dependent potassium channels,Kv)1.5和Kv2.1的关系。方法:首先应用细胞计数法检测不同浓度尼古丁对PASMCs细胞数量的影响,筛选出最适的尼古丁浓度。将PASMCs随机分为5组,分别为:正常对照组、尼古丁(1μmol/L)组、尼古丁(1μmol/L)+低浓度(10~(-6) mol/L)、中浓度(10~(-5) mol/L)和高浓度(10~(-4) mol/L)Far组。利用细胞凋亡试剂盒检测细胞caspase-3活性,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。并进一步应用RT-qPCR和Western blot法分别检测各组细胞Kv1.5和Kv2.1及凋亡相关因子Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白水平。结果:细胞计数结果显示,1μmol/L尼古丁能最大限度地增加PASMCs的数量。1μmol/L尼古丁能显著降低PASMCs的caspase-3活性,并增强细胞活力(P0.01)。杜鹃素(10~(-6)～10~(-4) mol/L)可浓度依赖性地阻断尼古丁的作用。流式细胞术检测显示,与对照组相比,1μmol/L尼古丁可明显诱导PASMCs增殖,降低其凋亡率;而杜鹃素干预后,PASMCs的凋亡率显著高于尼古丁组(P0.01)。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,1μmol/L尼古丁显著抑制PASMCs Kv1.5、Kv2.1和Bax的表达,增加Bcl-2的表达;10~(-5)μmol/L杜鹃素可以显著逆转尼古丁对PASMCs的作用(P0.01)。结论:杜鹃素能够对抗尼古丁所引起的大鼠PASMCs caspase-3和Bax抑制及Bcl-2增强,该作用与促进Kv1.5和Kv2.1表达有关。     

土荆皮乙酸促进喉癌细胞系HEp-2凋亡

目的本文观察土荆皮乙酸(PAB)对人喉表皮样癌细胞系2(HEp-2)的增殖和凋亡的影响。方法细胞分组及处理:以0、0.5、1、2、4、8和16μmol/L的PAB分别处理细胞24、48和72 h;MTT法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot和qPCR检测细胞Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白及mRNA表达;免疫组化检测细胞PARP和c-PARP蛋白的表达。结果 PAB呈时间-浓度依赖性抑制HEp-2增殖。与对照组比较,4和8μmol/L PAB组HEp-2细胞凋亡率均显著升高(P<0.01);4和8μmol/L PAB组HEp-2细胞的Bcl-2和PARP表达均显著下降(P<0.05);Bax、caspase-3和c-PARP的表达均显著升高(P<0.05)。结论 PAB可激活线粒体凋亡途径,诱导HEp-2细胞凋亡。     

低氧诱导神经干细胞凋亡和miR-26a低表达

目的:初步探讨氯化钴(cobalt chloride,Co Cl2)是否诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)凋亡及其机制,探讨NSCs凋亡是否引起microRNA-26a(miR-26a)表达变化。方法:用不同剂量的Co Cl2处理NSCs,CCK-8检测细胞活力;TUNEL检测细胞凋亡;建立Co Cl2诱导NSCs凋亡的模型,将NSCs分为对照组和凋亡组,real-time PCR检测miR-26a-3p、miR-26a-5p、GSK-3β、Bcl-2、Bax和caspase-3的表达;Western blotting检测Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:CCK-8结果显示不同浓度(200、400和600μmol/L)Co Cl2作用24 h,NSCs活力呈剂量依赖性下降(P0.05)。TUNEL检测显示Co Cl2(200、400和600μmol/L)作用24 h后NSCs凋亡率呈剂量依赖性增加(P0.05)。Real-time PCR和Western blotting结果表明凋亡组miR-26a、GSK-3β、Bax和caspase-3表达增加,Bcl-2、Bcl-2/Bax蛋白水平下降(P0.05)。结论:Co Cl2(400μmol/L)作用24 h可建立NSCs凋亡模型,其机制可能与线粒体凋亡通路有关;NSCs凋亡时miR-26a表达减少。     

白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的:探索白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其调控机制。方法:实时定量PCR (qRT-PCR)检测血清中单核细胞趋化蛋白鄄1 (MCP1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和白细胞介素18(IL-18)的mRNA 水平;HE 染 色和Masson 染色评价心肌纤维化水平;流式细胞术分析细胞凋亡;蛋白印迹检测Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、B 淋巴 瘤2 蛋白(Bcl-2)、Bcl-2 相关蛋白X(Bax)、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT 蛋白表达。结果:白藜芦醇可降低STZ 诱导的糖尿病大 鼠血清MCP-1、MIF 和IL-18 的mRNA 水平并改善心肌纤维化加剧。STZ 诱导糖尿病组血管平滑肌细胞凋亡率明显高于对照 组(P<0.05)。与STZ 诱导糖尿病组相比,STZ+白藜芦醇组血管平滑肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。而且,白藜芦醇可抑 制STZ 诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9 和Bax 蛋白表达,提高Bcl-2 表达(P<0.05)。 与对照组相比,STZ 诱导糖尿病组血管平滑肌细胞中p-PI3K/ PI3K 和p-AKT/ AKT 比率明显降低(P<0.05)。STZ+白藜芦醇组 血管平滑肌细胞p-PI3K/ PI3K 和p-AKT/ AKT 比率明显高于STZ 诱导糖尿病组(P<0.05)。结论:白藜芦醇可通过激活PI3K/ AKT 信号通路抑制STZ 诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡。     

AR-A014418对γδT细胞增殖、凋亡及杀伤功能的影响

目的:观察糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)选择性抑制剂AR-A014418对体外扩增的γδT细胞的细胞活性包括增殖、凋亡和杀伤功能的影响。方法:采用人淋巴细胞分离液分离健康人外周血中单个核细胞,在γδT细胞完全培养基中培养获得γδT细胞。用不同浓度的AR-A014418诱导培养γδT细胞72 h后,用流式细胞术检测各诱导处理组γδT细胞的增殖、凋亡和杀伤能力;用Western blot检测γδT细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达情况。结果:AR-A014418浓度在0. 3～10μmol/L时能促进γδT细胞的增殖并抑制其凋亡。同时促凋亡蛋白Cleaved caspase-3和Bax表达逐渐减弱,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达逐渐增强。尤其是在3μmol/L时,γδT细胞增殖活性最强,而且体外杀伤人肝癌HepG2细胞和人胃癌SGC-7901细胞活性也显著提高。结论:GSK-3β抑制剂AR-A014418在3μmol/L浓度时,可以抑制体外扩增γδT细胞的凋亡,并能增强其体外增殖和杀伤肿瘤活性,提示AR-A014418具有一定的免疫调节功能,为今后用于体外扩增γδT细胞提供实验依据。     

Nodosin通过Apaf-1和caspase-3诱导HepG2细胞凋亡

目的:研究传统中药提取物nodosin对人肝细胞癌Hep G2细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:将nodosin设置为1. 25μmol/L、2. 5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L不同浓度组,作用于Hep G2细胞24 h后,用Hoechst 33258染色和电镜观察不同浓度的药物对细胞形态学的影响,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用RT-qPCR检测凋亡蛋白酶激活因子1 (Apaf-1) mRNA的表达,用Western blot检测caspase-3及其前体和活化体的蛋白水平。结果:形态学结果显示,随着用药剂量的增加,细胞皱缩和细胞核偏移越明显,凋亡小体在5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L剂量组明显增多。Apaf-1 mRNA的表达增加,caspase-3及其前体的表达和cleaved caspase-3的蛋白水平随着用药剂量的增加逐渐增加(P 0. 01)。结论:Nodosin能够诱导Hep G2细胞凋亡。该作用可能是通过增加Apaf-1 mRNA的表达继之激活caspase-3实现的。     

姜黄素影响鼻咽癌细胞5-8F增殖凋亡能力及机制研究

探讨姜黄素对鼻咽癌细胞5-8F增殖凋亡的影响及作用机制。以人鼻咽癌细胞为研究对象,分别用0、5、10、20、40μmol/L的姜黄素作用于鼻咽癌细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,并计算半数抑制浓度。用半数抑制浓度的姜黄素作用于鼻咽癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中B细胞淋巴瘤/白血病2(B-cell lymphoma/Leukemia 2,Bcl-2)、β连环蛋白(β-catenin)、c-Myc表达水平。5、10、20、40μmol/L的姜黄素作用后细胞的存活率明显降低,与0μmol/L姜黄素作用组相比有明显差异(P0.05)。计算半数抑制浓度为(17.83±1.25)μmol/L,后续实验中选用18μmol/L的姜黄素继续研究。18μmol/L的姜黄素作用后的鼻咽癌细胞凋亡率明显高于0μmol/L姜黄素作用组(P0.01)。18μmol/L的姜黄素作用后的鼻咽癌细胞中Bcl-2、β-catenin、c-Myc表达水平均明显低于0μmol/L姜黄素作用组(P0.01)。由此姜黄素能够抑制人鼻咽癌细胞增殖,促进癌细胞凋亡,作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

丹参酮ⅡA抑制马兜铃酸诱导HUVECs凋亡及其可能机制

目的观察丹参酮ⅡA(TSN)对马兜铃酸(AA)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)凋亡的保护作用及其可能机制。方法体外培养HUVECs,设对照组、AA刺激组(AA终浓度为10 mg/L)、TSN干预组(先加入0.2、0.4和0.8 mg/L TSN,1 h后再加入AA)和LY294002预处理组(20μmol/L的PI3K抑制剂LY294002预处理30 min后,再加入TSN)。24 h后,MTT法检测细胞增殖;Hoechst33258荧光染色观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双荧光染色流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞Bcl-2、Bax和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达及比色法测定细胞caspase-3活性。结果与对照组相比,AA引起细胞凋亡率显著增加(P0.05),细胞Bcl-2和p-Akt表达降低(P0.05),细胞Bax表达升高(P0.05);TSN能减轻AA对细胞凋亡率及对细胞Bcl-2、Bax和p-Akt表达的作用(P0.05);PI3K抑制剂LY294002可抑制TSN的抗凋亡作用(P0.05)。结论 TSN可抑制AA诱导的HUVECs凋亡。     

褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨褐藻素对HSC-T6细胞生长和凋亡的影响。方法:将HSC-T6细胞分为空白对照组、阴性对照组及药物组,用不同浓度的褐藻素培养HSC-T6细胞。采用CCK-8检测在24 h、48 h和72 h褐藻素对HSC-T6细胞活力变化的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot法分别检测Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果:与空白对照组相比,CCK-8检测的结果表明,褐藻素在一定浓度范围内(15~75μmol/L)内能显著抑制HSC-T6细胞的活力(P0.01),呈剂量和时间依赖性。流式细胞术结果显示,24 h后高浓度(60μmol/L)组对HSC-T6细胞周期影响的效果显著(P0.01),G_1期比例显著下降(P0.01),G_2期和S期的比例显著升高(P0.01),48 h后低浓度(15μmol/L)和中浓度(30μmol/L)组对HSC-T6细胞周期的阻滞作用增强,呈剂量依赖性(P0.05);低、中、高浓度组早期凋亡率和总凋亡率都显著升高,呈剂量依赖性(P0.05)。蛋白印迹法实验结果表明,低、中、高浓度组Bax的蛋白表达显著上调,中、高浓度组Bcl-2的蛋白表达显著下调(P0.05)。结论:褐藻素可以通过使细胞周期阻滞于S期和G2期而抑制HSC-T6细胞生长;同时能通过下调Bcl-2和上调Bax的表达而诱导HSC-T6细胞凋亡。     

越桔原花青素调控脑胶质瘤细胞生长的机制研究*

 目的： 探讨越桔原花青素对脑胶质瘤细胞生长的影响。方法: 培养脑胶质瘤C6细胞,将其分为对照组以及10、20和40 μg/L越桔原花青素组,MTT法检测药物对C6细胞生长的影响,倒置显微镜观察细胞生长的变化,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡率的变化,免疫细胞化学法检测Bcl-2与Bax蛋白表达,Western blotting检测Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达。结果: 在24、48和72 h时,10、20和40 μg/L越桔原花青素均抑制C6细胞的生长,24和48 h时40 μg/L越桔原花青素组、72 h时20和40 μg/L越桔原花青素组细胞生长明显受抑制 (均P＜0. 01);倒置显微镜观察发现,各药物组细胞密度随药物浓度升高而减少;Annexin V/PI分析显示,细胞的凋亡率亦随着药物浓度的增加而明显增加;细胞免疫组化结果显示,10、20和40 μg/L越桔原花青素组中,C6细胞表达Bcl-2蛋白减少,表达Bax蛋白增加,但均无明显差异;Bax/Bcl-2的比值随着药物浓度升高而增加（P＜0.05或P＜0.01）; Western blotting结果显示,10、20和40 μg/L越桔原花青素组中,随着药物浓度升高,细胞表达Bcl-2蛋白减少（P＜0.01）而Bax和caspase-3蛋白表达均增加,Bax/Bcl-2的比值也明显增加（P＜0.01）。结论: 越桔原花青素抑制脑胶质瘤C6细胞的生长,其作用机制与调控Bax蛋白增加和Bcl-2蛋白减少,使Bax/Bcl-2比值增加,从而激活caspase-3,诱导凋亡发生有关。