肺脏树突状细胞表面共刺激分子在小鼠哮喘模型中的表达

目的 通过检测哮喘小鼠肺组织中树突状细胞(dendritic cells,DC)表面共刺激分子的表达以及细胞因子分泌的能力,探讨哮喘发生免疫耐受缺陷的原因.方法 Balb/c小鼠60只,分为3组(每组20只):哮喘组、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组、健康对照组.对3组小鼠取肺组织做病理观察,行支气管肺泡灌洗液(BALF)计数细胞并分类,ELISA检测血清特异性IgE(sIgE)及BALF中细胞因子的水平.分离、培养肺脏DC,用流式细胞仪(FACS)测CD11c表达,并进一步用FACS分析哮喘小鼠DC表面共刺激分子CD11cCD80、CD11cCD86表达的变化.结果 哮喘小鼠肺组织表现为以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润为主的炎症改变,BALF中嗜酸性粒细胞计数显著增加(P＜0.01),血清sIgE水平显著升高(P＜0.01).与PBS对照组比较,哮喘小鼠CD11cCD80、CD11cCD86表达上调(P＜0.01),其分泌IL-10细胞因子的水平明显下降.结论 肺脏DC可能通过上调CD11cCD80、CD11cCD86在哮喘的免疫耐受缺陷中发挥作用.     

红霉素对小鼠髓样树突状细胞表面免疫分子表达的影响

目的探讨红霉素体外对小鼠骨髓来源树突状细胞(DCs)的表面分子Ⅱ类组织相容性抗原(MHCⅡ)和共刺激分子表达的影响。方法用重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(IL-4)联合诱导培养小鼠骨髓来源的单个核细胞分化成未成熟DCs后随机分为对照组(A)和红霉素干预组(B),2组均予肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激,红霉素干预组同时按100μg/ml的终质量浓度加入红霉素干预,2组再培养24 h后用流式细胞仪检测技术检测DCs的MHCⅡ和共刺激分子表达。结果红霉素干预组的DCs表面分子MHCⅡ和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达水平明显低于对照组(P0.05)。结论红霉素可下调小鼠骨髓来源DCs的MHCⅡ和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达。     

罗勒多糖对树突状细胞表面分子表达的影响

目的：观察罗勒多糖对人外周血单核细胞来源的树突状细胞（Dendritic cell，DC）表面分子表达的影响，探讨其抗肿瘤免疫机制。方法：从正常人外周血分离获得单核细胞，加入含10％胎牛血清、CM-CSF及IL-4的RPMI1640，37℃培养5天，实验组加入罗勒多糖，对照组加入PBS，流式细胞仪检测细胞表面分子的表达。结果：在细胞因子的诱导下，CD14^＋单核细胞逐渐分化为DC，罗勒多糖作用组与对照组DC均表达CD209、CD80、CD83、CD86、CD1a和HLA-DR，与对照组相比，罗勒多糖组DC表面分子CD80和HLA-DR的表达均明显上调。结论：罗勒多糖能够调节DC表面分子CD80和HLA-DR的表达，这可能是罗勒多糖发挥其抗肿瘤免疫的机制之一。     

miR-147对老龄小鼠巨噬细胞表达促炎性细胞因子的影响

目的探讨miR-147对老龄化小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法腹腔注射LPS,用ELISA方法检测老年小鼠和年轻小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。分离的老年和年轻小鼠腹腔巨噬细胞经LPS刺激,用实时定量PCR方法检测miR-147的表达水平。在巨噬细胞中过表达和抑制表达miR-147,用ELISA方法检测细胞培养上清中IL-6和TNF-α的表达水平。结果腹腔注射LPS后,老年小鼠血清中促炎性细胞因子IL-6和TNF-α均显著高于年轻小鼠(P0.05)。分离出的腹腔巨噬细胞经LPS刺激后,年轻小鼠细胞中miR-147的表达水平显著上调(P0.05),而在老年小鼠中没有明显变化。巨噬细胞中过表达miR-147后,IL-6和TNF-α的表达水平均显著下降(P0.05),而抑制miR-147的表达,两者均显著上升(P0.05)。结论老年小鼠巨噬细胞中miR-147的表达异常可能是老龄化小鼠表达促炎性细胞因子异常的重要机制。     

miR-23a对LPS诱导小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

 目的 探讨miR-23a对LPS诱导小鼠原代腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响。方法 Real-time PCR定量分析LPS刺激不同时间的腹腔巨噬细胞中miR-23a的表达以及瞬时转染miR-23a mimics和inhibitors的腹腔巨噬细胞中IL-1?、IL-6和TNF-?等促炎性细胞因子的表达;ELISA检测mRNA变化明显的细胞培养上清的IL-6的含量。结果 原代腹腔巨噬细胞在LPS刺激后,miR-23a的表达明显下调;在转染miR-23a mimics后,IL-6的表达和分泌明显升高 (P <0.05),但对IL-1?和TNF-?的表达没有明显影响。而转染miR-23a inhibitors后,则IL-6的表达水平受到抑制。结论 LPS刺激原代巨噬细胞可抑制miR-23a的表达;miR-23a可促进炎性细胞因子IL-6的表达,对IL-1?和TNF-?无显著影响。     

转染IL-10的树突状细胞对小鼠哮喘气道表达的影响

研究小鼠重组腺病毒载体Ad-mIL-10及其转染的树突状细胞(dendritic cell,DC)对小鼠哮喘模型气道炎症的影响,探讨其相关的发病机制。用基因工程的方法构建小鼠IL-10腺病毒重组体Ad-mIL-10,并转染小鼠骨髓来源的DC。以卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏小鼠并雾化吸入激发的方法制作小鼠哮喘模型。第一次腹腔OVA致敏后静脉给予Ad-mIL-10、Ad-EGFP、Ad-EGFP转染的DC或Ad-mIL-10转染的DC,并设立哮喘模型制作对照组,观察各组小鼠血液、肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中的CD3+T细胞中的IL-10+IL-4-的Tr细胞及IL-10+IL-4+的Th2细胞比例变化,ELISA方法测定外周血及肺泡灌洗液中的IFN-γ、IL-4、IL-10水平,以观察Th1、Th2细胞的数量、功能变化以及IL-10的变化。结果显示Ad-mIL-10、Ad-EGFP、Ad-EGFP-DC对哮喘模型小鼠体内Tr细胞和Th2细胞的数量及肺部炎症局部的Th1及Th2细胞功能无明显影响;Ad-mIL-10转染的DC可以诱导哮喘模型小鼠体内IL-4-IL-10+的Tr细胞的增加及IL-4+IL-10+的Th2细胞的减少,并抑制哮喘模型小鼠肺部Th2细胞的功能,但对Th1细胞的功能无明显影响。提示单独应用Ad-mIL-10静脉注射产生高浓度的IL-10并不能诱导Tr细胞分化和抑制Th2细胞的激活。Ad-mIL-10转染的DC可以诱导原始T细胞向Tr细胞方向分化,并抑制Th2细胞的数量和功能。     

IL-25在小鼠哮喘中通过Nuocyte细胞诱导Th2炎性细胞因子的表达

目的研究哮喘气道炎性因子IL-25通过nuocyte细胞对Th2炎性细胞因子的影响。方法建立小鼠哮喘模型,分离并培养nuocyte细胞,将nuocyte细胞分为PBS对照组、IL-25处理组、抗IL-25组,体外给予IL-25和抗IL-25处理。ELISA方法检测细胞上清液IL-5和IL-13的含量;Western blot检测细胞IL-5和IL-13蛋白表达;RT-PCR检测IL-5和IL-13 mRNA表达;流式细胞计数测定nuocyte细胞数量。结果 IL-25处理组nuocyte细胞IL-5及IL-13在蛋白和基因水平的表达均比对照组和抗IL-25组IL-5及IL-13表达水平高(P0.05);IL-25处理组nuocyte细胞数量高于对照组及抗IL-25组(P0.05)。结论 IL-25在小鼠哮喘中可通过nuocyte细胞诱导IL-5和IL-13的表达,促进哮喘的发生和发展。     

COPD大鼠肺树突细胞表面分子的表达与相关细胞因子的关系

目的 探讨不同的树突状细胞(DCs)亚群在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠肺实质中的表达及其与肺T淋巴细胞亚群、血清细胞因子水平的相互关系.方法 用熏烟80天的方法制作COPD大鼠模型,通过免疫组化的方法分别检测大鼠肺实质的DCs表面分子标记物CD11c、S-100和共刺激分子CD80、CD86、MHCⅡ类分子的表达及T细胞的数量,同时测定血清中IL-10、IL-18的水平.结果 COPD组大鼠肺实质DCs和T细胞数量、血清IL-10及IL-18的水平和对照组比较,差异均有统计学意义;S-100和DCs数量与T细胞数量呈负相关,CD80、MHCⅡ类分子、CD4+T细胞与血清IL-10以及IL-18水平均有相关性.结论 COPD大鼠肺DCs可能通过T细胞、细胞因子的相互作用参与了COPD的发病机制.     

小鼠可溶性CD83对树突状细胞表达共刺激分子和共刺激活性的影响

目的：研究可溶性小鼠CD83（mCD83）对树突状细胞（DC）表达共刺激分子及共刺激活性的影响。方法：克隆mCD83基因，构建mCD83胞外功能区与人IgG1αFc段融合基因的真核表达载体pmCD83-hIg，并在COS-7细胞中表达可溶性mCD83-hIg融合蛋白。采用ELISA、Western blot和RT-PCR技术检测mCD83-hIg融合基因在COS-7细胞中的表达。用mCD83-hIg处理小鼠DC细胞系（DC2．4）采用流式细胞术检测DC细胞周期、细胞凋亡和共刺激分子CD80、CD86的表达影响；采用混合白细胞培养试验，检测mCD83-hIg对DC2．4刺激同种异基因T细胞增殖及产生IL-2和IFN-γ的影响。结果：酶切和序列测定鉴定显示构建的真核表达载体完全正确；mCD83-hIg对DC2．4细胞周期和细胞凋亡无影响，但可下调DC2．4表面共刺激分子CD80和CD86的表达；mCD83-hIg处理过的DC2．4刺激同种异基因T细胞增殖及产生IL-2和IFN-γ的能力显著下降。结论：mCD83-hIg可抑制DC表达共刺激分子并下调DC共刺激活性，从而抑制同种异基因T细胞增殖和产生细胞因子。     

促甲状腺素释放激素对小鼠脾细胞产生细胞因子的影响

观察促甲状腺素释放激素在体内和体外对小鼠脾细胞产生ＩＮＦ和ＩＬ－２的影响。结果表明，正常小鼠每天腹腔注射ＴＲＨ０．２μＧ／只，共１０ｄ，其脾细胞受ＣｏｎＡ刺激产生的ＩＮＦ和Ｉ Ｌ－２产量无显著增高，对氢化可的松处理的免疫抑制小鼠，加用以上剂量，ＴＲＨ后，其脾细胞产生ＩＮＦ和ＩＬ－２的能力明显提高。     

吴茱萸碱对小鼠树突状细胞分泌细胞因子的影响

目的:利用抗体芯片技术和ELISA检测吴茱萸碱(EVO)对小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)分泌相关细胞因子的影响,研究EVO的生物学调节功能。方法:体外诱导培养未成熟DC细胞(iDC),经LPS和EVO处理后,通过混合淋巴反应检测DC诱导异源T细胞的应答能力,ELISA检测上清中IL-12p40、IL-12p70和IL-10,小鼠抗体芯片检测细胞上清中细胞因子。结果:EVO促进了iDC和成熟DC(mDC)抗原提呈功能(P0.05),对iDC、mDC的细胞因子IL-10、IL-12分泌功能无影响(P0.05),另外EVO处理iDC后上调大于2倍的细胞因子有7个(VEGF、DPPIV/CD26、IGF-Ⅰ、IL-17BR、MDC、Pro-MMP-9、Eotaxin-2),处理mDC后上调大于2倍的细胞因子有2个(Eotaxin-2、IL-13)。结论:EVO处理mDC和iDC后,细胞因子的分泌功能发生了明显改变,这些细胞因子影响着DC的抗原摄取、迁移、抗原提呈,为进一步寻找药物靶点提供了线索。     

促红细胞生成素对哮喘小鼠肺组织VEGF及ICAM-1表达的影响

目的探讨促红细胞生成素对哮喘小鼠肺组织血管内皮生长因子(VEGF)及细胞间黏附分子(ICAM)-1的影响。方法 36只BALB/c小鼠,雌雄不限,随机分为对照组、哮喘组和促红细胞生成素组,卵蛋白致敏的方法制备哮喘小鼠模型。用乙酰甲胆碱行支气管激发试验,测定各组小鼠气道阻力的变化;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),进行细胞总数计数及嗜酸性粒细胞计数,免疫组织化学和Western blot方法检测各组小鼠肺组织VEGF与ICAM-1的表达。结果促红细胞生成素能够降低哮喘小鼠的气道阻力,降低BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞数(P0.01)。免疫组织化学和Western blot的光密度值分析结果显示,促红细胞生成素组小鼠肺组织VEGF与ICAM-1蛋白表达的平均光密度值显著低于哮喘组小鼠(P0.01)。结论促红细胞生成素可降低哮喘小鼠气道阻力及肺内炎症,与下调VEGF与ICAM-1的蛋白表达相关。     

iNKT细胞联合卵清蛋白对髓源性树突状细胞表型和功能的影响

目的:观察哮喘小鼠恒定自然杀伤T细胞(iNKT细胞)联合卵清蛋白(OVA)对髓源性树突状细胞(BMDCs)表型和功能的影响。方法:取健康雄性野生型BLAB/c小鼠BMDCs,分别与哮喘小鼠脾脏iNKT细胞联合OVA(iNKT细胞联合OVA组)、脂多糖(LPS组)、iNKT细胞联合PBS(iNKT细胞联合PBS组)、OVA(OVA组)或PBS(PBS组)共培养20 h,采用流式细胞术检测各组BMDCs表面分子MHC-II、CD80、CD86和CD40的表达水平,ELISA法检测培养上清液中白细胞介素12(IL-12)p70、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-10的水平;取各组共培养后的BMDCs,与DO11.10转基因小鼠脾CD4~+ T细胞共培养48 h,采用ELISA法检测培养上清液中IL-4和干扰素γ(IFN-γ)的水平。结果:iNKT细胞联合OVA组BMDCs表面分子MHC-II、CD80、CD86和CD40及培养上清液IL-12 p70、IL-6和TNF-α水平与LPS组比较差异无统计学显著性(P0.05),但明显高于iNKT细胞联合PBS组、OVA组和PBS组(P0.05或P0.01);iNKT细胞联合OVA组BMDCs与DO11.10 CD4~+ T细胞共培养上清液IL-4水平与LPS组比较差异无统计学显著性(P0.05),但明显高于iNKT细胞联合PBS组、OVA组和PBS组(P0.01)。结论:存在OVA时,iNKT细胞可以诱导BMDCs表型和功能的免疫原性成熟。     

核转录因子RelB抑制途径对骨髓树突状细胞表面分子表达的影响研究

目的探讨核转录因子RelB抑制途径对小鼠骨髓树突状细胞（bone marrow dendritic cells）的表面分子表达的影响,为致耐受树突状细胞的研究提供新方法。方法 rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导培养体系培养小鼠骨髓树突状细胞,免疫磁珠方法纯化;用慢病毒载体制备RelB shRNA慢病毒,与小鼠骨髓树突状细胞共培养,流式细胞术观察树突状细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40的表达,设LPS-DC对照组、未处理组和LPSRNAi RelB DC组。结果核转录因子RelB抑制的树突状细胞表面分子MHC-II、CD86和CD40均低水平表达,显著低于成熟DC表面分子的表达（P〈0.05）,且经LPS刺激后（LPS RNAi RelB DC）DC表面上述三类分子的表达水平仍显著低于LPS-DC组（P〈0.05）,与未处理组（immature DC）表面分子表达水平相当。结论核转录因子RelB抑制的骨髓树突状细胞表面分子表达水平低,呈现出致耐受的树突状细胞的特点,是致耐受树突状细胞研究的一种新方法。     

TGFβ1基因转染对大鼠树突状细胞分子表型和细胞因子分泌的影响

目的：研究转化生长因子β1（TGFβ1）基因转染大鼠树突状细胞（DC）表面分子表达以及细胞因子分泌的影响。方法：构建TGFβ1重组真核表达质粒TGFβ1-pcDNA3，以脂质体Amine介导转染大鼠骨髓DC，经过Western blot、RT-PCR、免疫细胞化学以及免疫荧光染色检测转染效率，应用FACS和免疫细胞化学等方法检测TGFβ1-DC分子表型以及细胞因子分泌的变化。结果：结果显示TGFβ1基因转染后可得到一定数量稳定的TGFβ1-DC，并获得有效TGFβ1的mRNA和蛋白表达。并发现TGFβ1-DC表面RT1B、B7-2、ICAM-1和OX62等分子表达均明显低于对照组，TGFβ1-DC分泌的Th2型细胞因子TGFβ1和IL-10的表达明显高于反义TGFβ1转染对照组，而Th1型细胞因子IL-12的合成则受到一定程度的下调。结论：TGFβ1基因转染可调节大鼠骨髓DC分子表型和细胞因子的分泌，增强DC的免疫耐受性，在器官移植治疗中有应用前景。     

γ-促分泌酶抑制剂对哮喘小鼠肺组织IL-4表达的影响

目的探讨γ-促分泌酶抑制剂对哮喘模型小鼠肺组织白介素-4表达的影响。方法选取30只BALB/c小鼠,随机分为对照组、哮喘组和γ-促分泌酶抑制剂阻断组。免疫组织化学方法和ELISA方法检测各组小鼠肺组织内IL-4的表达。结果哮喘组小鼠肺组织IL-4的表达水平显著高于正常对照组(0.01),但是在应用γ-促分泌酶抑制剂处理后,哮喘组小鼠肺组织IL-4的表达水平显著下调(0.01)。结论静脉注射γ-促分泌酶抑制剂能降低哮喘小鼠肺组织IL-4的表达。     

树突状细胞特异表面分子DC-SIGN的研究进展

DC-SIGN是一种特异表达于树突状细胞(DC)表面的Ⅱ型跨膜蛋白,在机体生理和病理免疫调节中发挥着重要作用,可以与ICAM-3结合,从而介导DC与T细胞的相互作用,其CRD区可以与HIV-1、HCV、结核杆菌等多种病原体表面糖蛋白结合,从而促进病原体感染。最近的研究表明DC-SIGN与肿瘤免疫、免疫逃避也密切相关。     

小鼠树突状细胞表面PD-L1分子对T淋巴细胞协同刺激效应的研究

目的：琛讨小鼠髓系DCs表面PD-L1分子在树突状细胞介导T细胞免疫应答中的作用。方法：采用流式细胞术分别检测未成熟DCs和凋亡肿瘤细胞负载并经CD40配基化的成熟DCs表面免疫分子的表达；混合淋巴细胞反应(MLR)和抗PD-L1单抗阻断试验分析未成熟DCs和成熟DCs表达的PD-L1分子对T淋巴细胞的协同刺激／抑制效应；^3H-TdR掺入试验检测未成熟DCs和成熟DCs对T淋巴细胞的促增殖效应；ELISA测定各组MLR反应上清中IL-10、IFN-γ的分泌水平；MTT比色法检测成熟DCs激发的肿瘤抗原特异性CTL对肿瘤细胞的杀伤效应。结果：未成熟DCs表面高表达PD-L1，负性调节未成熟DCs对自体T淋巴细胞的促增殖作用，抑制T细胞分泌IL-10、IFN-γ；凋亡肿瘤细胞负载并经CD40配基化的成熟DCs中等水平表达PD-L1，具有显著增强对自体T细胞的体外激发、扩增和细胞毒效应的作用，并可增加T细胞的IFN-γ分泌。结论：未成熟DCs高表达PD-L1抑制了对T细胞共刺激效应；CD40配基化成熟的DCs中度表达。PD-L1有助于激发T细胞介导免疫应答。     

可溶性小鼠BTLA对树突状细胞表面B7-1和B7-2表达的影响

目的研究可溶性小鼠B/T淋巴细胞弱化因子（murine B and T lymphocyte attenuator ，mBTLA）-人IgG1 Fc融合蛋白（mBTLA-hIg）对树突状细胞表面共刺激分子表达的影响。方法克隆mBT／A基因，构建mBTLA胞外功能区和人IgG1Fc融合基因的真核表达载体（pmBTLA-hIg），并采用脂质体转染法，将pmBTLA-hIg质粒转染小鼠树突状细胞系（DC2．4）。采用RT-PCR、ELISA和Westem blot分别检测pmBTLA-hIg质粒转染DC中mBTLA基因mBNA的表达及细胞培养上清中mBTLA-hIg融合蛋白的表达；采用流式细胞术检测pmBTLA-hIg质粒转染对DC2．4表面共刺激分子B7-1（CD80）和B7-2（CD86）表达的影响。结果成功克隆了小鼠BT／A基因，并构建了真核表达载体；mBTLA-hIg融合基因转染的DC高表达mBTLA-hIg融合蛋白，并可结合到DC表面。表达可溶性mBTLA-hIg融合蛋白的DC2．4表面B7．1的表达上调，B7-2的表达下调，而且这种改变可被兔抗GST-mBTLA血清阻断。结论可溶性mBTLA-hIg融合蛋白对DC细胞表面研分子的表达具有调节作用，可能是BTLA反向信号作用于DC的结果。     

哮喘小鼠模型肺组织nuocytes和Th9相关分子受体表达水平的变化及意义

目的分析nuocytes转录因子RORα及其分泌的细胞因子受体特异性结合链和Th9特征性细胞因子在哮喘小鼠肺组织表达的变化,探讨nuocytes对Th9细胞极化的影响,了解哮喘时肺组织对nuocytes和Th9细胞的应答状态。方法采用qRTPCR法检测RORα、IL-4Rα、IL-5Rα、IL-13Rα1、IL-13Rα2、IL-9和IL-9R等m RNA表达水平;对2类细胞特征性细胞因子受体表达水平的相关性及其与Ig E的表达水平的关系进行统计学分析。结果在哮喘小鼠模型中,RORα、IL-5Rα、IL-13Rα2和IL-9、IL-9R的m RNA表达水平均明显升高;相关性分析发现,IL-9及其受体的m RNA水平与RORα、IL-5Rα和IL-13Rα2 m RNA水平呈明显正相关,肺组织总Ig E的水平也随之增加。结论在哮喘小鼠肺组织中nuocytes和Th9相关分子及其受体优势表达,反映肺组织对2类细胞的积极应答状态,其在哮喘炎症中的作用由此可见一斑。