顺铂联合黄芪甲苷对乳腺癌大鼠炎性因子及免疫功能的影响

目的探讨顺铂联合黄芪甲苷对乳腺癌大鼠炎性因子及免疫功能的影响。方法选取健康雌性未孕SD大鼠45只,将7,12-二甲基苯并蒽溶于橄榄油中,每周灌胃1次(25 mg/kg),连续4 w诱导大鼠乳腺癌模型,然后随机将其分为模型组、顺铂组、顺铂联合黄芪甲苷组(联合用药组,n=15)。模型组给予生理盐水灌胃及腹腔注射生理盐水(5 ml/kg),顺铂组给予生理盐水灌胃(5 ml/kg)及腹腔注射顺铂(2 mg/kg)、联合用药组给予黄芪甲苷(2 mg/kg+12 g/kg)灌胃及腹腔注射顺铂(2 mg/kg),灌胃1次/d、腹腔注射1次/3 d,连续治疗21 d,次日处死动物取血和肿瘤组织。采用酶联免疫吸附试验检测乳腺癌大鼠外周血及肿瘤组织中干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-2、IL-1、IL-6的水平;采用流式细胞仪检测乳腺癌大鼠外周血中CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+的水平。结果与模型组比较,顺铂组、联合用药组外周血及肿瘤组织中IL-2、IFN-γ、CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+的水平明显升高,IL-1、IL-6、TNF-α、CD8~+水平明显降低,联合用药组升高或降低均较顺铂组明显(P<0.05)。结论顺铂联合黄芪甲苷治疗乳腺癌大鼠作用优于顺铂单纯用药,其机制可能与联合用药有效上调免疫因子IL-2、IFN-γ、CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+水平,下调IL-1、IL-6、TNF-α、CD8~+水平有关。     

秦皮乙素对Lewis肺癌小鼠凋亡及Wnt/β-catenin通路的影响

目的 观察秦皮乙素对Lewis肺癌小鼠凋亡及Wnt/β-catenin通路的影响.方法 右腋皮下注射Lewis肺癌细胞复制小鼠Lewis肺癌模型,分为模型组、顺铂组、秦皮乙素高剂量组及秦皮乙素低剂量组,每组12只.顺铂组(1 mg/kg)腹腔注射给药,秦皮乙素高剂量组(100 mg/kg)及秦皮乙素低剂量组(50 mg/kg)灌胃给药,模型组灌胃等体积溶媒;造模后第2天开始给药,1次/d.给药14 d后,测定瘤质量,凋亡率,Bax及Bcl-2 mRNA表达,caspase3、8和9活性,β-catenin、Cyclin D1和c-Myc蛋白表达.结果 与模型组比较,顺铂组、秦皮乙素高剂量组及秦皮乙素低剂量组瘤质量、Bcl-2 mRNA表达均显著降低,而细胞凋亡率、Bax mRNA表达显著增加,caspase3、8和9活性均显著增加,而β-catenin、Cyclin D1和c-Myc蛋白表达显著降低(均P<0.05).结论 秦皮乙素可以通过诱导凋亡及抑制Wnt/β-catenin通路激活,发挥抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤生长的作用.     

连翘酯苷对顺铂作用后豚鼠耳蜗Caspase-3表达的影响

目的观察连翘酯苷对顺铂作用后豚鼠耳蜗Caspase-3表达的影响。方法 30只豚鼠随机分为对照组、顺铂组和连翘酯苷组各10只。顺铂组腹腔注射顺铂8 mg/kg,1次/d,连续7 d,建立顺铂耳毒性模型;连翘酯苷组每次注射顺铂30 min前腹腔注射连翘酯苷25.0 mg/（kg·d）,对照组以生理盐水代替顺铂溶液注射,均连续7 d。实验动物被处死前,检测其畸变产物耳声发射（DPOAE）幅值变化;分别采用Western blot、RT-PCR法检测豚鼠耳蜗组织中的Caspase-3蛋白及其mRNA。结果顺铂组DPOAE幅值明显低于对照组（P〈0.01）;相比于顺铂组,连翘酯苷组DPOAE幅值明显升高（P〈0.05）。顺铂组豚鼠耳蜗Caspase-3蛋白与mRNA表达水平均显著高于对照组（P均〈0.01）;相比于顺铂组,连翘酯苷组Caspase-3蛋白与mRNA表达水平明显降低（P均〈0.05）。结论连翘酯苷能够通过降低Caspase-3的表达防护顺铂所致的耳蜗损伤。     

大蒜素对卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP增殖的影响及机制

目的探讨大蒜素对卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP凋亡的影响及机制。方法将SKOV-3/DDP细胞随机分为四组,大蒜素组加入40μg/mL的大蒜素,顺铂组加入40μg/mL的顺铂,联合组加入大蒜素和顺铂各40μg/mL,对照组不干预。各组分别培养24、48 h。采用MTT法检测各组细胞增殖抑制率;RT-PCR法测定Bax、Bcl-2mRNA表达;Western blot法测定Bax、Bcl-2蛋白表达。结果顺铂组、大蒜素组、联合组各时点(24 h、48 h)增殖抑制率明显高于对照组,联合组明显高于大蒜素组、顺铂组,P均<0.05。顺铂组、大蒜素组、联合组各时点Bax mR-NA和蛋白水平明显高于对照组,大蒜素组、联合组Bcl-2 mRNA和蛋白水平明显低于对照组,P均<0.05;顺铂组48 h Bcl-2蛋白明显高于对照组,P<0.05;联合组各时点Bax mRNA和蛋白水平明显高于、Bcl-2 mRNA和蛋白水平明显低于对照组,P均<0.05。结论大蒜素诱导SKOV-3/DDP凋亡作用优于顺铂,两者联合具有协同作用,其机制可能为上调Bax表达和下调Bcl-2表达有关。     

小柴胡汤联合紫杉醇对人口腔鳞癌细胞凋亡机制的影响

目的通过检测人口腔鳞癌细胞CAL27荷瘤小鼠血清及肿瘤组织内的凋亡相关蛋白,探讨小柴胡汤联合紫杉醇对人口腔鳞癌细胞凋亡机制的影响。方法取培养的人口腔鳞癌CAL27细胞,制成2×106/20μl CAL27细胞悬液,接种于雄性9周龄BALB/c裸鼠右前肢腋窝皮下,待肿瘤长至0.5 cm×0.5 cm时,随机分为肿瘤对照组(灌胃给予生理盐水+腹腔注射生理盐水)、小柴胡汤组(灌胃给予小柴胡汤+腹腔注射生理盐水)、紫杉醇组(灌胃给予生理盐水+腹腔注射紫杉醇)、联合用药组(灌胃给予小柴胡汤+腹腔注射紫杉醇)各12只;每组灌胃及腹腔注射量均为0.1 ml,小柴胡汤组50 g/kg、紫杉醇30 mg/kg连续隔天给药7次,于最后一次给药后第2天处死小鼠,眼球取血及肿瘤组织。采用酶联免疫吸附试验和免疫组织化学法检测荷瘤小鼠血清和肿瘤组织中B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)含量及蛋白阳性表达强度。结果与肿瘤对照组比较,小柴胡汤、紫杉醇、联合用药组血清及肿瘤组织中Bcl-2蛋白含量及蛋白阳性表达强度均明显降低,且依次降低趋势明显(P0.05),Bax蛋白含量及蛋白阳性表达强度均明显升高,且依次升高趋势明显(P0.05)。结论小柴胡汤除自身的抗肿瘤作用得到验证,联合紫杉醇用药还能起到增强剂的作用,更好地诱导细胞凋亡通路。     

筋骨草水煎液灌胃对顺铂所致肾损伤的预防作用观察

目的 探讨筋骨草水煎液对顺铂所致肾损伤的预防作用。方法 取成年雄性昆明小鼠30只，随机分为对照组、顺铂组、筋骨草组，每组各10只。筋骨草组给予筋骨草水煎液灌胃，对照组和顺铂组给予生理盐水灌胃，每天1次，连续12 d；于实验第7天筋骨草水煎液灌胃2 h后，顺铂组和筋骨草组给予10 mg/kg顺铂一次性腹腔注射诱导肾损伤。处死小鼠，取肾脏，用HE染色观察肾组织病理学改变；采集血液，使用全自动生化分析仪测定BUN、Cr、CysC,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β；取肾组织，WST-1法检测SOD,TBA法检测MDA，微板法检测GSH;RT-qPCR法检测氧化应激（Nrf2、HO-1、NQO1）、凋亡（Bcl-2、Caspase-3、Bax）相关mRNA表达。结果 与对照组比较，顺铂组肾小球体积增大，肾小管上皮细胞明显肿胀；血清BUN、Cr、CysC、TNF-α、IL-1β水平升高；肾组织MDA含量升高，SOD和GSH含量降低；肾组织Nrf2、HO-1、NQO1、Caspase-3、Bax mRNA表达上调，Bcl-2 mRNA表达下调。与顺铂组比较，筋骨草组肾组织病理损伤减轻；血清...     

二甲双胍联合顺铂对人肺癌裸鼠移植瘤治疗作用的研究

目的 研究二甲双胍联合常用的化疗药物顺铂对于人肺癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用及对生存素(Survivin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和Ki67分子表达的影响,致力于探索治疗肺癌的新的有效药物.方法 建立肺癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为二甲双胍组、顺铂组、二甲双胍联合顺铂组及对照组,给药42 d后,处死动物,留取肿瘤组织,免疫组织化学法及实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织中Survivin、MMP-2和Ki67蛋白及mRNA的表达.结果 二甲双胍组、顺铂组和二甲双胍联合顺铂组抑瘤率分别为28.97％、35.34％和54.65％.与对照组比较,顺铂组及二甲双胍联合顺铂组Survivin、MMP-2和Ki67蛋白及mRNA表达水平均降低(P值均＜0.05),二甲双胍组MMP-2蛋白及mRNA表达水平降低(P值均＜0.05);与二甲双胍组、顺铂组比较,二甲双胍联合顺铂组Survivin、MMP-2和Ki67蛋白及mRNA表达水平均降低(P值均＜0.05).结论 二甲双胍组可抑制MMP-2的表达,顺铂组及二甲双胍联合顺铂组均可抑制Survivin、MMP-2和Ki67的表达,二甲双胍和顺铂联合应用可以增强抗肿瘤的疗效.     

黄芪甲苷通过抑制氯化物细胞内通道蛋白4/ADP核糖基化因子6信号通路改善血管紧张素Ⅱ诱导的高血压大鼠模型的心肌损伤

目的 探究黄芪甲苷在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压大鼠模型中的心肌保护作用及其机制。方法 将60只SD大鼠分随机分为6组,每组10只：对照组,模型组,黄芪甲苷低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高剂量(50 mg/kg)组和ADP核糖基化因子6(Arf6)特异性抑制剂(NAV-2729)组。建立AngⅡ诱导高血压心肌损伤大鼠模型后给予不同药物或剂量处理2周后,观察各组大鼠左心室舒张末期内径、心脏射血分数及短轴缩短率、心肌病理损伤、心肌细胞凋亡以及相关凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子-2(Bcl-2)及Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达情况。另选30只SD大鼠随机分为3组,每组10只：氯化物细胞内通道蛋白4(CLIC4)过表达联合黄芪甲苷组、腺病毒阴性对照联合黄芪甲苷组及腺病毒阴性对照组。先通过尾静脉注射相应腺病毒,再用AngⅡ诱导高血压模型。2周后观察大鼠左心室舒张末期内径、心脏射血分数及短轴缩短率、心肌病理损伤、心肌细胞凋亡情况。结果 与模型组大鼠比较,中剂量和高剂量的黄芪甲苷能够改善AngⅡ诱导的高血压心肌损伤模型大鼠的心脏功能及心肌结构,促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达(0...     

黄芪甲苷灌胃预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨黄芪甲苷灌胃预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用。方法将100只大鼠随机分为三组,最终90只大鼠造模成功,其中假手术组29只,模型组30只,干预组31只。假手术组与模型组给予普通饲养+生理盐水(2 ml·kg-1·d-1)灌胃,干预组给予普通饲养+黄芪甲苷(10 mg·kg-1·d-1)灌胃。造模时,假手术组大鼠只在冠状动脉左室支左心耳下缘约0.5 cm处穿线,不结扎;模型组及干预组大鼠给予结扎。于灌注24 h后采用TUNEL法计算细胞凋亡指数(AI),比较Bax、Bcl-2以及半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白的表达。结果三组间AI、Bax、Bcl-2以及caspase-3蛋白比较差异表达(均P0.05),进一步两两比较,模型组及干预组的AI、Bax、Bcl-2以及caspase-3蛋白的表达显著高于假手术组,模型组的AI、Bax、caspase-3蛋白表达显著高于干预组,Bcl-2蛋白表达显著低于干预组(均P0.05)。结论在大鼠心肌缺血再灌注过程中存在明显的细胞凋亡过程,在此过程中,黄芪甲苷可能通过上调Bcl-2的表达、降低Bax的表达实现其对心肌细胞的保护作用。     

三氧化二砷联合维生素C对耐药性肺腺癌裸鼠移植瘤Caspase-3、Survivin活性的影响

目的 探索三氧化二砷( AS2O3)联合维生素C( Vit C)对人耐药性肺腺癌裸鼠移植瘤抑制作用及其可能机制.方法 建立裸鼠人耐药性肺腺癌移植瘤模型,随机分为对照组,VitC组(250 mg/kg),1.5 mg/kg AS2O3,3 mg/kg AS2O3,AS2O3+ Vit C组(AS2O3 1.5 mg/kg+ Vit C250 mg/ks),腹腔注射药物2 w并观察记录各组裸鼠移植瘤的生长情况及肿瘤体积和裸鼠体重的变化,计算肿瘤生长抑制率.2w后,取瘤组织进行免疫组织化学染色检测Caspase-3、Survivin蛋白的阳性率.用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)及Western印迹检测移植瘤内Caspase-3、Survivin的表达情况.结果 与对照组相比,AS2 O3各组、AS2O3+ Vit C组治疗后肿瘤体积减少,瘤质量减轻,差异均有显著性(P＜0.01);与AS2 O3单独用药组比较,联合用药组肿瘤体积,瘤质量明显减少(P＜0.01),抑瘤率明显增高;而Vit C组治疗后肿瘤体积及瘤质量没有明显减少.免疫组化显示Caspase-3蛋白阳性率增加,Survivin蛋白阳性率减低.RT-PCR及Western印迹结果显示:联合组与AS2O3组、Vit C组比较Survivin表达强度显著减小,Caspase-3表达强度显著增强.结论 AS2O3+ Vit C联合用药比AS2O3单独应用抑制耐顺铂肺癌移植瘤生长的作用更强,二者具有协同抗癌作用,其机制可能与下调Survivin及上调Caspase-3的表达有关.两者联用有望成为低毒高效的化疗组合.     

EZH2抑制剂联合顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨EZH2抑制剂UNC1999联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法传代培养人肺癌A549细胞系,取生长良好的传代细胞分为对照组、联合用药组、顺铂组和UNC1999组。所有组均给予RPMI 1640培养液及10%的胎牛血清培养,对照组不加药液,联合用药组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L UNC1999药液及2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;UNC1999组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的UNC1999药液;采用MTT比色法检测各组细胞增殖抑制率中IC50及联合指数(CI)。Western印迹法检测各组相关凋亡蛋白及细胞外调节蛋白激酶(ERK)及p-ERK的表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,UNC1999组、顺铂组、联合用药组细胞增殖均受到不同程度抑制(P0.05)。各组细胞增殖抑制作用存在剂量-时间依赖关系,且UNC1999与顺铂存在协同作用。UNC1999组、顺铂组、联合用药组与对照组比较细胞凋亡差异显著(P0.05)。UNC1999组、顺铂组、联合用药组中凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显升高,p-ERK蛋白表达明显降低,联合用药组Bcl-2表达低于对照组(P0.05)。结论 EZH2特异性抑制剂UNC199可能通过抑制MAPK-ERK细胞通路起到抑制肺癌A549细胞增殖,促进其凋亡,与顺铂单药或联合均具有协同效应。     

原花青素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关基因蛋白表达的影响

目的:观察原花青素对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B型白细胞/2型淋巴细胞样蛋白(Bcl-2)和凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达的影响,探讨原花青素在大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡中发挥的作用及可能的调控机制。方法:40只雄性SD大鼠随机等分为4组,即正常组,模型组,原花青素低剂量组[原花青素50 mg/(kg·d)],原花青素高剂量组[原花青素100 mg/(kg·d)],灌胃给药,每天1次,连续2周。末次给药后结扎冠状动脉左前降支(LAD)30 min再灌注120 min,建立大鼠心肌缺血再灌注模型。测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性、心肌梗死面积;用Western blot检测各组细胞凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡。结果:与正常组比较,模型组大鼠CK-MB活性显著增强、心肌梗死面积增大,心肌细胞凋亡指数升高,Caspase-3、Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax降低(P0.05);与模型组比较,原花青素高、低剂量组大鼠CK-MB活性显著减弱、心肌梗死面积减小,细胞凋亡指数显著降低,Caspase-3、Bax蛋白表达显著减弱,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax增加(P0.05)。结论:原花青素可拮抗缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与Caspase-3、Bax蛋白表达降低,Bcl-2表达升高,Bcl-2/Bax比例增加有关。     

宁夏密点麻蜥不同部位干预顺铂耐药胃癌模型裸鼠的效应及机制研究

目的:通过建立人胃癌耐药细胞株MKN-45/顺铂皮下瘤裸鼠模型，探讨宁夏密点麻蜥身体不同部位联合顺铂对顺铂耐药胃癌模型裸鼠的干预作用。方法:将36只BALB/c裸鼠均注射MKN-45/顺铂单细胞悬液于右前腋侧皮下制备胃癌裸鼠顺铂耐药模型。造模成功后随机分为模型组、顺铂组、宁夏密点麻蜥头部+顺铂组、宁夏密点麻蜥四肢+顺铂组、宁夏密点麻蜥躯干+顺铂组、宁夏密点麻蜥尾部+顺铂组共6组。除模型组外，余组均给予相应药物治疗28 d。测定各组裸鼠肿瘤体积大小、肿瘤重量及抑瘤率；分别采用免疫印迹法及免疫组织化学法检测各组裸鼠瘤组织中耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药蛋白1(MRP1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平；采用TUNEL法检测各组裸鼠瘤组织中耐药细胞凋亡情况。结果:与模型组比较，各给药组肿瘤重量均减轻(P<0.05),各给药组中P-gp、MRP1、Bcl-2的表达均显著降低(P<0.05),Bax的表达均显著增高(P<0.05),耐药细胞凋亡率均显著增高(P<0.05);与顺铂组比较，宁夏密点麻蜥不同部位+顺铂各组肿...     

黄芪多糖和水蛭素联合干预对巨噬细胞脂质积聚的影响及其机制

目的]明确黄芪多糖和水蛭素联合干预对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞内脂质积聚、线粒体膜电位和细胞凋亡相关蛋白的影响。 [方法]采用100 mg/L ox-LDL孵育RAW264.7细胞24 h建立泡沫细胞模型,采用优化浓度的黄芪多糖和水蛭素联合干预,设立对照组、模型组、黄芪多糖组、水蛭素组和二者联合干预组。采用油红O染色和氧化酶法检测ox-LDL诱导的巨噬细胞内胆固醇含量,流式细胞仪检测巨噬细胞早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率,激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位的变化,Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2及促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表达水平。 [结果]与水蛭素组、黄芪多糖组相比,黄芪多糖和水蛭素联合干预组细胞内胆固醇含量降低更明显(P＜0.05)。与模型组相比,黄芪多糖＋水蛭素联合干预组可显著降低ox-LDL诱导的巨噬细胞早期凋亡率和总凋亡率(P＜0.01)、上调巨噬细胞线粒体膜电位(P＜0.01),并显著降低Caspase-3和Bax蛋白表达量,升高Bcl-2蛋白表达量(P＜0.05)。 [结论]黄芪多糖和水蛭素联合干预可降低巨噬细胞内脂质积聚,且优于单独用药干预,两者联合干预可降低ox-LDL诱导的巨噬细胞凋亡率,其作用机制可能与调控线粒体膜电位和改善促凋亡蛋白Caspase-3、Bax以及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有关。     

藏红花酸预处理对心肌缺血大鼠凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax表达的影响

目的:研究藏红花酸预处理对心肌缺血大鼠凋亡相关蛋白bcl-2与bax表达的影响。方法:将30只Wistar雄性大鼠采用结扎冠状动脉左前降支的方法制备心肌缺血模型,缺血45min后,再灌注3h。后随机分为3组,每组10只。假手术组(Sham组)只穿线不结扎;缺血再灌注组(I/R组)0.5%CMC-Na按10ml/kg灌胃1周;藏红花酸组(CRO组)藏红花酸(50mg/kg)灌胃1周。实验结束后用TTC染色测定心肌的梗死面积;免疫组织化学方法检测心肌组织Bax、Bcl-2蛋白的表达;荧光定量PCR方法检测Bax、Bcl-2的mRNA表达。结果:与I/R组比较,CRO组梗死面积、Bax蛋白表达明显降低(P0.01),Bax mRNA表达降低(P0.05);Bcl-2蛋白表达、Bcl-2mRNA表达及Bcl-2/Bax的比值明显升高(P0.01)。结论:藏红花酸预处理对缺血再灌注损伤心肌细胞有保护作用,其机制可能与上调凋亡抑制蛋白Bcl-2、下调促凋亡蛋白Bax的表达有关。     

脑通汤对缺氧/复氧大鼠海马神经元Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的探讨脑通汤对缺氧/复氧(H/R)大鼠海马神经元Bcl-2、Bax和半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达的影响及防治海马神经元凋亡的作用机制。方法取培养9 d的海马神经元,随机分为正常细胞组、H/R模型组、正常血清组、脑通汤大、中、小剂量含药血清组。除正常细胞组以外,各组均缺氧24 h再复氧2 h造模。采用免疫组化检测海马神经元Bcl-2、Bax蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3基因的表达。结果免疫组化显示:与正常细胞比较,模型组Bcl-2蛋白表达下降、Bax蛋白表达明显升高、Bcl-2/Bax比值下调(P0.05)。与模型组比较,脑通汤大、中、小剂量含药血清组Bcl-2蛋白表达及Bcl-2/Bax比值明显增高,Bax蛋白表达明显下降,呈剂量依赖性(P0.05);但正常血清组上述指标无显著变化(P0.05)。实时荧光定量PCR显示:Bcl-2、Bax mRNA趋势同蛋白表达一致,Caspase-3 mRNA趋势同Bax mRNA表达一致。结论脑通汤可通过上调Bcl-2蛋白及基因表达和Bcl-2/Bax比值,抑制Bax及Caspase-3的过度表达,从而抑制H/R海马神经元凋亡。     

黄芩苷对糖尿病大鼠组织醛糖还原酶活性及肾脏细胞凋亡的影响

目的研究醛糖还原酶(AR)、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax与糖尿病肾病(DN)的关系,探讨醛糖还原酶抑制剂(ARIs)对DN的治疗作用。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、糖尿病组、依帕司他组、黄芩苷组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠腹腔注射STZ(60mg/kg),72h后建立糖尿病大鼠模型。依帕司他组灌胃依帕司他10mg.kg-1.d-1,黄芩苷组灌胃黄芩苷150mg.kg-1.d-1。16w后处死大鼠,测定晶体、肾脏组织AR活性,观察Bcl-2、Bax的表达,取部分肾皮质病理观察、电镜观察细胞凋亡的形态学变化。结果与正常对照组相比,糖尿病组晶体、肾脏皮质AR活性明显升高(P<0.001),两治疗组AR活性明显较糖尿病组降低(P<0.01),而血糖无明显变化。糖尿病组肾脏Bcl-2、Bax蛋白表达增加,治疗组的Bcl-2蛋白表达较糖尿病组增多,而Bax蛋白表达较糖尿病组减少。透射电镜下见糖尿病组肾脏肾小管上皮细胞呈典型的凋亡形态学改变,治疗组大鼠肾组织细胞凋亡改变明显减轻。糖尿病组肾小球基底膜增厚,系膜区域扩大,治疗组病变减轻。结论ARIs通过抑制AR活性,调节Bax、Bcl-2的表达抑制细胞凋亡,延缓DN的发展。黄芩苷对AR抑制作用与依帕司他相似。     

黑芥子苷通过p38/JNK MAPK信号通路对阿霉素心脏毒性的保护作用

目的:探讨黑芥子苷对阿霉素诱导的心脏毒性的作用及机制。方法:10周龄雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、黑芥子苷组、阿霉素组和黑芥子苷+阿霉素组。阿霉素组和黑芥子苷+阿霉素组给予单次腹腔注射阿霉素(15 mg/kg),对照组和黑芥子苷组给予单次腹腔注射生理盐水(15 mg/kg),黑芥子苷组和黑芥子苷+阿霉素组小鼠同时用黑芥子苷5 mg/kg灌胃,每2天1次,共3次。7 d后超声心动图检测心脏功能,Western blot检测心肌中凋亡相关蛋白和MAPK信号通路相关蛋白的表达水平。结果:黑芥子苷组与对照组小鼠超声心动图各指标、凋亡相关蛋白表达水平和MAPK相关蛋白表达水平的差异无统计学意义。与对照组相比,阿霉素组小鼠LVEDD、LVESD均明显增大,LVEF和LVFS均明显减小,Bax表达水平、p38和JNK的磷酸化水平明显升高,Bcl-2表达水平明显降低(P均<0.05)。与阿霉素组相比,黑芥子苷+阿霉素组小鼠LVEDD、LVESD均明显减小,LVEF和LVFS均明显增大,Bax表达水平、p38和JNK的磷酸化水平均明显降低,Bcl-2表达水平明显升高(P均<0.05)。结论:黑芥子苷通过p38/JNK MAPK信号通路减少心肌细胞凋亡,减轻阿毒素诱导的心脏毒性。     

黄芩茎叶总黄酮对阿尔茨海默病大鼠海马神经元Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对大鼠海马注射淀粉样蛋白Aβ25~35所致神经元Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法 40只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、SSTF 50 mg/kg、100 mg/kg组,每组10只。模型组、SSTF组大鼠于灌胃第8天双侧海马注射Aβ10μg,对照组大鼠海马注射生理盐水,大鼠于灌胃20 d后处死。采用TUNEL法观察大鼠海马神经元凋亡;免疫组化、Western印迹检测海马组织中Bax、Bcl-2的表达,采用光密度值(IOD)表示实验结果。结果模型组大鼠海马细胞凋亡IOD较对照组明显升高(P0.01),50、100 mg/kg给药组IOD较模型组明显降低(P0.01);免疫组化及Western印迹结果显示模型组Bax表达较对照组明显升高(P0.01),SSTF 50、100 mg/kg组Bax表达较模型组明显降低(P0.01);模型组Bcl-2较对照组明显降低(P0.01),SSTF 50、100 mg/kg组Bcl-2表达较模型组明显升高(P0.01)。结论大鼠海马注射Aβ25~35可引起海马神经元凋亡,其机制可能与Aβ上调凋亡基因Bax表达、降低抗凋亡基因Bcl-2表达有关。SSTF可减轻Aβ引起的神经元凋亡,其机制可能与其调控Bax、Bcl-2表达有关。     

组蛋白去乙酰化酶6抑制剂ACY1215对顺铂诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响

目的:观察组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)抑制剂ACY1215对顺铂诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响及其机制。方法:分别应用生理盐水、顺铂和ACY1215联合顺铂处理SMMC-7721细胞24h,光镜下观察各组细胞生长情况,RT-PCR检测各组细胞HDAC6基因的表达,Western blotting分析各组细胞微管蛋白(α-tubulin)、乙酰化微管蛋白(Acetyl-α-tubulin)、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)及增殖相关蛋白Cyclin D1的表达。结果:ACY1215联合顺铂对SMMC-7721细胞增殖的抑制明显高于单用顺铂。RT-PCR结果显示ACY1215联合顺铂组细胞HDAC6表达水平低于顺铂组(P0.05)。Western blotting结果显示,ACY1215联合顺铂组细胞促凋亡蛋白Bax表达量较顺铂组升高(P0.05),而抑凋亡蛋白Bcl-2和增殖相关蛋白Cyclin D1较顺铂组降低(P0.05);ACY1215联合顺铂组细胞Acetyl-α-Tubulin表达水平较顺铂组升高(P0.05)。结论:ACY1215具有增强顺铂诱导肝癌细胞凋亡的作用。