miR-31通过结合Dock180抑制乳腺癌细胞侵袭

目的 探讨miR-31表达与Dock180表达的相关性,以及miR-31通过结合Dock180对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法通过脂质体转染技术,将miR-31转染乳腺癌细胞系过表达miR-31;采用荧光酶报告基因检测miR-31与Dock180的结合方式;应用Western blot法检测miR-31表达不同的乳腺癌细胞中Dock180和其他相关蛋白的表达;RT-PCR检测miR-31与Dock180 mRNA的关系;基质胶侵袭实验检测miR-31过表达时,乳腺癌细胞的侵袭能力。结果 在乳腺癌细胞中,miR-31靶向结合Dock180,且Dock180蛋白表达与miR-31表达呈负相关,Dock180下调和miR-31上调削弱了乳腺癌的侵袭能力。结论miR-31可通过结合Dock180抑制乳腺癌细胞的侵袭。     

上皮-间质转化与乳腺癌干细胞

乳腺癌干细胞是导致乳腺癌复发、转移和耐药的根源之一。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)不仅赋予乳腺癌细胞迁移和侵袭特征,还可使癌细胞获得自我更新能力而具有干细胞的特性,从而促进乳腺癌干细胞的产生。EMT可以作为乳腺癌干细胞研究的一个新的切入点。本文就近年来该方面的研究进展做简要综述。     

SPIN1通过调控上皮-间质转化促进胃癌细胞的迁移、浸润

目的 明确SPIN1在胃癌细胞系中的表达情况及其对胃癌细胞迁移、浸润的作用,初步探究其可能的分子机制.方法 qRT-PCR检测SPIN1在5种胃癌细胞系中的表达情况;Transwell小室实验观察过表达及沉默SPIN1后细胞迁移和侵袭能力的变化;Western blot法检测过表达及沉默SPIN1后上皮-间质转化(ep...     

趋化因子SDF-1调控结直肠癌细胞上皮-间质转化

目的通过检测Twist、SDF-1、E-cadherin在结直肠癌及癌旁组织中的表达,探讨三者与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的相关性,为肿瘤的分子靶向治疗提供可能的靶标。方法收集结直肠癌和对应癌旁正常新鲜标本组织40例和结直肠癌组织及对应癌旁组织蜡块90例,利用免疫组化SP法和qRT-PCR法检测结直肠癌组织中SDF-1及EMT相关因子E-cadherin、Twist的表达,统计学分析SDF-1表达与E-cadherin、Twist表达之间的相关性。结果 qRT-PCR结果显示,与对应癌旁组织相比,结直肠癌组织中SDF-1、Twist mRNA的表达水平明显升高,而Ecadherin mRNA表达水平显著下降,差异有统计学意义(P0.05);结直肠癌组织中SDF-1、Twist的阳性率分别为75.56%、62.22%,明显高于对应癌旁组织,而E-cadherin在肿瘤中的阳性率为28.89%,显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(P0.05)。SDF-1表达与E-cadherin表达呈负相关,而与Twist表达呈正相关。结论趋化因子SDF-1高表达可能参与结直肠癌细胞的EMT过程,Twist高表达和Ecadherin低表达提示EMT现象参与结直肠癌的形成及转移过程,并促进肿瘤的生成和转移。     

miR-152通过靶向下调AGTR1抑制人肝癌细胞上皮间质转化及肾素-血管紧张素系统

目的 探讨微小RNA-152(miR-152)靶向血管紧张素Ⅱ1型受体(AGTR1)对肝癌HCCLM3细胞上皮间质转化(EMT)及肾素-血管紧张素系统(RAS)的影响。方法 将培养的HCCLM3细胞分为未转染组(未处理)、阴性对照组(转染阴性对照序列)和miR-152组(转染miR-152模拟物)。采用实时荧光定量PCR检测miR-152和血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、 AGTR1 mRNA表达,Transwell^TM小室检测细胞侵袭和迁移,Western blot法检测细胞波形蛋白(vimentin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和AGTR1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-152和AGTR1的靶向关系。结果 与未转染组或阴性对照组相比,miR-152组细胞miR-152表达水平和E-cadherin蛋白表达水平明显升高,而ACE、 AngⅡ、 AGTR1 mRNA表达水平和侵袭细胞数、迁移细胞数以及vimentin、 N-cadherin、 AGTR1蛋白表达水平均明显降低;双荧光...     

乳腺癌上皮间质转化标志物的研究进展

转移和复发是乳腺癌的主要死因.近年来研究发现,上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是乳腺癌转移的主要机制之一.EMT是指细胞由上皮表型向间质表型转变的过程,目前许多研究者报道了EMT相关的基因、蛋白、microRNA以及激酶等的改变与乳腺癌侵袭和转移的关系,然而到目前为止,有关EMT标志物与乳腺癌的关系缺乏系统的总结.本文就EMT标志物与乳腺癌侵袭和转移的关系进行综述.     

lncRNA GAS5 通过抑制MAPK / ERK 信号通路阻断乳腺癌细胞的上皮-间质转化过程

目的:探讨lncRNA GAS5对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及相关机制。方法:采用qPCR检测lncRNA GAS5在乳腺癌组织中和细胞系中的表达差异;Transwell实验和划痕实验分别检测lncRNA GAS5对乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响;Western blot检测lncRNA GAS5对EMT的影响以及潜在作用机制;裸鼠成瘤实验验证lncRNA GAS5对动物体内成瘤的影响。结果:与癌旁正常组织相比,lncRNA GAS5在乳腺癌组织中呈低表达,而且在MDA-MB-231细胞中的表达最低;lncRNA GAS5的上调显著减低了MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力;lncRNA GAS5的过表达使MDA-MB-231细胞中的E-cadherin蛋白显著升高,而N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白的表达显著降低,而使用MAPK/ERK信号通路的抑制剂U0126能抵消lncRNA GAS5对MDA-MB-231细胞EMT的影响;结论:lncRNA GAS5能通过抑制MAPK/ERK信号通路阻断乳腺癌细胞的上皮-间质转化过程。     

RASSF7表达与乳腺癌上皮-间质转化的关系

目的 探讨RASSF7在乳腺癌中的表达及与乳腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系.方法 采用免疫组化法检测80对乳腺癌及癌旁正常乳腺组织中RASSF7的表达,分析RASSF7表达与乳腺癌临床病理特征的关系.采用Western blot法检测8对新鲜乳腺癌...     

miR-211通过靶向调控TFAM抑制人乳腺癌细胞系增殖

目的探讨miR-211靶向线粒体转录因子A(TFAM)对人乳腺癌细胞增殖的影响。方法用miR-211及TFAM作为研究对象。首先,在乳腺癌细胞中转染miR-211 mimics或miR-211抑制剂以实现miR-211过表达或miR-211沉默,并检测miR-211过表达或沉默时TFAM蛋白质的表达水平;其次,构建了在TFAM的5'端有或无6对碱基突变的荧光酶报告基因质粒(mut-TFAM/wt-TFAM),与miR-211 mimics或miR-211抑制剂共转染后检测荧光酶活性变化;然后,构建pc DNA3.1/TFAM质粒,与miR-211 mimics或miR-211抑制剂共转染后检测TFAM蛋白质表达水平变化;最后,检测pc DNA3.1/TFAM和mimics NC/miR-211 mimics共转染后乳腺癌细胞增殖的增殖。结果miR-211过表达抑制TFAM蛋白质表达(P0.01),miR-211沉默促进TFAM蛋白质表达(P0.01);miR-211可靶向结合TFAM调控其表达;pc DNA3.1/TFAM可实现TFAM过表达(mRNA P0.01,蛋白质P0.01),并可恢复miR-211对TFAM的抑制作用;miR-211可抑制乳腺癌细胞的增殖和增殖(P0.05),TFAM可促进乳腺癌细胞增殖增殖(P0.01),TFAM可回复miR-211对乳腺癌细胞增殖增殖的抑制作用(P0.05)。结论 miR-211靶向TFAM基因抑制人乳腺癌细胞的增殖。     

姜黄素调控Wnt信号通路抑制胃癌细胞上皮间质转化的研究

目的探讨姜黄素对人胃癌细胞株BGC-823上皮间质转化(EMT)的影响机制。方法将细胞分为姜黄素干预组、TGF-β组、BGC-823细胞对照组、GES-1细胞对照组。采用姜黄素(10μmol/L)干预人胃癌细胞株BGC-823,通过MTT试验检测胃癌细胞增殖能力;通过Transwell小室试验检测胃癌细胞侵袭功能改变;通过Western blot检测各组细胞E-cadherin、Vimentin蛋白及Wnt信号通路相关蛋白表达。结果 TGF-β诱导能够促进人胃癌细胞株BGC-823增殖(P 0.05),胃癌细胞表现出更高的侵袭能力(P 0.01),而姜黄素干预后胃癌细胞的增殖及侵袭能力均明显受抑制。Western blot检测表明,TGF-β诱导干预后,BGC-823细胞E-cadherin、Vimentin蛋白水平升高,与此同时GSK3β、β-catenin及c-Myc的表达明显上调(P 0.01);姜黄素干预能有效抑制胃癌细胞EMT作用,Wnt信号通路蛋白水平显著下调(P 0.05)。结论姜黄素可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT作用,从而抑制肿瘤细胞的侵袭、转移,实现抗肿瘤作用。     

外泌体介导miR-335-5p通过靶向LKB1对胶质瘤细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨外泌体中microRNA-335-5p(miR-335-5p)被胶质瘤细胞摄取并作用于肝激酶B1(liver kinase B1, LKB1)影响胶质瘤细胞侵袭的分子机制。方法 通过外泌体提取试剂盒提取外泌体;运用透射电镜、粒度仪、Western blot法鉴定分离获取的外泌体;RT-PCR检测不同肿瘤细胞来源外泌体中miR-335-5p的表达量;外泌体摄取实验检测胶质瘤细胞对外泌体的摄取情况;Transwell实验检测加入外泌体后胶质瘤细胞的侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p是否靶向结合LKB1;Transwell实验检测转染miR-335-5p mimic后胶质瘤细胞的侵袭能力;Western blot法检测转染miR-335-5p mimic后胶质瘤细胞中LKB1和上皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和vimentin)的表达水平。结果 LN229细胞来源的外泌体中miR-335-5p表达水平明显高于H4细胞来源的外泌体;过表达miR-335-5p后LN229细胞侵袭能力增强;miR-335-5p靶向结合LKB1 mRNA...     

miR-489通过调控TWIST1的表达抑制结肠癌干细胞表型和上皮间质转换

目的探讨miR-489在结肠癌干细胞表型和上皮间质转换中的作用和调控机制。方法 RT-q PCR检测多个人结肠癌细胞系(HT29、SW480、SW620和HCT116)和正常肠道上皮细胞HIEC中miR-489表达;采用基因转染技术提高结肠癌细胞中miR-489表达,Western blot检测过表达miR-489对结肠癌干细胞标志物CD133、CD44、Ep CAM、ALDH1和上皮细胞标志物E-cadherin、间质细胞标志物vimentin和N-cadherin的表达;RT-q PCR和Western blot检测TWIST1 mRNA和蛋白表达水平。结果 4个结肠癌细胞系中的miR-489相对表达量显著低于正常肠道上皮细胞HIEC中的表达(P<0.05)。在HT29和HCT116细胞中过表达miR-489,4个结肠癌干细胞标志物表达降低(P<0.05);上皮细胞标志物表达增加(P<0.05);间质细胞标志物表达减少(P<0.05)。TWIST1是miR-489潜在靶基因,在2个细胞系中过表达miR-489,TWIST1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 miR-489在结肠癌细胞中低表达,过表达miR-489可能通过调控TWIST1抑制结肠癌干细胞表型和上皮间质转换。     

上皮-间质转化的信号转导机制

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)出现在各种生理和病理情况下,在胚胎发生与器官发育、肿瘤形成和转移以及纤维化过程中均有表现。TGF-β是EMT的一个重要诱导因素,其通过Smad和非Smad依赖通路对EMT的发生进行调节,对肿瘤的形成、转移和扩散起到了重要的作用。本文综述了近年来EMT信号转导机制的研究进展。     

miR-296-5p 靶向 PLK1 调控 PI3K/ AKT 通路诱导骨肉瘤细胞中的自噬并抑制上皮-间质转化

目的 探讨 miR-296-5p 靶向 PLK1 对骨肉瘤 (osteosarcoma, OS) 细胞自噬及抑制上皮-间质转化 (EMT) 的作用机制。 方法 qRT-PCR 检测 miR-296-5p 在 OS 细胞中的表达。 采用生物信息学分析预测 miR-296-5p 的靶基因, 验证 miR-296-5p 对靶基因 PLK1 的直接靶向调控; 细胞转染构建 miR-296-5p 过表达 和干扰细胞, CCK-8、 克隆形成、 Transwell 小室、 流式、 蛋白免疫印迹实验检测 miR-296-5p 的不同表达对 U2OS 细胞中 PTBP1 表达水平及细胞增殖、 侵袭、 凋亡、 自噬及 EMT 的影响。 结果 与对照组比较, miR-296-5p 在 OS 中表达降低, 而 PLK1 则升高 (P< 0. 05); 与 miR-NC 组比较, mimic 组的克隆形成率、 侵袭 细胞数目及 PTBP1、 p62、 N-cadherin、 Vimentin、 p-PI3K/ PI3K、 p-AKT/ AKT 水平降低, 细胞凋亡率、 Beclin-1、 LC3-Ⅱ/ Ⅰ、 E-cadherin 水平升高 (P< 0. 05); 与 PLK1 组比较, PLK1 + mimic 组的克隆形成率、 侵袭 细胞数目及 PTBP1、 p62、 N-cadherin、 Vimentin、 p-PI3K/ PI3K、 p-AKT/ AKT 水平降低, 细胞凋亡率、 Beclin-1、 LC3-Ⅱ/ Ⅰ、 E-cadherin 水平升高 (P< 0. 05)。 结论 miR-296-5p 可能能够靶向 PLK1 调控 PI3K/ AKT 通路诱导 OS 细胞中的自噬并抑制 EMT。     

髓源性抑制细胞通过诱导上皮-间质转化促进鼻咽癌细胞的侵袭转移

目的研究髓源性抑制细胞(myeloid derived suppressor cells,MDSC)与鼻咽癌细胞上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)的关系及对鼻咽癌细胞侵袭转移的影响。方法用流式细胞技术检测16例鼻咽癌患者以及9例健康对照者骨髓中MDSC所占比例,并分离鼻咽癌组织中MDSC;将MDSC与鼻咽癌细胞株CNE-2共培养,观察CNE-2细胞形态学的改变;应用q RT-PCR技术从RNA水平检测共培养前后CNE-2细胞上皮-间质转化相关基因(E-cadherin,N-cadherin,Vimentin,Snail)的改变;进一步采用Western blot技术从蛋白水平检测其表达变化;继而通过transwell小室及划痕实验检测MDSC对CNE-2细胞侵袭转移能力的影响。结果鼻咽癌患者骨髓中MDSC所占比例(10.37%)明显高于健康对照者(1.65%);MDSC与CNE-2细胞共培养后,CNE-2细胞在形态学上发生EMT;q RT-PCR和Western blot分别从RNA和蛋白水平证实CNE-2细胞上皮表型的相关基因(E-cadherin)表达下调,间质表型的相关基因(N-cadherin,Vimentin,Snail)表达上调;transwell小室侵袭实验证实共培养后CNE-2细胞的侵袭能力增强;划痕实验证实共培养后CNE-2细胞的迁移能力增强。结论 MDSC通过诱导EMT促进鼻咽癌细胞的侵袭转移能力。     

microRNA-155通过靶向抑制C/EBP-β和TAB2调控趋化因子的表达

目的明确microRNA(miR)-155对趋化因子CCL5、CXCL9、CXCL10、CCL20和CCL22表达的调控作用及其靶基因。方法培养RAW264.7细胞,向细胞内转染寡聚核苷酸(包括miR-ctrl、miR-155 mimics和miR-155 inhibitor)或靶基因保护子(包括C/EBP-β-TP~(miR-155)、TAB2-TP~(miR-155)和SOCS1-TP~(miR-155)),并用1μg/ml LPS刺激细胞活化,用RT-PCR、ELISA和Western blotting方法检测趋化因子及miR-155靶基因表达情况。结果 (1)miR-155抑制LPS活化的RAW264.7细胞分泌CXCL9、CXCL10和CCL20(P0.05),而促进上述细胞分泌CCL22(P0.05);(2)C/EBP-β和TAB2分别是miR-155调控CXCL9和CXCL10表达的靶基因。结论 miR-155可通过调控趋化因子的表达参与调控免疫炎症反应。     

DDX5通过上皮-间质转化促进人乳腺癌细胞侵袭

目的 探究DEAD box RNA解旋酶-5(DEAD-box helicase 5, DDX5)蛋白对乳腺癌MCF-7细胞侵袭转移作用的影响及其机制。方法 利用慢病毒感染法,构建过表达Flag-DDX5的人乳腺癌MCF-7稳转细胞系,划痕实验和Transwell实验检测DDX5蛋白过表达后对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响;Western blot实验检测上皮-间质转化(EMT)标志物上皮-钙黏蛋白(E-cadherin),纤维连接蛋白(Fibronectin),波形蛋白(Vimentin)的表达。结果 成功构建了稳定过表达DDX5的乳腺癌MCF-7稳转细胞系;DDX5蛋白过表达后,乳腺癌细胞迁移和侵袭能力明显增强,乳腺癌细胞E-cadherin的表达明显下调,Fibronectin与Vimentin的表达明显上调。结论 DDX5可能参与乳腺肿瘤细胞EMT过程,促进乳腺癌的恶性转移,进而影响乳腺癌的进程。     

miR-128-3p过表达靶向MAPK1抑制膀胱癌5637细胞株的侵袭，迁移和上皮间质转化

目的　研究miR-128-3p过表达对膀胱癌5637细胞株的侵袭,迁移和上皮间质转化影响。 方法　基因预测软件TargetScan筛选出miR-128-3p的靶基因,荧光素酶报告实验验证;RT-PCR检测miR-128-3p和MAPK1的表达,Transwell检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、ERK1/2、c-Myc和c-fos的表达,免疫荧光检测Vimentin的表达;裸鼠皮下注射建立移植瘤模型,30 d后检测瘤重量,绘制存活曲线,检测移植瘤中Vimentin、miR-128-3p、MAPK1、ERK1/2、c-Myc和c-fos的量。 结果　miR-128-3p靶向抑制MAPK1表达;miR-128-3p过表达后,侵袭细胞数目、伤口愈合率降低,E-cadherin表达上调,N-cadherin表达下调,Vimentin阳性率减少,p-ERK1/2、c-Myc和c-fos表达下调。经miR-128-3p干预,裸鼠体内移植瘤重量减轻,存活率增加,miR-128-3p表达上调,MAPK1的表达下调,Vimentin阳性率减少,p-ERK1/2、c-Myc和c-fos表达下调。 结论　过表达miR-128-3p通过靶向抑制MAPK1表达来抑制膀胱癌细胞5637的侵袭能力、迁移能力、上皮-间充质转化和ERK1/2、c-Myc和c-fos通路。     

miR-128-3p过表达靶向MAPK1抑制膀胱癌5637细胞株的侵袭，迁移和上皮间质转化

目的　研究miR-128-3p过表达对膀胱癌5637细胞株的侵袭,迁移和上皮间质转化影响。 方法　基因预测软件TargetScan筛选出miR-128-3p的靶基因,荧光素酶报告实验验证;RT-PCR检测miR-128-3p和MAPK1的表达,Transwell检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、ERK1/2、c-Myc和c-fos的表达,免疫荧光检测Vimentin的表达;裸鼠皮下注射建立移植瘤模型,30 d后检测瘤重量,绘制存活曲线,检测移植瘤中Vimentin、miR-128-3p、MAPK1、ERK1/2、c-Myc和c-fos的量。 结果　miR-128-3p靶向抑制MAPK1表达;miR-128-3p过表达后,侵袭细胞数目、伤口愈合率降低,E-cadherin表达上调,N-cadherin表达下调,Vimentin阳性率减少,p-ERK1/2、c-Myc和c-fos表达下调。经miR-128-3p干预,裸鼠体内移植瘤重量减轻,存活率增加,miR-128-3p表达上调,MAPK1的表达下调,Vimentin阳性率减少,p-ERK1/2、c-Myc和c-fos表达下调。 结论　过表达miR-128-3p通过靶向抑制MAPK1表达来抑制膀胱癌细胞5637的侵袭能力、迁移能力、上皮-间充质转化和ERK1/2、c-Myc和c-fos通路。