香叶木素通过NF-ＫB 通路缓解IL-1Ｂ诱导的新生大鼠骨关节炎软骨细胞凋亡和免疫反应

目的:本研究旨在探索香叶木素对IL-1β诱导的新生大鼠骨关节炎软骨细胞凋亡及免疫反应的影响及其分子机制。方法:软骨细胞分为4组:对照组;香叶木素(20μmol/L)组; IL-1β(50 ng/ml)组; Diosm(20μmol/L)+IL-1β(50 ng/ml)组。流式细胞术检测细胞凋亡。蛋白印迹分析Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶-13(MMP-13),蛋白聚糖、NF-κB P65和p-NF-κB P65蛋白水平。ELISA检测一氧化氮(NO)、前列腺素E2(PGE2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。免疫荧光染色观察NF-κB P65细胞定位。结果:香叶木素可改善IL-1β诱导的新生大鼠骨关节炎软骨细胞变形及细胞数目的下降。IL-1β组细胞凋亡率明显高于对照组(P0. 05)。与IL-1β组相比,Diosm+IL-1β组细胞凋亡率明显下降(P0. 05)。与对照组相比,IL-1β组Ⅱ型胶原和蛋白聚糖蛋白水平下降,MMP-13蛋白水平上升(P0. 05)。与IL-1β组相比,Diosm+IL-1β组Ⅱ型胶原和蛋白聚糖蛋白水平升高,MMP-13蛋白水平降低(P0. 05)。而且,IL-1β组NO、PGE2和TNF-α水平高于对照组(P0. 05)。Diosm+IL-1β组NO、PGE2和TNF-α水平低于IL-1β组(P 0. 05)。与对照组相比,IL-1β组p-P65/P65上升(P 0. 05)。Diosm+IL-1β组p-P65/P65低于IL-1β组(P0. 05)。另外,香叶木素会降低IL-1β诱导的新生大鼠骨关节炎软骨细胞NF-κB P65从细胞质向细胞核的转运。结论:香叶木素通过抑制NF-κB通路活化缓解IL-1β诱导的新生大鼠骨关节炎软骨细胞凋亡和免疫反应。     

熊果酸对肝纤维化大鼠NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化的影响

目的观察熊果酸(UA)对肝纤维化模型大鼠肝内胶原沉积的改善作用及其对NADPH氧化酶2(NOX2)/活性氧簇(ROS)/NLRP3炎性小体活化的影响。方法将大鼠随机分为对照组、CCl4模型组及UA治疗组。用CCl4诱导构建SD大鼠肝纤维化模型,一半用作UA治疗组。用试剂盒检测血清ALT含量;HE染色观察肝脏病理;天狼星红染色观察肝内胶原沉积;RT-q PCR法检测Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA表达量;Western blot及免疫组化检测肝脏中NOX2、NLRP3、casepase-1 p45、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达;DCFH-DA荧光探针法检测肝脏组织内ROS水平。结果与对照组相比,CCl4模型组血清ALT水平升高(P0.05),Ishak's肝纤维化评分明显上升,胶原沉积明显增多(P0.05),Nox2、Nlrp3、Caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显上升(P0.05);NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白的表达均出现明显增加,肝组织内ROS含量增加(P0.05);与CCl4模型组相比,UA治疗组血清ALT含量下降(P0.05),肝脏Ishak's肝纤维化评分及胶原沉积减少(P0.05),Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显下降(P0.05),NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达明显下降,肝脏组织内ROS水平显著改善(P0.05)。结论 UA减轻肝脏炎性反应并减少肝内胶原沉积,其机制可能与其抑制肝纤维化大鼠肝内NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化及IL-1β的释放减少有关。     

哌拉西林钠对CCl_4诱导的大鼠急性肝损伤的保护作用及机制研究

目的:探究哌拉西林钠(PS)对CCl_4诱导的大鼠急性肝损伤的作用及机制。方法:将40只大鼠随机分为对照组(Control,Ctrl)、PS组、四氯化碳(CCl_4)组和CCl_4+PS组,PS组和CCl_4+PS组每天腹腔注射PS(1 g/kg),连续给药7 d后,CCl_4组和CCl_4+PS组大鼠腹腔注射CCl_4溶液(1 ml/kg)。48 h后处死大鼠,试剂盒检测血清丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(ALT)、白介素-6(IL-6)、IL-1β和IL-10的浓度,并检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)的水平,Western blot检测Bcl-2和Bax表达,免疫组化检测凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果:与Ctrl组比较,CCl_4组大鼠肝组织出现损伤,血清ALT和AST含量明显升高;与CCl_4组比较,CCl_4+PS组大鼠肝组织损伤减轻,ALT和AST浓度显著降低; CCl_4组大鼠血清炎症因子IL-6和IL-1β的浓度明显高于Ctrl组,IL-10浓度明显降低; CCl_4+PS组IL-6和IL-1β的浓度较CCl_4组比较明显降低,IL-10浓度明显升高;同时,CCl_4还能明显降低肝组织SOD和GSH浓度,升高MDA浓度,PS能显著升高模型大鼠SOD和GSH浓度,降低MDA浓度;此外,CCl_4能显著降低Bcl-2的表达水平及Bcl-2/Bax的比值,升高Bax和Caspase-3的表达水平; PS能显著减弱CCl_4对Bcl-2、Bax和Caspase-3的调控作用。结论:PS能通过抑制氧化应激减轻CCl_4诱导的大鼠急性肝损伤。     

青藤碱缓解氧化应激和炎症反应对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用

目的:本研究旨在探索青藤碱对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠的影响。方法:小鼠随机分为4组:健康对照组(Ctrl),青藤碱组(Sinomenine),CCl_4模型组(CCl_4),青藤碱处理组(CCl_4+Sinomenine)。利用四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠模型。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、白细胞介素(IL-6)、IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF-α)水平。苏木素伊红(HE)染色观察肝脏组织病变。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色检测肝脏组织细胞凋亡。蛋白印迹检测Bcl-2和Bax表达。结果:CCl_4模型组ALT和AST水平高于对照组(P0. 01)。与CCl_4模型组相比,青藤碱处理组ALT和AST水平下降(P0. 01)。青藤碱可缓解四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝脏组织病变。CCl_4模型组细胞凋亡高于对照组(P0. 01)。青藤碱处理组细胞凋亡低于CCl_4模型组(P0. 01)。与对照组相比,CCl_4模型组Bcl-2表达减弱,Bax表达增强(P0. 01)。与CCl_4模型组相比,青藤碱处理组Bcl-2表达上升,Bax表达下降(P0. 01)。与对照组相比,CCl_4模型组SOD和GSH水平降低,MDA水平升高(P0. 01)。与CCl_4模型组相比,青藤碱处理组SOD和GSH水平上升,MDA水平下降(P0. 01)。CCl_4模型组IL-6,IL-1β和TNF-α水平高于对照组(P0. 01)。青藤碱处理组IL-6、IL-1β和TNF-α水平低于CCl_4模型组(P0. 01)。结论:青藤碱可减轻四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠肝损伤、细胞凋亡、氧化应激及炎症反应。     

益气化瘀柔肝方通过调控NLRP3炎性小体活性缓解CCl_4诱导的大鼠肝纤维化

目的研究益气化瘀柔肝方(Yiqi Huayu Rougan Recipe, YHR)对CCl_4诱导的大鼠肝纤维化的影响及分子机制。方法将SD大鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组,YHR低、中、高剂量(5.4、10.8、21.6 g/kg)组。末次给药后,收集大鼠血清和新鲜肝脏组织,运用生化法检测大鼠血清ALT、AST、ALP含量;ELISA法检测血清HA、LN、Hyp和促炎性因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)水平;采用HE染色和Masson染色法观察大鼠肝组织病理变化;采用RT-qPCR和Western blot法检测肝组织TLR4、NF-κB和炎性小体相关分子的mRNA和蛋白表达水平。结果秋水仙碱和各剂量组的YHR均能不同程度的减少大鼠血清酶谱含量以及肝纤维化指标水平,降低促炎性因子水平,且YHR高剂量组最为明显;秋水仙碱组和YHR各剂量组均能显著改善肝纤维化大鼠的病变程度,且肝组织中的TLR4、NF-κB和炎性小体相关分子的表达均减少。结论 YHR具有缓解CCl_4诱导的大鼠肝纤维化的作用,其药效作用机制可能与调控NLRP3炎性小体信号通路活性有关。     

慢性间歇性低氧激活NLRP1炎性小体引起小鼠肝损伤

目的 探讨慢性间歇性低氧(CIH)是否能激活含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白1(NLRP1)炎性小体引起肝损伤。方法 将C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、 CIH组。CIH组小鼠放入CIH仓进行造模(每天8 h,连续4周)。造模后,采用HE染色观察肝组织细胞形态、试剂盒检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,二氢乙啶(DHE)标记检测肝组织活性氧(ROS)的水平,免疫组织化学染色法检测小鼠肝组织NLRP1、含胱天蛋白酶激活和募集结构域凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(caspase-1)的表达和定位,Western blot法检测小鼠肝组织中NLRP1、 ASC、 caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的蛋白表达,ELISA检测小鼠血清IL-1β、 TNF-α水平。结果与对照组相比,CIH组肝细胞病变明显,细胞出现破裂、坏死、炎症细胞聚集,ALT、 AST、 ROS、 IL-1β和TNF-α水平显著升高;NLRP1、 ASC、caspase-1、IL-1β和TNF-α的蛋白表达升高。结...     

槲皮素抑制糖尿病大鼠炎症小体激活并减轻心肌损伤

目的:研究槲皮素对糖尿病心肌病(DCM)大鼠NLRP3炎症小体激活的抑制作用及对心肌的保护作用。方法:40只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组(10只)和造模组(30只)。造模组一次性腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg),建立糖尿病(DM)模型,每周测血糖,4周后测随机血糖,将随机血糖≥16.6 mmol/L的大鼠选入模型。将模型组大鼠随机分为DM组、DM+溶剂对照组和DM+槲皮素组,DM+槲皮素组每日给予槲皮素(100 mg/kg)灌胃。第16周末行超声检测心功能后麻醉处死大鼠,通过HE染色和Masson染色观察大鼠心肌组织形态学变化,Western blot、ELISA和免疫组化等方法观察NLRP3、ASC、caspase-1、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18等指标的变化,TUNEL染色观察心肌凋亡情况。结果:槲皮素显著抑制了糖尿病大鼠心肌中炎症小体的激活,DM+槲皮素组较DM组和DM+溶剂对照组的心肌组织中胶原含量明显降低,IL-1β和IL-18蛋白表达水平明显下降,减少了心肌凋亡(P0.05),心功能得到明显改善。结论:槲皮素显著抑制了NLRP3炎症小体的激活,降低了炎症水平,从而减轻了DCM大鼠心肌的损伤。     

自体富血小板血浆对骨关节炎模型兔软骨细胞凋亡及NLRP3/IL-1β通路的影响

目的:探究富血小板血浆(PRP)对兔骨关节炎的作用及可能的机制。方法:制备膝骨关节炎兔模型,分为模型组、玻璃酸钠(SH)组和PRP组,另设假手术组,每组6只兔。观察兔软骨大体形态,进行半定量评分;HE染色观察软骨病理形态并进行半定量评分;TUNEL染色观察软骨组织细胞凋亡情况;免疫组化法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/白细胞介素1β(IL-1β)通路相关蛋白的表达;Western blot法检测caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达情况;分离软骨细胞,分组处理后采用ELISA测定细胞NLRP3和IL-1β水平。结果:与假手术组相比,模型组的Pelletier评分,Mankin评分,软骨细胞凋亡率,NLRP3、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1和IL-1β蛋白阳性表达率,以及caspase-3和Bax蛋白水平均显著升高(P0. 05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P0. 05)。与模型组相比,SH组和PRP组的Pelletier评分,Mankin评分,软骨细胞凋亡率,NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β蛋白阳性表达率,以及caspase-3和Bax蛋白水平均显著降低(P0. 05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P0. 05)。PRP组的Pelletier评分,Mankin评分,软骨细胞凋亡率,NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β蛋白阳性表达率,以及caspase-3和Bax蛋白水平均低于SH组,Bcl-2蛋白水平高于SH组(P0. 05)。细胞培养实验中,与对照组相比,NLRP3抑制剂MCC950组NLRP3及IL-1β表达显著降低(P0. 05),IL-1β抑制剂eucalyptol组NLRP3表达无明显变化(P0. 05),IL-1β表达显著降低(P0. 05)。结论:富血小板血浆能够促进骨关节炎模型兔受损软骨的修复,效果优于SH,其机制可能与抑制NLRP3/IL-1β通路并减少软骨细胞凋亡有关。     

胰岛素处理促进糖尿病大鼠肾皮质骨形成蛋白和激活蛋白膜结合抑制物(BAMBI)表达并抑制炎症反应

目的研究胰岛素控制糖尿病(DM)大鼠血糖后, DM大鼠肾皮质骨形成蛋白和激活蛋白膜结合抑制物(BAMBI)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、凋亡相关的斑点样蛋白2(ASC-2)、胱天蛋白酶1(caspase-1)及炎性介质和相关纤维化指标的表达情况。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、 DM组及胰岛素处理组。链脲佐菌素(STZ)复制DM大鼠模型,每组8只, DM成模4周后,胰岛素处理组予以皮下注射胰岛素[8 U/(kg·次)],每天3次,连续注射6周后处死大鼠。免疫组织化学染色检测肾皮质BAMBI、 NLRP3、上皮钙黏素(E-cadherin)的表达, Western blot法检测肾皮质BAMBI、 NLRP3、 ASC-2、 caspase-1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(Col4)蛋白的表达,实时定量PCR检测肾皮质中BAMBI、 NLRP3的mRNA水平, ELISA检测肾皮质中白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-18的水平。采用Spearman秩相关检验对BAMBI和NLRP3蛋白表达进行相关性分析。结果与正常对照组相比, DM组肾皮质NLRP3的mRNA和蛋白水平及ASC-2、 caspase-1的蛋白水平升高,α-SMA、 FN、 Col4蛋白表达也升高,而BAMBI的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白表达降低,胰岛素处理组NLRP3的蛋白和mRNA水平及ASC-2、 caspase-1的蛋白水平低于DM组,α-SMA、 FN、 Col4蛋白表达也低于DM组,而BAMBI的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白表达高于DM组;胰岛素处理组IL-1β、 IL-18的水平较DM组降低,相关性分析显示在DM组以及胰岛素处理组中BAMBI和NLRP3的表达呈负相关。结论胰岛素处理可恢复DM大鼠肾皮质中BAMBI的表达,进而抑制NLRP3炎性体激活,减轻DM大鼠肾脏的炎症反应,阻止或延缓糖尿病肾病的病程进展。     

大鼠急性心肌梗死后NLRP3炎性体-IL-1β信号轴激活与End-MT的关系

目的:研究在急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)引发的心肌纤维化过程中,NLRP3炎性体-IL-1β信号轴的激活与内皮-间充质转化(endothelial-mesenchymal transition,End-MT)是否存在同一性。方法:30只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=15)与AMI组(n=15),术后28 d采用Masson染色检测心肌纤维化水平;Western blot检测NLRP3炎性体(NLRP3、ASC、pro-caspase-1和caspase-1)、内皮细胞标志物(CD31和VE-cadherin)及间充质细胞标志物(α-SMA和FSP1)的表达;酶联免疫吸附法检测NLRP3炎性体下游因子IL-1β的表达。结果:与假手术组相比,冠脉结扎组AMI大鼠心肌纤维化水平、End-MT进展程度、NLRP3炎性体活性及caspase-1和IL-1β的表达均显著增加(P0.05)。结论:NLRP3炎性体-IL-1β信号轴的激活与End-MT进程具有显著同一性,提示NLRP3炎性体-IL-1β作为激活End-MT的潜在靶点将为研究AMI后心肌纤维化及心力衰竭提供新的理论依据。     

香叶木素对非酒精性脂肪肝病幼鼠的保护作用

目的　探索香叶木素对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病幼鼠的影响。 方法　高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝病大鼠模型。酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测血脂及炎症因子水平。苏木素伊红（hematoxylin- eosin, HE）染色和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase- mediated dUTP nick labeling, TUNEL）染色分析肝脏组织病变及细胞凋亡。蛋白印记检测p-AMPKα1,AMPKα1,CPT-1, PPAR-α,SREBP-1c,FAS,p-P38,P38,p-AKT,AKT,p-AKT,AKT表达。 结果　与对照组相比,高脂饮食组大鼠TC, TG, LDL-c水平升高,HDL-c水平下降（P<0.01）。与高脂饮食组相比,香叶木素（10, 20, 50 mg/kg）组大鼠TC, TG, LDL-c水平降低,HDL-c水平上升（P<0.01）。香叶木素可缓解高脂饮食诱导的肝脏组织病变。高脂饮食组大鼠肝脏组织细胞凋亡高于对照组（P<0.01）。香叶木素（10, 20, 50 mg/kg）组大鼠肝脏组织细胞凋亡低于高脂饮食组（P<0.01）。高脂饮食组大鼠p-AMPKα1,CPT-1 和PPAR-α 表达低于对照组（P< 0.01）。与高脂饮食组相比,香叶木素（20, 50 mg/kg）组大鼠p-AMPKα1,CPT-1 和PPAR-α 表达升高（P< 0.01）。高脂饮食组大鼠SREBP-1c 和FAS表达高于对照组（P<0.01）。与高脂饮食组相比,香叶木素（10, 20, 50 mg/kg）组大鼠SREBP-1c 和FAS表达下降（P<0.01）。而且,高脂饮食组大鼠IL-6, IL-1β和TNF-α水平高于对照组（P<0.01）。与高脂饮食组相比,香叶木素（20, 50 mg/kg）组大鼠IL-6, IL-1β和TNF-α水平下降（P<0.01）。另外,香叶木素可逆转compound C对AMPK通路的抑制作用。 结论　香叶木素激活AMPK通路减轻高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝病幼鼠脂质代谢异常,肝脏组织病变,细胞凋亡及炎症反应。     

白屈菜红碱对肝纤维化小鼠TGF-β/Smads信号通路的影响

目的:探讨白屈菜红碱对四氯化碳(CCl_4)诱导的肝纤维化损伤小鼠的保护作用及对转化生长因子β(TGF-β)/Smads信号通路的影响。方法:50只C57BL/6N小鼠随机分成正常对照组、模型组及白屈菜红碱低剂量(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))、中剂量(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))和高剂量(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))3个剂量组,每组10只。采用腹腔注射CCl_4和橄榄油混合液8周诱导小鼠肝纤维化模型,白屈菜红碱组于第5周开始灌胃给药。第14周后处死小鼠,观察白屈菜红碱各剂量组干预后小鼠的肝指数,苏木精-伊红染色和苦味酸-酸性品红染色法观察小鼠肝组织的病理改变及肝纤维化的程度;采用分光光度计和酶标仪测定血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、透明质酸(HA)和肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量;RT-q PCR检测TGF-β1、Smad3、Smad4和Smad7的mRNA表达;Western blot检测TGF-β1、Smad4和Smad7的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组肝纤维化的病理改变明显,肝指数、AST、ALT、HA和Hyp均显著升高(P0.05);TGF-β1、Smad3和Smad4的mRNA表达显著上调,Smad7的mRNA表达显著下调(P0.05);TGF-β1和Smad4的蛋白表达显著上调,Smad7的蛋白表达显著下调(P0.05);与模型组比较,白屈菜红碱不同剂量给药组均抑制上述指标的改变(P0.05)。结论:白屈菜红碱能够抑制CCl_4诱导的小鼠肝纤维化,其机制可能与TGF-β/Smads信号通路有关。     

青藤碱对阿奇霉素诱导的急性肝损伤大鼠的保护作用及机制研究

目的:探索青藤碱对阿奇霉素诱导的大鼠急性肝损伤的影响及其分子机制。方法:SD大鼠随机分为3组:对照组、阿奇霉素(AZM)组和阿奇霉素+青藤碱(AZM+SM)组。苏木素伊红(HE)染色观察肝脏组织病变。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)检测细胞凋亡。免疫组化检测细胞增殖核抗原-67(Ki-67)表达。ELISA检测IL-6、IL-18和IL-1β水平。蛋白印迹检测p38、p-p38、HSP27和p-HSP27表达。结果:青藤碱可减轻阿奇霉素诱导的急性肝损伤大鼠肝脏组织病变。与对照组相比,阿奇霉素组细胞凋亡增加,Ki67表达下降(P0. 05)。与阿奇霉素组相比,阿奇霉素+青藤碱组细胞凋亡降低,Ki67表达升高(P0. 05)。阿奇霉素组IL-6、IL-18和IL-1β水平高于对照组(P0. 05)。阿奇霉素+青藤碱组IL-6、IL-18和IL-1β水平低于阿奇霉素组(P0. 05)。与对照组相比,阿奇霉素组p-p38/p38和p-HSP27/HSP27比值上升(P0. 05)。与阿奇霉素组相比,阿奇霉素+青藤碱组p-p38/p38和p-HSP27/HSP27比值下降(P0. 05)。结论:青藤碱可通过抑制p38通路的活化减轻阿奇霉素诱导的大鼠急性肝损伤。     

全氟辛烷磺酸通过NLRP3炎症小体诱导幼年期大鼠肺损伤及格列本脲干预的研究

目的:探讨含NLRP3家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)炎症小体参与全氟辛烷磺酸(PFOS)诱导幼年期大鼠肺损伤的可能机制。方法:28只21日龄SD大鼠随机分为对照(C)组、PFOS(P)组、格列本脲(G)组和格列本脲+PFOS(GP)组。将实验动物根据不同分组建立PFOS暴露模型和格列本脲保护模型,留取肺标本进行HE染色,ELISA法检测肺组织中髓过氧化物酶(MPO)含量以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18含量,高效液相色谱法(HPLC)检测血清中PFOS浓度,Western blot法检测肺组织中NLRP3、caspase-1和含CARD凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的蛋白水平。结果:肺组织病理切片HE染色结果显示,与C组相比,P组的气管及肺泡间质可见明显炎症浸润;格列本脲可使炎症反应显著减轻。ELISA结果显示,P组肺组织中MPO含量较C组显著升高(P<0.05),P组BALF中的IL-1β和IL-18含量较C组也明显升高(P<0.05);GP组肺组织MPD含量及BALF中IL-1β和IL-18含量均较P组降低(P<0.05)。Western blot结果显示,P组的NLRP3、caspase-1及ASC蛋白表达量较对照组均显著升高(P<0.01);格列本脲可使NLRP3、caspase-1及ASC蛋白表达水平降低(P<0.05)。免疫组化结果提示,P组的NLRP3蛋白表达水平较其余3组均显著升高(P<0.01)。结论:PFOS暴露可能通过激活NLRP3炎症小体,继而引发炎症反应,释放IL-1β等炎症因子导致大鼠肺损伤。格列本脲可以通过特异性抑制NLRP3炎症小体的组装,抑制炎症反应,减轻PFOS诱导的肺损伤。     

红丝线草对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1及VEGF蛋白表达的影响

目的探讨红丝线草对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1及VEGF蛋白表达的影响。方法用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,不同浓度红丝线草干预后,取肝脏常规制片并HE染色,免疫组织化学方法检测各组大鼠肝组织TGF-β1及VEGF蛋白表达的情况。结果红丝线草高、中剂量组大鼠肝组织TGF-β1及VEGF蛋白表达较模型组明显降低(P<0.05)。结论红丝线草的抗肝纤维化作用,可能与降低TGF-β1及VEGF蛋白的表达而影响细胞外基质的代谢有关。     

西地那非对勃起功能障碍模型大鼠主动脉血管组织中NLRP3/caspase-1通路的影响

目的 探讨西地那非(Sil)对勃起功能障碍(ED)大鼠主动脉血管组织中NLRP3/caspase-1通路蛋白表达的影响作用。方法 建立ED大鼠模型,随机分为ED组、Sil组,另取10只大鼠作为对照组。Sil组给予20 mg/kg西地那非灌胃(1次/d,连续2周)后,HE染色观察主动脉血管组织形态变化;Masson染色检测主动脉纤维化;免疫组化测定主动脉中白细胞介素-1β(IL-1β)和内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)的含量及分布;RT-qPCR及Western blot检测主动脉中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β和eNOS的表达。结果 ED组大鼠主动脉血管组织形态发生病理变化,内皮细胞局部脱落较多,纤维化明显;主动脉中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β的mRNA和蛋白表达均增高,eNOS的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。与ED组相比,Sil组大鼠主动脉血管组织形态学病理变化改善,内皮局部细胞脱落减少,纤维化减轻;主动脉中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β的mRNA和蛋白表达降低,eNOS的mRNA和蛋白表达增...     

α硫辛酰胺抑制糖尿病大鼠肾组织炎症和4型胶原蛋白的产生及其机制

目的通过观察糖尿病(DM)大鼠肾组织中Notch2、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)的表达情况及α硫辛酰胺(ALM)对Notch2、Toll样受体4(TLR4)、NLRP3和胶原蛋白表达的影响,初步探讨ALM抗糖尿病肾组织炎症和肾纤维化的可能保护机制。方法以链脲佐菌素(STZ)复制DM大鼠模型,分为DM组和ALM组,同时设正常对照组(NC组),每组8只。DM造模成功2周后,ALM组用ALM[150 mg/(kg·d)]进行灌胃,治疗6周后处死大鼠。HE和Masson染色观察肾组织形态变化,免疫组织化学染色观察肾组织中Notch2、TLR4、NLRP3的表达和定位,Western blot法检测肾组织中Notch2、TLR4、NLRP3和4型胶原蛋白(Col4)的蛋白水平,ELISA检测肾组织匀浆中炎性因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。采用Spearman秩相关检验对Notch2与TLR4、NLRP3蛋白表达进行相关性分析。结果 DM组的血糖、24 h尿蛋白量、肾脏指数、总胆固醇、甘油三酯均显著高于NC组;与DM组相比,ALM组肾脏指数、24 h尿蛋白量明显降低,而血糖无明显改变。与NC组相比,DM组大鼠肾组织中Notch2、TLR4、NLRP3和Col4的蛋白水平增加,ALM组大鼠肾组织中的上述蛋白水平明显低于DM组; ALM组大鼠肾组织匀浆IL-6和TNF-α的水平较DM组明显降低。相关性分析显示在DM组以及ALM组中Notch2与TLR4的表达均呈显著正相关,Notch2与NLRP3的表达也均呈显著正相关。结论 ALM抑制DM大鼠肾组织的炎症和Col4的产生,与Notch2抑制TLR4和NLRP3的活化有关。     

大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应

目的探讨大黄素对哮喘小鼠炎症反应及对肺组织中NOD样受体蛋白结构域相关蛋白3(NODlike receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)和胱冬肽-1(caspase-1)表达的影响。方法 36只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组和大黄素组。以卵蛋白为致敏原制备哮喘小鼠模型。收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数和分类计数,ELISA方法检测BALF中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)与白介素-4(IL-4)水平。HE染色观察小鼠肺组织病理学改变。Western-blot检测各组小鼠肺组织中NLRP3、ASC和caspase-1的表达。结果大黄素能减少BALF中炎性细胞总数和嗜酸性粒细胞,降低BALF中TNF-α、IL-1β与IL-4含量,减轻肺组织炎性反应。Western-blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著高于对照组(P0.01);与哮喘组比较,大黄素组小鼠肺组织NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白表达显著降低(P0.01)。结论大黄素可通过抑制NLRP3炎性小体活化减轻哮喘小鼠的炎症反应。     

miR-22-3p靶向NLRP3表达对脑缺血再灌注损伤大鼠细胞焦亡的影响北大核心CSCD

目的:探究miR-22-3p对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠细胞焦亡的作用及其对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)表达的靶向调控机制。方法:选取2019年12月至2020年3月甘肃医学院附属医院收治的45例急性缺血性脑卒中患者(CIRI)作为研究对象,并选同期体检的健康志愿者40例作为对照组,qRT-PCR检测血清miR-22-3p和NLRP3等相关基因表达,并进行相关性分析;双荧光素酶基因报告分析miR-22-3p与NLRP3的关系;线栓法构建CIRI大鼠模型。Sham组大鼠在造模过程中仅暴露不结扎,造模手术前4 h,CIRI+mimic组大鼠侧脑室注射10µl miR-22-3p-mimic,CIRI+mimic+pc大鼠侧脑室注射10µl miR-22-3p-mimic和pcDNA3.1-NLRP3,Sham组和CIRI组大鼠侧脑室注射等剂量miR-22-3p-mimic-NC。TTC染色检测各组大鼠脑梗死面积,尼氏染色检测各组大鼠脑组织神经细胞活性;ELISA检测大鼠血清IL-1β和IL-18含量;免疫组化检测各组大鼠脑组织半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)表达;Western blot检测各组大鼠脑组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达。结果:与对照组相比,CIRI患者血清miR-22-3p、Akt、JAK1、PI3K、STAT3等基因表达明显下降,NLRP3、IL-1β、IL-18、Caspase-1、ASC等基因表达明显升高(P<0.05)。CIRI患者血清miR-22-3p与NLRP3(r=−0.80,P=0.000)、IL-1β(r=−0.20,P=0.002)、IL-18(r=−0.25,P=0.004)、Caspase-1(r=−0.35,P=0.005)、ASC(r=−0.30,P=0.001)等基因表达呈负相关。miR-22-3p靶向调控NLRP3表达。过表达miR-22-3p明显降低CIRI大鼠脑梗死面积,增强神经细胞活性,下调IL-1β和IL-18含量及Cas-pase-1、NLRP3、ASC表达。而pcDNA3.1-NLRP3能明显逆转这些抑制作用。结论:CIRI中,miR-22-3p能够靶向调控NLPR3表达抑制神经元细胞焦亡,发挥神经保护作用。     

沙库巴曲缬沙坦抑制心肌细胞焦亡改善心梗后心衰大鼠心室重构

目的 探讨沙库巴曲缬沙坦对心梗后心衰大鼠的心肌损伤和心脏重构的改善作用,并初步研究其与细胞焦亡之间的关系。方法45只SPF级Wistar大鼠,分为假手术组(Sham,n=15）、心衰模型组（HF,n=15）和沙库巴曲缬沙坦组（SK,n=15）。小动物超声用来评估各组大鼠心脏功能;Masson染色检测各组大鼠心脏组织病理变化;免疫荧光法检测pro-IL-1β和pro-IL-18在各组大鼠心肌细胞中的表达;ELISA检测各组大鼠心脏组织中IL-1β、IL18的表达。Western blot检测各组大鼠心脏组织中焦亡相关因子NLRP3和炎症因子pro-caspase-1、ASC的表达水平。结果 与HF组相比,沙库巴曲缬沙坦组大鼠的EF和FS显著升高,而LVIDs和LVIDd显著降低;大鼠心肌纤维化范围明显减小,胶原蛋白染色区域显著降低。沙库巴曲缬沙坦可以显著抑制心衰大鼠ASC的表达,抑制IL-1β和IL-18在心衰大鼠心脏组织中的含量,下调NLRP3和caspase-1的水平,并上调pro-IL-1β和pro-IL-18的表达水平。结论 沙库巴曲缬沙坦可以抑制心肌纤维化和改善心室重构,该结果...