miR-21可通过下调CCL20减轻心肌炎的炎性反应抑制心肌细胞凋亡

目的研究miR-21对心肌炎炎性因子和心肌细胞凋亡的影响。方法运用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测心肌细胞中miR-21的表达;将miR-21 mimics组(转染miR-21 mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、NC组(未做任何处理)、si人巨噬细胞炎性蛋白3α(CCL20)组(转染siCCL20)、siNC组(转染siNC)、miR-21 mimics+pcDNA 3.1组(miR-21 mimics和pcDNA 3.1共转染)、miR-21 mimics+pcDNA 3.1-CCL20组(miR-21 mimics和pcDNA 3.1-CCL20共转染)均用脂质体法分别转染病毒性心肌炎(VMC)患者巨噬细胞、心肌细胞;用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞中CCL20、白细胞介素(IL)-17的含量;流式细胞术检测各组的细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测各组的荧光素酶活性。结果与健康志愿者相比,VMC患者心肌细胞中miR-21表达显著降低(P<0.001),巨噬细胞中CCL20含量显著升高(P<0.01);过表达miR-21、沉默CCL20均可显著下调巨噬细胞中IL-17含量(P<0.001),显著下调心肌细胞的凋亡率(P<0.001)。结论 miR-21可减轻心肌炎的炎性反应,抑制心肌细胞凋亡,其机制可能与靶向CCL20有关。     

miR-127-5p靶向IRAK4对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的探究miR-127-5p靶向白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响方法首先分为对照组和感染组,感染组用肺炎链球菌感染A549细胞,感染组细胞分别转染miR-127-5p mimic、si-IRAK4及阴性对照质粒,qRT-PCR检测A549细胞中miR-127-5p的表达水平,western blot检测IRAK4、Bax、Bcl-2蛋白水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,ELISA检测白介素-10(IL-10)、白介素-6(IL-6)水平,双荧光素酶报告基因检测miR-127-5p与IRAK4的靶向关系。结果与对照组比较,肺炎链球菌感染后A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著降低,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高(P<0.05);与感染+miR-NC组比较,过表达miR-127-5p后,A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著升高,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6显著降低;与感染+si-NC组比较,抑制IRAK4表达后,A549细胞中细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著降低,Bcl-2、IL-10水平显著升高;双荧光素酶报告基因及Western blot结果显示,miR-127-5p可通过与IRAK4特异性结合负向调控IRAK4的表达;与感染+miR-127-5p+pcDNA组比较,感染+miR-127-5p+pcDNA-IRAK4组A549细胞中凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高,Bcl-2、IL-10水平显著降低(P<0.05)。结论miR-127-5p靶向IRAK4调控肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子IL-10、IL-6的表达。     

姜黄素调控miR-21对病毒性心肌炎细胞凋亡、炎症反应及NF-κB信号通路的影响

目的:探讨姜黄素(Cur)是否通过调控微小RNA-21(miR-21)影响病毒性心肌炎(VMC)心肌细胞的凋亡及炎症反应。方法:用柯萨奇病毒B3(CVB3)感染心肌细胞建立VMC心肌细胞模型记为CVB3组,未经任何处理的心肌细胞作为对照组。以不同浓度(0.25,0.50,1.00μmol)的Cur处理心肌细胞进行干预,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;以酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Cur对miR-21表达水平的影响;分别将anti-miR-con、anti-miR-21转染至心肌细胞后使用CVB3处理,分别将miR-con、miR-21 mimics转染至心肌细胞后使用Cur与CVB3处理,采用上述方法检测细胞凋亡率及炎性因子的含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、核因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,CVB3组心肌...     

长链非编码RNA H19靶向miR-194-5p抑制LPS诱导心肌细胞炎症反应

目的研究长链非编码RNA(LncRNA)H19对LPS诱导的心肌细胞炎症因子分泌的影响及其机制。方法建立LPS诱导的心肌细胞H9c2损伤模型;pc-con组(转染pc-con)、pc-H19组(转染pc-H19)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-194-5p组(转染anti-miR-194-5p)、pc-H19+miR-con组(pc-H19和miR-con共转染)、pc-H19+miR-194-5p组(pc-H19和miR-194-5p共转染)均用脂质体法转染至H9c2细胞;qRT-PCR检测各组细胞中H19、miR-194-5p的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β的含量;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与Control组相比,LPS组心肌细胞中H19表达下调,miR-194-5p表达上调,且过表达H19、敲减miR-194-5p均可抑制LPS诱导的心肌细胞H9c2炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌;miR-194-5p是H19的靶标。过表达miR-194-5p可逆转过表达H19对LPS诱导心肌细胞炎症因子TNF-α、IL-6、 IL-1β的抑制作用。结论 H19可抑制LPS诱导的心肌细胞炎症因子的分泌,其机制可能与靶向miR-194-5p有关,可为心血管损伤的治疗提供新靶点。     

miR-188-5p靶向Nek6对宫颈癌细胞的影响及机制

目的探究微小RNA-188-5p(miR-188-5p)对宫颈癌细胞增殖、侵袭、凋亡、迁移的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)对33例宫颈癌患者的癌组织及癌旁组织中的miR-188-5p的表达水平进行检测。常规培养宫颈癌HeLa细胞,利用脂质体分别将miR-188-5p模拟物(mimics)及阴性对照转染至HeLa细胞。采用甲基噻唑基四唑(MTT)与平板克隆形成实验检测细胞存活率及克隆数目。流式细胞仪分析细胞凋亡;Transwell小室法分析侵袭与迁移;利用Targetscan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-188-5p对NIMA相关激酶(Nek)6的靶向性作用;构建Nek6小干扰RNA(si-Nek6),观察抑制Nek6的表达对细胞生物学行为的影响。结果宫颈癌组织、癌旁组织中miR-188-5p的相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-188-5p mimics或转染si-Nek6可降低细胞增殖、克隆形成能力,减少迁移和侵袭细胞数,并增加细胞凋亡率;miR-188-5p与Nek6基因的3′UTR结合,抑制Nek6的蛋白表达(P<0.05);Nek6过表达可逆转miR-188-5p对HeLa细胞生物学行为的调控作用。结论miR-188-5p可能靶向下调Nek6抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡。     

微小核糖核酸-31对大肿瘤抑制因子2及心肌细胞肥大的调控作用

目的:通过下调肥大心肌细胞中微小核糖核酸(miR)-31的表达,观察miR-31对大肿瘤抑制因子2(LATS2)及心肌细胞肥大的调控作用。方法:体外分离大鼠心肌细胞并连续培养10天,按干预条件不同将心肌细胞分为4组:空白对照组、单纯血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)干预组、miR-31抑制物慢病毒感染组、阴性病毒感染组。培养第8天实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组心肌细胞miR-31、LATS2及肥大基因心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达。培养第10天心肌细胞荧光探针染色观察心肌细胞形态变化。蛋白免疫印迹(Western blot)检测LATS2蛋白表达变化。双荧光素酶报告基因质粒转染293T细胞并检测荧光素酶活性,鉴定miR-3l对LATS2的靶向作用。结果:与空白对照组相比,单纯AngⅡ干预组miR-31、心肌肥大基因ANP、β-MHC表达水平均显著上升(P0.05),心肌细胞相对表面积明显增大(P0.05),而LATS2基因及蛋白表达明显下调(P0.05);与单纯AngⅡ干预组比较,miR-31抑制物慢病毒感染组miR-31、心肌肥大基因ANP、β-MHC表达明显下调(P0.05),心肌细胞相对表面积减小(P0.05),而LATS2在基因水平略有上升,蛋白水平则显著上调(P0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示TRAF6-3'UTR+miR-146b相对荧光素酶活性较TRAF6-3'UTR+miR-NC显著性下降(P0.01),LATS2-3'UTR+miR-31相对荧光素酶活性较LATS2-3'UTR-NC+miR-31显著性降低(P0.01),差异均有统计学意义。结论:下调肥大心肌细胞miR-31表达水平可一定程度逆转心肌细胞肥大,miR-31靶向作用LATS2参与调控心肌细胞的肥大。     

miR-155靶向SIRT1调控缺氧/复氧心肌细胞的活力、凋亡和氧化应激

目的研究miR-155对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞的活力、凋亡和氧化应激的影响,并探讨其机制。方法运用RT-qPCR检测细胞中miR-155、组蛋白去乙酰化酶(SIRT)1表达;H/R+miR-NC inhibitors组(转染miR-NC inhibitors)、H/R组(未转染H/R H9C2细胞)和Control组(未转染H9C2细胞)、H/R+miR-155 inhibitors+SIRT1 blocker组(miR-155 inhibitors和SIRT1 blocker共转染)、H/R+miR-155 inhibitors组(转染miR-155 inhibitors),均采用脂质体转染H/R H9C2细胞;Western印迹检测裂解的半胱天冬酶半胱天冬酶(cleaved-caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病蛋白(Bcl)-2、SIRT1的蛋白水平;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)实验检测细胞中乳酸盐脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光素酶活性。结果与Control组相比,H/R组细胞的miR-155表达显著升高(P<0.05),且敲减miR-155表达增加大鼠原代心肌细胞活力,抑制H9C2细胞凋亡,促进H9C2细胞的氧化应激。SIRT1为miR-155的靶标,且敲减SIRT1表达可逆转敲减miR-155对细胞的促生长,抑凋亡和促氧化作用。结论 miR-155可抑制大鼠原代心肌细胞的活力、促进H9C2细胞凋亡及抑制氧化应激,可能与靶向SIRT1有关,将为miR-155靶向治疗心脏病提供依据。     

miR-877靶向TRIM72调控脂多糖诱导的大鼠心肌细胞炎症反应和细胞凋亡

目的研究miR-877对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞H9c2炎症反应和细胞凋亡的影响及潜在的分子机制。方法实时荧光定量(qRT)-聚合酶链式反应(PCR)检测miR-877和三重基序(TRIM)72 mRNA的表达,Western印迹测定TRIM72蛋白、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定LPS诱导心肌细胞H9c2后培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-877与TRIM72的调控关系。结果 LPS诱导的大鼠心肌细胞H9c2中miR-877表达量显著上升(P0.05),TRIM72 mRNA和蛋白表达量显著下降(P0.05);LPS可诱导H9c2细胞大量产生炎症因子TNF-α和IL-6,诱导细胞凋亡;抑制miR-877表达或过表达TRIM72均可减轻LPS诱导的心肌细胞H9c2炎症反应,降低TNF-α和IL-6的产生,抑制细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-877靶向负调控TRIM72的表达;抑制TRIM72表达可逆转下调miR-877对LPS诱导的H9c2细胞炎症因子表达和细胞凋亡的作用。结论 miR-877通过靶向TRIM72以减轻LPS诱导的大鼠心肌细胞H9c2炎症反应,抑制细胞凋亡。     

miR-145抑制NF-κB p65表达促进ROS产生诱导卵巢癌细胞凋亡的机制

目的探讨微小RNA-145(miR-145)诱导卵巢癌细胞凋亡的潜在作用机制。方法收集卵巢癌临床组织样本,采用RT-qPCR法检测miR-145表达。体外培养OVCAR3人卵巢癌细胞,使用活性氧(ROS)试剂盒、脂质氧化产物丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、流式细胞仪、Western印迹检测细胞中ROS、MDA、SOD水平,细胞凋亡和B-淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bax、含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3蛋白表达。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western印迹法验证miR-145和核因子(NF)-κB p65的靶向关系。抑制或激活NF-κB信号通路,检测细胞中ROS、MDA、SOD水平和细胞凋亡。结果 miR-145在卵巢癌组织中的表达低于显著癌旁组织(P0.05)。在OVCAR3细胞中过表达miR-145,ROS和MDA水平显著升高(P0.05),SOD水平显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著增加(P0.05),Bcl-2/Bax比值显著降低(P0.05),Caspase-3蛋白表达显著上调(P0.05)。miR-145可靶向调控NF-κB p65蛋白表达。抑制NF-κB信号通路,ROS和MDA水平显著升高(P0.05),SOD水平显著降低(P0.05);细胞凋亡率显著增大(P0.05);激活NF-κB信号通路可减弱miR-145对OVCAR3细胞凋亡的诱导作用(P0.05)。结论 miR-145能够通过抑制NF-κB信号通路,上调ROS水平从而诱导卵巢癌细胞凋亡。     

miR-181a-5p调控LIF的表达调节胰腺腺泡细胞凋亡的分子机制

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)发病迅速,并发全身感染,因此早期的高效治疗对控制病情起到关键作用.微小RNA(microRNA, miRNA)在AP中的作用机制及临床应用的研究成为近几年的热点.其在AP发生发展及转归中的作用有助于为AP的诊断和治疗提供新思路.目的探讨miR-181a-5p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J凋亡的影响及机制.方法运用ELISA法检测雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞中AMY、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)的表达;将Cerulein+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、Cerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Cerulein+si-con组(转染si-con)、Cerulein+si-白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)组(转染si-LIF),均用脂质体法转染至AR42J细胞,再用15 nmol/L的雨蛙素处理8h;流式细胞术法检测各组细胞的凋亡; qRT-PCR检测各组细胞中miR-181a-5p mRNA和LIF mRNA的表达; Western blot检测各组细胞中LIF、caspase-3的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性.结果与对照组相比,雨蛙素处理8 h是AMY、TNF-α和IL-6的含量均升高的时间点,且细胞凋亡率显著降低(P 0.05);与Control组相比,Cerulein组AR42J细胞中miR-181a-5p mRNA表达显著下调, LIF mRNA和蛋白表达显著上调(P0.05);过表达miR-181a-5p、敲减LIF均可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞凋亡的促进作用; miR-181a-5p可抑制野生型LIF细胞的荧光活性,且可负向调控LIF的蛋白表达.结论 miR-181a-5p可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞的凋亡,其机制可能与靶向LIF有关,将可为AP的治疗提供新方向.     

微小RNA-124-3p通过靶向抑制RIPK1的表达对缺氧/复氧心肌细胞损伤中的保护作用及其机制研究

目的探讨微小RNA-124-3p(miR-124-3p)调控受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)对心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法大鼠心肌细胞随机分为Con组、H/R组、H/R+miR-124-3p组、H/R+miR-NC组、H/R+si-RIPK1组、H/R+siNC组、H/R+miR-124-3p+pcDNA组、H/R+miR-124-3p+pcDNA-RIPK1组。采用qRT-PCR法检测miR-124-3p与RIPK1 mRNA表达水平,Western blot法检测RIPK1蛋白表达情况,双荧光素酶报告基因检测验证miR-124-3p与RIPK1的靶向关系。流式细胞术检测细胞凋亡能力变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况。检测乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果 H/R组心肌细胞miR-124-3p表达水平显著低于Con组(P0.05),而RIPK1 mRNA及蛋白水平均显著升高(P0.05);H/R组心肌细胞LDH活性、MDA水平及Bax蛋白水平均显著高于Con组(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),而SOD水平及Bcl-2蛋白水平均显著低于Con组(P0.05);miR-124-3p过表达与抑制RIPK1表达可降低细胞凋亡率、LDH活性、MDA水平及Bax蛋白水平,而提高SOD水平及Bcl-2蛋白水平;双荧光素酶基因检测结果证实RIPK1是miR-124-3p的靶基因;RIPK1过表达逆转了miR-124-3p过表达对H/R心肌细胞损伤的作用。结论MiR-124-3p过表达可通过下调RIPK1表达进而减轻心肌细胞H/R损伤进而对心肌细胞发挥保护作用。     

miR-194-5p靶向MEX3A调控肝癌细胞活性和凋亡的机制

目的研究miR-194-5p对肝癌细胞活性和凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR法检测肝癌细胞HepG2、正常肝细胞L02中miR-194-5p和MEX3A的表达;根据分组:miR-194-5p组(转染miR-194-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-MEX3A组(转染si-MEX3A)、si-con组(转染si-con)、miR-194-5p+pcDNA-MEX3A组(共转染miR-194-5p mimics和pcDNA-MEX3A)、miR-194-5p+pcDNA组(共转染miR-194-5p mimics和pcDNA),均用脂质体法将相关质粒转染至HepG2;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的活性;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常肝细胞L02相比,肝癌细胞HepG2中miR-194-5p表达明显降低,MEX3A表达明显升高(P0.05);过表达miR-194-5p、敲减MEX3A均可抑制HepG2细胞的活性,促进细胞凋亡;miR-194-5p可抑制野生型MEX3A细胞的荧光活性;过表达MEX3A能逆转miR-194-5p对HepG2细胞活性的抑制和凋亡的促进作用。结论 miR-194-5p可抑制肝癌细胞的活性,促进凋亡,其机制可能与靶向MEX3A有关,将可为肝癌的治疗提供新靶点。     

miR-509-3p靶向BCL2基因调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-509-3p(miR-509-3p)调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制。方法 qRT-PCR检测miR-509-3p、B淋巴细胞瘤(BCL)2在乳腺癌组织及不同乳腺癌细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-509-3p与BCL2之间的相互作用;噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测miR-509-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡能力的变化情况;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-509-3p对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭行为的变化情况;Western印迹检测miR-509-3p对BCL2、细胞周期蛋白(CyclinD)1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的调控情况。结果与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中miR-509-3p的表达水平显著下调(P<0.05),与其他乳腺癌细胞相比,乳腺癌MDA-MB-231细胞中miR-509-3p表达最低,而BCL2的表达水平相反;上调miR-509-3p表达MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05),而细胞凋亡水平明显升高(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平明显降低(P<0.05),而p21表达水平明显升高(P<0.05);miR-509-3p可靶向调控BCL2表达;上调BCL2表达可逆转上调miR-509-3p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的作用。结论 miR-509-3p能够靶向抑制BCL2而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。     

miR-140-3p通过靶向趋化因子受体4和抑制JAK2/STAT3通路减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤

目的]探讨miR-140-3p对缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其机制。[方法]构建体外心肌细胞H/R模型,使用miR-140-3p mimics、趋化因子受体4(CXCR4)过表达质粒转染H9c2细胞。噻唑蓝法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;反转录聚合酶链反应和Western blot检测细胞中miR-140-3p、CXCR4、Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的激活以及凋亡相关蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与CXCR4的靶向关系。相应试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性和炎症因子、活性氧(ROS)的水平。[结果]体外H/R可抑制miR-140-3p的表达,上调CXCR4表达和JAK2/STAT3通路的磷酸化,诱导H9c2细胞凋亡而抑制H9c2细胞增殖,促进炎症因子和ROS的释放并上调LDH的活性。miR-140-3p可以通过靶向CXCR4 3′UTR抑制CXCR4表达,从而抑制JAK2/STAT3通路的磷酸化激活,抑制炎症因子和ROS的释放,下调LDH的活性,促进H9c2细胞增殖而抑制其凋亡。[结论]miR-140-3p可能通过靶向抑制CXCR4而抑制JAK2/STAT3通路,从而减轻缺血再灌注诱导的心肌细胞损伤。     

miR-203a-3p对食管癌细胞侵袭迁移能力的影响及其与Survivin的靶向调控关系

目的 观察微小RNA(miR)-203a-3p对食管癌细胞侵袭、迁移能力的影响并分析其与Survivin的靶向调控关系。方法 收集对数生长期的食管癌细胞TE-1及正常食管黏膜上皮细胞HEEC,RT-qPCR法检测细胞miR-203a-3p、Survivin mRNA。双荧光素酶报告基因检测法分析miR-203a-3p与Survivin的靶向调控关系。将TE-1细胞分为对照组、miR-203a-3p模拟组、miR-203a-3p抑制组及阴性对照组。miR-203a-3p模拟组转染miR-203a-3p mimic,miR-203a-3p抑制组转染miR-203a-3p inhibitor,阴性对照组转染miR-203a-3p NC,对照组不进行转染,RT-qPCR法验证转染效率。采用MTT法检测转染后2、12、24、36、48 h的细胞活力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 食管癌细胞中miR-203a-3p mRNA表达低于正常食管黏膜上皮细胞,Survivin mRNA表达高于正常食管黏膜上皮细胞（P均<0.05）。TargetSc...     

穿心莲内酯通过调控miR-206/STC2抑制前列腺癌细胞增殖并诱导凋亡的机制

目的探讨穿心莲内酯对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其潜在分子机制。方法以10μmol/L穿心莲内酯干预PC-3人前列腺癌细胞,噻唑蓝(MTT)、流式细胞仪和qRT-PCR实验检测细胞活性、凋亡及细胞中miR-206表达。将miR-206模拟物转染至PC-3细胞,检测细胞活性及凋亡率。采用qRT-PCR和免疫组化法检测前列腺癌组织中miR-206和斯钙素(STC)2表达,Targetscan在线预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-206和STC2的靶向关系。结果以10μmol/L穿心莲内酯干预PC-3细胞,细胞活性下降、凋亡率增加、miR-206表达上调;过表达miR-206能够降低细胞活性并促进细胞凋亡。在前列腺癌组织中,miR-206低表达而STC2高表达;Targetscan在线预测和双荧光素酶报告基因实验结果表明STC2是miR-206的靶基因。抑制miR-206表达可逆转穿心莲内酯对PC-3细胞活性和STC2表达的抑制及凋亡的促进作用。结论穿心莲内酯能够抑制PC-3细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能是通过上调miR-206并抑制STC2表达而实现的。     

炎症条件下miR-222-3 p靶向CD4对肺泡巨噬细胞IL-6分泌水平的影响

目的研究miR-222-3p靶向CD4对肺泡巨噬细胞炎症因子分泌水平的影响,探讨其具体作用机制。方法 CCK8法检测0、1、2、4、8μg/mL的炎症诱导剂LAMPS对MH-S细胞的毒性影响。LAMPS处理MH-S细胞0、30、60、90、120 min后,RT-qPCR检测miR-222-3p和IL-6的表达水平的变化,Western blot检测CD4的蛋白表达水平。miRDB软件预测和双荧光素酶报告实验检测miR-222-3p对CD4基因的靶向作用。siR-222-3p转入MH-S细胞后,Western blot检测CD4的表达水平变化,RT-qPCR检测细胞内的IL-6的mRNA表达水平。结果 LAMPS对MH-S细胞的生长具有抑制作用,具有浓度依赖性。2μg/mL的LAMPS作用于MH-S细胞后,miR-222-3p和IL-6上调表达,CD4下调表达,具有时间依赖性。miRDB软件预测CD4为miR-222-3p的靶基因,双荧光素酶实验验证了靶向关系。siR-222-3p能够促进CD4的表达,降低IL-6的表达水平。结论 miR-222-3p可通过靶向CD4来调控肺泡巨噬细胞炎症因子的分泌水平。     

miR-376b-3p通过靶向FGF21加重缺氧复氧心肌细胞的损伤

目的 探讨miR-376b-3p对缺氧复氧(H/R)心肌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法 培养心肌细胞H9c2,缺氧复氧法体外模拟H/R细胞损伤,建立心肌细胞损伤模型。用流式细胞术、免疫印迹(Western blot)、酶联免疫吸附(ELISA)检测正常对照组、H/R组、anti-miR-NC组、anti-miR-376b-3p组、anti-miR-376b-3p+si-NC组、anti-miR-376b-3p+si-成纤维细胞生长因子21(FGF21)组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)情况。双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光活性。结果 成功建立缺氧复氧损伤的细胞模型;模型组细胞中miR-376b-3p表达显著升高,FGF21表达显著降低,并且抑制miR-376b-3p可以减轻损伤细胞的凋亡和TNF-α、IL-6、IL-17的含量,以及上调Bcl-2,下调Bax。此外,miR-376b-3p还可靶向FGF21 mRNA。抑制FGF21后,抑制miR-376b-3p对缺氧复氧损伤的H9c2细胞的保护作用被减弱。结论 miR-376b-3p可促进缺氧复氧心肌细胞的凋亡和炎性反应,其机制与靶向FGF21 mRNA相关。     

lncRNA SNHG4/miR-152-3p对HepG2细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)SNHG4调控miR-152-3p对肝癌细胞增殖、凋亡及免疫因子的影响。方法:qRT-PCR检测肝癌细胞(HepG2、SNU-398、Hep3B)及永生化正常肝细胞THLE-2中SNHG4和miR-152-3p表达水平。将HepG2细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-SNHG4组(转染si-SNHG4)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-152-3p组(转染miR-152-3p)、si-SNHG4+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG4与anti-miR-NC)、si-SNHG4+anti-miR-152-3p组(共转染si-SNHG4与anti-miR-152-3p)。qRT-PCR检测SNHG4和miR-152-3p表达水平；CCK8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western Blot法检测PCNA、Bcl-2、Bax蛋白表达；ELISA法检测TNF-α、IL-6表达水平；双荧光素酶报告实验验证SNHG4和miR-152-3p靶向关系。结果:与永生化正常肝细胞THLE-2比较，肝癌细胞HepG2、S...     

干扰LINC00265上调miR-485-5p的表达影响缺氧诱导的心肌细胞凋亡、增殖机制研究

目的研究LINC00265对缺氧诱导的心肌细胞凋亡、增殖的影响及分子机制。方法将H9C2细胞分为对照组(未做任何处理)、模型组(缺氧处理3 h)、模型组+si-LINC00265组(转染siLINC00265后缺氧处理)、模型组+si-NC组(转染si-NC后缺氧处理)、模型组+miR-485-5p组(转染miR-485-5p后缺氧处理)、模型组+miR-NC组(转染miR-NC后缺氧处理)。实时荧光定量PCR(RTqPCR)检测LINC00265和miR-485-5p的表达水平;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞增殖核抗原Ki67(Ki67)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证LINC00265和miR-485-5p的靶向关系。比较各组上述指标的差异。结果缺氧诱导的心肌细胞中LINC00265表达水平升高,miR-485-5p表达水平降低,G0-G1期细胞所占比例升高,S期细胞所占比例降低,细胞凋亡率升高,Ki67表达水平降低,Caspase3表达水平升高(P0.05)。干扰LINC00265或过表达miR-485-5p后,G0-G1期细胞所占比例降低,S期细胞所占比例升高,细胞凋亡率降低,Ki67表达水平升高,Caspase3表达水平降低(P0.05)。LINC00265野生型报告载体与miR-485-5p共转染后细胞荧光活性降低(P0.05);而LINC00265突变型报告载体与miR-485-5p共转染后细胞荧光活性无显著变化(P0.05)。结论干扰LINC00265可能通过上调miR-485-5p的表达抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡、促进细胞增殖。