Api6在高脂高胆固醇饮食引起肺部炎症中所发挥作用的研究*

 目的：研究凋亡抑制因子6（Api6）在高脂高胆固醇饮食所致C57BL/6J小鼠肺部炎症反应中的作用。方法：6～8周龄的C57BL/6J雄性小鼠喂养于SPF环境中,随机分成2组,分别给予普通饮食和高脂高胆固醇饮食喂养。喂养16周后收集肺组织并采用免疫组织化学和ELISA法鉴定肺组织的炎症状态。实时定量PCR和Western blotting鉴定Api6 mRNA与蛋白的表达水平,流式细胞术检测小鼠支气管肺泡灌洗液细胞凋亡情况。体外培养巨噬细胞RAW264.7,流式细胞术检测Api6对氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）引起的细胞凋亡的影响。结果：高脂高胆固醇饮食喂养小鼠16周后,C57BL/6J小鼠肺组织出现以巨噬细胞蓄积以及肿瘤坏死因子α和单核细胞趋化蛋白1升高为主的炎症反应。与普通饮食组相比,高脂高胆固醇饮食喂养小鼠肺组织的Api6 mRNA和蛋白表达水平都显著上调（P<0.01）,同时支气管肺泡灌洗液中的巨噬细胞凋亡水平明显下降（P<0.01）。体外实验证实500 μg/L的重组Api6处理RAW264.7细胞可显著抑制oxLDL引起的细胞凋亡（P<0.05）。结论：高脂高胆固醇饮食可致C57BL/6J小鼠肺组织巨噬细胞蓄积,其机制可能与Api6抑制巨噬细胞的凋亡有关。     

高脂饮食对小鼠内脏脂肪组织T细胞亚群的影响

目的:探讨高脂饮食诱导的营养性肥胖小鼠脂肪组织内CD4+T淋巴细胞的变化。方法:将6周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分成2组,即正常对照组和高脂饮食组,分别饲养16周后眼底取血分离血清检测血糖、CHOL、TG、HDL和LDL水平,ELISA检测血清中TNF-α水平;游离附睾垫脂肪组织分离细胞,流式检测CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的数量及亚群的比例。结果:与对照组比较,高脂饮食组体重、增加体重、附睾垫脂肪重量、肾周脂肪重量、血脂、血糖和TNF-α水平均有显著增加,但胸腺指数和脾脏指数两组间没有显著差别。脂肪组织内CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞数均较对照组有所增高,其中CD8+T淋巴细胞增多最显著。在CD4+T淋巴细胞中,Th1和Th17细胞显著增多,而Th2细胞未见显著变化。结论:高脂饮食可诱导脂肪组织内T淋巴细胞的增多,并向Th1和Th17方向极化。     

袖状胃切除术对高脂饮食诱导肥胖大鼠肠道屏障的影响

目的研究袖状胃切除术对高脂饮食诱导肥胖大鼠肠道屏障的影响。方法建立高脂饮食诱导肥胖大鼠模型共30只,随机分为普通饮食组(CD,n=10)、假手术组(SO,n=10)和袖状胃切除组(SG,n=10),术后4周时分别检测24 h尿乳果糖/甘露醇比值(L/M)、门静脉血清内毒素水平和小肠黏膜紧密连接蛋白claudin-1和occludin表达水平。结果术后4周时,SG组大鼠体质量明显低于CD组(P0.001)和SO组(P0.001)。SG组大鼠24 h尿L/M值明显低于CD组(P0.001)和SO组(P0.01)。SG组门静脉血清内毒素水平明显低于CD组(P0.01)和SO组(P0.05)。术后4周时,SG组大鼠小肠黏膜中claudin-1表达水平明显高于CD组(P0.001)和SO组(P0.01),occludin表达水平明显高于CD组(P0.001)和SO组(P0.001)。结论袖状胃切除术可使高脂饮食诱导的肥胖大鼠体质量下降,降低24 h尿L/M值和门静脉血清内毒素水平,提高小肠黏膜中claudin-1和occludin蛋白的表达水平。     

硫辛酸对高脂饮食小鼠肠道氧化还原状态及消化吸收功能的影响

目的:探讨抗氧化剂硫辛酸（LA）对高脂饮食小鼠肠道氧化还原状态调节及消化吸收功能的影响。方法:24只C57BL/6雄性小鼠,随机分为3组：即对照组(正常饮食)、高脂组(高脂饮食)、LA组(高脂饮食+0.1%LA),6周后测定活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(TAC)以及脂肪酶、淀粉酶、胰蛋白酶等消化酶指标,同时用Affymetrix MOE430A 基因芯片分析肠道抗氧化、消化吸收相关功能基因的表达。结果:与高脂组相比,LA组MDA和ROS含量显著降低(P<0.05),SOD和TAC明显升高,消化酶活力有所恢复。抗氧化剂LA上调高脂饮食小鼠肠道抗氧化相关功能基因的表达水平,恢复物质消化、吸收和转运等相关功能基因的表达水平。结论:高脂引发氧化－抗氧化系统失衡,硫辛酸通过直接清除自由基以及提高抗氧化通路相关功能基因的表达水平解除氧化应激而有助于防治高脂引发的肠道功能损伤。     

高脂饮食引起大鼠动脉血管内皮细胞衰老

目的：研究高脂饮食对大鼠血管内皮细胞衰老的影响。方法：大鼠高脂饲料喂养12周后测定血脂的变化,HE染色分析胸主动脉和肾动脉血管结构的改变;胶原酶灌注方法分离胸主动脉和肾动脉血管内皮细胞,应用免疫细胞化学的方法鉴定内皮细胞;应用细胞化学染色的方法检测衰老相关的半乳糖甘酶（senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal）活性。 结果：SD 雄性大鼠高脂饲料喂养12周后,大鼠血浆三酰甘油、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平明显升高, 胸主动脉和肾动脉出现明显的粥样硬化改变;胸主动脉和肾动脉血管内皮细胞SA-β-gal活性明显增加,表现为较强的β-gal染色。结论：高脂饮食引起大鼠胸主动脉和肾动脉粥样硬化改变,动脉血管内皮细胞衰老增加。     

老年人T淋巴细胞PD-1高表达在炎症状态下对其功能的影响

目的探讨在LPS模拟的炎症环境中,老年人T淋巴细胞功能与程序性细胞死亡受体-1(PD-1)表达的相关性。方法选取我院健康体检人员110例,其中年轻人55例(65岁),老年人55例(≥65岁)。流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群(CD45-Per CP/CD3-APC/CD8-FITC)数目及其PD-1(CD279-PE)表达水平。分离外周血单个核细胞,分为对照组、LPS刺激组、LPS+抗PD-1组,CCK-8法和流式凋亡检测术检测细胞活性及凋亡影响,ELISA法检测培养上清中TNF-α、IL-6、IL-10、IL-2和IFN-γ表达水平。结果与年轻人相比,老年人各T淋巴细胞亚群绝对值均显著下降,PD-1表达水平升高(P0.05)。老年人LPS+抗PD-1组较LPS组细胞活性升高,凋亡率下降(P0.05),年轻人LPS+抗PD-1组与LPS组之间的细胞活性和凋亡率差异均无统计学意义(P0.05)。老年人LPS组TNF-α表达水平显著低于年轻人,IL-10/TNF-α比值高于年轻人(P0.05)。结论炎症状态下,老年人T淋巴细胞功能减低与PD-1高表达密切相关。免疫应答时淋巴细胞抑制性细胞因子分泌增多,更易处于免疫抑制状态,与老年人较年轻人更易罹患感染性疾病密切相关。     

高脂高胆固醇饮食对3基因突变小鼠动脉粥样硬化性病变的影响

目的： 探讨高脂高胆固醇饮食性因素对3个脂代谢相关基因突变小鼠血脂代谢及动脉内膜损伤的影响。方法：分析高脂高胆固醇饮食喂养的3基因突变（ApoE-/-/LDLR-/-/Leprdb/db）小鼠血脂、血糖水平和主动脉内膜病变的特点。结果：高脂高胆固醇饮食喂养的3基因突变小鼠血浆总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和血糖水平均显著高于普通饮食组。该饮食喂养2周和5周龄小鼠血浆TC、TG的浓度分别达(106.75±3.40) mmol/L和(9.12±1.35) mmol/L,高出普通饮食组4.33和2.36倍。主动脉内膜出现灶状内皮肿胀、脱落、单核/淋巴细胞黏附以及泡沫细胞形成。随喂养周数的增加出现内弹力板排列不整、部分断裂、内皮和平滑肌细胞内脂质沉积,并发生内膜增生型病变增多、范围扩大。血脂紊乱的加重与动脉内膜的损伤呈正相关。高脂高胆固醇饮食组小鼠的血脂紊乱和动脉内膜损伤均较普通饮食组严重,并伴有明显的肝细胞脂肪病变。结论：高脂高胆固醇饮食促进了3基因突变小鼠血脂代谢紊乱及主动脉内膜损伤的发生,提前并加重了动脉粥样硬化性病变的发生发展。     

肌肉注射脂联素基因对高脂饮食大鼠氧化应激作用的影响

构建人脂联素(hAPN)基因的质粒表达载体,研究其体外转移后的表达情况.通过基因重组构建脂联素基因表达系统,电转导法导入大鼠股部肌肉,RT-PCR检测大鼠肌肉注射部位组织中mRNA水平的表达情况,同时监测外周血中SOD、MDA水平.结果表明:RT-PCR显示该基因能在肌肉组织中表达,血清中SOD水平相应升高,注射后两周达到最高水平;MDA水平降低,注射两周后达到最低水平,持续大约两周.脂联素表达系统可以在动物体内表达,增加了自由基的清除,抑制了脂质过氧化物的产生.     

Urantide减轻高脂饮食引起的大鼠非酒精性脂肪肝损伤

目的探讨多肽化合物urantide对高脂饮食引起动脉粥样硬化大鼠非酒精性脂肪肝的保护作用。方法 72只SD大鼠随机分为:对照组(Con)、模型组(Mod)[用腹腔注射维生素D3(VD3)及高脂饮食方法复制大鼠动脉粥样硬化模型]、阳性药组(辛伐他汀,Sim)、urantide 3(Ut 3)、 7(Ut 7)及14 d组(Ut 14),给药剂量为30μg/kg。给药结束后,检测血清学及肝功能指标;HE染色胸主动脉、肝脏;RT-qPCR检测肝脏中尾加压素Ⅱ(UⅡ)、G蛋白偶联受体14(GPR14)的mRNA表达;免疫组织化学检测肝组织UⅡ、GPR14蛋白质表达。结果模型组大鼠血清中谷丙转氨酶氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)等水平较对照组显著升高(P0.05);urantide治疗组大鼠上述各项指标较模型组均显著回降(P0.05);模型组大鼠肝脏中UⅡ及GPR14 mRNA与蛋白表达均较对照显著增高(P0.05);与模型组大鼠相比,urantide治疗组随着给药时间的增加,UⅡ及GPR14 mRNA与蛋白表达显著回降(P0.05)。结论 Urantide对高脂饮食所引起动脉粥样硬化大鼠非酒精性脂肪肝具有明显的保护作用。     

大鼠母体孕期高脂高糖饮食对子代成年期动脉粥样硬化的影响

目的 观察大鼠母体孕期高脂高糖饮食对子代成年期动脉粥样硬化的影响。方法 20只雌性大鼠分成普食组（P组）和高脂高糖组（G组），孕期分别喂养两种饲料，G组子代雄性鼠分为高脂高糖组（G—G组）和普通饲料组（G—P组），P组子代雄性鼠仍普通饲料喂养（P—P组），子代大鼠12周末检测其血清氧化型低密度脂蛋白（OX—LDL），总甘油三脂（TG），总胆固醇（TC），高密度脂蛋白-C（HDL—C）及低密度脂蛋白-C（LDL—C）的浓度，同时利用HE染色切片观察子代成年大鼠主动脉的脂质沉积情况。结果 ①成年子代血清OX—LDL，TC和LDL—C浓度：在子代高营养组（P—G，G—G组）较子代普食组（P—P组）明显增高（P〈0．01）；在母亲高营养子代高营养组（G—G）较母亲高营养子代普食组（G—P）明显增高（P〈0．05）。②血清TG和HDL—C浓度在各组无显著差异性（P〈0．05。③母体孕期高营养的子代主动脉脂纹发生率在G—G组最高，G—P组次之，P—P组最低。结论 母体孕期高营养饮食对子代成年期动脉粥样硬化有着重要的影响，子代在生长过程中普通饮食有利于延缓或防止动脉粥样硬化的发生。     

高脂饮食对大鼠主动脉内皮细胞形态及刚度的影响

目的研究高脂饮食对大鼠主动脉内皮细胞形态与刚度的影响。方法将SD大鼠随机分为高脂饲养组(AS组,n=3)与对照组(CON组,n=3),利用植块法获得大鼠胸主动脉内皮细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态,通过荧光染色比较两组细胞F-actin平均荧光强度,利用原子力显微镜(atomic force microscopy,AFM)检测细胞刚度。结果细胞在植块后第7 d有少量细胞爬出,第14 d细胞融合成单层,利用Ⅷ因子免疫荧光染色法证实为内皮细胞。高脂饮食引起细胞周长(P0.01)、长轴/短轴比率(P0.01)、面积增大(P0.05);细胞圆度减小(P0.01)。高脂组F-actin平均荧光强度明显高于对照组(P0.01)。AFM显示高脂饲养引发内皮细胞刚度显著增大(P0.01)。结论高脂饮食将引发内皮细胞形态与刚度发生改变,进而影响血管正常功能,使其成为动脉粥样硬化的重要诱因。     

雌激素对T淋巴细胞的影响

本文研究了注射外源性雌激素(10微克/10克体重/天,共14天)和摘除卵巢(35天)对淋巴组织和淋巴细胞的影响。注射雌二醇组动物的胸腺和脾脏重量,两者中的ANAE( )细胞百分率,外周血液中的白细胞总数、淋巴细胞绝对值、淋巴细胞中的ANAE( )细胞的百分率及其绝对值以及胸腺和脾脏细胞内的cAMP水平均显著降低。摘除卵巢组动物的胸腺重量显著增大;胸腺细胞、脾细胞和外周血淋巴细胞中的ANAE( )细胞的百分率显著降低;以及脾脏细胞内的cAMP水平显著降低。     

妊娠期高脂饮食对子代大鼠成年期肥胖影响的研究

目的 观察、分析母鼠妊娠期高脂饮食对子代成年期肥胖的影响.方法 24只健康的雌性Wistar大鼠,经确认怀孕便随机分为普食组(basic diet B)和高脂组(hish-fat diet HF),分别用基础饲料和高脂饲料喂养妊娠期及哺乳期.断奶后,将妊娠期高脂喂养组的雄性子代随机分为普食组和高脂组,分别用基础饲料和高脂饲料喂养12周.测量各子代大鼠体重、体长变化、肠系膜及肾周脂肪垫重量、血清Leptin值和血清脂质(TC、TG、HDL-C和LDL-C)水平,计算Lee's指数.结果 (1)体重、Lee's指数亲代高脂子代普食(HF/B)组该值为三组中最低.(2)肠系膜及肾周脂肪垫重量三组间无显著性差异.(3)血清脂质TG、HDL-C出生后继续高脂饲养组(HF/HF)的TG值均高于继续普食喂养组(B/B、HWB).B/B与HF/B间HDL-C无差异,但均高于HF/HF组;TC、LDL-C HF/HF的TC、LDL-C值在三组中均为最高,继续普食喂养的两组中,HF/B组也高于B/B组.(4)血清Leptin值HF/HF高于B/B、HF/B.结论 妊娠期高脂饮食会影响子代成年期血脂代谢及肥胖发生,出生后饮食调节可减弱其影响作用.     

高脂饮食对GK大鼠动脉组织蛋白酶S表达的影响

糖尿病患者的心血管事件发生率及病死率是非糖尿病患者的2-4倍,而动脉粥样硬化是大血管病变的主要病理基础。我们早期采用基因芯片技术发现,糖尿病大鼠动脉壁组织蛋白酶S(Cat S)的基因表达显著上调[1],提示Cat S在糖尿病促进动脉粥样硬化进程中可能发挥着重要作用。1材料与方法1·1动物模型和标本制备:健康雄性W istar大鼠(对照组)和自发性糖尿病模型大鼠(Goto-Kakisaki,GK)(糖尿病组)各5只(清洁级,中科院上海实验动物中心提供)。2组大鼠均喂养高脂饲料(基础饲料80%、猪油10%、白砂糖10%)12周,然后麻醉大鼠,取主动脉弓下段2-3 cm主动脉,…     

高脂饮食喂养对大鼠骨骼肌细胞膜GLUT4含量的影响

目的:检测骨骼肌细胞膜GLUT4含量的改变,探讨高脂饮食喂养诱导胰岛素抵抗的受体后机制。方法:将动物分为3组:①正常对照组;②高脂饮食组;③高脂饮食+饮食控制组。通过8周高脂饮食喂养建立胰岛素抵抗大鼠模型,随后代以普通饮食继续喂养4周。用Westernblot方法检测骨骼肌细胞膜表面GLUT4蛋白表达。结果:在胰岛素刺激下,高脂饮食组大鼠骨骼肌细胞膜GLUT4蛋白表达显著少于正常对照组(减少约31%);饮食控制组骨骼肌细胞膜GLUT4蛋白表达明显高于高脂饮食组(约1.14倍)。结论:高脂喂养的方法可成功复制出胰岛素抵抗大鼠模型;高脂饮食可能通过影响胰岛素信号转导系统,使胰岛素刺激的GLUT4转位至细胞膜受阻,其在膜上的含量也降低,从而促进胰岛素抵抗的形成和发展。     

生长激素对T淋巴细胞功能的影响

生长激素 (ＧＨ )是垂体分泌的多肽激素 ,早在 1930年 ,Ｓｍｉｔｈ就发现大鼠去除垂体后 ,胸腺即开始萎缩[1] 。后来一些研究证明 ,ＧＨ可以使去垂体动物受损的免疫功能恢复 ,促进胸腺发育[2 ] ,淋巴细胞上有特异的ＧＨ受体 ,ＧＨ可刺激淋巴细胞增殖。为了探讨ＧＨ对Ｔ淋巴细胞功能的影响 ,本实验用不同浓度的ＧＨ对Ｔ淋巴细胞进行刺激 ,观察ＧＨ对Ｔ淋巴细胞增殖的影响 ,以及ＧＨ对抗氢化考的松的作用。1　材料与方法1 1　材料　Ｔ淋巴细胞系ＪｕｒｋａｔＥ6 1(美国ＡＴＣＣ公司 ) ;ＰＨＡ、人重组基因ＧＨ (中科院上海生物化学研究所 ) ;…     

Vγ1+γδ T淋巴细胞对气道变应性炎症和气道高反应性的调节

目的:探讨消除Vγ1+γδ T淋巴细胞的哮喘C57BL/6小鼠中观察气道高反应性和支气管灌洗液中细胞因子浓度变化、肺组织中CD4+ CD25+ T淋巴细胞变化.方法:T淋巴细胞消除是以OVA首次致敏和第二次致敏1周前注射anti-Vγ1 mAbs、anti-Vγ4 mAbs、nonspecific hanmster IgG来完成.对C57BL/6小鼠测定气道高反应性后留取支气管灌洗液,分离肺组织.采用ELISA法测定支气管灌洗液中IL-10和TGF-β的浓度,利用FACS分析肺组织中提取的CD4+ CD25+ T淋巴细胞.结果:(1)诱导哮喘时消除Vγ1+γδ T淋巴细胞的C57BL/6小鼠气道高反应性比注射hanmster IgG的对照组减弱.但是消除Vγ4+γδ T淋巴细胞的C57BL/6小鼠气道高反应性与对照组相比无差别.(2)消除Vγ1+γδ T淋巴细胞的C57BL/6小鼠支气管灌洗液中IL-10和TGF-β浓度比对照组增加.(3)消除Vγ1+γδ T淋巴细胞的C57BL/6小鼠肺组织中CD4+ CD25+ T淋巴细胞比对照组明显增加.结论:消除Vγ1+γδ T淋巴细胞的哮喘C57BL/6小鼠气道高反应性减弱与支气管灌洗液中细胞因子IL-10和TGF-β的增加有关,并且与肺组织中的调节T淋巴细胞CD4+ CD25+ T淋巴细胞增加有关.     

类风湿关节炎前后肠道T淋巴细胞的分布变化

目的探讨在类风湿关节炎条件下大鼠小肠(十二指肠、空肠、回肠)上皮内T淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)、固有层T淋巴细胞(lamina propria lymphocyte,LPL)的变化规律。方法通过免疫组织化学染色方法,观察正常组和致病组肠管黏膜的T淋巴细胞的变化规律,然后分别对IEL和LPL计数,并进行统计学分析。结果大鼠致病组肠道各部分(十二指肠、空肠、回肠)上皮层和固有层可见T淋巴细胞数量增多。结论通过免疫组织化学方法可见在类风湿关节炎条件下,肠道黏膜的上皮层和固有层均可见T淋巴细胞的分布增多,肠道各段的IEL、LPL可能在黏膜免疫应答中起着关键的生物学作用。     

高脂饮食兔膝关节软骨的变化

背景:血清胆固醇水平增高与人群中骨关节病发病率增高呈正相关,而对于高脂饮食是否参与关节软骨退变过程从而诱发骨关节炎,目前尚不清楚。目的:观察经高脂喂养后新西兰兔膝关节软骨形态学改变,探索饮食在关节软骨退变过程中的作用。方法:将新西兰兔40只随机分为2组:对照组饲以基础饲料,高脂组饲以高脂饲料(20%猪油混合80%的基础饲料)。每4周末抽取空腹血样,测三酰甘油、总胆固醇水平。饲养28周后,取兔膝关节行大体观察后,取股骨髁部软骨行扫描电镜观察。结果与结论:与对照组相比,高脂组血清三酰甘油、总胆固醇水平均显著升高(P0.05)。扫描电镜观察发现,高脂组髁软骨表面粗糙,陷凹变浅,排列杂乱,形态不规则,大小不均,软骨表面呈局灶性剥脱改变,排列变得不规整,孔隙不均匀,软骨表面出现断裂空洞。进一步放大倍数观察可见软骨表面小山峰样结构变浅、变平,孔隙基本消失。结果证实,长期高脂饮食可诱发和加重软骨损伤,提示其可能参与了骨关节炎的发生发展。     

高脂饮食对大鼠海马、大脑皮质和脊髓GDNF表达的影响

目的:探讨高脂饮食对大鼠海马、大脑皮质和脊髓胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的影响。方法:20只雄性SD大鼠随机分成两组:普通饮食组(ND)和高脂饮食组(HFD),每组10只,分别给予两组大鼠普通饮食和高脂饮食14周,测量各组大鼠体重、脂肪重、Lee’s指数和脂体比。应用real time RT-PCR检测各组大鼠海马、大脑皮质和脊髓GDNF mRNA的表达;应用Western Blot检测各组大鼠海马、大脑皮质和脊髓GDNF蛋白的表达;应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组大鼠海马、大脑皮质和脊髓肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6的水平。结果:高脂饮食导致大鼠体重、脂肪重、Lee’s指数和脂体比均明显升高(P <0.05); HFD组大鼠海马、大脑皮质和脊髓GDNF mRNA表达水平较ND组均显著下降(P <0.01),HFD组大鼠海马、大脑皮质和脊髓GDNF蛋白表达水平较ND组均明显下降(P <0.05); HFD组大鼠海马、大脑皮质和脊髓中TNF-α、IL-1β和IL-6水平与ND组相比均明显升高(P <0.0...