LPS持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响

目的　研究LPS持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞 (DC)成熟的影响。方法　小鼠骨髓细胞用GM CSF培养 7d ,持续刺激组全程加入LPS ,短期刺激组在最后 48h加入LPS ,对照组不加LPS。流式细胞仪检测细胞表型和细胞摄取抗原的能力 ,ELISA检测细胞产生的细胞因子 ,混合淋巴细胞培养检测细胞提呈抗原的能力。结果　用LPS持续刺激的小鼠骨髓DC表达MHCⅡ、CD86、CD80和CD11c等分子和分泌TNF α和IL 12 (p70 )的能力并未增加 ,吞噬FITC OVA的能力显著升高 ,刺激同种异基因T细胞和刺激同种同基因T细胞增殖的能力亦显著低于LPS短期刺激组。结论　LPS持续刺激可抑制DC的发育成熟 ,可能是持续严重感染时免疫功能低下的原因     

CCK-8对LPS诱导树突状细胞成熟的影响

目的: 观察八肽胆囊收缩素(CCK-8)对脂多糖(LPS)诱导树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法: 采用粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导法培养小鼠骨髓来源DCs,在LPS诱导其成熟过程中用不同浓度的CCK-8进行干预,采用流式细胞分析技术检测DCs表面主要组织相容性复合物II(MHC II)、分化群80(CD80)和分化群86(CD86)的表达;ELISA法检测DCs培养上清中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;MTT法检测CCK-8处理DCs对同种异体T细胞增殖反应的影响。结果: CCK-8剂量依赖性地抑制LPS诱导DCs表面CD80、CD86和MHC II表达(P<0.01, P<0.05 );CCK-8抑制LPS诱导DCs分泌IL-1β、IL-6和TNF-α(P<0.01);并且,CCK-8降低LPS诱导DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖的活性(P<0.05,P<0.01)。结论: CCK-8对LPS诱导DCs成熟过程中的细胞表型、细胞因子分泌和抗原提呈功能有抑制作用,提示CCK-8有可能在抗感染和抵抗自身免疫性疾病过程中发挥重要调节作用。     

MBL对LPS诱导树突状细胞成熟的调节作用

目的 探讨甘露聚糖结合凝集素对细菌脂多糖诱导的人外周血单核细胞来源树突状细胞（MoDC）成熟的影响。方法 从健康成人外周血分离能黏附塑料的单核细胞，在rhGM-CSF和rhIL-4条件下培养5d，然后在有或无LPS和不同质量浓度（10～100mg／L）天然人MBL条件下继续培养2d。用倒置显微镜观察DC的形态，以FACS分析DC的表型，用MTT法测定DC刺激同种异体T细胞增殖的能力，以酵母多糖颗粒吞噬试验评估DC的抗原摄取能力，用ELISA检测DC培养上清液中TNF-α和IL-12p40＋p70的含量。结果 MBL以剂量依赖方式下调LPS诱导人MoDC表面分子CD83和CD86表达，增强其摄取酵母多糖颗粒的能力，降低其激发初始T细胞增殖的能力，并抑制其LPS诱导的TNF-α和IL-12 p40＋p70分泌，但MBL质量浓度低至10mg／L时对LPS诱导DC成熟作用几无影响。结论 高质量浓度MBL能抑制LPS诱导的DC成熟过程，提示其可能在LPS引发疾病包括败血症或感染性休克中具有调节作用，亦提供了分析DC分化成熟有关信号途径的新手段。     

再生丝素蛋白对小鼠骨髓来源树突状细胞分化、成熟的影响

体外研究再生丝素蛋白材料对小鼠骨髓来源树突状细胞分化、成熟的影响,探讨丝素蛋白的免疫原性及作为生物材料的意义。体外分离培养小鼠骨髓来源树突状细胞,接种于铺有再生丝素蛋白生物材料的细胞培养板中培养,在光学显微镜下观察细胞形态;FCM分析细胞表面相关分子的表达。同时用 MTT 法测小鼠骨髓来源树突状细胞细胞株 DC2．4在所选各种材料表面的生长增殖情况。结果表明：（1）再生柞蚕丝素蛋白和家蚕丝素蛋白均可支持小鼠骨髓来源的 DCs 生长和聚集;（2）MTT 结果表明再生柞蚕丝素蛋白与再生家蚕丝素蛋白相比可促进小鼠 BM来源 DC2．4的增殖;（3）再生柞蚕丝素蛋白和再生家蚕丝素蛋白上的小鼠 BM来源 DCs 表面低表达 CD11c、CD40、CD80、CD86、MHC -Ⅱ分子,与空白对照组 DCs 的表达谱相比无明显差别。再生柞蚕丝素蛋白与再生家蚕丝素蛋白相比,可较好地支持小鼠 BM来源 DC2．4的生长和增殖;再生丝素蛋白无刺激小鼠 BM来源 DCs 成熟的生物学效应。     

HBeAg对小鼠骨髓源性树突状细胞成熟的影响

目的 探讨HBe Ag对LPS诱导小鼠骨髓源性树突状细胞(DC)成熟的影响。方法 体外诱导C57BL/6小鼠骨髓细胞分化成未成熟树突状细胞,经CD11c磁珠分选纯化后将DCs随机分为空白对照组、LPS刺激组、HBe Ag+LPS刺激组。流式检测DC表型变化,混合淋巴反应(MLR)检测DC促T淋巴细胞增殖能力,酶联免疫法(ELISA)检测细胞上清液中IL-12的分泌水平,Western blot检测p38磷酸化水平,并设置SB203580组为阳性对照探讨细胞IL-12分泌的可能调节机制。结果 LPS刺激未成熟DC引起细胞表面MHC-Ⅱ、CD86表达升高,刺激同种异体淋巴细胞增殖能力增强,IL-12分泌量增高。HBe Ag可抑制LPS促进DC表面MHC-Ⅱ、CD86表达升高和促淋巴细胞增殖能力增强的作用。LPS刺激DC可引起p38磷酸化水平升高,并呈时间依赖性;HBe Ag或SB203580预处理细胞再予LPS刺激,磷酸化p38表达和IL-12分泌较单纯LPS刺激组明显下降。结论 HBe Ag对LPS引起的树突状细胞的成熟有一定的抑制作用,且HBe Ag可能通过抑制p38MAPK信号通路下调LPS诱导的树突状细胞IL-12的产生。     

LPS介导的树突状细胞成熟过程中的表型变化

目的:探讨树突状细胞成熟过程中,DC表面MHC分子和共刺激分子的表达变化及MHCⅡ的胞内分布变化。方法:制备小鼠骨髓来源的树突状细胞,LPS分别刺激0、3、6、12和24小时,荧光抗体标记后,用流式细胞仪检测MHCⅠ、MHCⅡ分子和CD86、CD80、CD40等共刺激分子在细胞表面的表达,同时以激光共聚焦显微镜观察MHCⅡ的胞内分布变化。结果:在LPS刺激后,DC细胞表面的不同表型分子,其表达水平随时间延长有不同的上升趋势。同时在未成熟DC中,MHCⅡ主要集中在细胞核附近,LPS刺激后,MHCⅡ朝细胞外围扩散,到刺激12小时,有较多的MHCⅡ出现在细胞表面。结论:LPS介导的树突状细胞成熟过程中的表型分子有不同的变化趋势。     

MBL对树突状细胞体外分化成熟的影响

目的: 探讨甘露聚糖结合凝集素 (MBL)对人外周血单核细胞来源的树突状细胞 (MoDC)分化成熟的影响。方法: 以天然人MBL刺激MoDC, 在倒置显微镜下观察DC的形态; 用FACS分析DC的表型; 用 3H- TdR掺入法测定DC刺激同种异体T细胞增殖的能力; 以酵母多糖颗粒吞噬试验评估DC的抗原摄取能力; 用ELISA检测DC培养上清中IL- 12和TNF- α的含量。结果: MBL刺激的DC表面分子CD1a、CD83、CD40、CD80、CD86和MHC DR的表达均上调,摄取酵母多糖颗粒的能力降低, 激发初始T细胞增殖的能力加强, 分泌的IL- 12增多但几乎不分泌TNF- α。结论: MBL能诱导DC分化成熟, 提示其可能通过调节DC的功能而参与获得性免疫应答。     

蛋氨酸脑啡肽对GM-CSF诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟及TLR-4表达的协同作用

观察蛋氨酸脑啡肽(MENK)对巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导的小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)成熟及TLR-4表达的影响,探讨蛋氨酸脑啡肽对小鼠骨髓来源DCs免疫功能的调节机制。体外制备小鼠骨髓细胞用GM-CSF协同MENK诱导培养7d后用RT-PCR法检测TLR-4的mRNA表达,用western-blot检测TLR-4蛋白的表达,同时用流式细胞仪(FACS)分析DC表型特征,混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC的功能。结果显示MENK协同诱导组树突状细胞TLR-4和共刺激分子的表达高于正常对照组(P<0.01)和GM-CSF诱导组(P<0.05)并具有强的激发MLR的能力。提示MENK可以促进DC成熟及TLR-4的表达,增强DC免疫功能。     

可诱导共刺激分子诱导骨髓来源不成熟树突状细胞特异性分泌IL-6

目的:分析可诱导共刺激分子(ICOS)可溶性融合蛋白(ICOSIg)能否向不成熟DCs传递逆向信号及其性质。方法:以流式细胞仪结合特异性抗体检测DCs表型分子改变;以ELISA检测培养上清细胞因子变化;以RT-PCR检测各组DCs细胞内细胞因子及受体、趋化因子等mRNA表达水平。结果:ICOSIg或膜锚定ICOS作用于不成熟DCs,均可诱导其高表达MHC-Ⅱ、CD80、CD86和CD83等表型分子;促进DCs特异性分泌IL-6。结论:ICOS作用于不成熟DCs表面的ICOSL可以向DCs细胞传递逆向信号,诱导DCs细胞高分泌IL-6,同时其表面重要的表型分子也上调,可能参与了DCs细胞免疫功能的调节,其信号转导机制可能涉及p38-MAPK通路。     

小鼠骨髓源性树突状细胞的体外诱导

分离树突状细胞（DC）的原理是依据DC的低密度和半黏附特性，DC缺乏Fc受体，可对获得的DC进一步纯化。这种方法获取的DC数量有限。细胞因子诱生法是目前体外扩增DC常用的方法。其中，扩增效果最好的细胞因子是粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）和白细胞介素4（IL-4）。     

猪苓多糖刺激/诱导小鼠树突状细胞成熟

研究猪苓多糖对小鼠骨髓树突状细胞(DC)表型及功能成熟的影响。从小鼠骨髓中分离单个核细胞(MNC),用rmGM-CSF、IL-4培养5 d后,实验组加入猪苓多糖(50μg/ml),空白对照组加等量RPMI 1640,阳性对照组加LPS(1μg/ml),3组分别同时作用48 h。扫描电镜观察其体外培养过程中的形态特征,流式细胞仪(FACS)分析其表型特征,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其功能。用猪苓多糖刺激的小鼠骨髓MNC具典型的DC形态;细胞表达I-A/I-E、CD11c和分泌IL-12能力比空白对照组增加,具有极强的激发MLR的能力,显示成熟DC的特征。猪苓多糖可以促进体外培养的小鼠骨髓DC的成熟,促进DC诱导的免疫应答启动。     

雷公藤内酯醇对浆细胞样树突状细胞功能及成熟的影响

目的 通过体外试验研究雷公藤内酯醇(triptolide)对浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)功能及成熟的影响,为进一步阐明雷公藤内酯醇的免疫学活性提供依据.方法 从健康志愿者外周血分离单个核细胞,流式细胞仪分选pDC,加入0、5、10、30 μg/L的雷公藤内酯醇共孵育,24 h后收集上清液,ELISA检测pDC分泌的IFN-α、IL-6、TNF-α量,5 d后收集细胞,流式细胞仪检测树突状细胞表型CD11c、CD80、CD86阳性率,光镜观察DC的形态,扫描电镜观察DC的超微结构.结果 雷公藤内酯醇显著降低pDC分泌的IFN-α、IL-6、TNF-α,并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性(P＜0.05);雷公藤内酯醇可抑制pDC向DC的分化和成熟,并呈雷公藤内酯醇浓度依赖性(P＜0.05).结论 雷公藤内酯醇能够降低pDC的功能,并抑制其向DC的分化和成熟.

Abstract：

Objective To explore the mechanism of immunomodulatory activity of triptolide on healthy volunteers peripheral blood mononuclear cells (PBMC)-derived plasmacytoid dendritic cells (pDCs). Methods Healthy volunteers-derived pDCs were sorted by flow cytometry, then incubated with triptolide (0, 5, 10, 30 μg/L). After 24 hours, we detected the concentration of IFN-α, IL-6, TNF-α using ELISA. After 5 days, the cultrural cells were collected and analyzed by flow cytometry, light microscope and electron microscope scanning. Results Triptolide-treated pDCs secreted lower level of IFN-α,IL-6 ,TNF-α, triptolide could inhibit pDCs differentiation to DCs which displayed more immature morphology and immunophenotypes than untreated-pDCs. Conclusion Triptolide could decrease the immune function of pDCs, inhibit differentiation and maturation of pDCs.     

益母草碱对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的调控作用

目的研究益母草碱对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的调控机制。方法 MMT法检测巨噬细胞活性;Griess法检测NO的释放量;ELISA法检测IL-1β、IL-6、TNF-α的释放量;qRT-pCR法检测iNOS、MCP-1、IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR2、TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA的表达量。结果益母草碱极显著提高了巨噬细胞的MTT活力(P<0.01);益母草碱能显著促进巨噬细胞NO和IL-1β、TNF-α的释放(P<0.05,P<0.01)。在LPS刺激下,巨噬细胞极显著提高了NO、IL-1β、IL-6、TNF-α的释放(P<0.01),而益母草碱能显著抑制由LPS刺激造成的NO、IL-1β和IL-6、TNF-α的过度释放(P<0.05,P<0.01)。与LPS组比较,益母草碱+LPS组中TLR2的mRNA表达无显著变化(P>0.05),而TLR4、My D88、NF-κB的m RNA表达量显著下调(P<0.01)。结论益母草碱对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的炎症反应具有调控作用,机制可能与其能够调节TLR4/NF-κB信号通路相关。     

小鼠骨髓成熟与不成熟树突状细胞中RelB基因的表达

目的:探讨体外分离培养的小鼠骨髓来源的成熟与未成熟DC中核转录因子RelB(avianreticuloendotheliosisviral(v-rel)oncogenerelatedB)基因的表达。方法:无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导骨髓前体细胞产生未成熟的DC,未成熟的DC在培养结束前18h经LPS刺激获得成熟的DC,用流式细胞术分析它们的表型,用RT-PCR和免疫荧光染色法检测成熟与未成熟DC中,RelBmRNA和其蛋白的表达。结果:流式细胞术分析显示未成熟的DC中MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子(CD86和CD40)呈低水平表达;而成熟的DC则呈高水平表达。RT-PCR和免疫荧光染色法检测结果均显示,RelB基因在未成熟的DC中呈低水平表达;而在成熟的DC中呈高水平表达,两者比较具有统计学意义(P<0.01)。结论:RelB基因的表达与小鼠骨髓来源的DC的成熟状态密切相关。抑制DC中RelB基因的表达,有可能诱导产生具有耐受原性的未成熟的DC。     

α黑素细胞刺激素基因转染对小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟的影响

为观察转染α黑素细胞刺激素(-αMSH)基因的树突状细胞(DC)的功能和特性,以腺相关病毒(AAV)为载体将α-MSH基因导入小鼠骨髓来源的未成熟DC(-αMSH-DC),用ELISA检测-αMSH-DC培养上清中-αMSH及IL-12水平,用流式细胞仪分析-αMSH-DC表面分子的表达,以-αMSH-DC提呈OVA抗原刺激致敏T细胞,通过ELISA测定IL-2水平来观察其抗原提呈功能。结果显示,在-αMSH-DC培养上清中检测到-αMSH的分泌,-αMSH-DC表面分子表达下调,分泌IL-12的能力降低,抗原提呈功能被抑制。-αMSH-DC可部分抵抗LPS上调表面分子表达和促进IL-12分泌的作用。表明-αMSH基因可籍AAV载体导入未成熟DC,并有效地表达,α-MSH基因修饰的DC成熟受到抑制。     

吗啡持续刺激对小鼠树突状细胞成熟的影响

为研究吗啡持续刺激对C57BL/6小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟的影响.体外培养C57BL/6小鼠骨髓来源的树突状细胞,在培养过程中给予吗啡刺激,应用流式细胞术检测细胞表型CD11c、Ia、CD86的变化.吗啡干预各组树突状细胞中细胞表型CD11c、Ia、CD86表达较对照组显著升高.吗啡持续刺激能够促进小鼠树突状细胞的...     

Toll样受体4在β2GPI诱导小鼠骨髓来源树突状细胞成熟过程中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在β2糖蛋白I(β2GPI)诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)成熟过程中的作用。方法体外联合使用重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)诱导TLR4正常(C3H/HeN)及TLR4缺陷(C3H/HeJ)小鼠的骨髓细胞为未成熟树突状细胞(iDC)。用β2GPI或LPS(阳性对照)对iDC进一步刺激后,采用倒置显微镜观察细胞形态,流式细胞术分析细胞表面分子变化,ELISA测定细胞因子IL-12和TNF-α的分泌水平。结果同C3H/HeJ小鼠相比,C3H/HeN小鼠iDC经β2GPI或LPS刺激后,细胞突起较多,形态上更成熟;细胞表面分子CD11c和MHC-Ⅱ的表达量更高(P0.05);细胞因子IL-12和TNF-α的分泌更强(P0.01)。结论 TLR4在β2GPI诱导小鼠骨髓细胞来源的树突状细胞成熟过程中起重要作用。     

DEN2感染对MyD88沉默的小鼠树突状细胞相关膜分子表达及炎症因子分泌的影响

目的:探讨髓样分化因子88(MyD88)在DEN2感染BMDC后对其成熟及相关炎症因子分泌的影响.方法:利用rmIL-4、rmGM-CSF联合诱导培养BMDC;针对BMDC MyD88基因,设计并合成3对MyD88 siRNA,脂质体法转染BMDC;通过Western blot筛选一对高沉默效率的MyD88 siRNA;常规方法增殖及鉴定DEN2;直接免疫荧光及RT-PCR鉴定DEN2吸附BMDC;流式细胞术分析对照组、感染组、RNAi组、感染RNAi组、无义RNAi组BMDC膜表面分子CD86、MHCⅡ的表达,双抗体夹心ELISA法检测上清液中IP-10、TNF-α及IFN-α的分泌水平.结果:经细胞因子诱导培养后可获得CD11c表达为70.85％ ±2.66％的相对未成熟的BMDC;与空白对照组相比,序列1～3组的MyD88蛋白质表达率分别降低28.36％±14.26％、54.20％ ±22.93％、73.14％±11.80％,其中序列3的沉默效率最高,具有显著统计学意义(P ＜0.01);DEN2可吸附BMDC.与对照组比较,DEN2感染组DC膜表面分子CD86表达降低,MHCⅡ增高,感染RNAi组的MHCⅡ、CD86表达无明显变化;与对照组比较,DEN2感染组分泌TNF-α、IFN-α及IP-10的水平均增高,而感染RNAi组分泌的IP-10、IFN-α、TNF-α则无明显变化.结论:DEN2可吸附BMDC,并促使其成熟及细胞因子分泌;siRNA可沉默MyD88,有效阻断DEN2感染BMDC的胞内信号传导及其所引起的成熟及炎症因子分泌.     

体外诱导成熟树突状细胞的研究

目的：探讨在体外从干细胞中诱导出成熟DC的适宜环境。方法：分别将人胎肝、骨髓和脾细胞以及小鼠骨髓和脾细胞在体外用GM－CSF和TNF－α诱导,观察了第3、5、7天DC的收获情况。进一步用S－P免疫细胞化学染色检测了mBmDC和fLDC有关分子表达。结果：在体外通过GM－CSF和TNF－α的作用,小鼠骨髓、人胎肝、骨髓细胞呈典型的毛刺状胞浆突起,第5天的收获率分别为：39.5％、67.2％、12.9％,而基本不能从脾细胞中诱导出成熟DC,获得的DC能与MAbCD80、MAbCD40呈强阳性反应。结论：在GM－CSF和TNF－α的共同作用下,能在体外从人胎肝、 骨髓和小鼠骨髓干细胞中获得成熟DC,其DC能表达高高水平的B7－1和CD40分子,这为大量获得DC提供了一种简便可行的手段,为研究DC的生物学特征及其抗原提呈功能提供了丰富的材料,为开展以DC为基础的各种免疫治疗研究奠了良好的基础。     

小反刍兽疫病毒对鼠源树突状细胞成熟分化的影响

目的研究和探讨小反刍兽疫病毒(PPRV)对小鼠骨髓来源的树突状细胞(BM-DCs)成熟和分化功能的影响。方法从小鼠骨髓中分离得到DCs,经过IL-4和GM-CSF诱导成熟;流式细胞术检测DCs表面共刺激分子表达及吞噬FITC-Dextran的能力;ELISA检测细胞因子IL-6、IL-12p40、IL-1β和IL-10的表达水平。结果利用LPS和PPRV处理DCs 24 h,发现与阳性对照LPS组相比,PPRV作用后显著抑制了CD40和MHC-Ⅱ的表达(P<0.05);滴度适度的PPRV可以显著增加CD40、CD80和CD86的表达,显著升高IL-6和IL-10的分泌(P<0.05),吞噬FITC-Dextran的能力并无显著差异,各组之间也无影响,且不同比例的PPRV对DC存活率无显著影响(P>0.05)。结论 PPRV在一定滴度范围内具有潜在的促进小鼠DC成熟的功能,为免疫学研究奠定基础。